artus CMV QS-RGQ Kit: Χαρακτηριστικά απόδοσης

Σεπτέμβριος 2015 artus CMV QS-RGQ Kit: Χαρακτηριστικά απόδοσης artus CMV QS-RGQ Kit, Έκδοση 1 4503363 Ελέγξτε την διαθεσιμότητα νέων ηλεκτρονικών αναθεωρήσεων επισήμανσης στη διεύθυνση www.qiagen.com/products/artuscmvpcrkitce.aspx προτού εκτελέσετε τον έλεγχο. Η τρέχουσα κατάσταση αναθεώρησης υποδεικνύεται από την ημερομηνία έκδοσης (μορφή: μήνας/έτος). Sample to Insight

Αναλυτική ευαισθησία-πλάσμα Το όριο ανίχνευσης της ανάλυσης όσον αφορά τον καθαρισμό (όριο ευαισθησίας) αξιολογήθηκε για το artus CMV QS-RGQ Kit με χρήση θετικών στον CMV κλινικών δειγμάτων σε συνδυασμό με την εκχύλιση στο όργανο QIAsymphony SP. Για το πλάσμα, η αναλυτική ευαισθησία όσον αφορά τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit προσδιορίσθηκε με χρήση μίας σειράς αραιώσεων του ιού της CMV από 1000 έως την ονομαστική τιμή 0,316 CMV αντιγράφων/ml με εμβολιασμό σε κλινικά δείγματα πλάσματος. Αυτά τα δείγματα υποβλήθηκαν σε εκχύλιση DNA με χρήση του QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi Kit σε συνδυασμό με το πρωτόκολλο Cellfree1000 DSP (όγκος εκχύλισης: 1 ml, όγκος έκλουσης: 60 µl). Καθεμιά από τις 10 αραιώσεις αναλύθηκε με το artus CMV QS-RGQ Kit σε 4 διαφορετικές ημέρες, σε 4 εκτελέσεις με 8 θυγατρικούς κλώνους έκαστη. Τα αποτελέσματα καθορίστηκαν μέσω ανάλυσης probit. Μία γραφική αναπαράσταση της ανάλυσης probit παρουσιάζεται στην Εικόνα 1. Το όριο ανίχνευσης της ανάλυσης για τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit σε συνδυασμό με το Rotor-Gene Q, είναι 42,5 αντίγραφα/ml (p = 0,05). Αυτό συνεπάγεται ότι η πιθανότητα ανίχνευσης 42,5 αντιγράφων/ml, είναι 95%. 1.0 95% Proportions Αναλογίες 0.8 0.6 0.4 1.63 ~ 42.5 1,63 copies/ml ~ 42,5 αντίγραφα/ml (95%) (95%) (29,4 70,2 (29.4 70.2 copies/ml) αντίγραφα/ml) 0.2 0.0-1 0 1 2 3 log (δόση) (dose) Εικόνα 1. Ανάλυση probit: πλάσμα, CMV (Rotor-Gene Q). Αναλυτική ευαισθησία λαμβάνοντας υπόψη τον καθαρισμό (πλάσμα, με τη χρήση του QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi Kit) του artus CMV QS-RGQ Kit στο όργανο Rotor-Gene Q. artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 2

Ειδικότητα-πλάσμα Η ειδικότητα του artus CMV QS-RGQ Kit εξασφαλίζεται κατά κύριο λόγο με την επιλογή των εκκινητών και των ανιχνευτών καθώς και με την επιλογή αυστηρών συνθηκών αντίδρασης. Οι εκκινητές και οι ανιχνευτές έχουν ελεγχθεί με βάση την ανάλυση σύγκρισης αλληλουχίας, όσον αφορά τυχόν ομολογίες με άλλες αλληλουχίες αναφερόμενες σε τράπεζες γονιδίων. Με αυτόν τον τρόπο έχει ελεγχθεί η ανιχνευσιμότητα όλων των σχετικών στελεχών. Επιπλέον,η ειδικότητα αξιολογήθηκε με τη χρήση 100 διαφορετικών δειγμάτων πλάσματος τα οποία ήταν αρνητικά στον CMV. Αυτά δεν εμφάνισαν κανένα σήμα με τους ειδικούς για τον CMV εκκινητές και ανιχνευτές που περιέχονται στο CMV RG Master. Ελέγχθηκε μία πιθανή διασταυρούμενη-αντιδραστικότητα του κιτ artus CMV QS-RGQ με χρήση της ομάδας μαρτύρων που παρατίθεται στον Πίνακα 1 (παρακάτω). Κανένας από τους εξεταζόμενους παθογόνους παράγοντες δεν προκάλεσε αντίδραση. Δεν παρατηρήθηκαν περιπτώσεις διασταυρούμενης αντιδραστικότητας με μεικτές λοιμώξεις. Πίνακας 1. Ειδικός έλεγχος του κιτ με δυνητικά διασταυρωμένης αντίδρασης παθογόνους παράγοντες. Ομάδα ελέγχου CMV (Cycling Green)) Εσωτερικός μάρτυρας (Cycling Yellow)) Ανθρώπινος ερπητοϊός 1 (Ιός απλού έρπητα 1) + Ανθρώπινος ερπητοϊός 2 (Ιός απλού έρπητα 2) + Ανθρώπινος ερπητοϊός 3 (Ιός ανεμοβλογιάς-έρπητα ζωστήρα) + Ανθρώπινος ερπητοϊός 4 (Ιός Epstein-Barr) + Ανθρώπινος ερπητοϊός 6A + Ανθρώπινος ερπητοϊός 6B + Ανθρώπινος ερπητοϊός 7 + Ανθρώπινος ερπητοϊός 8 (ερπητοϊός σχετιζόμενος με το σάρκωμα Kaposi) + Ιός ηπατίτιδας Α + Ιός ηπατίτιδας B + Ιός ηπατίτιδας C + Ανθρώπινος μη ανοσοποιητικός ιός 1 + Ανθρώπινος ιός Τ-κυτταρικής λευχαιμίας τύπος 1 + Ανθρώπινος ιός Τ-κυτταρικής λευχαιμίας τύπος 2 + Ιός Δυτικού Νείλου + Εντεροϊός + Παρβοϊός B19 + artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 3

Γραμμικό εύρος-πλάσμα Το γραμμικό εύρος για τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit προσδιορίσθηκε με ανάλυση μίας σειράς αραιώσεων υλικού ιού του CMV από 1,00 x 10 8 αντίγραφα/ml έως 3,16 x 10 1 αντίγραφα/ml. Ο καθαρισμός διεξήχθη σε θυγατρικούς κλώνους (n = 4 για συγκεντρώσεις 1,00 x 10 7 αντίγραφα/ml, n = 8 για συγκεντρώσεις <1,00 x 10 7 αντίγραφα/ml) με χρήση του QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Kit σε συνδυασμό με το πρωτόκολλο Cellfree1000 (όγκος εκχύλισης: 1 ml, όγκος έκλουσης: 60 µl). Καθένα από τα δείγματα αναλύθηκε με το artus CMV QS-RGQ Kit. Το γραμμικό εύρος για τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit προσδιορίσθηκε ότι καλύπτει για το πλάσμα συγκεντρώσεις από 7,94 x 10 1 αντίγραφα/ml έως 1,00 x 10 8 αντίγραφα/ml (Εικόνα 2). 10 Log10 estimated concentration (copies/ml) log 10 estimated concentration (copies/ml) 8 6 y = 1.0521x 0.3653 y = 1.0521x R 2 0.3653 = 0.9991 R 2 = 0.9991 4 2 0 0 2 4 6 8 10 log Log10 nominal concentration (copies/ml) (copies/ml) Εικόνα 2. Γραμμικό εύρος του artus CMV QS-RGQ Kit (πλάσμα). Υπολογισμός του γραμμικού εύρους. Η ευθεία γραμμή προσδιορίσθηκε με γραμμική παλινδρόμηση των log 10 υπολογιζόμενων συγκεντρώσεων με τις log 10 ονομαστικές συγκεντρώσεις. Η εξίσωση της γραμμής παλινδρόμησης περιλαμβάνεται στην εικόνα. Ανθεκτικότητα-πλάσμα Η επικύρωση της ανθεκτικότητας επιτρέπει τον καθορισμό του συνολικού ποσοστού αποτυχίας του artus CMV QS-RGQ Kit. Για την επικύρωση της ανθεκτικότητας εμβολιάσθηκαν 100 CMV αρνητικά δείγματα πλάσματος με 130 αντίγραφα/ml του CMV (περίπου τριπλάσια συγκέντρωση του αναλυτικού ορίου ανίχνευσης). Ύστερα από εκχύλιση με χρήση του QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi Kit σε συνδυασμό με το πρωτόκολλο Cellfree1000_DSP για πλάσμα (όγκος εκχύλισης: 1 ml, όγκος έκλουσης: 60 µl), τα δείγματα αυτά αναλύθηκαν με το artus CMV QS-RGQ Kit. Επιπλέον, η ανθεκτικότητα του εσωτερικού μάρτυρα αξιολογήθηκε με καθαρισμό και ανάλυση των 100 εμβολιασμένων δειγμάτων πλάσματος. Δεν παρατηρήθηκαν αναστολές. Συνεπώς, η ανθεκτικότητα του artus CMV QS-RGQ Kit είναι 99% artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 4

Κλινική αξιολόγηση - πλάσματος Η κλινική απόδοση του κιτ artus CMV QS-RGQ αξιολογήθηκε εξετάζοντας κλινικά δείγματα και αναλύοντας τα ευρήματα έναντι των αποτελεσμάτων από μια συγκριτική μέθοδο. Ένα σύνολο 174 δειγμάτων πλάσματος που συλλέχθηκαν σε EDTA από ασθενείς με λοίμωξη από τον ιό CMV ή προετοιμάστηκαν τεχνητά με χρήση του πρώτου προτύπου του Π.Ο.Υ. για τον ιό CMV, καθώς και από αρνητικούς μάρτυρες εξετάστηκαν με το κιτ artus CMV QS-RGQ και τη συγκρίσιμη μέθοδο σε ένα εξωτερικό κέντρο. Η ποιοτική συμφωνία των δύο κιτ ήταν 100%. Διενεργήθηκε ανάλυση παλινδρόμησης Deming και Passing-Bablok με το αποτέλεσμα της δοκιμασίας με το κιτ QIAGEN στον άξονα Y και το αποτέλεσμα της δοκιμασίας με τη συγκριτική μέθοδο στον άξονα X (βλέπε Εικόνα 3). Η εκτιμώμενη διαφορά log 10 (IU/ml) στο σημείο όπου απαιτείται ιατρική ενέργεια (1.000 IU/ml) μεταξύ του κιτ QIAGEN και του κιτ σύγκρισης ήταν 0,074 log 10 IU/ml, όπως υπολογίστηκε από την παλινδρόμηση Deming. Log10 IU/ml: Κι τ artus CMV QS-RGQ Τομή Deming: 0,253, Κλί ση: 0,940 Τομή Passing-Bablok: 0,291, Κλί ση: 0,929 Log10 IU/ml: Κι τ Εικόνα 3. Γράφημα παλινδρόμησης με γραμμές Passing-Bablok και Deming (πλάσμα). Στην ανάλυση συμπεριλήφθηκαν δείγματα που ήταν μεταξύ του κάτω ορίου ποσοτικοποίησης (LLOQ) και του άνω ορίου ποσοτικοποίησης (ULOQ) και για τα δύο κιτ. Δημιουργήθηκε ένα γράφημα Bland-Altman που παρουσιάζει τη διαφορά στην υπολογισμένη τιμή log 10 (IU/ml). Επιπλέον, υπολογίστηκε η μέση διαφορά log 10 (IU/ml) και το αντίστοιχο 95% εύρος της και υπερτέθηκε στο γράφημα (βλέπε Εικόνα 4). artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 5

Log10 IU/ml: Κι τ artus CMV QS-RGQ και log10 IU/ml: κι τ σύγκρι σης Log10 IU/ml: Κι artus τ CMV QS-RGQ και 10 IU/ml: log Κι τ Εικόνα 4. Γράφημα Bland-Altman (πλάσμα). Οι οριζόντιες γραμμές αναφοράς βρίσκονται στο 0,00, 0,57 και 0,58 και υποδηλώνουν τη μέση διαφορά (log 10 IU/ml: κιτ artus CMV QS-RGQ log 10 IU/ml: κιτ σύγκρισης) και το αντίστοιχο 95% διάστημα πρόβλεψης. Στην ανάλυση συμπεριλήφθηκαν δείγματα που ήταν μεταξύ του κάτω ορίου ποσοτικοποίησης και του άνω ορίου ποσοτικοποίησης και για τα δύο κιτ. Αναλυτική ευαισθησία-ολικό αίμα Το όριο ανίχνευσης της ανάλυσης όσον αφορά τον καθαρισμό (όριο ευαισθησίας) αξιολογήθηκε για το artus CMV QS-RGQ Kit με χρήση θετικών στον CMV κλινικών δειγμάτων σε συνδυασμό με την εκχύλιση στο όργανο QIAsymphony SP. Για το ολικό αίμα, η αναλυτική ευαισθησία όσον αφορά τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit προσδιορίσθηκε με χρήση μίας σειράς αραιώσεων του ιού της CMV από 1000 έως την ονομαστική τιμή 3,16 CMV αντιγράφων/ml με εμβολιασμό σε κλινικά δείγματα ολικού αίματος. Αυτά τα δείγματα υποβλήθηκαν σε εκχύλιση DNA με χρήση του QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Mini Kit σε συνδυασμό με το πρωτόκολλο VirusBlood200 (όγκος εκχύλισης: 200 ml, όγκος έκλουσης: 60 µl). Καθεμιά από τις 8 αραιώσεις αναλύθηκε με το artus CMV QS-RGQ Kit σε 3 διαφορετικές ημέρες, σε 6 εκτελέσεις με 11 θυγατρικούς κλώνους έκαστη. Τα αποτελέσματα καθορίστηκαν μέσω ανάλυσης probit. Μία γραφική αναπαράσταση της ανάλυσης probit παρουσιάζεται στην Εικόνα 3. Το όριο ανίχνευσης της ανάλυσης για τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit σε συνδυασμό με το Rotor-Gene Q, είναι 164,55 αντίγραφα/ml (p = 0,05). Αυτό συνεπάγεται ότι η πιθανότητα ανίχνευσης 164,55 αντιγράφων/ml, είναι 95%. artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 6

1.0 95% Proportions Αναλογίες 0.8 0.6 0.4 2.21631 ~ 164.55 2,21631 copies/ml ~ 164,55 (95%) αντίγραφα/ml (95%) (82.01 636.34 copies/ml) 82,01 636,34 αντίγραφα/ml) 0.2 0.0-1 0 1 2 3 log (dose) (δόση) Εικόνα 3. Ανάλυση probit:ολικό αίμα, CMV (Rotor-Gene Q). Αναλυτική ευαισθησία λαμβάνοντας υπόψη τον καθαρισμό (ολικό αίμα, με τη χρήση του QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Mini Kit) του artus CMV QS-RGQ Kit στο όργανο Rotor-Gene Q. Ειδικότητα ολικό αίμα Η ειδικότητα του artus CMV QS-RGQ Kit εξασφαλίζεται κατά κύριο λόγο με την επιλογή των εκκινητών και των ανιχνευτών καθώς και με την επιλογή αυστηρών συνθηκών αντίδρασης. Οι εκκινητές και οι ανιχνευτές έχουν ελεγχθεί με βάση την ανάλυση σύγκρισης αλληλουχίας, όσον αφορά τυχόν ομολογίες με άλλες αλληλουχίες αναφερόμενες σε τράπεζες γονιδίων. Με αυτόν τον τρόπο έχει ελεγχθεί η ανιχνευσιμότητα όλων των σχετικών στελεχών. Επιπλέον,η ειδικότητα αξιολογήθηκε με τη χρήση 100 διαφορετικών δειγμάτων ολικού αίματος τα οποία ήταν αρνητικά στον CMV. Αυτά δεν εμφάνισαν κανένα σήμα με τους ειδικούς για τον CMV εκκινητές και ανιχνευτές που περιέχονται στο CMV RG Master. Μία ενδεχόμενη διασταυρωμένη αντίδραση του artus CMV QS-RGQ Kit, εξετάστηκε με τη χρήση της ομάδας ελέγχου που αναφέρεται στον Πίνακα 1 (βλέπε σελίδα 3). Κανένας από τους εξεταζόμενους παθογόνους παράγοντες δεν προκάλεσε αντίδραση. Δεν παρατηρήθηκαν περιπτώσεις διασταυρούμενης αντιδραστικότητας με μεικτές λοιμώξεις. Γραμμικό εύρος-ολικό αίμα Το γραμμικό εύρος για τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit προσδιορίσθηκε με ανάλυση μίας σειράς αραιώσεων υλικού ιού του CMV από 5,00 x 10 7 έως 1,00 x 10 2 αντίγραφα/ml στο ολικό αίμα. Ο καθαρισμός διεξήχθη σε θυγατρικούς κλώνους (n = 4 για συγκεντρώσεις 1,00 x 10 7 αντίγραφα/ml, n = 8 artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 7

για συγκεντρώσεις <1,00 x 10 7 αντίγραφα/ml) με χρήση του QIAsymphony DNA Mini Kit σε συνδυασμό με το πρωτόκολλο VirusBlood200 (όγκος εκχύλισης: 200 µl, όγκος έκλουσης: 60 µl). Καθένα από τα δείγματα αναλύθηκε με το artus CMV QS-RGQ Kit. Το γραμμικό εύρος για τον καθαρισμό του artus CMV QS-RGQ Kit προσδιορίσθηκε ότι καλύπτει συγκεντρώσεις από 1,00 x 10 3 αντίγραφα/ml έως 5,00 x 10 7 αντίγραφα/ml για το ολικό αίμα (Εικόνα 6). log10 υπολογιζόμενη συγκέντρωση log 10 estimated ( concentration ί / l) (copies/ml) 10 8 6 4 2 0 y = 1.0514x 0.2366 1.0514x 0.2366 R R 2 = 0.9999614 2 = 0.9999614 0 2 4 6 8 10 log 10 nominal ονομαστική concentration συγκέντρωση (copies/ml) ( ί / l) Εικόνα 6. Γραμμικό εύρος του artus CMV QS-RGQ Kit (ολικό αίμα). Υπολογισμός του γραμμικού εύρους. Η ευθεία γραμμή προσδιορίσθηκε με γραμμική παλινδρόμηση των log 10 υπολογιζόμενων συγκεντρώσεων με τις log 10 ονομαστικές συγκεντρώσεις. Η εξίσωση της γραμμής παλινδρόμησης περιλαμβάνεται στην εικόνα. Ανθεκτικότητα-ολικό αίμα Η επικύρωση της ανθεκτικότητας επιτρέπει τον καθορισμό του συνολικού ποσοστού αποτυχίας του artus CMV QS-RGQ Kit. Για την επικύρωση της ανθεκτικότητας εμβολιάσθηκαν 100 CMV αρνητικά δείγματα ολικού αίματος με 500 αντίγραφα/ml του CMV (περίπου τριπλάσια συγκέντρωση του αναλυτικού ορίου ανίχνευσης). Ύστερα από εκχύλιση με χρήση του QIAsymphony DNA Mini Kit σε συνδυασμό με το πρωτόκολλο VirusBlood200 για ολικό αίμα, τα δείγματα αυτά αναλύθηκαν με το artus CMV QS-RGQ Kit. Επιπλέον, η ανθεκτικότητα του εσωτερικού μάρτυρα αξιολογήθηκε με καθαρισμό και ανάλυση των 100 εμβολιασμένων δειγμάτων ολικού αίματος. Δεν παρατηρήθηκαν αναστολές. Συνεπώς, η ανθεκτικότητα του artus CMV QS-RGQ Kit είναι 99%. artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 8

κλινική αξιολόγηση - ολικού αίματος Η κλινική απόδοση του κιτ artus CMV QS-RGQ αξιολογήθηκε εξετάζοντας κλινικά δείγματα και αναλύοντας τα ευρήματα έναντι των αποτελεσμάτων από μια συγκριτική μέθοδο. Ένα σύνολο 115 κλινικών δειγμάτων ολικού αίματος που συλλέχθηκαν από ασθενείς με λοίμωξη από τον ιό CMV καθώς και από αρνητικούς μάρτυρες εξετάστηκαν με το κιτ artus CMV QS-RGQ και μια συγκρίσιμη μέθοδο σε ένα εξωτερικό κέντρο. Διενεργήθηκε ανάλυση παλινδρόμησης Deming και Passing-Bablok με το αποτέλεσμα της δοκιμασίας με το κιτ QIAGEN στον άξονα Y και το αποτέλεσμα της δοκιμασίας με τη συγκριτική μέθοδο στον άξονα X (βλέπε Εικόνα 7). Τομή Deming: 0,791, Κλί ση: 1,141 Τομή Passing-Bablok: 0,554, Κλί ση: 1,113 Log10 IU/ml: Κι τ artus CMV QS-RGQ Log10 IU/ml: Κι τ Εικόνα 7. Γράφημα παλινδρόμησης με γραμμές Passing-Bablok και Deming (ολικό αίμα). Στην ανάλυση συμπεριλήφθηκαν μόνο κλινικά δείγματα. Στην ανάλυση συμπεριλήφθηκαν δείγματα που ήταν μεταξύ του κάτω ορίου ποσοτικοποίησης (LLOQ) και του άνω ορίου ποσοτικοποίησης (ULOQ) και για τα δύο κιτ. Δημιουργήθηκε ένα γράφημα Bland-Altman που παρουσιάζει τη διαφορά στην υπολογισμένη τιμή log 10 (IU/ml). Επιπλέον, υπολογίστηκε η μέση διαφορά log 10 (IU/ml) και το αντίστοιχο 95% εύρος της και υπερτέθηκε στο γράφημα (βλέπε Εικόνα 8). Η μέση διαφορά στην τιμή log 10 (IU/ml) μεταξύ του κιτ QIAGEN και του κιτ σύγκρισης ήταν 0,18 log 10 IU/ml. Η ποιοτική συμφωνία των δύο κιτ ήταν 100%. artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 9

Log10 IU/ml: artus CMV QS-RGQ Kit and log10 IU/ml: comparator kit Log10 IU/ml: artus CMV QS-RGQ Kit and log10 IU/ml: Comparator kit Εικόνα 8. Γράφημα Bland-Altman (ολικό αίμα). Οι οριζόντιες γραμμές αναφοράς βρίσκονται στο 0,18, 0,86 και 0,51 και υποδηλώνουν τη μέση διαφορά (log 10 IU/ml: κιτ artus CMV QS-RGQ log10 IU/ml: κιτ σύγκρισης) και το αντίστοιχο 95% διάστημα πρόβλεψης. Στην ανάλυση συμπεριλήφθηκαν μόνο κλινικά δείγματα. Στην ανάλυση συμπεριλήφθηκαν δείγματα που ήταν μεταξύ του κάτω ορίου ποσοτικοποίησης και του άνω ορίου ποσοτικοποίησης και για τα δύο κιτ. Ακρίβεια Τα δεδομένα ακρίβειας του artus CMV QS-RGQ Kit παρέχουν τη δυνατότητα καθορισμού της ολικής διακύμανσης της ανάλυσης. Η ολική διακύμανση αποτελείται από τη μεταβλητότητα εντός της ανάλυσης (intra-assay), (μεταβλητότητα πολλαπλών αποτελεσμάτων δειγμάτων της ίδιας συγκέντρωσης, στα πλαίσια ενός πειράματος), τη μεταβλητότητα μεταξύ διαφορετικών αναλύσεων (inter-assay), (μεταβλητότητα πολλαπλών αποτελεσμάτων της ανάλυσης που παρήχθησαν σε διαφορετικά όργανα του ίδιου τύπου από διαφορετικούς χειριστές εντός του ίδιου εργαστηρίου) και τη μεταβλητότητα μεταξύ των παρτίδων (inter-batch), (μεταβλητότητα πολλαπλών αποτελεσμάτων της ανάλυσης με χρήση περισσότερων παρτίδων). Τα ληφθέντα δεδομένα χρησιμοποιήθηκαν για τον καθορισμό της τυπικής απόκλισης, της διακύμανσης και του συντελεστή μεταβλητότητας για το συγκεκριμένο παθογόνο παράγοντα και την PCR εσωτερικού μάρτυρα. Τα αναλυτικά δεδομένα ακρίβειας του artus CMV QS-RGQ Kit (χωρίς εξέταση του καθαρισμού) συλλέχθηκαν με χρήση του πρότυπου ποσοτικοποίησης της χαμηλότερης συγκέντρωσης (QS 4, 10 αντίγραφα/µl). Η δοκιμασία εκτελέστηκε με 8 θυγατρικούς κλώνους. Τα δεδομένα ακρίβειας υπολογίστηκαν με βάση τις τιμές C T των καμπυλών πολλαπλασιασμού (C T : κύκλος κατωφλίου, βλέπε artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 10

Πίνακα 2, σελίδα 9). Επιπλέον, τα δεδομένα ακρίβειας για τα ποσοτικά αποτελέσματα σε αντίγραφα/µl προσδιορίσθηκαν με χρήση των αντίστοιχων τιμών C T (Πίνακας 3, σελίδα 10). Με βάση αυτά τα αποτελέσματα, η γενική στατιστική διασπορά οποιουδήποτε δείγματος με την αναφερθείσα συγκέντρωση είναι 1,21% (C T ) ή 14,38% (συγκέντρωση) και 1,93% (C T ) για την ανίχνευση του εσωτερικού μάρτυρα. Αυτές οι τιμές βασίζονται στο σύνολο όλων των μεμονωμένων τιμών της καθορισμένης μεταβλητότητας. Πίνακας 2. Δεδομένα ακρίβειας με βάση τις τιμές C T Μεταβλητότητα εντός της ανάλυσης: Μεταβλητότητα εντός της ανάλυσης: Εσωτερικός μάρτυρας Μεταβλητότητα μεταξύ αναλύσεων: Μεταβλητότητα μεταξύ αναλύσεων: Εσωτερικός μάρτυρας Μεταβλητότητα μεταξύ παρτίδων: Μεταβλητότητα μεταξύ παρτίδων: Εσωτερικός μάρτυρας Ολική διακύμανση: Ολική διακύμανση: Εσωτερικός μάρτυρας Τυπική απόκλιση Διακύμανση Συντελεστής μεταβλητότητας (%) 0,17 0,03 0,57 0,31 0,10 1,16 0,38 0,14 1,27 0,47 0,22 1,77 0,33 0,11 1,10 0,53 0,28 2,02 0,36 0,13 1,21 0,51 0,26 1,93 Πίνακας 3. Δεδομένα ακρίβειας με βάση τα ποσοτικά αποτελέσματα (σε αντίγραφα/µl) Μεταβλητότητα εντός της ανάλυσης: Μεταβλητότητα μεταξύ αναλύσεων: Μεταβλητότητα μεταξύ παρτίδων: Ολική διακύμανση: Τυπική απόκλιση Διακύμανση Συντελεστής μεταβλητότητας (%) 1,34 1,80 13,30 1,54 2,38 15,25 1,46 2,12 14,41 1,45 2,11 14,38 Αναπαραγωγιμότητα Τα δεδομένα αναπαραγωγιμότητας παρέχουν τη δυνατότητα τακτικής αξιολόγησης της απόδοσης του artus CMV QS-RGQ Kit καθώς και μία σύγκριση της αποτελεσματικότητας με άλλα προϊόντα. Αυτά τα δεδομένα αποκτώνται από τη συμμετοχή σε καθιερωμένα προγράμματα επάρκειας. artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 11

Διασταυρούμενη επιμόλυνση Η απουσία διασταυρούμενης επιμόλυνσης μεταξύ δειγμάτων για τη συνολική ροή εργασίας αποδείχθηκε με την ενδεδειγμένη ανίχνευση όλων των γνωστών θετικών και αρνητικών δειγμάτων σε εναλλάξ θέσεις (διάταξη τύπου σκακιέρας) για επιλεγμένο σύστημα artus QS-RGQ. Σχετικά προϊόντα και πληροφορίες παραγγελιών παρατίθενται στο εγχειρίδιο για το κιτ artus CMV QS- RGQ Για τις τρέχουσες πληροφορίες άδειας και αποποιήσεις σχετικά με συγκεκριμένα προϊόντα, ανατρέξτε στο σχετικό εγχειρίδιο ή οδηγίες χρήσης του κιτ QIAGEN. Τα εγχειρίδια ή οι οδηγίες χρήσης των κιτ QIAGEN είναι διαθέσιμα στη διεύθυνση www.qiagen.com. Μπορείτε επίσης να τα ζητήσετε από το Τμήμα τεχνικής εξυπηρέτησης της QIAGEN ή τον τοπικό σας αντιπρόσωπο. Εμπορικά σήματα: QIAGEN, QIAsymphony, artus, Rotor-Gene (QIAGEN Group); ATCC (American Type Culture Collection); Acrometrix (Life Technologies). Οι καταχωρημένες ονομασίες, τα εμπορικά σήματα κ.λπ. που χρησιμοποιούνται σε αυτό το έγγραφο, δεν θα πρέπει να θεωρούνται μη προστατευμένα από το νόμο, ακόμη και αν δεν επισημαίνονται ειδικά ως τέτοια. 2012 2015 QIAGEN,, με τη διατήρηση κάθε δικαιώματος. Ordering www.qiagen.com/contact Technical Support support.qiagen.com Website www.qiagen.com artus CMV QS-RGQ Kit: Performance characteristics 09/2015 12