Места на продукција на Б клетките

Места на продукција на Б клетките 1

Продукција на Б клетките HSC Зрела Б кл. = 1-2 недели Прецизно организирана експресија на рецепторни и атхезивни молекули Б1 Б кл. (5%) и Б2 Б кл. (95%) Активација Мемориски и ефекторни кл. Basel nomenclature (pre-pro, pro, pre-b, immature B) developed by Melchers and colleagues 2

Улога на стромалните кл. од коскената срцевина Директен контакт VLA-4 VCAM1 c-kit SCF Цитокини Про-Б кл. Пре-Б кл. (експресираат имуноглобулни во цит., но не на површината) IL-7 Активни транскрипциски фактори Експресија на гени Преуредување на Ig гени Површински маркери (како може да се следат?) 3

BCR 4

Се поврзуваат за промотори и енхансери на важни Ig гени ПреБ-клеточен рецептор (pre-bcr) Сигнали неопходни за понатамошно зреење Делба на пре-б-клетките (6-8x) (IL-7) Промени во експ. на RAG1/2 и TdT 5

(Реактивација на RAG1/2) Б-клеточни подгрупи Први се создаваат, во феталниот живот Пандан на γδ Т кл.? (150 денови полужив.) Природни IgM (нормално заст. во серумот) 6

Б-клеточни подгрупи 7

Селекција на Б клетките во коскената срцевина Дневна продукција (кај глушец) = 5х10 7 Ја напуштаат коскената срцевина = 5х10 6 (10%) Негативна селекција Клонална делеција на автореактивни Б кл. Централна толеранција Премостувачко поврзување на migm од незрелите Б кл. = апоптоза (Eксп: Со помош на антитело специфично за μ) Негативната селекција на Б кл. е помалку строга Последици? Селекција на Б клетките Експериментални докази Тransgene-encoded IgM against the H-2 class I molecule K k (only anti-h-2k k antibodies) H-2 d и H-2 d/k глувци 8

Незрела Б кл. сопствен антиген Зреењето запира експресија на RAG-1/2 Едитирање на рец. 9

Апоптоза (неколку недели) (Ниски нивоа на Bcl-2 и Bcl-xl; Високи на Fas) 10

Активација на Б клетките Тимус-зависни антигени (TD) Тимус-независни антигени (TI) Тип-1 тимус-независни антигени (TI-1) Пр. липополисахарид Тип-2 тимус-независни антигени (TI-2) Полимерни протеини (пр. флагелин) Полисахариди (од бак. кл. ѕид) ТI vs. ТD одговор (значење на T H кл.) Послаб (TI) Нема создавање мемориски клетки (TI) Слабо превклучување на класи (TI) TI-1 - пример - LPS од кл. ѕид на грам-нег. бактерии Интеракции: LPS BCR; LPS TLR4 (Специфичен BCR некои Б кл.; TLR4 сите Б кл.) Поликлонски Б-клеточен активатор Делба и диференцијација на Б-кл. Експерименти со голи глувци и внесување на Т кл. 11

ТI-2 Активација премостувачко поврзување на mig TI-2 vs. TI-1 антигени Не се поликлонски активатори (ТI-2) Активираат само зрели Б кл. (TI-2) Потребни се цитокини за ефикасна пролиферација и превкл. на класи (TI-2) TD и TI (TI-1, ТI-2) антигени 12

Сигнали кои ги водат Б кл. низ клеточниот циклус Наивни Б кл. G 0 фаза Активација (премост. повр.) G 1 S G 2 M Активирање на Б клетките 13

Активирање на Б клетките Пренесување на активирачките сигнали Кратки цитоплазматични опашки на mig (18 аминок-ни ) Тирозин Тирозин 14

Пренесување на активирачките сигнали Пренесување на активирачките сигнали Фосфорилација на тирозините во ITAM Поврзувачки места за адаптерот BLNK и тирозин киназата Syk (активирана од Src) Syk го фосфорилира BLNK Поврзувачки места за други протеини (Btk, PLCγ2) 15

Пренесување на активирачките сигнали Syk го фосфорилира Btk Btk ja aктивира PLCγ2 со што може да се модифицираат конц. на Ca 2+ и PKC патеките 16

Сличности помеѓу BCR и TCR сигнализацијата Поделба на функциите помеѓу подединиците во рецепторниот комплекс Активација со посредство на мембрански-асоцирана Src протеин тирозин киназа p56 Lck во T кл. и Lyn, Blk, и Fyn во B кл. Група од голем сигнализирачки комплекс со протеин тирозин киназна активност ZAP-70 во Т кл. и Syk во Б кл. Адаптери LAT и SLP-76 во Т кл. и BLNK во Б кл. 17

Сличности помеѓу BCR и TCR сигнализацијата Вклучување на повеќе сигнал-пренесувачки патеки Промени во експресијата на гени Стимулаторни и инхибиторни корецептори 18

Стимулаторни и инхибиторни корецептори Експериментални потврди за улогата на корецепторите (10 4 migm vs. 10 2 migм + сигнал од CD19/CR2/TAPA-1) Инхибиторни сигнали CD22 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10781410) FcγRIIb рецептор (CD32) Поврзува Fc рег. од IgG; Колигација на BCR и FcγRIIb Инхибирана активација При ТD активацијата, Б кл. им помагаат на своите помагачи BCR специфично препознава антиген Б кл. е најефикасна од APCs при ниски конц. на антиген 19

Т-Б конјугат Миграција на Голџи системот и микротубуларниот организирачки центар во Т кл. (олеснета секреција на цитокини кон Б кл.) CD40/L ТNF/R фамилија Lyn, Syk, PLC, NF-κB Eксперименти Б кл. + T H кл. мем. aнти-cd40l 20

Диференцијација потреба од цитокини Активирана Б кл. IL-2R, IL-4R, IL-5R Негативна селекција на Б клетките во периферијата double transgenics Анергични Б кл.! 21

Анергични Б кл.! (IgM +, IgD + = зрели Б кл.) Бенефит од присуството на анергични Б кл.? Доказ за периферна селекција 22

Хуморален одговор Кинетика на одговорот (Како се мери?) Примарен одговор (наивни/неискусни лимфоцити) Секундарен одговор (мемориски лимфоцити) Примарен одговор (наивни лимфоцити) Создавање на плазма кл. и мемориски Б кл. Од што зависи кинетиката? 23

Секундарен одговор (мемориски лимфоцити формирани во текот на примарниот; G 0 фаза; долговечни) Оriginal antigenic sin Побројни од специфичните наивни Б кл. Превклучување класи = одговарачки ефекторни функции за патогенот Зреење на афинитетот Хуморален одговор експерименти со хаптен-носач Т Н и Б кл. неопходни за хуморален одговор Препознаваат различни епитопи на истиот антиген Секундарен одговор Само ако секундарната имунизација е со истиот носач ( carrier effect ) 24

Хуморален одговор експерименти со хаптен-носач Клетките имунизирани против хаптенот и клетките имунизирани против носачот се различни популации Hapten-primed B cells Hapten-primed T cells Carrier-primed B cells Carrier-primed T cells Hapten-primed B cells Hapten-primed T cells Carrier-primed B cells 25

Hapten-primed B cells Carrier-primed B cells Carrier-primed T cells Hapten-primed B cells Hapten-primed T cells Carrier-primed B cells Carrier-primed T cells Hapten-primed B cells Carrier-primed B cells Hapten-primed T cells Hapten-primed B cells Carrier-primed B cells Carrier-primed T cells *Mерен е само Б- клеточниот одговор на хаптенот These experiments demonstrate that the response of hapten-primed B cells to the hapten-carrier conjugate requires the presence of carrierprimed CD4 + T H cells specific for carrier epitopes Клетките имунизирани против носачот се Т кл. Клетките имунизирани против хаптенот се Б кл. 26

Хуморален одговор in vivo Aнтиген од крвта слезенка Антиген од ткивните простори лимфни јазли In response to antigen recognition by the BCR, the B cell begins to express the chemokine receptor CCR7. CCR7 binds to the chemokines CCL19 and CCL21, which are secreted by stromal cells in the T-cell zones of secondary lymphoid organs. The B cell still also expresses CXCR5, which binds CXCL13, expressed by FDCs in the B-cell follicles. Because they express receptors for both T- and B-cell-zone-derived chemokines, by approximately 6 hours post stimulation, antigen-engaged B cells move to the boundary of the B-cell and T-cell zones. 27

28

(Б кл. црвено; Т Н зелено) (Б кл. е водич ) Хуморален одговор in vivo Активација Фокуси од пролиферирачки Б кл. на рабовите од паракортексот Плазма кл. Активирани Б кл. и T H преминуваат во примарните фоликули Секундарни фоликули Фоликуларни дендритски/стеблести кл. (Fc и комплемент рец.; отсуство на MHC II) Миграција кон центарот на секундарниот фоликул Зародишен центар (по 7-10 дена од изложувањето) 29

Четири главни процеси во зародишните центри Центробласти Центроцити 4 3 1 2 4 3 Given the active mutational and selection events that occur within the germinal center, it should come as no surprise that it has been referred to by some as a Darwinian Microcosm 30

Зреење на афинитетот по пат на соматска хипермутација Милион пати поголема стапка на мутација во однос на другите гени; Фокусираност; Activation-Induced Cytidine Deaminase (AID) 31

Соматска хипермутација (Ако сакаш повеќе да знаеш) Селекција во светлата зона Компетиција за ограничен број на Ag-Ab/Аg-C3b на површината од FDC / Компетиција за контакт со T H Сигнал за преживување Нег. сел. на автоимуни рецептори Висока заситеност на BCR со сопствени антигени Интернализација Апоптоза Отсуство на контакт со спец. T H (запоставување) 32

Превклучување на класи Потреба од CD40-CD40L интерак., AID Зошто е потребно? Превклучување на класи 33

Плазма клетки Создавање во зародишни центри и надвор од нив (Појава во медуларниот регион на јазолот во рок од 5-6 дена од почетокот на имунолошкиот одговор) (BLIMP-1, IRF-4 = B кл. Плазма кл.) Отсуство на mig Продукција на антитела, ~1000 молекули/клетка/s Висока стапка на транскрипција 5-10 дена живот на плазма кл. од примарниот фокус Миграција Долготрајна имунолошка меморија Плазма кл. од фокусите vs. Плазма кл. од зародиш. цен. 34

Мемориски Б кл. Регулација на имунолошкиот ефекторен одговор Реактивност или толеранција Штетни последици при несоодветен одговор кон туѓ или сопствен антиген Цитокини и други механизми Пример: B-10 B cells release the interleukin IL-10 upon antigenic stimulation, and may serve to reduce inflammation during an ongoing immune response 35

Регулација на имунолошкиот ефекторен одговор Имунол. историја; Компетиција помеѓу антигени Пример: SRBCs vs. HRBCs Антитело-индуцирана инхибиција на продукцијата на антителото Пример: Зошто не се вакцинира за сипаници пред возраст од 1 година? Механизми на инхибицијата Циркулирачките антитела компетираат со рец. на B кл., спречувајќи акт. и клонска експ. Преку Fc рец. на Б кл. доближување на Fc и BCR ITIM Поврзување на инозитол фосфатазата SHIP 36

37