Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΠΛΑΚΕΣ PA-254021.06 Αναθ.: April 2013 BD Iso-Res Agar BD Iso-Res Agar (150 mm) ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BD Iso-Res Agar είναι ένα ημι-καθορισμένο υλικό για την εξέταση ευαισθησίας κλινικών απομονωμένων στελεχών με τη μέθοδο με διάχυσης σε δίσκο (Kirby-Bauer). ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Ενώ το άγαρ Mueller Hinton II συστήνεται σε πολλά πρότυπα για εξέταση ευαισθησίας, έχουν τεθεί διάφορα ζητήματα κατά της χρήσης του, όπως η ανεπαρκής αναπαραγωγιμότητα μεταξύ διαφορετικών παρτίδων και προβλήματα με την εξέταση των τετρακυκλινών και της τριμεθοπρίμης. 1-3 Το Iso-Res Agar (που περιγράφεται επίσης ως υλικό καλλιέργειας Iso- Sensitest) έχει αναπτυχθεί ειδικά για την αποτροπή των προβλημάτων αυτών. 4-6 Τα συστατικά έχουν επιλεγεί προσεκτικά για το σχηματισμό ευδιάκριτων και αναπαραγώγιμων ζωνών αναστολής. Το υλικό καλλιέργειας περιέχει μόνο χαμηλά επίπεδα θυμίνης ή θυμιδίνης, έτσι ώστε η εξέταση των σουλφοναμιδών και της τριμεθοπρίμης να μην επηρεάζονται από τους ανταγωνιστές αυτούς. Επομένως, το BD Iso-Res Agar αποτελεί μια εξαιρετική εναλλακτική λύση στο άγαρ Mueller Hinton II για την εξέταση ευαισθησίας με διάχυση σε δίσκο. Τα μεγέθη των ζωνών αναστολής που περιγράφονται στο πρότυπο M2-A7 της NCCLS ισχύουν και για το άγαρ Mueller Hinton. Επομένως, ενδέχεται να διαφέρουν από αυτά που προσδιορίζονται στο BD Iso- Res Agar. 8 Αυτό το υλικό καλλιέργειας συνιστάται από το Ολλανδικό σύστημα WRG. 9 Η καζεΐνη και ειδικά επιλεγμένες πεπτόνες παρέχουν βασικά θρεπτικά συστατικά, ενώ πολλές από τις καθορισμένες ενώσεις του υλικού καλλιέργειας παρέχουν θρεπτικά συστατικά, βιταμίνες και ανόργανα άλατα σε ίχνη. ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ BD Iso-Res Agar Σύνθεση* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Υδρολυμένη καζεΐνη 11,0 g Μεναδιόνη (Βιταμίνη K3) 0,001 Πεπτόνη 3,0 Κυανοκοβαλαμίνη (Βιταμίνη B12) 0,001 Γλυκόζη 2,0 L-Κυστεΐνη 0,02 Χλωριούχο νάτριο 3,0 L-Τρυπτοφάνη 0,02 Άμυλο 1,0 Πυριδοξίνη (Βιταμίνη B6) 0,003 Όξινο φωσφορικό δινάτριο 2,0 Παντοθενικό 0,003 Οξικό νάτριο 1,0 Νικοτιναμίδη 0,003 Γλυκεροφωσφορικό μαγνήσιο 0,2 Βιοτίνη 0,0003 Γλυκονικό ασβέστιο 0,1 Θειαμίνη 0,00004 Θειικό κοβάλτιο(ii) 0,001 Αδενίνη 0,01 Θειικός χαλκός(ii) 0,001 Γουανίνη 0,01 Θειικός ψευδάργυρος 0,001 Ξανθίνη 0,01 Θειικός σίδηρος(ιι) 0,001 Ουρακίλη 0,01 Χλωριούχο μαγγάνιο(ii) 0,002 Άγαρ 8,0 ph 7,4 ± 0,2 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. PA-254021.06-1 -
ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τις πλάκες εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 5 ή 10 τρυβλίων επί μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Για λεπτομέρειες σχετικά με τον ενοφθαλμισμό και την ανάγνωση των αποτελεσμάτων, δείτε τις ενότητες ιαδικασία της εξέτασης και Αποτελέσματα. Οι πλάκες BD Iso-Res Agar και οι αντιμικροβιακοί δίσκοι που χρησιμοποιούνται συνήθως θα πρέπει να εξετάζονται τουλάχιστον δύο φορές την εβδομάδα ως προς την απόδοσή τους, με χρήση των στελεχών εξέτασης που αναφέρονται στην ενότητα ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ. Εμφάνιση μη ενοφθαλμισμένου υλικού καλλιέργειας: άχρωμο έως ανοικτό πορτοκαλί. ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD Iso-Res Agar (πλάκες Stacker 90 mm) ή BD Iso-Res Agar (πλάκες 150 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένο. Υλικά που δεν παρέχονται 1. Ζωμός ενοφθαλμίσματος σε σωληνάρια, όπως ο BD Trypticase Soy Broth (Ζωμός πέψης σόγιας-καζεΐνης) ή ο ζωμός Mueller Hinton II (ρυθμισμένος με κατιόντα), για την παρασκευή πρότυπου ενοφθαλμίσματος, καθώς και στείρος ζωμός ή στείρο αλατούχο διάλυμα για την αραίωση του ενοφθαλμίσματος. 2. Πρότυπο σύγκρισης θειικού βαρίου (0,5 ml 0,048 M BaCl 2 [1,175% w/v BaCl 2. 2H 2O] έως 99,5 ml 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [1% v/v]). 3. Φωτομετρική συσκευή για τη ρύθμιση της θολερότητας του εναιωρήματος ενοφθαλμίσματος, έτσι ώστε να είναι ισοδύναμη με το πρότυπο 0,5 McFarland. 4. Ως εναλλακτική λύση στα παραπάνω υλικά (1-3), είναι δυνατό να χρησιμοποιηθεί το BD Prompt Inoculation System (συσκευή ογκομετρικής παρασκευής ενοφθαλμίσματος). 6,18 5. Χάρτινοι δίσκοι διαποτισμένοι με καθορισμένες ποσότητες αντιμικροβιακών παραγόντων, 6 όπως οι δίσκοι εξέτασης ευαισθησίας BD Sensi-Disc. 6. Συσκευή διανομής, όπως η δοσιμετρική συσκευή BD Sensi-Disc 6, 8 ή 12 θέσεων. Μια κατάλληλη δοσιμετρική συσκευή διατίθεται επίσης για πλάκες Mueller Hinton II Agar Square. 7. Χάρακας ή άλλη συσκευή για μέτρηση του μεγέθους των ζωνών σε χιλιοστόμετρα. 8. Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το προϊόν αυτό χρησιμοποιείται για εξέταση ευαισθησίας καθαρών καλλιεργειών μόνον και δεν προορίζεται για χρήση απευθείας με κλινικά δείγματα (δείτε επίσης την ενότητα ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ). ιαδικασία της εξέτασης Εναιωρήστε το στέλεχος εξέτασης σε Trypticase Soy Broth ή αλατούχο διάλυμα και ρυθμίστε τη θολερότητα έτσι ώστε να αντιστοιχεί στο πρότυπο 0,5 McFarland. Εντός 15 λεπτών μετά τη PA-254021.06-2 -
ρύθμιση της θολερότητας του ενοφθαλμίσματος, εμβαπτίστε έναν αποστειρωμένο στειλεό στο κατάλληλα αραιωμένο ενοφθάλμισμα και περιστρέψτε τον σταθερά μερικές φορές επάνω στο άνω εσωτερικό τοίχωμα του σωληναρίου, έτσι ώστε να εξωθήσετε την περίσσεια υγρού. Εναλλακτικά, είναι δυνατό να χρησιμοποιήσετε το BD Prompt Inoculation System. Ενοφθαλμίστε ολόκληρη την επιφάνεια του άγαρ της πλάκας τρεις φορές, περιστρέφοντας την πλάκα κατά 60 μεταξύ των γραμμωτών επιστρώσεων, έτσι ώστε να επιτύχετε ομοιόμορφο ενοφθαλμισμό. Εφαρμόστε τους αντιμικροβιακούς δίσκους με τη βοήθεια δοσιμετρικής συσκευής αντιμικροβιακών δίσκων, λαμβάνοντας άσηπτες προφυλάξεις. Εναποθέστε τους δίσκους έτσι ώστε τα κέντρα να απέχουν μεταξύ τους τουλάχιστον 24 mm. Αφού τοποθετηθούν οι δίσκοι πάνω στο άγαρ, συμπιέστε τους με αποστειρωμένη βελόνα ή λαβίδα, έτσι ώστε να επιτύχετε πλήρη επαφή με την επιφάνεια του υλικού καλλιέργειας. Το βήμα αυτό δεν είναι απαραίτητο εάν οι δίσκοι εναποτίθενται με χρήση της δοσιμετρικής συσκευής αυτοσυμπίεσης BD Sensi- Disc 6, 8 ή 12 θέσεων. Εντός 15 λεπτών μετά την εφαρμογή των δίσκων, αναστρέψτε τις πλάκες και επωάστε τις σε αερόβια ατμόσφαιρα στους 35 έως 37 C, επί 24 ώρες. Αποτελέσματα Μετά την επώαση, μετρήστε τη διάμετρο των ζωνών πλήρους αναστολής (όπως κρίνεται με γυμνό οφθαλμό), συμπεριλαμβάνοντας τη διάμετρο του δίσκου, με ακρίβεια χιλιοστού, με χρήση συρόμενου διαβήτη, χάρακα ή υποδείγματος που έχει προετοιμαστεί για το σκοπό αυτό. Η συσκευή μέτρησης κρατείται στο κάτω μέρος της ανεστραμμένης πλάκας πάνω από ένα μαύρο, μη ανακλαστικό υπόβαθρο και φωτίζεται από επάνω. Το τελικό σημείο θα πρέπει να λαμβάνεται ως η περιοχή που δεν εμφανίζει καμία ορατή ανάπτυξη, η οποία είναι δυνατό να ανιχνευτεί με γυμνό οφθαλμό. Αγνοήστε τυχόν αμυδρή ανάπτυξη μικροσκοπικών αποικιών, οι οποίες είναι δυνατό να ανιχνευτούν μόνο με δυσκολία κοντά στην άκρη της εμφανούς ζώνης αναστολής. Τα αποτελέσματα αναφέρονται ως ανθεκτικά, μετρίως ανθεκτικά ή ευαίσθητα. Σημειωτέον ότι τα μεγέθη ζωνών δεν είναι πάντοτε συγκρίσιμα με εκείνα που βρίσκονται στο άγαρ Mueller Hinton II (δείτε την ενότητα Περιορισμοί της διαδικασίας). ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Αυτό το υλικό καλλιέργειας έχει αξιολογηθεί εσωτερικά. Τα εύρη μεγέθους ζώνης βασίζονται σε αποτελέσματα από τουλάχιστον 3 διαφορετικές παρτίδες BD Iso-Res Agar: Στελέχη BD Sensi-Disc Αναμεν όμενο εύρος (mm) Escherichia coli ATCC 25922 Αμπικιλλίνη AM-10 14-25 Entero- Μεζλοκιλλίνη MZ-30 20-29 Μεζλοκιλλίνη MZ-30 27-33 Κεφαλοθίνη CF-30 15-21 Ερυθρομυκίνη E-15 18-25 Κεφοταξίμη CTX-30 28-37 SXT 28-34 Ιμιπενέμη IPM-10 30-36 Γενταμυκίνη GM-10 19-26 E. faecalis Αμπικιλλίνη AM-10 24-30 Αμικασίνη AN-30 19-26 ATCC 33186 Μεζλοκιλλίνη MZ-30 27-33 Οφλοξακίνη OFX-5 29-33 Ερυθρομυκίνη E-15 18-25 Σιπροφλοξακίνη CIP- 30-40 SXT 24-32 5 SXT 24-32 Στελέχη BD Sensi-Disc Αναμενό μενο εύρος (mm) Αμπικιλλίνη AM-10 24-28 coccus faecalis ATCC 29212 PA-254021.06-3 -
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Πενικιλλίνη G P-10 30-40 Pseudomonas Τικαρκιλλίνη TIC-75 20-28 Οξακιλλίνη OX-1 18-24 Αζλοκιλλίνη AZ-30 21-29 Κεφαλοθίνη CF-30 33-44 aeruginosa Αζτρεονάμη ATM-30 26-31 Κεφοταξίμη CTX-30 27-34 ATCC 27853 Αμικασίνη AN-30 18-28 Τετρακυκλίνη TE-30 25-34 Γενταμυκίνη GM-10 18-25 Γενταμυκίνη GM-10 23-30 Κεφταζιδίμη CAZ-30 23-31 Ερυθρομυκίνη E-15 26-35 Λινκομυκίνη L-15 25-33 Οφλοξακίνη OFX-5 24-30 SXT 24-32 Η διάχυση σε δίσκο πρέπει να εφαρμόζεται μόνο με βακτηριδιακά στελέχη όπως οι Enterobacteriaceae, σταφυλόκοκκοι, εντερόκοκκοι ή άλλους μικροοργανισμούς που παράγουν καλά ανεπτυγμένες αποικίες εντός περιόδου επώασης 18 έως 24 ωρών σε μη αιματούχα υλικά καλλιέργειας και οι οποίοι αναπτύσσονται αερόβια. Για λεπτομέρειες, συμβουλευτείτε το πρότυπο της NCCLS. 7 Η εξέταση και οι μέθοδοι που περιγράφονται παραπάνω πρέπει να εφαρμόζονται μόνον σε καθαρές καλλιέργειες βακτηριδίων. Η μέθοδος που περιγράφεται εδώ για την παρασκευή ενοφθαλμίσματος και τον ενοφθαλμισμό είναι εκείνη που περιγράφεται στο πρότυπο της NCCLS. 7 Έχουν αναπτυχθεί και άλλα εθνικά πρότυπα για τις εξετάσεις αντιμικροβιακής ευαισθησίας σύμφωνα με τη διαδικασία των Bauer- Kirby. Στα πρότυπα αυτά, οι πυκνότητες του ενοφθαλμίσματος και η μέθοδος ενοφθαλμισμού ενδέχεται να διαφέρουν από το πρότυπο της NCCLS. Παρότι δεν υπάρχουν κοινά Ευρωπαϊκά πρότυπα για εξέταση ευαισθησίας, εάν δεν είναι δυνατό να εφαρμοστούν οι κατευθυντήριες οδηγίες της NCCLS, θα πρέπει να συμβουλεύεστε τα τοπικά εθνικά πρότυπα. Τα μεγέθη ζωνών εξέτασης ευαισθησίας που λαμβάνονται σε αυτό το υλικό καλλιέργειας δεν είναι απαραίτητο να συμφωνούν με εκείνα που λαμβάνονται σε άγαρ Mueller Hinton II στο πρότυπο M2-A6 της NCCLS. 7,8 Συνιστάται επομένως η σύγκριση με τα μεγέθη ζωνών που λαμβάνονται και στα δύο υλικά καλλιέργειας, με χρήση των αντιμικροβιακών δίσκων που εξετάζονται συνήθως πριν από τη συνήθη χρήση του BD Iso-Res Agar. Τυχόν ακατάλληλη συγκέντρωση ενοφθαλμίσματος ενδέχεται να δώσει εσφαλμένα αποτελέσματα. Οι ζώνες αναστολής ενδέχεται να είναι υπερβολικά μικρές εάν το ενοφθάλμισμα είναι υπερβολικά πυκνό ή υπερβολικά μεγάλες και δύσκολες στη μέτρηση εάν το ενοφθάλμισμα είναι υπερβολικά αραιό. Τυχόν εσφαλμένη φύλαξη των αντιμικροβιακών δίσκων ενδέχεται να προκαλέσει απώλεια της ισχύος και τη λήψη ψευδώς ανθεκτικού αποτελέσματος. Ενδέχεται να συναντηθούν βακτηρίδια που χρειάζονται θυμίνη ή θυμιδίνη. Αυτοί οι μικροοργανισμοί ενδέχεται να μην αναπτύσσονται ικανοποιητικά σε αυτό το υλικό καλλιέργειας επειδή περιέχει χαμηλά επίπεδα θυμίνης ή θυμιδίνης. Η in vitro ευαισθησία ενός μικροοργανισμού σε έναν ειδικό αντιμικροβιακό παράγοντα δε σημαίνει απαραίτητα ότι το αντιμικροβιακό θα είναι αποτελεσματικό in vivo. ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Ericsson, H.M, and J.C. Sherris 1971. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Suppl. 217: 1-90. 2. Garrod, L.P., and P.M. Waterworth. 1971. J. Clin. Pathol. 24: 779-789. 3. Reller, L.B., et al. 1974. J. Infect. Dis. 130: 454-463. 4. Reynolds, A.V., et al. 1974. Brit. Med. J. II: 778. 5. Stewart, S.M., et al. 1975. J. Clin. Pathol. 28: 195-197. 6. Bell, S.M. 1975. Pathology 7, Suppl.: 1-48. 7. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2000. Approved standard: M2-A7. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 7 th ed. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, Pa. 8. Jorgensen, J.H., and J.D. Turnidge. 2003. Susceptibility test methods: dilution and disk diffusion methods. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. PA-254021.06-4 -
Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. USA. 9. Werkgroep Richtlijnen Gevoeligheidsbepalingen. 1981. Standaardisatie van Gevoeligheidsbepalingen. Bilthoven, The Netherlands. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ ΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD Iso-Res Agar Αρ. κατ. 254021 Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε πλάκες, 20 πλάκες Αρ. κατ. 254076 Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε πλάκες, 120 πλάκες BD Iso-Res Agar (150 mm) Αρ. κατ. 254101 Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε πλάκες, 20 πλάκες ΠΕΡΙΣΣΟΤΕΡΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. 2013 BD PA-254021.06-5 -