BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate)

ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA-254489.03 Αναθ.: Sep 2011 BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) χρησιμοποιείται για την απομόνωση βακτηριδίων που εμπλέκονται συνήθως σε λοιμώξεις της ουροποιητικής οδού. Το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar είναι ένα μη εκλεκτικό υλικό για την απομόνωση, ταυτοποίηση ή διαφοροποίηση παθογόνων οργανισμών της ουροποιητικής οδού, ενώ το Άγαρ Columbia CNA είναι ένα εκλεκτικό υλικό για την απομόνωση Gram θετικών βακτηριδίων. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar: Ο Escherichia coli, οι εντερόκοκκοι, οι ομάδες Klebsiella- Enterobacter-Serratia και Proteus-Morganella-Providencia είναι οι οργανισμοί που προκαλούν συχνότερα λοιμώξεις της ουροποιητικής οδού (=UTI). Ο E. coli σε καθαρή καλλιέργεια ή σε συνδυασμό με εντερόκοκκους προκαλεί 60% έως 70% των UTI. Ο Staphylococcus saprophyticus και ο Streptococcus agalactiae παρουσιάζονται, με μικρότερη συχνότητα, σε UTI στις γυναίκες. Ορισμένοι από τους εμπλεκόμενους οργανισμούς παράγουν ένζυμα για τον μεταβολισμό λακτόζης ή γλυκοζιδίων ή και των δύο, ενώ άλλοι οργανισμοί δεν παράγουν κανένα από αυτά τα ένζυμα. Παραδείγματος χάριν, ο E. coli παράγει ένζυμα μεταβολισμού λακτόζης αλλά είναι αρνητικός στη ß-γλυκοζιδάση. Άλλα μέλη της οικογένειας Enterobacteriaceae είναι θετικά στη ß- γλυκοζιδάση αλλά δεν περιέχουν τα απαραίτητα ένζυμα για τη ζύμωση λακτόζης, και άλλα μέλη της οικογένειας μπορεί να περιέχουν και τους δύο τύπους ενζύμων ή κανέναν από αυτούς. Οι β- γλυκοζιδάσες βρίσκονται επίσης σε Gram θετικούς κόκκους όπως τον Enterococcus spp. και Streptococcus agalactiae. Η απαμινάση της θρυπτοφάνης (TDA) είναι ένα χαρακτηριστικό ένζυμο που βρίσκεται στην ομάδα οργανισμών Proteus-Morganella-Providencia. Το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar επιτρέπει την ταυτοποίηση E. coli, εντερόκοκκων και των περισσότερων στελεχών Staphylococcus saprophyticus και S. simulans απευθείας στο τρυβλίο απομόνωσης. Επιπλέον, είναι δυνατή η ανίχνευση των ομάδων Klebsiella-Enterobacter- Serratia (=KES) και Proteus-Morganella-Providencia (=PMP) μέσω χρωματισμού των αποικιών και του υλικού. 1-3 Επειδή το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar είναι μη εκλεκτικό, αναπτύσσονται και άλλοι παθογόνοι οργανισμοί UTI, αλλά για την ταυτοποίησή τους απαιτούνται βιοχημικές εξετάσεις. Το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar αναπτύχθηκε από τον A. Rambach και πωλείται από την BD Diagnostic Systems σύμφωνα με το συμφωνητικό αδειοδότησης που έχει υπογραφεί με την CHROMagar, Παρίσι, Γαλλία. Ειδικά επιλεγμένες πεπτόνες παρέχουν τα θρεπτικά στοιχεία στο Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar. Το μείγμα χρωμογόνων αποτελείται από τεχνητά υποστρώματα (χρωμογόνα) τα οποία απελευθερώνουν ενώσεις διαφορετικού χρώματος κατά την αποικοδόμηση από ειδικά μικροβιακά ένζυμα, διασφαλίζοντας έτσι την άμεση διαφοροποίηση ορισμένων ειδών ή την ανίχνευση ορισμένων ομάδων οργανισμών, με ελάχιστες εξετάσεις επιβεβαίωσης. Άγαρ Columbia CNA: Οι Ellner et al. ανέφεραν την ανάπτυξη μιας νέας σύνθεσης άγαρ αίματος, που ονομάστηκε άγαρ Columbia. 4 Το υλικό αυτό, που επιτυγχάνει μεγαλύτερες αποικίες και πιο πλούσια ανάπτυξη από ότι ανάλογες βάσεις άγαρ αίματος, χρησιμοποιείται για υλικά που περιέχουν αίμα και για εκλεκτικές συνθέσεις. Οι Ellner et al. βρήκαν ότι ένα υλικό που περιέχει 10 mg κολιστίνης και 15 mg ναλιδιξικού οξέως ανά λίτρο σε βάση άγαρ Columbia, εμπλουτισμένο με 5% αίμα προβάτου, υποστηρίζει την ανάπτυξη σταφυλόκοκκων, αιμολυτικών στρεπτόκοκκων και εντερόκοκκων ενώ αναστέλλει την ανάπτυξη ειδών Proteus, Klebsiella και Pseudomonas. 4 PA-254489.03-1 -

Το άγαρ Columbia αποτελεί ένα ιδιαίτερα θρεπτικό υλικό βάσης. Η προσθήκη αντιμικροβιακών παραγόντων, κολιστίνης και ναλιδιξικού οξέων καθιστά το υλικό εκλεκτικό για gram θετικούς μικροοργανισμούς, ιδιαίτερα στρεπτόκοκκους και σταφυλόκοκκους. Το αίμα προβάτου προστίθεται στο υλικό για να επιτρέπεται η ανίχνευση αιμολυτικών αντιδράσεων. 4,5 ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) Κατά προσέγγιση συνθέσεις* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού CHROMagar Orientation Medium Χρωμοπεπτόνες 16,1 g Χρωμογόνο Μείγμα 1,3 Άγαρ 15,0 ph 6,9 ± 0,2 Columbia CNA Agar Παγκρεατικό αφομοίωμα της καζεΐνης 12,0 g Χλωριούχο νάτριο 5,0 g Πεπτικό αφομοίωμα ζωϊκού ιστού 5,0 Άγαρ 13,5 Εκχύλισμα ζυμομυκήτων 3,0 Κολιστίνη 0,01 Εκχύλισμα βοείου κρέατος 3,0 Ναλιδιξικό οξύ 0,015 Άμυλο αραβοσίτου 1,0 Αίμα προβάτου, απινωδογονωμένο 5% ph 7,3 ± 0,2 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τα τρυβλία εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατόν να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 10 τρυβλίων επί μια εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση στο φως πριν και κατά τη διάρκεια της επώασης γιατί ενδέχεται να καταστρέψει τα χρωμογόνα που περιλαμβάνονται στο Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε τα τρυβλία αερόβια στους 35 έως 37 C για διάστημα τουλάχιστον 20 έως 24 ωρών. PA-254489.03-2 -

Στέλεχος εξέτασης Enterococcus faecalis ATCC 29212 Streptococcus agalactiae ATCC 12386 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 27736 Proteus vulgaris ATCC 8427 Μη ενοφθαλμισμένο CHROMagar Orientation Medium αποικίες μικρές, κυανοπράσινες προς κυανές Ανάπτυξη αρκετά καλή έως καλή, μικροσκοπικές, κυανές αποικίες λευκές έως κιτρινωπές αποικίες Ανάπτυξη αρκετά καλή έως εξαιρετική, μεσαίου μεγέθους, διάφανες, ρόδινες αποικίες αποικίες μεσαίου μεγέθους, σκούρες κυανές, με ή χωρίς κυανό δακτύλιο Ανάπτυξη αρκετά καλή έως εξαιρετική, κυανοπράσινες αποικίες. Το περιβάλλον υλικό είναι ανοικτό πορτοκαλί προς καφέ Άχρωμο έως ανοικτό μπεζ, διάφανο Columbia CNA Agar γκρίζες αποικίες, απουσία αιμόλυσης Ανάπτυξη αρκετά καλή έως καλή, λευκές έως γκρίζες αποικίες, β- αιμόλυση υπόλευκες αποικίες, β-αιμόλυση Πλήρης αναστολή Αναστολή μερική έως πλήρης Αναστολή μερική έως πλήρης Ερυθρό (χρώμα αίματος) ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (διπλά τρυβλία Stacker των 90 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένο. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar χρησιμοποιείται αποκλειστικά για την απομόνωση, καταμέτρηση και διαφοροποίηση βακτηριδίων που βρίσκονται στα ούρα. Μπορούν να χρησιμοποιηθούν ούρα μέσης ροής ή καθετήρα ή ούρα που έχουν συλλεχθεί με υπερηβική παρακέντηση της ουροδόχου κύστης (δείτε επίσης ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ). Για τη συλλογή δειγμάτων ούρων εφαρμόζετε άσηπτες τεχνικές. Τα ούρα πρέπει να επιστρώνονται απευθείας στο υλικό μέχρι 2 ώρες μετά τη συλλογή ή πρέπει να διατηρούνται στο ψυγείο (για διάστημα μέχρι 24 ώρες) ώστε να αποφεύγεται η υπερβολική ανάπτυξη των λοιμωδών ή των μολυσματικών παραγόντων πριν τον ενοφθαλμισμό σε αυτό το υλικό. 6-8 Διαδικασία της εξέτασης Συλλέξτε ένα δείγμα μη αραιωμένων, καλά αναμεμειγμένων ούρων χρησιμοποιώντας βαθμονομημένο κρίκο (0,01 ή 0,001 ml). Για τον ενοφθαλμισμό των υλικών σε διπλά τρυβλία, χρησιμοποιήστε κατά προτίμηση κρίκους 0,001 ml (= 1 µl). Βεβαιωθείτε για τη σωστή φόρτωση του κρίκου που περιέχει το δείγμα. Πρώτα ενοφθαλμίστε το δείγμα σε μια μικρή περιοχή της επιφάνειας του Υλικού Προσανατολισμού CHROMagar. Μετά ενοφθαλμίστε την υπόλοιπη περιοχή του υλικού αυτού. Κατόπιν, συλλέξτε νέο δείγμα από τα ούρα και προχωρήστε με τον ίδιο τρόπο για το Άγαρ Columbia CNA. Εάν χρησιμοποιούνται κρίκοι των 10 µl, συνιστάται προηγούμενη δεκαπλάσια αραίωση του δείγματος ούρων σε στείρο φυσιολογικό αλατούχο διάλυμα. Επωάστε το ενοφθαλμισμένο τρυβλίο σε ανεστραμμένη θέση αερόβια στους 35 έως 37 C για 20 έως 24 ώρες. Δεν συνιστάται η επώαση αυτού του διπλού τρυβλίου σε περιβάλλον εμπλουτισμένο με διοξείδιο του άνθρακα. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση στο φως κατά τη διάρκεια της επώασης γιατί το φως ενδέχεται να καταστρέψει τα χρωμογόνα που PA-254489.03-3 -

περιλαμβάνονται στο Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar. Όταν αναπτυχθούν τα χρώματα των αποικιών, επιτρέπεται η έκθεση στο φως. Η χρήση των βαθμονομημένων κρίκων και άλλων τεχνικών που χρησιμοποιούνται συνήθως για την τοποθέτηση δειγμάτων ούρων σε τρυβλία είναι υποχρεωτική, ώστε να προκύψουν απομονωμένες αποικίες με τα τυπικά τους χρώματα και σχήματα. Αποτελέσματα Μετά την επώαση, τα υλικά θα πρέπει να εμφανίζουν απομονωμένες αποικίες στις περιοχές όπου αραιώθηκε σωστά το ενοφθάλμισμα. Το Σχήμα 1 θα πρέπει να χρησιμοποιείται για την ταυτοποίηση ή διαφοροποίηση και ως κατευθυντήρια γραμμή για συμπληρωματικές αντιδράσεις επιβεβαίωσης στο Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar. Για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί χρώση Gram και μικροσκόπηση. Η ανάπτυξη στο Άγαρ Columbia CNA προκύπτει εάν υπάρχουν Gram θετικά βακτηρίδια. Για λεπτομέρειες και για την ερμηνεία της ανάπτυξης σε αυτό το υλικό, συμβουλευτείτε τις αναφορές. 5,9 Εξετάσεις επιβεβαίωσης Για το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar, εκτελέστε τις εξετάσεις επιβεβαίωσης όπως απαιτείται (Σχήμα 1). Μην εφαρμόζετε κανένα αντιδραστήριο ανίχνευσης, όπως ινδόλη DMACA ή άλλα αντιδραστήρια στις αποικίες που βρίσκονται σε αυτό το υλικό. Αντίθετα, οι εξετάσεις θα πρέπει να εκτελούνται σε διηθητικό χαρτί με ανάπτυξη από αντίστοιχες αποικίες. Μη χρησιμοποιείτε αντιδραστήριο ινδόλης Kovac για αποικίες E. coli, γιατί το χρώμα τους ενδέχεται να παρεμβληθεί με το ερυθρό χρώμα μιας θετικής εξέτασης ινδόλης. Αντί αυτού χρησιμοποιήστε αντιδραστήριο ινδόλης διμεθυλαμινοκινναμαλδεΰδης (DMACA). Εάν χρησιμοποιούνται άλλες εξετάσεις επιβεβαίωσης ή βιοχημικά συστήματα ταυτοποίησης, πρέπει να ακολουθούνται οι οδηγίες αυτών των εξετάσεων ή συστημάτων. Υπολογισμός και ερμηνεία των αποτελεσμάτων 6-9 Μετρήστε τον αριθμό των αποικιών (cfu) σε κάθε υλικό. Εάν χρησιμοποιήθηκε κρίκος 0,001 ml, κάθε αποικία αντιστοιχεί σε 1000 CFU/ml ούρων. 7 Ούρα που λαμβάνονται από το μέσον της ροής ούρησης και μέσω καθετήρα: Οι τρέχουσες κατευθυντήριες γραμμές υποδεικνύουν ότι για έναν μόνο απομονωμένο οργανισμό η πυκνότητα 10 5 cfu/ml υποδεικνύει λοίμωξη, η πυκνότητα <10 5 cfu/ml υποδεικνύει ουρηθρική ή κολπική μόλυνση, και μεταξύ 10 4 έως 10 5 CFU/ml απαιτείται εκ νέου αξιολόγηση με βάση τα κλινικά στοιχεία. Τα μολυσματικά βακτηρίδια εμφανίζονται συνήθως σε μικρούς αριθμούς που ποικίλουν στη μορφολογία των αποικιών. Ούρα που συλλέγονται με υπερηβική παρακέντηση της ουροδόχου κύστης: Επειδή η ουροδόχος κύστη είναι στείρα σε άτομα που δεν έχουν μολυνθεί, η ανίχνευση cfu υποδεικνύει λοίμωξη. Τα παθογόνα της ουροποιητικής οδού αποδίδουν συνήθως σε αυτό το υλικό μεγάλες μετρήσεις και διαθέτουν ομοιόμορφη μορφολογία αποικιών και χρώμα. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) χρησιμοποιείται για την απομόνωση, ταυτοποίηση ή συμπερασματική ταυτοποίηση βακτηριδίων που εμπλέκονται συνήθως σε λοιμώξεις της ουροποιητικής οδού. Το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar είναι ένα χρωμογόνο υλικό για την άμεση ταυτοποίηση, διαφοροποίηση και καταμέτρηση συνήθων παθογόνων της ουροποιητικής οδού. Το υλικό είναι κατάλληλο για την απομόνωση πολλών μικροοργανισμών αερόβιας ανάπτυξης, όπως Enterobacteriaceae, Pseudomonas και αζυμωτικά Gram αρνητικά ραβδία, εντερόκοκκους, σταφυλόκοκκους και πολλούς άλλους οργανισμούς, από δείγματα ούρων. 1-3 Το υλικό επιτρέπει την άμεση ταυτοποίηση Escherichia coli σύμφωνα με το χρώμα των αποικιών και μια εξέταση επιβεβαίωσης ινδόλης, και την άμεση ταυτοποίηση Enterococcus και Streptococcus agalactiae σύμφωνα με το χρώμα των αποικιών και μια εξέταση επιβεβαίωσης PYR, ή εναλλακτικά, μια ορολογική εξέταση συγκόλλησης για τον προσδιορισμό της ομάδας Lancefield. Άλλοι οργανισμοί ενδεχομένως να ταυτοποιηθούν μετά από εκτέλεση κάποιων εξετάσεων επιβεβαίωσης ή μπορεί να απαιτούν πλήρη βιοχημική ταυτοποίηση, ανάλογα με το PA-254489.03-4 -

είδος. Επειδή οι περισσότερες από τις συνηθέστερες λοιμώξεις της ουροποιητικής οδού προκαλούνται από E. coli ή/και εντερόκοκκους, η χρήση του υλικού αυτού μειώνει σημαντικά το φόρτο εργασίας και το χρόνο για τον ενοφθαλμισμό και την ανάγνωση των συστημάτων ταυτοποίησης που απαιτούνται όταν χρησιμοποιούνται για την απομόνωση συμβατικά υλικά. Το Άγαρ Columbia CNA είναι ένα τυπικό υλικό για την απομόνωση και καλλιέργεια πολλών Gram θετικών μικροοργανισμών αερόβιας ανάπτυξης, π.χ. στρεπτόκοκκοι, σταφυλόκοκκοι, κορυνόμορφα, Listeria spp και άλλοι. 5,7,9 Αποτελέσματα της Απόδοσης 2,10 Διενεργήθηκαν δύο ανεξάρτητες αξιολογήσεις απόδοσης σε Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar. Και στις δύο αξιολογήσεις, το χρωμογόνο υλικό ανίχνευσε περισσότερα παθογόνα από ότι τα παραδοσιακά υλικά που χρησιμοποιήθηκαν για συγκριτικούς σκοπούς. Έχουν δημοσιευθεί οι λεπτομέρειες για την πρώτη αξιολόγηση, και τα αποτελέσματα της πρώτης και της δεύτερης αξιολόγησης είναι διαθέσιμα στο έγγραφο Οδηγίες Χρήσης του BD CHROMagar Orientation Medium (αρ. κατ. 254102). 2 Περιορισμοί της διαδικασίας Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar: Οι αποικίες που εμφανίζουν το φυσικό τους χρώμα και δεν αντιδρούν με τα χρωμογόνα υποστρώματα πρέπει να διαφοροποιηθούν περαιτέρω με κατάλληλες βιοχημικές ή ορολογικές εξετάσεις. Συμβουλευτείτε τις αναφορές. 9,11 Τα Gram αρνητικά ραβδία, πλην εκείνων που ανήκουν στην ομάδα KES, μπορεί να παράγουν μεγάλες κυανές αποικίες και να απαιτούν, συνεπώς, συμπληρωματικές βιοχημικές εξετάσεις για την ταυτοποίησή τους. 11 Σε πολύ σπάνιες περιπτώσεις, ενδέχεται να υπάρχει στα ούρα Listeria monocytogenes ή άλλα είδη Listeria (π.χ. μετά από αποβολή που οφείλεται σε αυτούς τους παράγοντες). Ο οργανισμός Listeria παράγει μικρές κυανές έως κυανοπράσινες αποικίες που είναι PYR αρνητικές, και μιμούνται τον Streptococcus agalactiae (δείτε το Σχήμα 1). Συνεπώς, μπορεί να είναι χρήσιμη η προετοιμασία μιας χρώσης Gram όλων των στελεχών που σε αυτό το υλικό παράγουν μικρές, κυανές έως κυανοπράσινες αποικίες, οι οποίες είναι PYR αρνητικές. Η παρουσία Gram θετικών ραβδίων μπορεί να είναι ενδεικτική για είδη Listeria. Απαιτούνται συμπληρωματικές βιοχημικές εξετάσεις για την επιβεβαίωση της παρουσίας αυτών των παραγόντων. Πολύ σπάνια, απομονωμένοι οργανισμοί Aeromonas hydrophila ενδέχεται να παράγουν ρόδινες έως ροζ αποικίες. Αυτές είναι δυνατόν να διαφοροποιηθούν από E. coli με μια εξέταση οξειδάσης (Aeromonas = θετικό, E. coli = αρνητικό). Περιστασιακά, αρνητικοί στην κοαγκουλάση σταφυλόκοκκοι, πλην του S. saprophyticus, π.χ. S. simulans, S. xylosus, και S. intermedius, ενδέχεται να εμφανίσουν αποικίες χρώματος ρόδινου έως ροζ. Συνεπώς, απαιτείται η εκτέλεση συμπληρωματικών εξετάσεων (δείτε το Σχήμα 1) σε αυτούς τους απομονωμένους οργανισμούς. Το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar δεν υποστηρίζει την ανάπτυξη απαιτητικών οργανισμών όπως Neisseria, Haemophilus, ή Mycoplasma spp. Δεν έχει επικυρωθεί η χρήση αυτού του υλικού για μη κλινικά ή κλινικά δείγματα πλην δειγμάτων ούρων. Πριν χρησιμοποιήσετε το Υλικό Προσανατολισμού CHROMagar για πρώτη φορά, συνιστάται η εκπαίδευση στην τυπική εμφάνιση των αποικιών με προσδιορισμένα στελέχη, π.χ., τα στελέχη που αναφέρονται στην ενότητα ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ. Άγαρ Columbia CNA : Σε αυτό το υλικό μπορεί να αναπτυχθούν βακτήρια που παρουσιάζουν ανθεκτικότητα στα εκλεκτικά συστατικά. Τα είδη Candida και άλλοι μύκητες δεν αναστέλλονται σε αυτό το υλικό. Οι αερόβιοι οργανισμοί σπορογένεσης όπως ο Bacillus spp, μπορεί να ανασταλούν με το Άγαρ Columbia CNA με 5% Αίμα Προβάτου, παρόλο που είναι Gram θετικά βακτήρια. Παρότι ορισμένες διαγνωστικές εξετάσεις είναι δυνατό να εκτελεστούν απευθείας σε αυτό το υλικό καλλιέργειας, για πλήρη ταυτοποίηση απαιτούνται βιοχημικές και, εάν υποδεικνύεται, ανοσολογικές εξετάσεις, με χρήση καθαρών καλλιεργειών. Η βάση άγαρ Columbia έχει σχετικά υψηλή περιεκτικότητα υδατανθράκων και, συνεπώς, οι β αιμολυτικοί στρεπτόκοκκοι μπορεί να παράγουν μια πρασινωπή αιμολυτική αντίδραση που μπορεί να παραγνωριστεί για α αιμόλυση. PA-254489.03-5 -

ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Merlino, J., S. Siarakas, G. J. Robertson, G. R. Funnell, T. Gottlieb, and R. Bradbury. 1996. Evaluation of CHROMagar Orientation for differentiation and presumptive identification of gram-negative bacilli and Enterococcus species. J. Clin. Microbiol. 34: 1788-1793. 2. Hengstler, K.A., R. Hammann, and A.-M. Fahr. 1997. Evaluation of BBL CHROMagar Orientation medium for detection and presumptive identification of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 35: 2773-2777. 3. Samra, Z., M. Heifetz, J. Talmor, E. Bain, and J. Bahar. 1998. Evaluation of use of a new chromogenic agar in detection of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol. 36: 990-994. 4. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45:502-504. 5. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1, p. 269-275.Williams & Wilkins, Baltimore, MD. 6. Barry, A.L., P.B. Smith, and M. Turck. 1975. Cumitech 2, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., T.L. Gavan. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Forbes, B.A., and P.A. Granato. Processing specimens for bacteria. 1995. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture media, Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Data on file. BD Diagnostic Systems Europe, Heidelberg, Germany. 11. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD CHROMagar Orientation Medium / Columbia CNA Agar (Biplate) Αρ. κατ. 254489 Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD logo and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company 2011 BD PA-254489.03-6 -

Σχήμα 1: Κατευθυντήριες γραμμές για την εμφάνιση των αποικιών, για την εκτέλεση εξετάσεων επιβεβαίωσης και τη συνακόλουθη διαφοροποίηση ή ταυτοποίηση σε BD CHROMagar Orientation Medium Μικρές, κυανοπράσινες έως κυανές αποικίες: εξέταση PYR β ερυθρές (+) άχρωμες (-) α Enterococcus spp. Κόκκοι: Str. agalactiae Ραβδία: είδη Listeria : εξετάσεων Μεγάλες, κυανές αποικίες: Ομάδα Klebsiella-Enterobacter-Serratia (KES) Ταυτοποιήστε τα είδη με σύστημα βιοχημικών εξετάσεων Μεγάλες, ρόδινες, διάφανες αποικίες: εξέταση ινδόλης DMACA γ πράσινες (+) άχρωμες έως ερυθρές (-) E. coli δ Ταυτοποιήστε τα είδη με σύστημα βιοχημικών Μικρές, αδιαφανείς, ρόδινες έως ροζ αποικίες: δίσκος νοβοβιοκίνης 5 µg ε ανθεκτικοί ευαίσθητοι Staphylococcus saprophyticus f, S. xylosus στ S. simulans στ S. intermedius ζ Ταυτοποιήστε τα είδη με σύστημα βιοχημικών εξετάσεων Άχρωμες έως μπεζ αποικίες σε ανοικτό πορτοκαλί έως καφέ υλικό η : Ομάδα Proteus-Morganella-Providencia PMP εξέταση ινδόλης DMACA γ πράσινες (+) άχρωμες έως ρόδινες (-) Proteus vulgaris H 2 S + θ Proteus mirabilis ( ODC +) ι Providencia spp. H 2 S - Proteus penneri (ODC -) Morganella spp. H 2 S - α Συνιστάται χρώση Gram. β Εξέταση πυρογλουταμινικού για αρυλαμιδάση του πυρρολιδονυλίου. Για τη διαφοροποίηση Enterococcus spp. από Streptococcus agalactiae, αντί της εξέτασης PYR μπορούν να χρησιμοποιηθούν ορολογικές εξετάσεις για την ομαδοποίηση Lancefield. γ DMACA= αντιδραστήριο διμεθυλαμινοκινναμαλδεΰδης για παραγωγή ινδόλης. Εφαρμόστε το αντιδραστήριο σε διηθητικό χαρτί και τρίψτε μια αποικία στην περιοχή του διηθητικού χαρτιού που περιέχει αντιδραστήριο. Περιμένετε για 10-20 δευτερόλεπτα. Το πράσινο χρώμα είναι ενδεικτικό της παραγωγής ινδόλης (ερυθρό ή άχρωμο = αρνητικό). Μη χρησιμοποιείται αντιδραστήριο ινδόλης Kovac για την εξέταση ρόδινων αποικιών! δ Μπορεί να εκτελεστεί εξέταση οξειδάσης σε όλες τις θετικές στην ινδόλη, μεγάλες ρόδινες αποικίες, προκειμένου να εξαιρεθεί η παρουσία Aeromonas (=θετικός στην οξειδάση). ε Απλώστε-ενοφθαλμίστε τον απομονωμένο οργανισμό σε ένα τρυβλίο με Άγαρ Mueller Hinton II. Τοποθετήστε ένα δίσκο νοβοβιοκίνης (δίσκος 5 µg) στο ενοφθαλμισμένο τρυβλίο. Επωάστε για 18 έως PA-254489.03-7 -

24 ώρες στους 35 έως 37 C και μετρήστε το μέγεθος της ζώνης αναστολής (ανθεκτικό: 16 mm, ευαίσθητο: > 16 mm). στ Γνωστοί ως οργανισμοί παθογόνοι για τον άνθρωπο, οι οποίοι ενδέχεται να απομονωθούν και από ούρα. ζ Δεν είναι γνωστό ότι απομονώνεται από ανθρώπινα ούρα. η Το ανοικτό πορτοκαλί έως καφέ χρώμα οφείλεται στη θετική απαμινάση της θρυπτοφάνης (TDA) που είναι συνήθης για όλους τους οργανισμούς της ομάδας PMP. Περίπου 50% των στελεχών P. vulgaris παράγουν κυανές αποικίες σε υλικό χρώματος ανοικτού πορτοκαλί έως καφέ. θ Συμβατική εξέταση υδροθείου. ι Συμβατική εξέταση αποκαρβοξυλάσης της ορνιθίνης. PA-254489.03-8 -