High Sensitivity CRP. For use on IMMULITE 2000 systems

High Sensitivity CRP For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of C-reactive protein (CRP) in serum or plasma, as an aid in the detection and evaluation of infection, tissue injury, inflammatory disorders and associated diseases. Measurements may also be used as an aid in the identification of individuals at risk for future cardiovascular disease. High sensitivity CRP (hscrp) measurements, when used in conjunction with traditional clinical laboratory evaluation of acute coronary syndrome, may be useful as an independent marker for recurrent events in patients with stable coronary disease or acute coronary syndrome. Catalog Number: L2KCRP2 (200 tests), L2KCRP6 (600 tests) Test Code: hsc Color: Dark Blue Summary and Explanation CRP is an acute phase β-globulin with a molecular mass of approximately 118,000 daltons. 1 CRP is highly conserved, composed of five identical cyclic globular subunits, and is classified as a member of the pentraxin superfamily of proteins. 1,2 CRP levels in serum or plasma may rise during general, nonspecific response to infectious and non-infectious inflammatory conditions such as rheumatoid arthritis, cardiovascular disease and peripheral vascular disease. 3 CRP is synthesized in the liver and is normally present as a trace constituent of serum or plasma. While the precise in vivo functions of CRP during the inflammation state are not known, there is considerable evidence indicating a role in the recognition and elimination of foreign pathogens, as well as potentially toxic endogenous substances released from damaged tissue, by assisting humoral and cellular immunity. 1,4 In normal individuals, hepatic cells produce CRP at constitutive levels of less than 10 mg/l. 4 Within 24 to 48 hours following acute tissue damage, production dramatically rises to approximately 1,000 times the constitutive level. CRP levels may remain elevated for several days before returning to normal. 1,4,5 As elevated CRP values are always associated with pathological changes, the CRP assay provides useful information for the diagnosis, therapy, and monitoring of inflammatory conditions and associated diseases. 6-8 It is well established that inflammation is a key pathogenetic mechanism in atherosclerosis, which leads to cardiovascular diseases. Clinical and epidemiological studies have shown that CRP measured by high-sensitivity CRP assays is the analyte of choice for inflammation markers in atherosclerosis. The hscrp result has prognostic utility in patients with acute coronary syndrome and is a strong independent predictor of future coronary events in apparently healthy individuals. 9-16 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP is a solid-phase, chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with anti-ligand. The liquid phase consists of ligand-labeled anti-crp murine monoclonal antibody and alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to rabbit polyclonal anti-crp antibody in buffer. The automatically prediluted patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, CRP in the sample forms the antibody sandwich complex with anti-ligand on the bead and ligand-labeled monoclonal murine anti- CRP antibody in the reagent. The enzyme conjugated polyclonal rabbit anti-crp antibody then binds to the immobilized CRP. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by a centrifugal wash. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. 2 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

Incubation Cycles: 1 30 minutes. Time to first result: 35 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 5 µl serum or plasma (heparinized or EDTA). Automatic Predilution Factor: 100 Dilution of High Samples: Samples greater than 100 mg/l should be further diluted manually using the CRP Sample Diluent (L2CRZ). The CRP Sample Diluent is at a 2.5X concentration and must be prediluted to 1X concentration (1-in-2.5) with deionized water before use for manual sample dilutions, e.g. by adding 500 µl Sample Diluent to 750 µl water. Correction for further dilution must be calculated manually. Storage: 3 days at 2 8 C, or 2 months at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. CRP Bead Pack (L2CRP12) With barcode. 200 beads, coated with anti-ligand. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KCRP2: 1 pack. L2KCRP6: 3 packs. CRP Reagent Wedge (L2CRPA2) With barcode. 11.5 ml ligand-labeled anti- CRP murine monoclonal antibody and alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to rabbit polyclonal anti-crp antibody in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KCRP2: 1 wedge. L2KCRP6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. CRP Adjustors (LCRL, LCRH) Two vials (Low and High), 2.0 ml each, of CRP in a protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KCRP2: 1 set. L2KCRP6: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 3

CRP Sample Diluent (L2CRZ) For the dilution of patient samples. 50 ml of a concentrated (ready-to-use) CRP-free protein/buffer matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KCRP2: 1 vial. L2KCRP6: 3 vials. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KCRP2: 3 labels. L2KCRP6: 5 labels. Kit Components Supplied Separately CRP Sample Diluent (L2CRZ) For the dilution of patient samples. 50 ml of a concentrated (ready-to-use) CRP-free protein/buffer matrix. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2CRZ: 1 vial. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2CRZ: 3 labels. L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LCRCM: Tri-level CRP Control Module Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: Use controls or pools with at least two levels (low and high) of CRP. Expected Values Based on its relationship to IMMULITE/IMMULITE 1000 High Sensitivity CRP (see Method Comparison), the assay can be expected to have essentially the same reference ranges. Expected high sensitivity CRP values for healthy individuals have been established in the literature at < 3 mg/l. 17 A study performed on 100 apparently healthy volunteers yielded a median of 1.4 mg/l and an upper 97.5 th percentile of 11 mg/l. The AHA/CDC Scientific Statement 18 concerning inflammation and cardiovascular markers reports that hscrp values < 1 mg/l are low risk for cardiovascular disease prediction; values between 1 3 mg/l are average risk for cardiovascular disease prediction; and values > 3 mg/l are high risk for cardiovascular disease prediction. Increases in CRP are non-specific and should not be interpreted without a complete clinical history. See Limitations section. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitations For diagnostic purposes, CRP results should be used in conjunction with other test results, the overall clinical presentation to the physician, and all other appropriate information. When being used for risk assessment, the following precautions must be noted: 1 Increases in CRP are non-specific and should not be interpreted without a complete clinical history. 2 Screening the entire adult population is not recommended. 3 CRP measurements are not a substitute for traditional cardiovascular risk factors. 4 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

4 Acute coronary syndrome management should not depend on CRP measurements. 5 Patient with persistently unexplained CRP levels above 10 mg/l should be evaluated for other non-cardiovascular origins. 6 Testing for risk assessment should not be performed while there is an indication of infection, systemic inflammation, or trauma. 7 Secondary prevention measures should be based on global risk assessment and not depend on CRP. 8 Serial testing of CRP should not be used to monitor effects of treatment. 9 The average of CRP results repeated optimally over two weeks should be used in performing risk assessment on metabolically stable patients. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988; 34:27 33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in mg/l. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Reportable Range: 0.2 to 100 mg/l. Standardized to WHO 1st IS 85/506 and CRM 470. Analytical Sensitivity: 0.1 mg/l Functional Sensitivity: 0.2 mg/l High-dose Hook Effect: None up to 3,780 mg/l. Precision: Samples were repeatedly assayed in quadruplicate over the course of several days, for a total of 20 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with two CRP solutions (600 and 1,200 mg/l) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for CRP. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of conjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 512 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: Samples (n = 34) were collected into plain serum, heparinized plasma, EDTA plasma, and Becton Dickinson SST vacutainer tubes and spiked with CRP. (Heparin) = 0.987 (Serum) 0.30 mg/l r = 0.98 (EDTA) = 0.926 (Serum) + 1.64 mg/l r = 0.98 (SST) = 1.02 (Serum Plain) 0.23 mg/l r = 0.98 Means: 40.0 mg/l (Serum) 39.2 mg/l (Heparin) 38.7 mg/l (EDTA) 40.6 mg/l (SST) Method Comparison 1: The assay was compared to IMMULITE/IMMULITE 1000 High Sensitivity CRP on 340 samples. (Concentration range: up to approximately 80 mg/l by IMMULITE/IMMULITE 1000. See graph 1.) By linear regression: (IML 2000) = 1.07 (IML) 0.20 mg/l r = 0.993 Means: 6.0 mg/l (IMMULITE 2000) 5.8 mg/l (IMMULITE) IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 5

Method Comparison 2: The assay was compared to another commercially available assay (Dade Behring N High Sensitivity CRP) on 185 samples. (Concentration range: 0.2 to 22.9 mg/l by Dade Behring. See graph 2.) By linear regression: (IML 2000) = 1.01 (Dade Behring) 0.089 mg/l r = 0.995 Means: 2.5 mg/l (IMMULITE 2000) 2.6 mg/l (Dade Behring) Using the same data set, a correlation was performed limiting the concentration range to 0.2 9.4 mg/l by Dade Behring (n = 175). (See graph 3.) (IML 2000) = 1.00 (Dade Behring) 0.082 mg/l r = 0.993 Means: 1.7 mg/l (IMMULITE 2000) 1.8 mg/l (Dade Behring) Interpretation of Results Results lower than the functional sensitivity are reported as < 0.2 mg/l. Imprecision at the recommended upper limit of normal (3 mg/l) is approximately 3% CV. It is recommended to follow-up elevated CRP values with repeat testing and detailed clinical evaluation. Intra-individual variations of CRP are significant and should be taken into account when interpreting values. References 1) Schultz DR, Arnold PI. Properties of four acute phase proteins: CRP, serum amyloid A protein, α 1 -acid glycoprotein, and fibrinogen. Semin Arthritis Rheum 1990; 20:129 47. 2) Osmand AP, Friedenson B, Gewurz H, et al. Characterization of CRP and the complement subcomponent C1t as homologous proteins displaying cyclic pentameric symmetry (pentraxins). Proc Nat Acad Sci USA 1977; 74:739 43. 3) Du Clos TW. Function of CRP. Ann Med 2000; 32:274 8. 4) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995:358. 5) Kushner I. The phenomenon of acute phase response. Ann N Y Acad Sci 1982; 389:39 48. 6) Dixon JS, Bird HA, Sitton NG, et al. CRP in the serial assessment of disease activity in rheumatoid arthritis. Scand J Rheumatol 1984; 13:39 44. 7) Hind CR, Pepys MB. The role of CRPmeasurement in clinical practice. Int Med 1984; 5:112 51. 8) van Leeuwen MA, van Rijswijk MH. Acute phase proteins in the monitoring of inflammatory disorders. Baillieres Clin Rheumatol 1994; 8:531 52. 9) Ridker PM, Cushman M, Stampfer MJ, et al. Plasma concentration of CRP and risk of developing peripheral vascular disease. Circulation 1998; 97:425 8. 10) Ridker PM, Buring JE, Shih J, et al. Prospective study of CRP and the risk of future cardiovascular events among apparently healthy women. Circulation 1998; 98:731 3. 11) Ridker PM, Glynn RJ, Hennekens CH. CRP adds to the predictive value of total and HDL cholesterol in determining risk of first myocardial infarction. Circulation 1998; 97:2007 11. 12) Ridker PM, Rifai N, Pfeffer MA, et al. Inflammation, pravastatin, and the risk of coronary events after myocardial infarction in patients with average cholesterol levels. Cholesterol and Recurrent Events (CARE) Investigators. Circulation 1998; 98:839 44. 13) Tracy RP, Lemaitre RN, Psaty BM, et al. Relationship of CRP to risk of cardiovascular disease in the elderly. Results from the Cardiovascular Health Study and the Rural Health Promotion Project. Arterioscler Thromb Vasc Biol 1997; 17:1121 7. 14) Macy EM, Hayes TE, Tracy RP. Variability in the measurement of CRP in healthy subjects: implications for reference intervals and epidemiological applications. Clin Chem 1997; 43:52 8. 15) Ridker PM, Cushman M, Stampfer MJ, et al. Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men. N Engl J Med 1997; 336:973 9. Erratum: ibid 1997; 337:356. 16) Rifai N, Ridker PM. High-sensitivity C-Reactive Protein: A novel and promising marker of coronary heart disease. Clin Chem 2001; 47(3):403 411. 17) Biasucci LM. CDC/AHA workshop on markers of inflammation and cardiovascular disease. Application to clinical and public health practice clinical use of inflammatory markers in patients with cardiovascular diseases. A background paper. Circulation 2004; 110:e560 e567. 18) Pearson TA, Mensah GA, Alexander RW, et al. AHA/CDC Scientific Statement. Markers of inflammation and cardiovascular disease. Application to clinical and public health practice. A statement for healthcare professionals from the Centers for Disease Control and the American Heart Association. Circ 2003; 107:499 511. 19) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4. Wayne, PA: NCCLS, 1998. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. www.siemens.com/diagnostics 6 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (mg/l) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 0.23 0.02 8.7% 0.02 8.7% 2 0.85 0.04 4.7% 0.06 7.1% 3 3.2 0.09 2.8% 0.10 3.1% 4 12.3 0.35 2.8% 0.40 3.3% 5 21.8 0.74 3.4% 0.82 3.8% 6 93.7 4.8 5.1% 4.9 5.2% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Recovery (mg/l) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 4.7 A 35.7 34.5 103% B 69.7 64.5 108% 2 9.5 A 40.6 39.0 104% B 77.9 69.0 113% 3 16.4 A 47.4 45.6 104% B 80.8 75.6 107% 4 18.4 A 52.6 47.5 111% B 78.3 77.5 101% Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Specificity Compound 1 mg/dl Added 2 % Cross reactivity 3 Human Serum Albumin 1,000 ND Human IgG 1,000 ND Transferrin 1,000 ND ND: Not detectable. 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ.Αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 % reaktywności Krzyżowej, 4 ND: Nieoznaczlne. IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 7

Linearity (mg/l) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 8 in 8 5 8.7 4 in 8 4.1 4.4 93% 2 in 8 2.0 2.2 91% 1 in 8 1.0 1.1 91% 2 8 in 8 23.1 4 in 8 11.5 11.6 99% 2 in 8 5.9 5.8 102% 1 in 8 3.0 2.9 103% 3 8 in 8 72.2 4 in 8 36.7 36.1 102% 2 in 8 17.6 18.1 97% 1 in 8 9.0 9.0 100% 4 8 in 8 78.6 4 in 8 39.5 39.3 101% 2 in 8 18.2 19.7 92% 1 in 8 10.0 9.8 102% 5 8 in 8 > 100 6 in 8 91.8 4 in 8 67.2 61.2 110% 2 in 8 28.0 30.6 92% 1 in 8 13.6 15.3 89% Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Method Comparison 1 IMMULITE 2000 HS CRP 100 75 50 25 0 0 25 50 75 100 IMMULITE/IMMULITE 1000 HS CRP, mg/l (IML 2000) = 1.07 (IML) 0.20 mg/l r = 0.993 Method Comparison 2 IMMULITE 2000 HS CRP 25 20 15 10 5 0 0 5 10 15 20 25 Dade Behring, mg/l (IML 2000) = 1.01 (Dade Behring) 0.089 mg/l r = 0.995 IMMULITE 2000 HS CRP 12 9 6 3 0 0 3 6 9 12 Dade Behring, mg/l (IML 2000) = 1.00 (Dade Behring) 0.082 mg/l r = 0.993 Česky IMMULITE 2000 Vysoce citlivý CRP Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace C-reaktivního proteinu (CRP) v séru nebo plazmě, jakožto pomůcky při zjištění a vyhodnocení infekce, poranění tkáně, zánětlivých onemocnění a souvisejících chorob. Měření může být také použito při stanovení individuálního rizika vzniku kardiovaskulárního onemocnění. Stanovení vysoce citlivého CRP (hscrp), pokud je použito spolu s dalšími tradičními markery v klinické laboratoři používanými při vyhodnocení akutního koronárního syndromu, může být užitečné jako nezávislý marker pro opakující se příhodu 8 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

u pacientů se stabilním koronárním onemocněním nebo akutním koronárním syndromem. Katalogové číslo: L2KCRP2 (200 stanovení), L2KCRP6 (600 stanovení) Kód metody: hsc Barva: Tmavě modrá Shrnutí a vysvětlení CRP je beta globulin akutní fáze s molekulovou hmotností přibližně 118 000 daltonů. 1 CRP je stabilní, skládá se z pěti identických cyklických globulárních podjednotek a patří do nadčeledi proteinů. 1,2 Hladina CRP v séru nebo plazmě se může zvyšovat v rámci obecné nespecifické odezvy na infekční i neinfekční zánětlivý stav, jako je revmatoidní artritida, kardiovaskulární onemocnění a periferní vaskulární choroby. 3 CRP je syntetizován v játrech a normálně se v plazmě nebo séru nachází jako stopová látka. Zatímco přesné in vivo funkce CRP během zánětlivého stavu nejsou známy, existují rozsáhlé důkazy o jeho úloze při rozeznávání a eliminaci cizích patogenů a také potenciálně toxických endogenních látek, které se uvolňují z poškozené tkáně tím, že napomáhá humorální a buněčné imunitě. 1,4 U zdravých osob tvoří jaterní buňky CRP v konstitutivním množství méně než 10 mg/l. 4 Do 24 až 48 hodin od akutního poškození tkáně se tvorba CRP dramaticky zvýší oproti konstitutivní hladině asi tisíckrát. Než se koncentrace CRP opět vrátí do normálu, může zůstat zvýšená několik dní. 1,4,5 Protože zvýšená hladina CRP vždy svědčí o patologických změnách, stanovení CRP poskytuje užitečné informace pro diagnostiku, léčbu a monitorování zánětlivých stavů a přidružených onemocnění. 6-8 Je dobře známo, že zánět je klíčový patogenní mechanismus při ateroskleróze vedoucí ke kardiovaskulárním onemocněním. Klinické a epidemiologické studie ukazují, že CRP měřené vysoce citlivými metodami je analytem vhodným jako zánětlivý marker při ateroskleróze.výsledek hscrp má prognostickou hodnotu u pacientů s akutním koronárním syndromem a je nezávislým významným prediktorem budoucí koronární příhody u zjevně zdravých jedinců. 9-16 Princip Stanovení Stanovení IMMULITE 2000 Vysoce citlivý CRP je chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena antiligandem. Tekutá fáze obsahuje ligandem značenou myší monoklonální protilátku proti CRP a alkalickou fosfatázu (z telecího střeva) konjugovanou s králičí polyklonální protilátkou proti CRP v pufru. Automaticky naředěný vzorek pacienta a reagencie jsou inkubovány společně s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. Během této doby tvoří CRP ze vzorku sendvičový komplex s protilátkou s antiligandem na kuličce a ligandem značenou monoklonální myší protilátkou proti CRP v reagencii. Enzymový konjugát polyklonální králičí protilátky proti CRP se pak váže na imobilizované CRP. Nenavázaný vzorek pacienta a enzymový konjugát jsou odstraněny centrifugačním mytím. Nakonce je přidán chemiluminiscenční substrát do reakční zkumavky obsahující kuličku a generovaný signál je úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 1 30 minut. Čas do prvního výsledku: 35 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 9

antikoagulačních činidel. Stanovení Vysoce citlivý CRP na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 5 µl séra nebo plazmy (heparinizované nebo EDTA). Faktor automatického předředění: 100 Ředění koncentrovaných vzorků: Vzorky s koncentrací vyšší než 100 mg/l by měly být dále ředěny ručně s použitím CRP diluentu vzorků (L2CRZ). CRP diluent vzorků je 2,5x koncentrovaný a musí být naředěn na koncentraci 1x (1:2,5) deionizovanou vodu před použitím pro ruční ředění, tj. přidáním 500 µl diluentu vzorků do 750 µl vody. Korekce výsledku další diluce musí být vypočtena ručně. Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C, nebo 2 měsíce při teplotě 20 C. Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. CRP zásobník s kuličkami (L2CRP12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených antiligandem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KCRP2: 1 balení. L2KCRP6: 3 balení CRP reagencie (L2CRPA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml ligandem značené myší monoklonální protilátky proti CRP a alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s králičí polyklonální protilátkou proti CRP, v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KCRP2: 1 nádobka. L2KCRP6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. CRP kalibrátory (LCRL, LCRH) Dvě ampulky, každá 2,0 ml, s vysokou a nízkou koncentrací CRP v bílkovino/pufrové matrici, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KCRP2: 1 sada. L2KCRP6: 2 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. CRP diluent vzorků (L2CRZ) Pro automatické ředění vzorků od pacientů analyzátorem. 50 ml koncentrované (připravené k použití) bílkovino/pufrové matrice bez CRP. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KCRP2: 1 ampulka. L2KCRP6: 3 ampulky. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KCRP2: 3 štítky. L2KCRP6: 5 štítků. 10 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

Materiál dodávaný zvlášť CRP diluent vzorků (L2CRZ) Pro automatické ředění vzorků od pacientů analyzátorem. 50 ml koncentrované (připravené k použití) bílkovino/pufrové matrice bez CRP. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2CRZ: 1 ampulka. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2CRZ: 3 štítky. L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků (16 100 mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků LCRCM: Trojúrovňový CRP kontrolní modul Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěma koncentracemi (vysokou a nízkou) CRP. Očekávané hodnoty Na základě vztahu mezi metodou IMMULITE/IMMULITE 1000 Vysoce citlivý CRP (viz srovnání metod) a metodou lze očekávat stejné referenční rozmezí. Očekávané hodnoty Vysoce citlivého CRP u zdravých jedinců byly ustanoveny v literatuře < 3 mg/l. 17 Výsledkem studie provedené na 100 zjevně zdravých dobrovolnících je medián 1,4 mg/l a horní 97,5 percentil 11 mg/l. AHA/CDC Scientific Statement 18 zabývající se zánětovými a kardiovaskulárními markery uvádí, že hscrp hodnoty < 1 mg/l znamenají nízké riziko v predikci vývoje kardiovaskulárních onemocnění, hodnoty mezi 1 3 mg/l jsou spojené s nízkým rizikem v predikci kardiovaskulárních onemocnění a hodnoty > 3 mg/l znamenají vysoké riziko pro predikci kardiovaskulárních onemocnění. Zvýšení koncentrace CRP je nespecifické a nemělo by být interpretováno bez klinické historie pacienta. Viz odstavec Omezení. Uvedené hranice považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Pro účely stanovení diagnózy je nutné hodnoty CRP použít v souvislosti s výsledky ostatních testů, celkovou klinickou prezentací lékaři a všemi ostatními patřičnými informacemi. Pokud je použit ke stanovení rizika, musí být zohledněny následujícící věci: 1 Zvýšení koncentrace CRP je nespecifické a nemělo by být interpretováné bez kompletní klinické historie pacienta. 2 Screening kompletní dospělé populace není doporučen. 3 Stanovení CRP nenahrazuje tradiční kariovaskulární rizikové faktory. 4 Postup při ošetření akutního koronárního syndromu by nemělo být závislé na měření CRP. 5 Pacient s přetrvávající nevysvětlenou koncentrací CRP vyšší než 10 mg/l by běl být vyhodnocen z pohledu nekardiovaskulárních příčin zvýšení. 6 Stanovení rizika by nemělo být prováděno, pokud je u pacienta indikace infekce, systémového zánětu nebo poranění. IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 11

7 Sekundární preventivní měření by mělo být založeno na stanovení celkového rizika a nezávisle na CRP. 8 Sériové měření CRP by nemělo být použito k monitorování účinnosti léčby. 9 Průměr výsledků meření CRP optimálně opakovaných nejméně dva týdny by měl být použit k vyhodnocení rizika u metabolicky stabilních pacientů. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v mg/l. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Rozsah měření: 0,2 to 100 mg/l. Standardizováno dle WHO 1st IS 85/506 and CRM 470. Analytická citlivost: 0,1 mg/l Funkční citlivost: 0,2 mg/l High-dose Hook Effect: Do 3 780 mg/l žádný. Přesnost: Vzorky byly stanovovány čtyřmo v průběhu několika dní, celkem 20 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Precision.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Linearity.) Zpětná Výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem dvou roztoků CRP (600 a 1 200 mg/l) v poměru 1:19. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce Recovery.) Specificita: Protilátka je silně specifická vůči CRP. (Viz tabulka "Specificity".) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 512 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: Vzorky (n=35) byly odebrány do obyčejných (sérum), heparinizovaných (plazma), EDTA (plazma) a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek a do všech byl přidán CRP. (Heparin) = 0,987 (Sérum) 0,30 mg/l r = 0,98 (EDTA) = 0,926 (Sérum) + 1,64 mg/l r = 0,98 (SST) = 1,02 (Sérum obyčejná) 0,23 mg/l r = 0,98 Střední hodnoty: 40,0 mg/l (Sérum) 39,2 mg/l (Heparin) 38,7 mg/l (EDTA) 40,6 mg/l (SST) Srovnání metody 1: Stanovení bylo porovnáno s testem Vysoce citlivý CRP na analyzátoru IMMULITE na 340 vzorcích. (Koncentrační rozsah: do přibližně 80 mg/l. Viz graf 1.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,07 (IML) 0,20 mg/l r = 0,993 Střední hodnoty: 6,0 mg/l (IMMULITE 2000) 5,8 mg/l (IMMULITE) Srovnání metod 2: Metoda byla porovnána s další komerčně dostupnou metodou (Dade Behring N High Sensitivity CRP) na 185 samples. (Koncentrační 12 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

rozsah: 0,2 až 22,9 mg/l podle Dade Behring. Viz graf 2) Lineární regresí: (IML 2000) = 1,01 (Dade Behring) 0,089 mg/l r = 0,995 Střední hodnoty: 2,5 mg/l (IMMULITE 2000) 2,6 mg/l (Dade Behring) S použitím stejného souboru dat bylo provedeno porovnání při omezeném koncentračním rozsahu od 0,2 9,4 mg/l podle Dade Behring (n = 175). (viz graf 3.) (IML 2000) = 1,00 (Dade Behring) 0,082 mg/l r = 0,993 Střední hodnoty: 1,7 mg/l (IMMULITE 2000) 1,8 mg/l (Dade Behring) Interpretace výsledků Výsledky nižší než funkční citlivost metody jsou uváděny jako < 0,2 mg/l. Nepřesnost na horní hranici doporučeného normálu (3 mg/l) je přibližně 3% CV. Je doporučeno dále sledovat zvýšené hodnoty CRP opakovaným testováním a detailním klinickým vyhodnocením. Rozptyl u jednotlivce je významný a měl by být zohledněn při interpretaci výsledků. Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Υψηλής Ευαισθησίας CRP Ενδεδειγμένη χρήση: Για εργαστηριακή διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση της C-reactive protein (CRP) στον ορό ή στο πλάσμα, ως βοήθημα για την ανίχνευση και την αποτίμηση των μολύνσεων, των κακώσεων των ιστών, των φλεγμονωδών διαταραχών και των συνδεόμενων ασθενειών. Οι μετρήσεις μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν σαν βοήθεια για την αναγνώριση των ατόμων με κίνδυνο μελλοντικής καρδιαγγειακής νόσου. Οι μετρήσεις υψηλής ευαισθησίας CRP (hscrp), όταν χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με την κλασσική κλινική εργαστηριακή εκτίμηση του οξέος στεφανιαίου συνδρόμου, μπορεί να είναι χρήσιμες σαν ανεξάρτητος δείκτης για περιστατικά επανεμφάνισης σε ασθενείς με σταθερή σταφανιαία νόσο ή οξύ στεφανιαίο σύνδρομο. Αριθμός καταλόγου: L2KCRP2 (200 αναλύσεις), L2KCRP6 (600 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: hsc Χρώμα: Σκούρο Μπλε Περίληψη και Επεξήγηση Η CRP είναι μίας οξείας φάσης β-σφαιρίνη με μάζα περίπου 118 000 daltons. 1 Η CRP είναι υψηλά συντηρούμενη και αποτελείται από πέντε όμοιες κυκλικές και σφαιροειδείς υπομονάδες και ταξινομείται ως μέλος της υπέρ-οικογένειας των πρωτεϊνών. 1,2 Τα επίπεδα της CRP στον ορό ή στο πλάσμα μπορεί να αυξηθούν κατά την διάρκεια μιας γενικής και μη συγκεκριμένης αντίδρασης σε μολυσματικές και μη μολυσματικές φλεγμονώδεις καταστάσεις όπως η ρευματοειδής αρθρίτιδα, η καρδιαγγειακή πάθηση και η περιφερική αγγειακή ασθένεια. 3 Η CRP συντίθεται στο συκώτι και είναι φυσιολογικά παρούσα σαν συστατικό του ορού ή του πλάσματος. Ενώ δεν είναι γνωστές οι ακριβείς in vivo λειτουργίες της CRP κατά την διάρκεια της φλεγμονώδους κατάστασης, υπάρχουν επαρκείς ενδεικτικές αποδείξεις του ρόλου της στην αναγνώριση και εξάλειψη ξένων παθογόνων, όπως επίσης και ενδυνάμει τοξικές ενδογενείς ουσίες που απελευθερώνονται από τους κατεστραμμένους ιστούς, βοηθώντας στην ανοσία των σωματικών υγρών και των κυττάρων. 1,4 Τα ηπατικά κύτταρα ενός φυσιολογικού ατόμου παράγουν CRP σε συστατικά επίπεδα όχι λιγότερο από 10 mg/l. 4 Μέσα στις 24 με 48 ώρες μετά την οξεία καταστροφή των ιστών, η παραγωγή αυξάνεται δραματικά περίπου 1 000 φορές το constitutive επίπεδο. Τα επίπεδα της IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 13

CRP μπορεί να παραμείνουν αυξημένα για αρκετές μέρες πριν επανέρθουν σε στις κανονικές τιμές. 1,4,5 Εφόσον αυξημένες τιμές CRP συνδέονται πάντα με παθολογικές αλλαγές, η ανάλυση CRP μας δίνει χρήσιμες πληροφορίες για την διάγνωση, θεραπεία και παρακολούθηση των φλεγμονωδών καταστάσεων και των συνδεόμενων παθήσεων. 6-8 Έχει σαφώς καθοριστεί ότι η φλεγμονή είναι ένα κλειδί στον παθογεννετικό μηχανισμό της αθηρωσκλήρυνσης, που οδηγεί σε καρδιαγγειακές νόσους. Κλινικές και επιδημιολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι η μέτρηση της CRP με μεθόδους υψηλής ευαισθησίας είναι η μετρούμενη ουσία επιλογής ανάμεσα στους δείκτες φλεγμονής στην αθηρωσκλήρυνση. Το αποτέλεσμα της hscrp έχει προγνωστική χρησιμότητα σε ασθενείς με οξύ στεφανιαίο σύνδρομο και είναι ένας ισχυρός ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για μελλοντικά στεφανιαία περιστατικά σε προφανώς υγιή άτομα. 9-16 Αρχή της Διαδικασίας Η μέθοδος IMMULITE 2000 Υψηλής Ευαισθησίας CRP είναι μία ξηρής φάσης, χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με αντι-ligand. Η υγρή φάση αποτελείται από σημασμένο με ligand αντι-crp μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού και αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αντι- CRP σε ρυθμιστικό διάλυμα. Το αυτόματα προαραιωμένο δείγμα ασθενούς και το αντιδραστήριο επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, η CRP του δείγματος σχηματίζει το σύμπλεγμα αντισωμάτων σάντουϊτς με το αντι-ligand στο σφαιρίδιο και το σημασμένο με ligand αντι-crp μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού στο αντιδραστήριο. Το συνδεδεμένο ένζυμο σε πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αντι- CRP στη συνέχεια προσδένεται στη σταθεροποιημένη CRP. Το μη προσδεδεμένο δείγμα και το συνδεδεμένο ένζυμο στη συνέχεια απομακρύνονται με φυγοκεντρικές εκπλύσεις. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σωλήνα αντίδρασης που περιέχει το σφαιρίδιο και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 1 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 35 λεπτά. Συλλογή Δείγματος Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα πρόσθετα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Υψηλής Ευαισθησίας CRP δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 5 µl ορού ή πλάσματος (ηπαρινισμένου ή EDTA). Αυτόματος Παράγοντας Προδιάλυσης: 100 Αραίωση Δειγμάτων με Υψηλή Τιμή: Δείγματα με τιμή μεγαλύτερη των 100 mg/l θα πρέπει να αραιώνονται χειροκίνητα χρησιμοποιώντας το Αραιωτικό Δείγματος CRP (L2CRZ). Το Αραιωτικό Δείγματος CRP βρίσκεται σε συγκέντρωση X2,5 και πρέπει να προαραιώνεται για να βρίσκεται σε συγκέντρωση X1 (1 προς 2,5) με απιονισμένο νερό πριν χρησιμοποιηθεί σε χειροκίνητες αραιώσεις δειγμάτων, π.χ. με προσθήκη 500 µl Αραιωτικού Δείγματος σε 750 µl νερού. Διόρθωση για 14 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

περαιτέρω αραίωση πρέπει να υπολογίζεται χειροκίνητα. Φύλαξη: 3 μέρες στους 2 8 C, ή 2 μήνες στους 20 C. Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για εργαστηριακή διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Υπόκεινται στην ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθείστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για τα επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας B και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Μερικά συστατικά μπορεί να περιέχουν αζίδιο του νατρίου (λιγότερο από 0,1 g/dl). Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα υλικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων CRP (L2CRP12) Με barcode. 200 σφαιρίδια, επικαλυμμένα με anti-ligand. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KCRP2: 1 συσκευασία. L2KCRP6: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστηρίου CRP (L2CRPA2) Με barcode. 11,5 ml ligand-σημασμένο anti-crp μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού και αλκαλική φωσφατάση (έντερο μόσχου) συνδεδεμένο με πολυκλωνικό anti-crp αντίσωμα κουνελιού σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KCRP2: 1 δοχείο. L2KCRP6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές CRP (LCRL, LCRH) Δύο φιαλίδια (Χαμηλό και Υψηλό), 2 ml το καθένα, CRP σε μήτρα πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Σταθεροί στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα, ή για 6 μήνες (διαλυμένοι) στους 20 C. L2KCRP2: 1 σετ. L2KCRP6: 2 σετ. Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετείστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι, ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. Διαλύτης δειγμάτων CRP (L2CRZ) Για την διάλυση των δειγμάτων των ασθενών. 50 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μήτρας πρωτεΐνης/ρυθμιστικού χωρίς CRP. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 months (διαλυμένα) στους 20 C. L2KCRP2: 1 φιαλίδιο. L2KCRP6: 3 φιαλίδια. Ετικέτες με barcode παρέχονται για χρήση με το διαλύτη. Πριν τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 100 mm, έτσι ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. L2KCRP2: 3 ετικέτες. L2KCRP6: 5 ετικέτες. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Διαλύτης δειγμάτων CRP (L2CRZ) Για την διάλυση των δειγμάτων των ασθενών. 50 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μήτρας πρωτεΐνης/ρυθμιστικού χωρίς CRP. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 months (διαλυμένα) στους 20 C. L2CRZ: 1 φιαλίδιο. IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 15

Ετικέτες με barcode παρέχονται για χρήση με το διαλύτη. Πριν τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 100 mm, έτσι ώστε τα barcodes να μπορούν να διαβαστούν από κατάλληλο σύστημα. L2CRZ: 3 ετικέτες. L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Έκπλυμα του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για διάλυση του δείγματος (16 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες διάλυσης δείγματος LCRCM: Τριών επιπέδων δείγμα ελέγχου CRP Απαιτούνται επίσης: Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000. Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε δείγματα ελέγχου η δείγματα ορού τουλάχιστον δύο επιπέδων (χαμηλό και υψηλό) CRP. Αναμενόμενες τιμές Με βάση τη συνάφεια της μεθόδου με την IMMULITE/IMMULITE 1000 High Sensitivity CRP (βλ. Σύγκριση Μεθόδων), η εξέταση αναμένεται να έχει ουσιαστικά το ίδιο εύρος αναφοράς. Οι αναμενόμενες τιμές της υψηλής ευαισθησίας CRP για υγιή άτομα έχουν καθοριστεί στη βιβλιογραφία σε < 3 mg/l. 17 Μελέτη που πραγματοποιήθηκε σε 100 προφανώς υγιείς εθελοντές έδωσε μέση τιμή 1,4 mg/l και ένα υψηλότερο 97,5ο εκατοστημόριο 11 mg/l. Η Επιστημονική Ανακοίνωση AHA/CDC 18 που αφορά τη φλεγμονή και τους καρδιαγγειακούς δείκτες αναφέρει ότι τιμές hscrp < 1 mg/l είναι χαμηλού κινδύνου για πρόγνωση καρδιαγγειακής νόσου, τιμές ανάμεσα σε 1 3 mg/l είναι μέσου κινδύνου για πρόγνωση καρδιαγγειακής νόσου και τιμές > 3 mg/l είναι υψηλού κινδύνου για πρόγνωση καρδιαγγειακής νόσου. Αυξήσεις τιμών στη CRP είναι μη-ειδικές και δεν πρέπει να ερμηνεύονται χωρίς πλήρες κλινικό ιστορικό. Βλ. την παράγραφο Περιορισμοί. Θεωρείστε αυτά τα όρια μόνο σαν οδηγούς. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τα δικά του εύρη αναφοράς. Περιορισμοί Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα CRP πρέπει να συνεκτιμούνται σε συνδυασμό με άλλα αποτελέσματα εξετάσεων, με τη γενική κλινική κατάσταση και με άλλες συναφείς πληροφορίες. Όταν χρησιμοποιούνται για τον καθορισμό κινδύνου, πρέπει να τονιστούν οι παρακάτω: 1 Αυξήσεις τιμών στη CRP είναι μηειδικές και δεν πρέπει να ερμηνεύονται χωρίς πλήρες κλινικό ιστορικό. 2 Δεν προτείνεται η διαλογή (screening) όλου του ενήλικου πληθυσμού. 3 Οι μετρήσεις CRP δεν υποκαθιστούν τους κλασσικούς δείκτες καρδιαγγειακού κινδύνου. 4 Η διαχείριση του οξέος στεφανιαίου συνδρόμου δεν πρέπει να εξαρτάται από τις μετρήσεις CRP. 5 Ασθενείς με επίμονες ανεξήγητες τιμές CRP μεγαλύτερες των 10 mg/l πρέπει να ερμηνεύονται με άλλα μη καρδιαγγειακά αίτια. 6 Ο έλεγχος για τον καθορισμό κινδύνου δεν πρέπει να γίνεται όταν υπάρχει ένδειξη λοίμωξης, συστηματικής φλεγμονής ή τραύματος. 7 Οι δευτερεύουσες προληπτικές μετρήσεις πρέπει να βασίζονται στον καθορισμό συνολικού κινδύνου και να μην εξαρτώνται από τη CRP. 8 Διαδοχικοί έλεγχοι της CRP δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται για την 16 IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06)

παρακολούθηση των αποτελεσμάτων της. 9 Ο μέσος όρος των αποτελεσμάτων CRP που επαναλαμβάνονται κατά το βέλτιστο ανά δύο εβδομάδες πρέπει να χρησιμοποιείται για την πραγματοποίηση καθορισμού κινδύνου σε μεταβολικά σταθερούς ασθενείς. Τα ετεροφιλικά αντισώματα που περιέχονται στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιλαμβάνονται στα συστατικά της εξέτασης έχοντας ως αποτέλεσμα την παρεμβολή τους στις ανοσομετρικές εξετάσεις in vitro. [Βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα από ανθρώπους που εκτίθενται συχνά σε ζώα ή σε προϊόντα ορού ζώων μπορεί να έχουν τέτοια παρεμβολή και ως εκ τούτου λανθασμένο αποτέλεσμα. Τα αντιδραστήρια σχεδιάστηκαν έτσι ώστε να ελαχιστοποιείται αυτός ο κίνδυνος; παρόλα αυτά ενδεχόμενες αλληλεπιδράσεις μεταξύ κάποιων σπάνιων ορών και των συστατικών της εξέτασης μπορεί να συμβούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης πρέπει πάντοτε να συνδυάζονται με την κλινική εξέταση, το ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Δείτε παρακάτω τους πίνακες και τα γραφικά που αναπαριστούν την απόδοση της εξέτασης. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε mg/l. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος μέτρησης: 0,2 έως 100 mg/l. Τυποποιημένο με το WHO 1st IS 85/506 και CRM 470. Αναλυτική ευαισθησία: 0,1 mg/l Λειτουργική Ευαισθησία: 0,2 mg/l Επίδραση Φαινομένου Hook: Δεν εμφανίζεται μέχρι τις 3 780 mg/l. Ακρίβεια: Τα δείγματα αναλύθηκαν εις τετραπλούν για αρκετές ημέρες, για ένα σύνολο 20 τρεξιμάτων και 80 επαναλήψεων (Βλ. Πίνακα Precision ) Γραμμικότητα: Ελέγχθηκαν δείγματα με διάφορες αραιώσεις (Βλ. Πίνακα Linearity ). Ανάκτηση: Δείγματα 1 με 19 εμπλουτίστηκαν με δύο διαλύματα CRP (600 και 1 200 mg/l) και αναλύθηκαν. (Βλ. Πίνακα Recovery για τα αντιπροσωπευτικά δείγματα). Ειδικότητα: Το αντίσωμα εμφανίζει υψηλή ειδικότητα για τη CRP. (Βλ. Πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Παρουσία δεσμευμένης χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 200 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 512 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις μέχρι 3 000 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικοί Τύποι Δείγματος: Δείγματα (n = 34) συλλέχθηκαν σε απλούς σωλήνες, σε σωλήνες με ηπαρινισμένο πλάσμα, EDTA πλάσμα και σωλήνες κενού Becton Dickinson SST και εμπλουτίστηκαν με CRP. (Ηπαρίνη) = 0,987 (Ορός) 0,30 mg/l r = 0,98 (EDTA) = 0,926 (Ορός) + 1,64 mg/l r = 0,98 (SST) = 1,02 (Απλός Ορός) 0,23 mg/l r = 0,98 Μέσοι όροι: 40,0 mg/l (Ορός) 39,2 mg/l (Ηπαρίνη) 38,7 mg/l (EDTA) 40,6 mg/l (SST) Σύγκριση Μεθόδου 1: Η μέθοδος συγκρίθηκε με τη μέθοδο IMMULITE/IMMULITE 1000 High Sensitivity CRP σε 340 δείγματα. (Εύρος συγκέντρωσης: μέχρι περίπου 80 mg/l με IMMULITE/IMMULITE 1000. Βλ. γράφημα 1.) Με γραμμική παλινδρόμηση: (IML 2000) = 1,07 (IML) 0,20 mg/l r = 0,993 Μέσοι όροι: 6,0 mg/l (IMMULITE 2000) 5,8 mg/l (IMMULITE) Σύγκριση Μεθόδου 2: Η μέθοδος συγκρίθηκε με άλλη εμπορικά διαθέσιμη μέθοδο (Dade Behring N High Sensitivity IMMULITE 2000 High Sensitivity CRP (PIEL2KCRP-4 {6}, 2009-10-06) 17