Leuko64 Προσδιορισμός ανίχνευσης οξειών συστημικών φλεγμονωδών αντιδράσεων

Leuko64 Προσδιορισμός ανίχνευσης οξειών συστημικών φλεγμονωδών αντιδράσεων i Πληροφορίες προϊόντος h LK-064-75 (75 εξετάσεις), LK-064-250 (250 εξετάσεις) V Για in vitro διαγνωστική χρήση ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΑΡΧΗ Η έκφραση του ουδετερόφιλου CD64 αυξάνεται γρήγορα, τόσο in vitro όσο και in vivo εντός μερικών ωρών, μέσω μεσολαβητών φλεγμονής, όπως η γ-ιντερφερόνη και ο G-CSF (1-3). Η ίδια μεταβολή παρατηρείται ως αντίδραση σε τεκμηριωμένη μόλυνση ή τραυματισμό ιστών, υποδεικνύοντας έτσι ότι η μέτρηση της έκφρασης του ουδετερόφιλου CD64 συσχετίζεται με την ύπαρξη ανάλογων παθολογιών στον άνθρωπο (4-14). Ο προσδιορισμός Leuko64 TM χρησιμοποιεί ένα μίγμα τριών μονοκλωνικών αντισωμάτων με ειδικότητες για το CD64 (κλώνοι 22 και 32.2) και το CD163 (κλώνος Mac2-158). Η χρήση των δύο αντισωμάτων σε διαφορετικούς επιτόπους του CD64 αυξάνει το λόγο σήματος προς θόρυβο και παρέχει ένα μηχανισμό για την ελαχιστοποίηση της διακύμανσης από τη μία παρτίδα στην άλλη στο σήμα φθορισμού του αντιδραστηρίου. Η προσθήκη του μονοκλωνικού αντισώματος στο CD163, ένα μονοκυτταρικό ειδικό αντιγόνο, αυξάνει την ειδικότητα ταυτοποίησης του υποπληθυσμού λευκοκυττάρων, διευκολύνοντας έτσι τον αλγόριθμο εντοπισμού συστάδων του λογισμικού Leuko64 TM QuantiCALC και επιτρέποντας τον εντοπισμό εσωτερικών πληθυσμών "θετικού και αρνητικού ελέγχου". Η χρήση αυτοματοποιημένου λογισμικού εξαλείφει την εγγενή διακύμανση της τυπικής υποκειμενικής ανάλυσης κυτταρομετρικής ροής σε listmode. Η χρήση εναιωρήματος με φθορίζοντα σφαιρίδια για την τυποποίηση της κυτταρικής CD64 ποσοτικοποίησης κατέστησε δυνατή την ιχνηλασιμότητα ως προς το NIST Τυπικό Υλικό Αναφοράς SRM 1932 (RM 8640) και παρέχει ένα μηχανισμό για την ελαχιστοποίηση των διαφορών από τη μία παρτίδα στην άλλη στα κιτ προσδιορισμού Leuko64 TM. Τα αποτελέσματα του προσδιορισμού Leuko64 TM αναφέρονται ως δείκτης PMN CD64 ως η διαγνωστική παράμετρος, μαζί με τους δείκτες Μονοκυττάρου CD64 και CD163. ΕΦΑΡΜΟΓΗ Οι εκδόσεις LK-064-75 και LK-064-250 του κιτ προσδιορισμού Leuko64 TM σχεδιάστηκαν ειδικά για χρήση με τα παρακάτω κυτταρόμετρα ροής: Beckman Coulter XL, Beckman Coulter FC-500, Beckman Coulter Navios, BD Biosciences FACScan, BD Biosciences FACSCalibur και BD Biosciences Cantos.

ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το κιτ προσδιορισμού Leuko64 TM της Trillium Diagnostics προορίζεται να χρησιμοποιηθεί στη μέτρηση της έκφρασης του λευκοκυτταρικού ουδετερόφιλου CD64 και προορίζεται να χρησιμοποιηθεί σε συνάρτηση με άλλα εργαστηριακά ευρήματα και κλινικές εκτιμήσεις για να βοηθήσει στην in vitro διάγνωση της οξείας συστημικής φλεγμονώδους απόκρισης στον τραυματισμό ιστών, όπως σημειώνεται στη βλάβη, τη μόλυνση ή τη σήψη ιστών. Το Trillium Leuko64 TM προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση μόνο από εκπαιδευμένο προσωπικό με τα κατάλληλα προσόντα. ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΚΙΤ Αντιδραστήριο A Αντιδραστήριο B Αντιδραστήριο C Leuko64 TM Λογισμικό Μίγμα μονοκλωνικών αντισωμάτων από ποντικούς (περιέχει αλατούχο ρυθμιστικό διάλυμα με 0,5% κεκαθαρμένη αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) και 0,01% αζίδιο νατρίου). 10X Πυκνό διάλυμα λύσης Trillium (περιέχει χλωριούχο αμμώνιο) Εναιώρημα σφαιριδίων πολυστυρενίου 5-6 µm ιχνηθετημένα με StarFire Red TM και ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC), (περιέχει <0,1% αζίδιο νατρίου και 0,01% Tween 20). Χρησιμοποιείται για την ανάλυση αρχείων κυτταρομετρίας ροής σε αρχεία listmode και για τον υπολογισμό δεικτών CD64 στα λευκοκύτταρα. Το CD που περιλαμβάνεται περιέχει επίσης προγράμματα εκμάθησης για την εκπαίδευση του χρήστη και τη βέλτιστη χρήση του κιτ προσδιορισμού Leuko64 TM. ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΟΥΝΤΑΙ, ΑΛΛΑ ΕΝ ΣΥΜΠΕΡΙΛΑΜΒΑΝΟΝΤΑΙ Απεσταγμένο νερό Σωληνάρια από πολυστυρένιο 12x75 μίας χρήσης Κυτταρόμετρο ροής Μικροπιπέτα (ες) για τη δοσομετρία 5uL, 50uL και 1mL Αναδευτήρας τύπου vortex Ηλεκτρονικός υπολογιστής για ανάλυση αρχείου listmode ΕΙΓΜΑ Ο προσδιορισμός Leuko64 TM απαιτεί μόνο 50µL πλήρους αίματος σε αντιπηκτικό. Το EDTA, η ηπαρίνη, το κιτρικό νάτριο ή το ACD είναι όλα συμβατά αντιπηκτικά με αυτό το σύστημα εξέτασης. Τα δείγματα αίματος παραμένουν αποδεκτά για έως 8 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (18-22C) ή για 48 ώρες όταν διατηρούνται στο ψυγείο (2-8C). ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΕΙΓΜΑΤΟΣ 1. Αραιώστε το 10X διάλυμα λύσης Trillium (Αντιδραστήριο) 1:10, αναμιγνύοντας 1 μέρος του πυκνού Αντιδραστηρίου B με 9 μέρη διηθημένου απεσταγμένου νερού. Το τελικό ph αυτού του διαλύματος πρέπει να είναι 7,40 + 0,05. Παρασκευάστε έναν όγκο που να επαρκεί για τον αναμενόμενο αριθμό εξετάσεων (απαιτείται 1,0 ml για κάθε δείγμα). Το αραιωμένο ή το 1X διάλυμα λύσης Trillium παραμένει LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 2 από 9

σταθερό για 1 εβδομάδα σε θερμοκρασία δωματίου (20-26 C) ή για 30 ημέρες όταν διατηρείται στο ψυγείο (2-8 C). 2. Το αραιωμένο διάλυμα λύσης Trillium πρέπει να έχει θερμοκρασία από 20 C έως 37 C όταν χρησιμοποιείται. Το κρύο διάλυμα μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα κακή λύση και υποβέλτιστες συνθήκες προσδιορισμού. 3. Θέστε ετικέτα σε ένα σωληνάριο 12 x 75 mm από πολυστυρένιο για κάθε δείγμα προς ανάλυση. 4. Προσθέστε με πιπέτα 50µL αντιδραστηρίου Α Leuko64 TM σε κάθε σωληνάριο με ετικέτα. 5. Προσθέστε με πιπέτα 50µL του καλά αναμεμιγμένου δείγματος αίματος σε αντιπηκτικό με αριθμό λευκών αιμοσφαιρίων <25 x 10 9 κύτταρα/l (αραιώστε αν είναι απαραίτητο) στο αντίστοιχο σωληνάριο που περιέχει αντιδραστήριο A. Αναμίξτε ή αναδεύστε ήπια και επωάστε για 10 λεπτά στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου (18-22C). 6. Προσθέστε 1mL 1X διάλυμα λύσης Trillium (αραιωμένο αντιδραστήριο B) σε κάθε σωληνάριο και αναδεύστε επιμελώς. Επωάστε για 15 λεπτά στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου. Η διακεκομμένη ανάδευση αυξάνει τη λύση. 7. Προσθέστε 5 µl σφαιρίδια Leuko64 TM (αντιδραστήριο C) σε κάθε σωληνάριο, αναδεύστε και αναλύστε με κυτταρόμετρο ροής, χρησιμοποιώντας το παρακάτω πρωτόκολλο προετοιμασίας οργάνου και ανάλυσης. Τα προετοιμασμένα δείγματα που δεν αναλύονται άμεσα πρέπει να φυλάσσονται σε 2-8 C και να προστατεύονται από το φως μέχρι να αναλυθούν. Η ανάλυση με κυτταρομετρία ροής πρέπει να πραγματοποιείται εντός 4 ωρών από τη χρώση. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗ ΡΟΗΣ Πριν να αναλύσετε το πρώτο σας δείγμα, θα πρέπει να προετοιμάσετε ένα πρωτόκολλο λήψης στον κυτταρομετρητή ροής. Τα σφαιρίδια Leuko64 TM (Αντιδραστήριο C) θα χρησιμεύσουν ως βαθμονομητής για τις απολαβές του οργάνου και τις ρυθμίσεις τάσης. Προκειμένου να λειτουργήσει σωστά το αυτοματοποιημένο λογισμικό, επιβάλλεται η ακριβής τήρηση των παρακάτω βημάτων. Βλ. προγράμματα εκμάθησης στο CD του λογισμικού Leuko64 TM QuantiCALC για πρόσθετη υποστήριξη κατάρτισης. 1. Προετοιμάστε ένα σωληνάριο από πολυστυρένιο 12 x 75 mm που περιέχει g 5 µl σφαιρίδια Leuko64 TM (αντιδραστήριο C) σε 0,5 ml 1X διάλυμα λύσης Trillium (αντιδραστήριο B αραιωμένο 1:10 με διηθημένο απεσταγμένο νερό, ph 7,40 + 0,05). Αυτό το εναιώρημα σφαιριδίων θα χρησιμοποιηθεί για τον καθορισμό της βέλτιστης τάσης PMT και των ρυθμίσεων σκέδασης φωτός του κυτταρομέτρου ροής. 2. Στη λειτουργία λήψης του κυτταρομέτρου σας (οι χρήστες Beckman Coulter XL, FC500 ή Navios - βλ. παρακάτω), ρυθμίστε 5 ιστογράμματα δύο παραμέτρων: FS (lin) έναντι SS (log) CD64 FITC έναντι SS (log) CD163 PE έναντι SS (log) FL3 (σφαιρίδια) έναντι SS (log) CD163 PE έναντι CD64 FITC LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 3 από 9

Και 3 ιστογράμματα μίας παραμέτρου: FL1 - CD64 FITC FL2 - CD163 PE FL3 (ή PMT με ρύθμιση φίλτρου που να μπορεί να ανιχνεύσει 685 nm φωτός) ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για τα όργανα Beckman Coulter XL, FC500 και Navios επιβάλλεται οι παράμετροι λήψης να επιλεγούν με την παρακάτω σειρά: P1 = FALS P4=log PE P2 = log πλευρικής διασποράς P5=log PMT για σήμα 685 nm (συνήθως P3 = log FITC FL4) 3. Απενεργοποιήστε όλες τις ρυθμίσεις αντιστάθμισης και κατωφλίου. 4. Ρυθμίσεις τάσης για όλα τα όργανα, εκτός από το BDB FACSCanto II. (για τους χρήστες FACSCanto II, βλ. οδηγίες παρακάτω) Σημείωση: Ορίστε όλες τις παραμέτρους log σε προβολή 4 δεκάδων στο λογισμικό συλλογής του κυτταρομέτρου ροής πριν από τη λήψη Εκτελέστε το εναιώρημα σφαιριδίων και πραγματοποιήστε τις παρακάτω ρυθμίσεις στα ιστογράμματα μίας παραμέτρου (βλ. διάγραμμα) Το κέντρο της κορυφής στον άξονα FL1 (FITC) πρέπει να κεντράρεται στο κανάλι 100, (στην αρχή της τρίτης δεκάδας της έντασης φθορισμού. Το κέντρο της κορυφής στον άξονα FL2 (ΡΕ) πρέπει να κεντράρεται στο ~ 20, (στο πρώτο σημείο (tic) της δεύτερης δεκάδας της έντασης φθορισμού). Το κέντρο της κορυφής στον άξονα FL3 πρέπει να κεντράρεται στο κανάλι 100 ή στην αρχή της τρίτης δεκάδας της έντασης φθορισμού. Στο ιστόγραμμα FS έναντι log SS, ο πληθυσμός σφαιριδίων πρέπει να τοποθετηθεί στο τέλος της τρίτης δεκάδας για το σήμα log πλευρικής διασποράς και κοντά στο κανάλι 200 για εμπρός το σήμα διασποράς ή για το σήμα διασποράς μικρής γωνίας (σε κλίμακα 256, χρησιμοποιήστε τα κανάλια 25-50). Για τους χρήστες όλων των μοντέλων Beckman Coulter, του FACSCalibur και του FACScan : CD64 FITC CD163 PE Starfire Red SSC Log **Ρυθμίσεις τάσης μόνο για χρήστες BDB FACSCanto II : Τα κυτταρόμετρα ροής BD FACSCanto II απαιτούν οδηγίες εναλλακτικής ρύθμισης, λόγω διαφορών στην προβολή της κλίμακας φθορισμού log που είναι μοναδικές για το λογισμικό συλλογής BD FACSDiva που χρησιμοποιείται στο Canto II. LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 4 από 9

Σημείωση: Ορίστε όλες τις παραμέτρους log σε προβολή 4 δεκάδων στο λογισμικό συλλογής του κυτταρομέτρου ροής πριν από τη λήψη. Εκτελέστε το εναιώρημα σφαιριδίων και πραγματοποιήστε τις παρακάτω ρυθμίσεις στα ιστογράμματα μίας παραμέτρου (βλ. διάγραμμα): Το κέντρο της κορυφής στον άξονα FL1 (FITC) πρέπει να κεντράρεται στο κανάλι 3000, (στο δεύτερο σημείο (tic) της τρίτης δεκάδας της έντασης φθορισμού. Το κέντρο της κορυφής στον άξονα FL2 (ΡΕ) πρέπει να κεντράρεται στο κοντά στο τέλος της δεύτερης δεκάδας της έντασης φθορισμού). Το κέντρο της κορυφής στον άξονα FL3 πρέπει να κεντράρεται στο κανάλι 3000, (στο δεύτερο σημείο (tic) της τρίτης δεκάδας της έντασης φθορισμού. Στο ιστόγραμμα FS έναντι log SS, ο πληθυσμός σφαιριδίων πρέπει να τοποθετηθεί στο τέλος της τρίτης δεκάδας για το σήμα log πλευρικής διασποράς και κοντά στο κανάλι 25-50 για το εμπρός σήμα διασποράς ή το σήμα διασποράς μικρής γωνίας. Μόνο για τους χρήστες BD FACSCanto II: CD64 FITC CD163 PE Starfire Red SSC Log 5. Το κατώφλι εξαίρεσης αιμοπεταλίων και υπολειμμάτων ερυθρών αιμοσφαιρίων θα οριστεί στο log SS με τη χρήση λεμφοκυττάρων. Ο διευκρινιστής στο log SS πρέπει να οριστεί ακριβώς στα αριστερά του πληθυσμού λεμφοκυττάρων. Μην χρησιμοποιήσετε διευκρινιστή με ρύθμιση εμπρός διασποράς, καθώς τα σφαιρίδια θα εξαιρεθούν από τη λήψη. 6. Οι ρυθμίσεις λήψης και φύλαξης πρέπει να προσαρμοστούν ώστε να είναι δυνατή η συλλογή 50.000 μη οριοθετημένων συμβάντων. Γενικά συνιστάται ο ορισμός της ανάλυσης στο 1024, αλλά επιβάλλεται με τη χρήση κυτταρομέτρων Beckman Coulter Cytomics FC500 ή BD Biosciences FACSCanto. 7. Αποθηκεύστε τις ρυθμίσεις και το πρότυπο λήψης. Επαναλάβετε τα βήματα 4-7 με κάθε νέα παρτίδα Leuko64 TM ή μετά από συντήρηση του οργάνου. ΑΝΑΛΥΣΗ ΑΡΧΕΙΩΝ LISTMODE Εγκαταστήστε το λογισμικό Leuko64 QuantiCALC που συμπεριλαμβάνεται στον υπολογιστή MacIntosh ή PC που θα χρησιμοποιηθεί για την ανάλυση δεδομένων. Ακολουθήστε τις οδηγίες χρήστη για την ανάλυση δεδομένων listmode στο αρχείο Βοήθεια του λογισμικού. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το λογισμικό είναι ειδικό κατά παρτίδα και τα πρωτόκολλα χρήσης είναι ειδικά κατά μοντέλο οργάνου. Θα σας ζητηθεί να επιβεβαιώσετε τη σωστή επιλογή. LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 5 από 9

ΣΤΡΑΤΗΓΙΚΗ ΕΛΕΓΧΟΥ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣ ΙΟΡΙΣΜΟ LEUKO64 TM Ο προσδιορισμός χρησιμοποιεί αυτόλογους κυτταρικούς πληθυσμούς από το δείγμα ασθενούς για θετικούς και αρνητικούς ελέγχους, πράγμα που βελτιστοποιεί την αξιολόγηση προαναλυτικών μεταβλητών. Ο λεμφοκυτταρικός πληθυσμός, ο οποίος στερείται έκφρασης τόσο του CD64 όσο και του CD163 χρησιμεύει ως πληθυσμός αρνητικού ελέγχου και εξασφαλίζει την προσθήκη των σωστών αντιδραστηρίων και μπορεί να εντοπίσει την ύπαρξη ουσιών φθορισμού εντός του διαγνωστικού δείγματος. Ο μονοκυτταρικός πληθυσμός, ο οποίος έχει ιδιοσυστασιακή έκφραση τόσο του CD64 όσο και του CD163, χρησιμεύει ως θετικός έλεγχος για την εξασφάλιση σωστής χρώσης του δείγματος με το αντιδραστήριο A. Ακολουθήστε τις οδηγίες χρήστη για την ανάλυση δεδομένων listmode στο αρχείο Βοήθεια του λογισμικού Leuko64 TM για περαιτέρω λεπτομέρειες αναφορικά με τους αρνητικούς και τους θετικούς ελέγχους του προσδιορισμού. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το λογισμικό διαθέτει δείκτες και οδηγίες που σχετίζονται με τον έλεγχο. t l H Y C ΧΕΙΡΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ Φυλάσσετε τα φιαλίδια σε όρθια θέση, πωματισμένα σφιχτά, σε θερμοκρασία 2-8 C όταν δεν χρησιμοποιούνται. Τα μη ανοιγμένα φιαλίδια παραμένουν σταθερά ως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται επάνω σε κάθε φιαλίδιο και στο φυλλάδιο του προσδιορισμού. Αποφύγετε τους μη απαραίτητους κύκλους θέρμανσης και ψύξης, καθώς ο προσδιορισμός είναι έγκυρος έως το πολύ τριάντα (30) κύκλους θέρμανσης και ψύξης. Προστατέψτε το προϊόν για να μην καταψυχθεί, από θερμοκρασίες άνω των 30C και από παρατεταμένες περιόδους σε θερμοκρασία δωματίου (18-26C) ή από έκθεση στο φως. ΠΡΟΕΙ ΟΠΟΙΗΣΗ Όλα τα συστατικά αυτού του κιτ περιέχουν αζίδιο του νατρίου (<0,1% β/ό). Αυτό το χημικό είναι μια τοξική και επικίνδυνη χημική ένωση όταν συνδυάζεται με οξέα ή μέταλλα. Χειριστείτε το με την κατάλληλη φροντίδα. Τα διαλύματα που περιέχουν αζίδιο του νατρίου πρέπει να απορρίπτονται κατάλληλα. ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Η απόδοση και η ειδικότητα των αντιδραστηρίων που περιέχονται σε αυτό το κιτ έχουν δοκιμαστεί με τη χρήση εσωτερικών μεθόδων ποιοτικού ελέγχου. Η παραγωγή αυτού του προϊόντος γίνεται με τη χρήση οδηγιών ποιοτικού συστήματος και βιομηχανικής παραγωγής σε συμμόρφωση με τον Κανονισμό Ποιοτικών Συστημάτων (QSR) του FDA και το Πρότυπο ISO 13485:2003. LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 6 από 9

ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Είναι γνωστό ότι η θεραπευτική χρήση της γ-ιντερφερόνης, του G-CSF και άλλων παραγόντων που διαμορφώνουν τη συγγενή ανοσοαπόκριση, επηρεάζουν την προς τα επάνω ρύθμιση της έκφρασης του λευκοκυττάρου CD64 και, ως εκ τούτου, θα επηρεάσει την ερμηνεία του προσδιορισμού. Τα αποτελέσματα του προσδιορισμού Leuko64 TM δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται ως αποκλειστική μέτρηση της φλεγμονής σε αυτούς τους ασθενείς, αλλά μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την παρακολούθηση της επίδρασης των συναφών θεραπειών. Πρέπει να τηρούνται οι κατάλληλες συνθήκες φύλαξης και χρήσης αυτού του προϊόντος και των προς εξέταση δειγμάτων για βέλτιστη απόδοση και για την αποφυγή ψευδών ή ανακριβών αποτελεσμάτων. Η ατελής ανάμιξη του αντιδραστηρίου C πριν από τη χρήση είναι δυνατό να ακυρώσει τόσο το κλάσμα που λαμβάνεται όσο και το υλικό που απομένει μέσα στο φιαλίδιο. Η επιλογή λανθασμένου πρωτοκόλλου οργάνου ή αριθμού παρτίδας κιτ κατά την αρχικοποίηση του λογισμικού είναι δυνατό να επιφέρει μείωση της ακρίβειας της ανάλυσης δεδομένων listmode. Το λογισμικό είναι ειδικό κατά παρτίδα και τα πρωτόκολλα χρήσης είναι ειδικά κατά μοντέλο οργάνου. Κάντε τη σωστή επιλογή όταν σας ζητηθεί. Οποιοδήποτε αρχείο από ένα σοβαρά λευκοπενικό ή ουδετεροπενικό δείγμα αίματος που παρουσιάζει λιγότερα από 200 WBC συμβάντα οριοθετημένα από το λογισμικό Leuko64 TM σε οποιαδήποτε από τις 3 κατηγορίες (PMN, λεμφοκυττάρων ή μονοκυττάρων) δεν είναι δυνατό να αναλυθεί από τον προσδιορισμό Leuko64 TM χωρίς σημαντική μείωση της ακρίβειας του δείκτη PMN CD64. Οποιοδήποτε αρχείο με μέτρηση συμβάντων σφαιριδίων μικρότερη από 1000 πρέπει να αξιολογηθεί, προκειμένου να καθοριστεί η αιτία της χαμηλής μέτρησης σφαιριδίων, η οποία μπορεί να οφείλεται σε λανθασμένες ρυθμίσεις του οργάνου ή σε ανεπαρκώς αραιωμένο δείγμα αίματος με WBC >25 x 10 9 κύτταρα/l. Σπανίως, τα όργανα κυτταρομετρίας ροής ενδέχεται να έχουν ασυνήθιστη διάταξη φίλτρων, όπου FL1 δεν είναι το σήμα CD64 FITC και FL2 δεν είναι το σήμα CD163 PE, πράγμα που, συνεπώς, διακυβεύει την απόδοση του λογισμικού Leuko64 TM. Επικοινωνήστε με τον έμπορο του οργάνου και την Τεχνική Υποστήριξη της Trillium Diagnostics για υποστήριξη στην επίλυση αυτής της κατάστασης ή οποιωνδήποτε προβλημάτων από τη χρήση του λογισμικού. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώσει ένα αποδεκτό εύρος ή εύρη αναφοράς για κάθε παρτίδα του Leuko64 TM. Το εύρος αναφοράς του δείκτη PMN CD64 για υγιή φυσιολογικά δείγματα αίματος αναμένεται να είναι 1,00. Γενικά, όσο σοβαρότερη είναι η συστημική οξεία φλεγμονώδης απόκριση, τόσο υψηλότερη θα είναι η μέτρηση της τιμής του δείκτη CD64 PMN (και μονοκυττάρων). εν υπάρχουν καθορισμένα αναμενόμενα εύρη αναφοράς για τους δείκτες CD64 και CD163 μονοκυττάρων. LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 7 από 9

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΠΑΡΑΠΟΜΠΕΣ 1. Davis BH. Improved diagnostic approaches to infection/sepsis detection. Expert Rev Mol Diag 2005;5:193-207. 2. Schiff D, Rae J, et al. Increased phagocyte CD64 expression and improved Fcreceptor mediated phagocytosis following in vivo recombinant human interferon- Ɣ treatment of normal human subjects. Blood 1997;90:2987-94. 3. Petroni KC, Shen L, Guyre PM. Modulation of human polymorphonuclear leukocyte IgG Fc receptors and Fc receptor-mediated functions by IFN-gamma and glucocorticoids. J Immunol 1988;140:3467-72. 4. Davis BH, Bigelow NC, et al. Neutrophil CD64 expression: potential diagnostic indicator of acute inflammation and therapeutic monitor of interferon- therapy. Lab Hematol 1995;1:3-12. 5. Guyre PM, Campbell AS, et al. Monocytes and polymorphonuclear neutrophils of patients with streptococcal pharyngitis express increased numbers of type I IgG Fc receptors. J Clin Invest 1990;86:1892-1. 6. Ng PC, Lam HS. Diagnostic markers for neonatal sepsis. Curr Opin Pediatr 2006;18:125-31. 7. Davis BH, Bigelow NC. Comparison of neutrophil CD64 expression, manual myeloid immaturity counts, and automated hematology analyzer flags as indicators of infection or sepsis. Lab Hematol 2005;11:137-47. 8. Leino L, Sorvajarvi K, et al. Febrile infection changes the expression of IgG Fc receptors and complement receptors in human neutrophils in vivo. Clin Exp Immunol 1997;107:37-43. 9. Davis BH, Olsen S, et al. Neutrophil CD64 is an improved indicator of infection or sepsis in emergency room patients. Arch Pathol Lab Med 2006;130(5):654-61. 10. Van der Meer W, Pickkers P, et al. Hematological indices, inflammatory markers and neutrophil CD64 expression: comparative trends during experimental human endotoxemia. J Endotoxin Res 2007;13:94-100. 11. Groselj M, Ihan A, Derganc M. Neutrophil and monocyte CD64 and CD163 expression in critically ill neonates and children with sepsis: comparison of fluorescence intensity and calculated Indexes. Mediators Inflamm 2008; 2008:202646. 12. Bhandari V, Wang C, et al. Hematologic profile of sepsis in neonates: neutrophil CD64 as a diagnostic marker. Pediatrics 2008;121:129-134. 13. Hoffmann JJ. Neutrophil CD64 as a sepsis biomarker. Biochemica Medica 2011;21:282-90. 14. Icardi M, Erickson Y, Kilborn S, et al. CD64 Index provides simple and predictive testing for detection and monitiroing of sepsis and bacterial infection in hospital patients. J Clin Microbiol 2009;47:3914-19. 15. US Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration. 29 CFR Parts 1910. 1030, Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens; Final Rule. Federal Register 235:64175-82. 1991. 16. US Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication (NIH) 93-8395.Washington: US Government Printing Office. 1993. LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 8 από 9

ΕΜΠΟΡΙΚΑ ΣΗΜΑΤΑ Το λογισμικό Leuko64 QuantiCALC διέπεται από το νόμο περί πνευματικών δικαιωμάτων και αναπτύχθηκε από κοινού από την VERITY SOFTWARE HOUSE Topsham, Maine, Η.Π.Α. www.vsh.com και την TRILLIUM DIAGNOSTICS, LLC Brewer, Maine, Η.Π.Α. www.trilliumdx.com Τα FACSCanto και FACScan είναι εμπορικά σήματα της BD Biosciences San Jose, CA, Η.Π.Α. www.bdbiosciences.com Τα Navios, Gallios Cytomics FC500 και XL είναι εμπορικά σήματα της Beckman Coulter, Inc Brea, CA, Η.Π.Α. www.beckman.com Το Leuko64 είναι ένας προσδιορισμός κατοχυρωμένος με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας, βάσει του διπλώματος ευρεσιτεχνίας Η.Π.Α. με αρ. 8.116.984, του διπλώματος ευρεσιτεχνίας Ιαπωνίας με αρ. 5047803 και της εφαρμογής EPO με αρ. 05851842.4. ΥΠΟΣΤΗΡΙΞΗ ΠΕΛΑΤΩΝ M P Trillium Diagnostics, LLC PO Box 67 Brewer, Maine, Η.Π.Α. 04412 Τηλ. 1-207-945-0900 Fax 1-207-942-0346 Τεχνική υποστήριξη info@trilliumdx.com Παραγγελίες μέσω τηλεφώνου, φαξ ή ιστοτόπου στη διεύθυνση www.trilliumdx.com IQ Products BV Rozenburglaan 13a 9727 DL Groningen, Ολλανδία Τηλ. +31(0) 50 57 57 000 Φαξ +31 (0) 50 57 57 002 Τεχνική υποστήριξη marketing@iqproducts.nl Παραγγελίες orders@iqproducts.nl Ιστότοπος www.iqproducts.nl LK64-V11-2013 A4 EN Σελίδα 9 από 9