Chlamydia pneumoniaeigmselisa medac Ελληνικά 0123 432TMBVPG/010414
ΚΑΤAΣΚΕΥΑΣΤΗΣ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Fehlandtstraße 3 D20354 Hamburg MAΡΚΕΤΙΝΓΚ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbh Bereich Diagnostika Theaterstraße 6 D22880 Wedel Τηλέφωνο: ++49/ 4103 / 8006 351 Φαξ: ++49/ 4103 / 8006 359 ΔΙΕΥΘΥΝΣΗ ΠΑΡΑΓΓΕΛΙΩΝ Τηλέφωνο: ++49/ 4103 / 8006 111 Φαξ: ++49/ 4103 / 8006 113 432TMBVPG/010414
Chlamydia pneumoniaeigmselisa medac Ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός για την ανίχνευση των αντισωμάτων IgM των χλαμυδίων πνευμονίας σε ορο και πλασμα Cat. no.: 432TMB ΜΟΝΟ ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ ΕΙΣΑΓΩΓΗ Τα χλαμύδια είναι gramαρνητικά παθογόνα βακτήρια. Έχουν έναν υποχρεωτικά ενδοκυττάριο κύκλο ζωής σε βλεννογόνες επιφάνειες, ενδοθηλιακά κύτταρα, λείες μυϊκές ίνες και, σύμφωνα με πρόσφατα ευρήματα σε ορισμένες ιστικές δομές του κεντρικού νευρικού συστήματος. Τα χλαμύδια εξαρτώνται από φωσφαγώνα των κυττάρων του ξενιστή και αποτελούν ως εκ τούτου ενεργειακά παράσιτα. Το γένος των χλαμυδίων περιλαμβάνει τέσσερα είδη: Τα C. pneumoniae, C. trachomatis, C. psittaci, και C. pecorum. Το C. pneumoniae και C. trachomatis είναι υποχρεωτικά παθογόνα για τον άνθρωπο. Το C. psittaci είναι παθογόνο για τον άνθρωπο και για διάφορα είδη ζώων. Μέχρι σήμερα, το C. pecorum έχει απομονωθεί μόνο από ζώα. Οι λοιμώξεις από Chlamydia pneumoniae εμφανίζονται παγκοσμίως. Το φάσμα των ασθενειών, επιπλέον της γρίπης, περιλαμβάνει την ιγμορίτιδα, τη φαρυγγίτιδα, τη βρογχίτιδα, τη χρόνια αποφρακτική πνευμονία και την αντιδραστική αρθρίτιδα. Η αιτιολογική συσχέτιση με το άσθμα λοιμωδών καταστάσεων, τη σαρκοείδωση, τον καρκίνο του πνεύμονα, την αρτηριοσκλήρυνση, το οξύ έμφραγμα του μυοκαρδίου, το εγκεφαλικό επεισόδιο, τη σκλήρυνση κατά πλάκας, και την όψιμη εμφάνιση νόσου του Alzheimer έχει συζητηθεί. Σύμφωνα με τους Grayston και Saikku (1989), που πρώτοι περιέγραψαν τα είδη χλαμυδίων, σχεδόν κάθε άνθρωπος μολύνεται και ξαναμολύνεται από τα χλαμύδια κατά τη διάρκεια της ζωής του. Τα τις περισσότερες φορές ασθενή και/ή διάχυτα συμπτώματα που συνοδεύουν τη λοίμωξη από C. pneumoniae καθιστούν την ανίχνευσή τους δύσκολη. Μη ανιχνεύσιμες μολύνσεις μπορούν να οδηγήσουν σε χρόνια εξέλιξη της ασθένειας με δυσάρεστες συνέπειες. Η διάγνωση της λοίμωξης από C. pneumoniae βασίζεται στην απομόνωση των παθογόνων από κυτταρικές καλλιέργειες, άμεση ανίχνευση του αντιγόνου, τεστ πολλαπλασιασμού νουκλεϊκών οξέων και σερολογία. Απομόνωση των παθογόνων από κυτταρική καλλιέργεια απαιτεί τις περισσότερες φορές 432TMBVPG/010414 1
ειδικές άδειες, είναι χρονοβόρα, απαιτεί ειδικά εργαστήρια και είναι μόνο σε μερικές περιπτώσεις επιτυχής. Η άμεση μέθοδος ανοσοφθορισμού και ο ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός δεν έχουν ευρεία χρήση. Έχει αναφερθεί ότι έχουν χαμηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Για την ανίχνευση αντισωμάτων για ειδικά είδη ο μικροανοσοφθορισμός θεωρείται η μέθοδος αναφοράς. Η μέθοδος του μικροανοσοφθορισμού είναι επίπονη, υποκειμενική και απαιτεί εμπειρία. Το τεστ αυτό δεν είναι τυποποιημένο. Η χρήση διαφορετικών αντιγόνων και διαφορετικών ορίων για παλιές, πρόσφατες ή τρέχουσες μολύνσεις έχουν ως αποτέλεσμα μεγάλες διαφορές στα αποτελέσματα μεταξύ εργαστηρίων. Το κιτ Chlamydia pneumoniaeselisa medac χρησιμοποιεί καλά καθαρισμένο και ειδικό αντιγόνο. Η ανίχνευση των αντισωμάτων IgM, IgA και IgG επιτρέπει την αξιολόγηση της κατάστασης της λοίμωξης και βοηθάει στην επιλογή κατάλληλης θεραπευτικής αγωγής. Το κιτ Chlamydia pneumoniaeselisa medac καλύπτει τις ανάγκες για τυποποίηση, αντικειμενικότητα, επαναληψιμότητα και αυτοματοποίηση των εργαστηρίων ρουτίνας. 432TMBVPG/010414 2
ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Η πλάκα είναι επικαλυμμένη με ειδικά καθαρισμένο αντιγόνο για τα C. pneumoniae. Τα ειδικά αντισώματα για C. pneumoniae του δείγματος του ασθενους συνδέονται στο αντιγόνο. Η συζευγμένη υπεροξειδάση των αντιανθρώπινων IgM αντισωμάτων συνδέεται στα αντισώματα IgM (P = υπεροξειδάση). Επώαση με TMB (*). Η αντίδραση σταματάει με την προσθήκη θειϊκού οξέος. Η απορρόφηση μετριέται φωτομετρικά. Πλεονεκτήματα της εξέτασης Υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Τα αποχωριζόμενα strips επιτρέπουν την αποτελεσματική χρήση της εξέτασης. 432TMBVPG/010414 3
ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Cat. no.: 432TMB 1. MTP Μικροπλάκα: 12 x 8 πηγαδάκια, (τυπωμένο με CPM, με πλαίσιο και αποξηραντικό, αεροστεγώς συσκευασμένα σε σακούλα αλουμινίου), διασπώμενα, φόρμαu, καλυμμένα με ειδικό αντιγόνο για C. pneumoniae και FCS, έτοιμα για χρήση. 2. CONTROL Αρνητικός μάρτυρας: 1 φιαλίδιo 1,5 ml, ανθρώπινος ορός, έτοιμος για χρήση, χρωματισμένος κυανός που περιέχει NBCS, φαινόλη, ProClin TM 300 και gentamycin sulfate. 3. CONTROL + Θετικός μάρτυρας: 1 φιαλίδιo 1,5 ml, ανθρώπινος ορός, έτοιμος για χρήση, χρωματισμένος κυανός που περιέχει BSA, φαινόλη, ProClin TM 300 και gentamycin sulfate. 4. WB Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης: 1 φιαλίδιο με 100 ml PBS/Tween (10x), ph 7,2 7,4, περιέχει ProClin TM 300. 5. BACDIL Διαλύμα αραίωσης: 1 φιαλίδιο με 110 ml PBS/Tween/NBCS, ph 7,0 7,2, έτοιμο για χρήση, χρωματισμένο κυανό, περιέχει ProClin TM 300. 6. CON Σύμπλοκο: 3 φιαλίδια με 4,5 ml έκαστο, αντιανθρώπινα IgM κατσίκας, HRPσυζευγμένα, έτοιμο για χρήση, χρωματισμένο ερυθρό, περιέχει BSA, φαινόλη, ProClin TM 300 και gentamycin sulfate. 7. TMB TMBΥπόστρωμα: 1 φιαλίδιο με 10 ml, έτοιμο για χρήση. 8. STOP Διάλυμα τερματισμού: 2 φιαλίδια με 11 ml έκαστο, 0,5 M sulfuric acid (H 2 SO 4 ), έτοιμο για χρήση. 9. RFABS IgG/Rf Δεσμευτικό: 1 φιαλίδιo με 4 ml, αντιανθρώπινο ΙgG αντίσωμα κατσίκας, έτοιμο για χρήση, περιέχει 0,1 % sodium azide. 432TMBVPG/010414 4
1. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ ΥΛΙΚΟ/ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟ ΚΑΤΑΣΤΑΣΗ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Κιτ εξέτασης κλειστό 2...8 C Μέχρι την Μικροπλάκα ανοιγμένο 2...8 C σε σακούλα με αποξηραντικό ημερομηνία λήξης 12 εβδομάδες Μάρτυρες ανοιγμένο 2...8 C 12 εβδομάδες Ρυθμιστικό διάλυμα αραιωμένο 2...8 C 12 εβδομάδες πλύσης Διαλύτης δείγματος ανοιγμένο 2...8 C 12 εβδομάδες Σύμπλοκο ανοιγμένο 2...8 C 12 εβδομάδες TMBΥπόστρωμα ανοιγμένο 2...8 C 12 εβδομάδες Διάλυμα τερματισμού ανοιγμένο 2...8 C Μέχρι την ημερομηνία λήξης IgG/Rf Δεσμευτικό ανοιγμένο 2...8 C 12 εβδομάδες Μη χρησιμοποιείτε τα αντιδραστήρια μετά την ημερομηνία λήξης. 2. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΧΡΕΙΑΖΟΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕ ΧΟΡΗΓΟΥΝΤΑΙ 2.1. Ύδωρ αποσταγμενο και αποιονισμενο. 2.2. Μικροπιπέτες ρυθμιζόμενου όγκου. 2.3. Καθαροί γυάλινοι ή πλαστικοί περιέκτες για αραίωση του ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης και του δείγματος. 2.4. Κατάλληλη συσκευή για πλύση μικροπλάκας (π.χ., ELISA washer). 2.5. Επωαστήρας για 37 C. 2.6. Συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας με φίλτρα για 450 nm and 620 650 nm. 3. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Πριν την έναρξη της διαδικασίας της εξέτασης, όλα τα περιεχόμενα του κιτ θα πρέπει να έλθουν σε θερμοκρασία δωματίου (RT). Υπολογίστε τα πηγαδάκια που χρειάζονται. 3.1. Μικροπλάκα Μετά από κάθε αφαίρεση strips η σακούλα αλουμινίου θα πρέπει να σφραγιστεί και πάλι σφιχτά μαζί με το αποξηραντικό. Η φύλαξη και η σταθερότητα υποδεικνύονται στον στο κεφάλαιο 1. 432TMBVPG/010414 5
3.2. Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης Αναμίξτε ένα μέρος ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης (10x) με εννιά μέρη ύδατος για ένεση(π.χ., 50 ml ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης (10x) με 450 ml ύδατος). 10 ml αραιωμένου ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης χρειάζονται για οκτώ πηγαδάκια. Οι κρύσταλλοι στο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (10x) πρέπει να διαλυθούν με θέρμανση (μέγιστο 37 C) ή/και ανακάτεμα σε θερμοκρασία δωματίου. Μην αναμιγνύετε τα ειδικά αντιδραστήρια της εξέτασης (μικροπλάκα, μάρτυρες, σύμπλοκο) με αντίστοιχα αντιδραστήρια διαφορετικών παρτίδων. Αντιθέτως, διαλύτης δείγματος, ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης, ΤΜΒ Υπόστρωμα, IgG/RFΔεσμευτικό και διάλυμα τερματισμού μπορούν να χρησιμοποιηθούν αδιακρίτως σε όλα τα κιτ προσδιορισμού χλαμυδίων και μυκοπλάσματος με τη μέθοδο elisa. Δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται αντιδραστήρια διαφορετικών κατασκευαστών. Έγκυρα και επαναλήψιμα αποτελέσματα λαμβάνονται μόνο αν ακολουθηθεί με ακρίβεια η διαδικασία της εξέτασης. 4. ΔΕΙΓΜΑ 4.1. Η εξέταση είναι κατάλληλη για δείγματα ορού και για EDTA πλάσμα. Τα δείγματα των ασθενών μπορούν να αποθηκευτούν για 7 ημέρες στους 28 C. Τυχόν μακροχρόνια αποθήκευση να γίνεται στη κατάψυξη σε θερμοκρασία 20 C. Να αποφεύγονται πολλαπλές αποψύξεις και επανακαταψύξεις των δειγμάτων. 4.1. Για να αποφευχθεί παρεμβολή από υψηλούς IgGτίτλους και RF συνίσταται προσρόφηση των IgF/Rf σε ολα τα δειγματα. 4.2. Προετοιμασία των δειγματων, π.χ. απενεργοποίηση δε χρειάζεται. Ωστόσο, τα δειγματα δε θα πρέπει να είναι επιμολυσμένα με μικροοργανισμούς ούτε να περιέχουν ερυθρά αιμοσφαίρια. 5. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 5.Α IgG/RF ΔΕΣΜΕΥΣΗ Προσοχή: Οι μάρτυρες είναι έτοιμοι για χρήση. Οι όγκοι που απαιτούνται στα παρακάτω είναι μόνο για μονό προσδιορισμό. 5.Α.1. Δειγματα: 10 μl δειγμα διαλύονται με 240 μl διαλύτη. (Αραίωση 1:25) 432TMBVPG/010414 6
5.Α.2. Δέσμευση: 30 μl IgG/RfΔεσμευτικού και 30 μl αραιωμένου δειγματος αναμιγνύονται (αραίωση 1:50) και επωάζονται για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT). Εναλλακτικώς : Η δέσμευση μπορεί να διεκπεραιωθεί ολονύχτια σε 2 8 C. 5.Α.3. Η αραίωση της εξέτασης είναι τώρα 1:50. 5.Β. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 5.B.1. Κόψτε τη σακούλα αλουμινίου πάνω από τη σύνδεση και βγάλτε τον απαιτούμενο αριθμό strips (δείτε 3.1.). Τα strips είναι έτοιμα για χρήση και δε χρειάζεται να υποβληθούν σε πρόπλυση. 5.B.2. Βάλτε με πιπέτα 50 µl διαλύτη δείγματος στο πηγαδάκι A1 ως τυφλό (δείτε 6.A.) και εις διπλούν 50 µl αρνητικού μάρτυρα, 50 µl θετικού μάρτυρα και τα αραιωμένα δείγματα ασθενών. Αν χρειαστεί, τα πηγαδάκια της μικροπλάκας μπορούν να διατηρηθούν σε υγρό θάλαμο μέχρι και για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου πριν τη διαδικασία. 5.B.3. Επωάστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας για 60 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 o C (± 1 C) σε υγρό θάλαμο ή σκεπασμένες με κάλυμμα. 5.B.4. Μετά την επώαση πλύνετε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας τρεις φορές με 200 µl ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης ανά πηγαδάκι. Προσέξτε να είναι πλήρη όλα τα πηγαδάκια. Μετά την πλύση στραγγίστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας σε διηθητικό χαρτί. Μην αφήνετε τα πηγαδάκια να στεγνώσουν! Συνεχίστε αμέσως! 5.B.5. Προσθέστε σύμπλοκο (κόκκινο χρώμα) σε κάθε πηγαδάκι. Προσθέστε 50 µl σύμπλοκο με πιπέτα στα πηγαδάκια αν η εξέταση γίνεται με το χέρι. Παρακαλώ σημειώστε: Όταν δουλεύετε με αυτοματοποιημένα όργανα, προσθέστε 60 µl σύμπλοκο με πιπέτα σε κάθε πηγαδάκι λόγω της μεγαλύτερης εξάτμισης στους θαλάμους επώασης των αυτόματων συσκευών. Η καταλληλότητα του κιτ για χρήση σε αυτόματους αναλυτές επιβεβαιώθηκε κατά την αξιολόγηση του. Παρόλα αυτά συστήνεται να επιβεβαιώνεται η συμβατότητά του με τον αναλυτή που χρησιμοποιεί το εργαστήριο. 432TMBVPG/010414 7
5.Β.6. Επωάστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας πάλι για 60 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 C (± 1 C) σε υγρό θάλαμο ή σκεπασμένα με κάλυμμα. 5.Β.7. Μετά την επώαση πλύνετε ξανά τα πηγαδάκια της μικροπλάκας (δείτε 5.Β.4.). 5.Β.8. Προσθέστε 50 µl TMBΥποστρώματος σε κάθε πηγαδάκι και επωάστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας για 30 λεπτά (± 2 λεπτά) στους 37 C (± 1 C) σε υγρό θάλαμο ή σφραγισμένα με κάλυμμα επώασης στο σκοτάδι. Τα θετικά δείγματα γίνονται κυανά. 5.Β.9. Σταματήστε την αντίδραση προσθέτοντας 100 µl διαλύματος τερματισμού σε κάθε πηγαδάκι. Τα θετικά δείγματα γίνονται κίτρινα. Καθαρίστε τα πηγαδάκια της μικροπλάκας από κάτω πριν από τη φωτομετρική ανάγνωση και φροντίστε να μην υπάρχουν φυσαλίδες αέρα στα πηγαδάκια. Η ανάγνωση θα πρέπει να γίνει μέσα σε 15 λεπτά μετά την προσθήκη του διαλύματος τερματισμού! 432TMBVPG/010414 8
5.C. ΠΙΝΑΚΑΣ ΓΙΑ ΤΗN IgG/RfΔΕΣΜΕΥΣΗ Ένδειξη ανά προσδιορισμό 10 μl δειγμα + 240 μl Διαλύτη 250 μl; αραίωση 1:25 30 μl IgG/Rf Δεσμευτικό + 30 μl αραιωμένο δειγμα 60 μl; αραίωση 1:50 Vortex Επωάστε για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου ή όλη την νύχτα, σε 2 8 C Αραίωση της εξέτασης 1:50 5.D. ΠΙΝΑΚΑΣ ΓΙΑ ΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Διαλύτης δείγματος Αρνητικός μάρτυρας Θετικός μάρτυρας Δείγμα Τυφλό(A1) 50 µl Αρνητικός μάρτυρας 50 µl Θετικός μάρτυρας 50 µl Δείγμα 50 µl Επωάστε για 60 λεπτά στους 37 C, πλύνετε 3 x με 200 µl ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης. Σύμπλοκο 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) 50/60 µl*) Επωάστε για 60 λεπτά στους 37 C, πλύνετε 3 x με 200 µl ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης. TMBΥπόστρωμα 50 µl 50 µl 50 µl 50 µl Επωάστε για 30 λεπτά στους 37 o C στο σκοτάδι. Διάλυμα Τερματισμού 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl Φωτομετρική ανάγνωση στα 450 nm (ref. 620 650 nm) *) χειροκίνητη/αυτόματη διαδικασία (δείτε 5.Β.5.) 432TMBVPG/010414 9
6.A. ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ (ΕΓΚΥΡΟΤΗΤΑ) Διαβάστε τις τιμές OD στα 450 nm (μήκος κύματος αναφοράς 620 650 nm). Αφαιρέστε την τιμή OD από το τυφλό (πηγαδάκι A1) από όλες τις άλλες OD τιμές. Η τιμή OD του τυφλού πρέπει να είναι < 0,100. Η μέση τιμή OD του Αρνητικού μάρτυρα θα πρέπει να είναι < 0,100. Η τιμή OD του Θετικού μάρτυρα θα πρέπει να είναι > 0,800. Cutoff = μέση τιμή OD του Αρνητικού μάρτυρα + 0,380 Γκρίζα ζώνη = Cutoff ± 10% Επαναλάβετε την διαδικασία εάν τα αποτελέσματα είναι εκτός προδιαγραφών. 6.B. ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ: 6.B.1. ΠΟΙΟΤΙΚΗ Αποτέλεσμα OD < Γκρίζα ζώνη OD Cutoff ± 10 % OD > Γκρίζα ζώνη Aξιολόγηση αρνητικό αμφίβολο θετικό 6.B.2. HMIΠΟΣΟΤΙΚΗ Cutoffindex: OD δείγματος OD cutoff Aξιολόγηση < 0,9 αρνητικό 0,9 1,1 αμφίβολο > 1,1 θετικό Δείγματα με οπτική πυκνότητα μέσα στη γκρίζα ζώνη πρέπει να επανεξετάζονται μαζί με φρέσκα δείγματα που θα συλλεχθούν 14 μέρες αργότερα με σκοπό να καθοριστεί η αλλαγή τίτλου. Τα αποτελέσματα πρέπει πάντα να ερμηνεύονται σε συνδυασμό με κλινικά ευρή ματα και πρόσθετες διαγνωστικές παραμέτρους. Υψηλές συγκεντρώσεις αιμοσφαιρίνης, βιλιρουβίνης και λιπιδίων δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα. Αντιθετα, σε αρνητικα δειγματα υψηλές συγκεντρώσεις λιπιδίων μπορούν να οδηγησουν σε υψηλοτερα ODαποτελέσματα. Αντίδραση με αντιπυρηνικά αντισώματα, ετερόφυλα αντισώματα και αντισώματα της C. trachomatis και C. psittaci δεν μπορούν να αποκλειστούν. 432TMBVPG/010414 10
6.C. ΕΙΔΙΚΑ IgM/IgA/IgGΕΡΜΗΝΕΙΑ Θερικά αποτελέσματα IgM IgA IgG COI* COI * COI* >1,1 <0,9 <0,9 + >1,1 >1,1 <0,9 + + >1,1 <0,9 >1,1 + + >1,1 >1,1 >1,1 + + + <0,9 >1,1 >1,1 + + <0,9 <0,9 >1,1 + <0,9 >1,1 <0,9 + <0,9 <0,9 <0,9 * CutoffIndex=Δείκτης κατωφλίου Ερμηνεία Ορολογικός δείκτης λοίμωξης σε αρχικό στάδιο ή πολυκλωνικής ενεργοποίησης Bκυττάρων. Επανελέγξτε τα IgM, IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. Ορολογικός δείκτης οξείας λοίμωξης. Επανελέγξτε τα IgG μετά από 14 ημέρες. Ορολογικός δείκτης οξείας λοίμωξης. Ορολογικός δείκτης οξείας λοίμωξης. Ορολογικός δείκτης τρέχουσας λοίμωξης 1. Επανελέγξτε τα IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. Ορολογικός δείκτης παρελθούσας λοίμωξης. Σε περίπτωση κλινικής υποψίας επανελέγξτε μετά από 14 ημέρες για IgA κα IgG αντισώματα. Ορολογικός δείκτης αρχικής φάσης της λοίμωξης μεμονομένων, επιμενόντων IgA 2. Επανελέγξτε τα IgM, IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. Καμία ορολογική ένδειξη τρέχουσας ή παρελθούσας λοίμωξης 3. Σε περίπτωση κλινικής υποψίας επανελέγξτε τα IgM, IgA και IgG μετά από 14 ημέρες. Σχόλιο: Οριακά αποτελέσματα μπορεί να υποδεικνύουν αρχόμενη λοίμοξη ή σε αποδρομή. Συνίσταται επανέλεγχος μετά από 14 ημέρες. 432TMBVPG/010414 11
1 2 Μιά τρέχουσα λοίμωξη μπορεί να οφείλεται σε: χρόνια λοίμωξη με ανθεκτικά παθογόνα: Οι τιμές COI των αντισωμάτων παραμένουν σταθερές για αρκετές εβδομάδες. οξεία λοίμωξη: Οι τιμές COI των αντισωμάτων αυξάνονται σημαντικά. υψηλή συγκέντρωση IgG: Δεν μπορεί να αποκλεισθεί οξεία λοίμωξη. Κατά τον Grayston et al. (1989), οι τίτλοι MIF IgG titres 1:512 υποδεικνύουν οξεία λοίμωξη. Σε μεμονομένες περιπτώσεις μπορεί να υπάρχουν μεμονομένα επιμένοντα IgA αντισώματα. Το ανοσολογικό αυτό φαινόμενο εμφανίζετα σε σε διάφορες βακτηρτιακές λοιμώξεις. Δεν μπορεί να εκτιμηθεί η κλινική συσχέτιση. 3 Σε περίπτωση πρόσφατης οξείας λοίμωξης από C. pneumoniae τα αποτελέσματα των ορολογικών αντισωμάτων μπορεί να είναι αρνητικά, παρά τα κλινικά συμπτώματα και την θετική ανίχνευση αντιγόνου. Εάν επιθυμείτε την ορολογική επιβεβαίωση ενός θετικού αντιγονικού αποτελέσματος ή μία παρακολούθηση, συνιστούμε έλεγχο μετά από 14 ημέρες από τη ορομετατροπή. 432TMBVPG/010414 12
7. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΠΙΔΟΣΗΣ Τα παρακάτω χαρακτηριστικά λειτουργία προσδιορίστηκαν κατά τη διαγνωστική αξιολόγηση. 7.A. ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ Μελετήθηκαν 121 ΙgM αρνητικό οροί με την MIF μέθοδο στα C. pneumoniae (31 ασθενείς με κλινική υποψία λοίμωξης (1) και 90 από ασθενείς με καλλιέργεια θετική στα C. trachomatis (2) καθώς και 159 ΙgM αρνητικό οροί (Elisa αναφοράς) από δότες αίματος (3) (άντρες και γυναίκες 2060 ετών), για τον προσδιορισμό της ειδικότητας. Μελετήθηκαν οροί από 38 ασθενείς με υποψία για αναπνευστική λοίμωξη (4) για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας. Με την MIF μέθοδο ανιχνεύθηκαν αντισώματα της C. pneumoniae σε όλους τους ορούς. Ομάδα ασθενών Ειδικότητα IgΜ Ασθενείς χωρίς ΙgM αντισώματα της C. pneumoniae με την MIF μέθοδο: (1) ασθενείς με υποψία χλαμυδιακής λοίμωξης (n=31) (2) STD ασθενείς (n=90) Οροί χωρίς ΙgM αντισώματα της C. pneumoniae με ELISA αναφοράς (3) Δότες αίματος (n=159) Ομάδα ασθενών Ασθενείς με αντισώματα C. pneumoniae με μέθοδο MIF: (4) Ασθενείς με αναπνευστική λοίμωξη (n=38) 90 % (28/31) 98 % (88/90) 99 % (157/159) Ευαισθησία IgM 97 % (37/38) 432TMBVPG/010414 13
7.B. ΑΚΡΙΒΕΙΑ Δείγμα Διακύμανση IntraAssay Δείγμα Διακύμανση InterAssay (n = 11) OD SD CV (%) n OD SD CV (%) NC 0,036 0,003 8 21 NC 0,035 0,003 9 BC 0,503 0,027 5 21 BC 0,521 0,027 5 PC 1,216 0,047 4 21 PC 1,225 0,063 5 N 1 0,844 0,063 7 21 N 3 0,051 0,004 8 N 2 0,719 0,042 6 21 N 4 0,848 0,061 7 NC = Αρνητικός Μάρτυρας BC = Ασθενώς Θετικός Μάρτυρας (δεν περιλαμβάνεται στο κιτ) PC = Θετικός Μάρτυρας ΓΕΝΙΚΕΣ ΣΥΜΒΟΥΛΕΣ ΓΙΑ ΤΟ ΧΕΙΡΙΣΜΟ Μην ανταλλάσσετε τα φιαλίδια ή τα βιδωτά καπάκια τους για να αποφύγετε την επιμόλυνση του ενός από το άλλο. Τα αντιδραστήρια θα πρέπει να σφραγίζονται αμέσως μετά τη χρήση ώστε να αποφευχθεί η εξάτμιση και η μικροβιακή τους επιμόλυνση. Μετά τη χρήση, τα αντιδραστήρια θα πρέπει να φυλάσσονται κάτω από τις συνθήκες που συνιστώνται ώστε να διατηρηθούν μέχρι την ημερομηνία λήξης. Μετά τη χρήση, όλα τα περιεχόμενα του κιτ εξέτασης θα πρέπει να φυλάσσονται στην αρχική συσκευασία, για να αποφευχθεί το ανακάτεμα τους με αντιδραστήρια άλλων συστημάτων εξέτασης ή άλλων παρτίδων (δείτε επίσης 3.). ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΓΕΙΑ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑ Οι τοπικοί επαγγελματικοί κανονισμοί για την υγεία και την ασφάλεια θα πρέπει να γίνονται σεβαστοί. Τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης έχουν εξεταστεί και βρέθηκε ότι είναι αρνητικά για HBsAg, για αντισώματα έναντι του HIV1/2 και για HCV. Ωστόσο, συνίσταται αυτά τα υλικά καθώς και εκείνα που είναι ζωικής προέλευσης(δείτε τα περιεχόμενα του κιτ), θα πρέπει να τα χειρίζεστε ως δυνητικά μολυσματικά και να λαμβάνετε όλα τα απαραίτητα μέσα προστασίας. ΚΑΤΑΣΤΡΟΦΗ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Τα υπολείμματα χημικών και παρασκευασμάτων θεωρούνται γενικά επικίνδυνα απόβλητα. Η απαλλαγή από το είδος αυτό των αποβλήτων ρυθμίζεται από εθνικούς και τοπικούς νόμους και κανονισμούς. Επικοινωνήστε με τις τοπικές αρχές ή με εταιρίες διαχείρισης αποβλήτων που θα σας δώσουν συμβουλές σχετικά με το πώς να απαλλαγείτε από επικίνδυνα απόβλητα. Ημερομηνία Έκδοσης: 01.04.2014 432TMBVPG/010414 14
ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ Balin, B.J., Gérard, H.C., Arking, E.J., Appelt, D.M., Branigan, P.J., Abrams, J.T., WhittumHudson, J.A., Hudson, A.P.: Identification and localization of Chlamydia pneumoniae in the Alzheimer s brain. Med. Microbiol. Immunol. 187, 2342 (1998). Christiansen, G., Boesen, T., Hjerno, K., Daugaard, L., Mygind, P., Madsen, A.S., Knudsen, K., Falk, E., Birkelund, S.: Molecular biology of Chlamydia pneumoniae surface proteins and their role in immunopathogenicity. Am. Heart J. 138, 491495 (1999). Danesh, J., Collins, R., Peto, R.: Chronic infections and coronary heart disease: is there a link? Lancet 350, 430436 (1997). Elkind, M.S., Lin, I.F., Grayston, J.T., Sacco, R.L.: Chlamydia pneumoniae and the risk of first ischemic stroke. The Northern Manhattan stroke study. Stroke 31, 15211525 (2000). Gérard, H.C., Schumacher, H.R., ElGabalawy, H., GoldbachManksy, R., Hudson, A.P.: Chlamydia pneumoniae present in the human synovium are viable and metabolically active. Microb. Pathog. 29, 1724 (2000). Grayston, J.T.: Epidemiology of Chlamydia pneumoniae (TWAR). In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11. 14. September, 211214 (1996). Grayston, J.T., Aldous, M.B., Easton, A., Wang, S.P., Kuo C.C., Campbell, L.A., Altman, J.: Evidence that Chlamydia pneumoniae causes pneumonia and bronchitis. J. Infect. Dis. 168, 12311235 (1993). Gupta, S., Leatham, E.W., Carrington, D., Mendall, M.A., Kaski, J.C., Camm, A.J.: Elevated Chlamydia pneumoniae antibodies, cardiovascular events, and azithromycin in male survivors of myocardial infarction. Circulation 96, 404407 (1997). Gurfinkel, E., Bozovich, G., Daroca, A., Beck, E., Mautner, B.: Randomised trial of roxithromycin in nonqwave coronary syndromes: ROXIS pilot study. Lancet 350, 404407 (1997). Hahn, D.L., Peeling, R.W., Dillon, E., McDonald, R., Saikku, P.: Serologic markers for C. pneumoniae in asthma. Ann. Allergy Asthma Immunol. 84, 227233 (2000). Hunter, S.F., Hafler, D.A.: Ubiquitous pathogens: Links between infection and autoimmunity in MS? Neurology 55, 164165 (2000). Kuo, C. C., Jackson, L.A., Campbell, L.A., Grayston, J.T.: Chlamydia pneumoniae(twar). Clin. Microbiol. Rev. 8, 451461 (1995). LayhSchmitt, G., Bendl, C., Hildt, U., DongSi, T., Jüttler, E., Schnitzler, P., GrondGinsbach, C., Grau, A.J.: Evidence for infection with Chlamydia pneumoniae in a subgroup of patients with multiple sclerosis. Ann. Neurol. 47, 652655 (2000). 432TMBVPG/010414 15
Maass, M., Bartels, C., Engel, P.M., Mamat, U., Sievers, H.H.: Endovascular presence of viable Chlamydia pneumoniae is a common phenomenon in coronary artery disease. J. Am. Coll. Cardiol. 31, 827832 (1998). Muhlestein, J.B.: The link between Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis. Infect. Med. 14, 380382, 392, 426 (1997). Saikku, P.: Chronic Chlamydia pneumoniae infections. In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11.14. September. 215218 (1996). Saikku, P., Leinonen, M., Mattila, K., Ekman, M.R., Nieminen, M.S., Mäkela, P.H., Huttunen, J.K., Valtonen, V.: Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction. Lancet 2, 983986 (1988). Saikku, P., Leinonen, M., Tenkanen, L., Linnanmäki, E., Ekman, M.R., Manninen, V., Manttari, M., Frick, M.H., Huttunen, J.K.: Chronic Chlamydia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease in the Helsinki Heart Study. Ann. Intern. Med. 116, 272278 (1992). Samra, Z., Soffer, Y.: IgA antichlamydial antibodies as a diagnostic tool for monitoring of active chlamydial infection. Eur. J. Epidemiol. 8, 882884 (1992). Schumacher, H.R.: Chlamydial Arthritis. In: Chlamydia Research. Pekka Saikku (ed.). Proceedings of the 4 th Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Helsinki, Finland, 20.23. August. 229 (2000). Sriram, S., Stratton, C.W., Yao, S.: Chlamydia pneumoniae infection in the central nervous system in multiple sclerosis. Ann. Neurol. 46, 6 14 (1999). Stille, W., JustNübling, G.: Argumente für eine AntibiotikaTherapie der Arteriosklerose. Chemotherapie Journal 6, 15 (1997). 432TMBVPG/010414 16