Anti-HAV IgM. For the Qualitative Detection of IgM Antibodies to Hepatitis A Virus. For use on IMMULITE 2000 systems

Anti-HAV IgM For the Qualitative Detection of IgM Antibodies to Hepatitis A Virus For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the qualitative detection of IgM antibody to hepatitis A virus (HAV) in human serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA), as an aid in the determination of acute HAV infection. Catalog Number: L2KVM2 (200 tests), L2KVM6 (600 tests) Test Code: HAM Color: Brown Summary and Explanation Hepatitis is an infectious liver disease caused by the Hepatitis A virus (HAV). Hepatitis A virus was first identified in human feces in 1973 1 and differs in many fundamental ways from Hepatitis B virus (HBV), Hepatitis C virus (HCV) and other viral causes of hepatitis. The virus is a small, non-enveloped, relatively heat stable RNA virus and is classified with the enterovirus group of the Picornaviridae family. 2,3,4 HAV accounts for a high incidence of acute hepatitis affecting humans throughout the world. Illness caused by HAV is characterized by fever, nausea, abdominal pain, loss of appetite and jaundice. These symptoms may appear 10-14 days after ingesting contaminated foods. Persons may shed HAV in their feces before disease symptoms appear. HAV infection is diagnosed by detection of immunoglobulin M (IgM) and IgG antibodies to HAV in human serum. Anti- HAV IgM is present at the acute or the early convalescent stage of infection. Anti- HAV IgG, which appears shortly after the IgM titer appears in the course of infection, remains detectable for a person's lifetime and confers lifelong protection against the disease. 4 A reactive total anti-hav (IgG and IgM) test in patient serum or plasma indicates past infection or immunization and associated immunity. 5 The test may be used to assess immune status in naturally infected 6 and experimentally vaccinated individuals 7 and for epidemiological studies. 8,9 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM is a solidphase, two-site sequential chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-human IgM antibody. The liquid phase consists of three reagents: 1) protein-based buffer, 2) HAV antigen in buffer and 3) alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal rabbit anti-hav antibody in buffer. In the first cycle, the pre-diluted patient sample (1-in-40) and the protein buffer are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, IgM antibodies to HAV in the patient sample bind to the monoclonal murine anti-human IgM antibody on the bead. Unbound sample is then removed by a centrifugal wash. In the second cycle, reagents containing HAV antigen and the enzyme conjugated anti-human IgM antibody are added to the original reaction tube for another 30- minute incubation. During this time, the immobilized human anti-hav IgM binds to the HAV antigen, which in turn binds to the enzyme conjugated anti-hav antibody to form the antibody sandwich complex. The unbound conjugate is removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Specimen Collection The patient need not be fasting, and no special preparations are necessary. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Samples which are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. 2 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06)

Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA). Storage: 3 days at 2 8 C. 10 For longer storage: at 20 C. 11 Automatic Predilution Factor: 40. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Because no test method can offer complete assurance that laboratory specimens do not contain HIV, hepatitis B virus, or other infectious agents, specimens should be handled at the BSL2 as recommended for any potentially infectious human serum or blood specimen in the CDC-NIH manual, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 1993. The Anti-HAV IgM Adjustor, Anti-HAV IgM Low Positive Control and Anti-HAV IgM Positive Control may contain HAV. Always handle all controls as if capable of transmitting infectious agents. The concentration of anti-hav in a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." The Adjustor and Controls supplied with the kit should be fully dissolved after reconstitution. Failure to ensure the homogeneity of the solution may result in poor reproducibility of results. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied The principal components Bead Pack, Reagent Wedge, and Adjustor represent a matched set. Barcodes encode information about the test, including expiration dates, component lot numbers, and cutoff parameters. Anti-HAV IgM Bead Pack (L2VM12) With barcode. 200 beads coated with a murine monoclonal anti-human IgM antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KVM2: 1 pack. L2KVM6: 3 packs. Anti-HAV IgM Reagent Wedge (L2VMA2) With barcode. 11.5 ml of a protein-based buffer. 11.5 ml HAV antigen, in buffer, 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to rabbit polyclonal anti-hav antibody, in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KVM2: 1 wedge. L2KVM6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations without damaging the barcode on the main label. Remove the IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06) 3

foil seal from the top of the Reagent Wedge, and snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Invert the reagent wedge gently a few times to ensure thorough mixing and remove any bubbles from the surface before each run to avoid reagent sampling error. Anti-HAV IgM Adjustor (LVMR) One vial containing lyophilized human serum with IgM reactive to HAV in buffer, with preservative. Reconstitute with 4.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. (No further dilution is required.) Stable at 2-8 C for 14 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KVM2: 1 vial. L2KVM6: 2 vials. Anti-HAV IgM Controls (LVMC1, LVMC2, LVMC3) Three vials (Negative, Low Positive and Positive). LVMC1 (Negative Control): lyophilized human serum nonreactive to HAV, with preservative. LVMC2, LVMC3 (Low Positive Control, Positive Control): lyophilized human serum with IgM reactive to HAV, with preservative. Reconstitute each vial with 2.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 14 days after reconstitution, or for 6 months (aliquoted) at 20 C. L2KVM2: 2 sets. L2KVM6: 3 sets. Anti-HAV IgM controls require the same 1-in-40 on-board predilution as patient samples. The IMMULITE 2000 software performs automatic on-board dilution of control samples, and the results will be tracked in the QC database. Enter controls as controls. Aliquot Labels with barcodes are supplied with the kit, for use with the Adjustors and Controls. Before use, place the appropriate Aliquot Labels on test tubes, so the barcodes can be read by the barcode reader on the IMMULITE 2000. IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KVM2: 1 vial. L2KVM6: 1 vial. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KVM2: 3 labels. L2KVM6: 5 labels. Kit Components Supplied Separately IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2IGZ2: 1 vial. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2IGZ2: 5 labels. L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: The controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. 4 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06)

The Controls should be processed at (or near) the beginning of every run containing patient samples to be tested for anti-hav IgM, and also when readjusting. For the current control ratio ranges, please refer to the Control insert. The Positive Control is used to validate the IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM assay at a critical level when determining the presence of an active Hepatitis A infection. In addition to the controls provided, users may wish to run additional controls for their own purposes. Additional controls may be tested in accordance with guidelines or requirements of local, state, and/or federal regulations or accrediting organizations. It is also recommended that known reactive and nonreactive specimens be run periodically to assure pipetting accuracy for the dilution step. It is recommended that the user refer to published guidelines for general quality control recommendations and intervals for testing. Reagent Handling: Invert the reagent wedge gently a few times to ensure thorough mixing and to remove any bubbles from the reagent surface before each run, to avoid sampling error. Calculation of Cutoff and S/CO Ratio: The Master Cutoff of the assay was determined from representative samples to achieve optimal sensitivity and specificity for the assay. The cutoff is set equal to the average counts per second (mean cps) of the Adjustor (from the most recent adjustment) multiplied by Curve Parameter 1. (See the "Low Adjustor CPS" and "Curve Parameter 1" fields in the IMMULITE 2000 Kit Information screen, which can be accessed from the menu via Data Entry: Kit Entry.) Calculation of a signal/cutoff (s/co) ratio is done by using the following formula: S/CO Ratio = Sample or Control cps Mean Adjustor cps P1 Calculation and reporting of qualitative results (reactive / nonreactive / indeterminate) and signal/cutoff (s/co) ratio are handled automatically by the IMMULITE 2000. The result for a sample is reported as Indeterminate if the counts per second for that sample fall within ±10% of the cutoff. The result is reported as Reactive if the sample's counts are above the indeterminate range, and Nonreactive if below this range. Interpretation of Results A result of "Reactive (ratio of 1.1) indicates that anti-hav IgM is present and was detected in the patient sample. A result of Nonreactive (ratio of <0.9) indicates that anti-hav IgM is not present and was not detected in the patient sample. Any result of "Indeterminate" (ratio between 0.9 and <1.1) should be retested. Samples which still test as "Indeterminate" should be tested by an alternate method, or a second sample should be taken if possible within a reasonable period of time (e.g., one week). The magnitude of the measured results (cps) above the Cutoff is not indicative of the total amount of antibodies detected. Reports by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Anti- HAV IgM EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." An interpretation of the results is not recommended if the positive or negative control falls outside the range specified in the Quality Control section Limitations The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical and vaccination history, symptomology and other laboratory findings. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06) 5

interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed as a signal-tocutoff ratio. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Specificity: A study was conducted to evaluate whether the measurement of anti-hav IgM antibody is affected by closely related microorganisms. Sera containing antibodies to HCV (n=10), Epstein-Barr virus (n=20), HBcAg (n=10), rheumatoid factor (n=10), HSV (n=10), ANA (n=6), HIV (n=10), CMV (n=10), Toxoplasma (n=20), rubella (n=20) were tested by IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM. One hundred-twenty five out of 126 samples were nonreactive for HAV IgM. One sample positive for anti-hiv yielded an indeterminate result. This sample was further tested by a commercially available HAV IgM assay (Abbott HAVAB -M EIA) and yielded a nonreactive result. Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 540 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 40 volunteers into plain, heparinized, sodium citrate, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer plastic tubes. All samples were assayed by the IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM procedure. Results are expressed as a signal-to-cutoff ratio. By linear regression: (Heparin) = 0.90 (Serum) + 0.05 r = 0.996 (EDTA) = 0.98 (Serum) + 0.01 r = 0.999 (SST) = 0.97 (Serum) + 0.02 r = 0.998 (Sodium Citrate) = 1.02 (serum) + 0.01 r= 0.999 Means: 1.21 (Serum) 1.27 (Heparin) 1.15 (EDTA) 1.23 (SST) 1.18 (Sodium Citrate) Method Comparison: The assay was compared to a commercially available Abbott HAVAB -M EIA on 257 patient samples. Ten samples that were nonreactive by IMMULITE 2000 and positive by Abbott HAVAB -M EIA method were resolved to be negative by Abbott AxSYM assay. The table below presents the final results of this study. IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM Abbott Reactive Ind Nonreactive Positive 36 1 0 Indeterminate 0 0 3 Negative 1 0 216 Total Agreement: 98.1% Relative Sensitivity: 97.3% Relative Specificity: 98.6% References 1) Feinstone SM, Kapikian AZ, Purcell RH, Hepatitis A: detection by immune electron microscopy of a virus like antigen associated with acute illness, Science 1973; 182, 1026-28, 2) Cohen JI, Ticehurst JR, Purcell RH, Buckler- White A, Baroudy BM, Complete nucleotide sequence of a wild-type hepatitis A virus: comparison with different strains of hepatitis A virus and other picornaviruses, J, Virol, 1987;61, 50-59, 3) Coulepis AG, Locarnini, SA, Westaway, EG, Tannock, GA, Gust ID, Biophysical and biochemical characterization of a hepatitis A virus, Intervirology 1982;18, 107-207, 4) Stapleton JT, Host immune response to Hepatits A virus, J Infect Dis 1995;171 (suppl, 1):S9-14, 5) Weston SR, Martin P, Serological and molecular testing in viral hepatitis: an 6 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06)

update, Can J, Gastroenterol 2001;15(3):177-84, 6) Lemon SM, Bin LN, Serum neutralizing antibody response to hepatitis A virus, J Infect Dis 1983;148:1033-39, 7) Flehmig B, Haage A, Heirricy U, Pfisterer M, Studies with an inactivated hepatitis A vaccine, In: AJ Zuckerman (Ed), Viral hepatitis and liver disease, 1988;100-5, 8) Yang NY, Yu PH, Mao ZX, Chen NL, Mao JS, In: Apparent infection of hepatitis A virus, Amer J Epidemiology 1988;127(3):599-604, 9) Tassopoulos NC, Roumeliotou-Karayannis A, Sakka M, Ticehurst J, et al, An epidemic of hepatitis A in an institution for young children, Amer J Epidemiol 1987;125(2): 302-7, 10) Tietz NW, editor, Clinical guide to laboratory tests, 3rd ed, Philadelphia: WB Saunders, 1995:354-60, 11) Tietz NW, editor, Clinical guide to laboratory tests, 3rd ed, Philadelphia: W,B, Saunders, 1995:322-4, Technical Assistance Available outside the United States only, For technical assistance, contact your National Distributor, www.siemens.com/diagnostics The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003, Tables and Graphs Precision (ratio) Within Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 0,25 0,03 12,0% 0,03 12,0% 2 0,25 0,03 12,0% 0,04 16,0% 3 0,75 0,05 6,7% 0,08 10,7% 4 1,40 0,08 5,7% 0,14 10,0% 5 1,84 0,10 5,4% 0,17 9,2% 6 1,84 0,10 5,4% 0,16 8,7% 7 2,52 0,11 4,4% 0,28 11,1% 8 6,78 0,36 5,3% 0,59 8,7% 9 7,25 0,39 5,4% 0,66 9,1% 10 16,0 0,89 5,6% 1,35 8,4% Česky, 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient, Ελληνικά, 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV, Polski, 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Česky IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM Použití: Pro in vitro diagnostiku na analyzátorech IMMULITE 2000 pro kvalitativní stanovení IgM protilátek proti viru hepatitidy A (HAV) v lidském séru nebo plazmě (heparinové, s citrátem sodným nebo EDTA) jako pomůcky při stanovení akutní infekce HAV. Katalogové číslo: L2KVM2 (200 testů), L2KVM6 (600 testů) Kód metody: HAM Barva: Hnědá Shrnutí a vysvětlení Hepatitida je infekční onemocnění jater způsobené virem hepatitidy A (HAV). Virus hepatitidy A byl poprvé identifikován v lidské stolici v roce 1973 1 a v mnoha zásadních aspektech se liší od viru hepatitidy B (HBV), viru hepatitidy C (HCV) a jiných virů způsobujících hepatitidu. Je to neobalený RNA virus, relativně odolný vůči teplu a se skupinou enterovirů se řadí k čeledi Picornaviridae. 2,3,4 HAV způsobuje akutní hepatitidu postihující populace po celém světě. Nemoc způsobená HAV se projevuje horečkou, nevolností, bolestmi břicha, nechutenstvím a zežloutnutím. Tyto symptomy se mohou projevit 10-14 dní po požití kontaminované potravy. Stolice může obsahovat HAV ještě dříve, než se projeví symptomy nemoci. Infekce HAV je diagnostikována detekcí imunoglobulinu M (IgM) a IgG protilátek proti HAV v lidském séru. IgM protilátky proti HAV jsou v séru obsaženy během akutní fáze infekce a ve fázi začínající rekonvalescence. IgG protilátky proti HAV, které se vytvoří krátce po vzniku infekce, zůstávají v krvi po celý život a tvoří imunitu proti onemocnění. 4 Pozitivní test na protilátky proti HAV (IgG a IgM) v séru nebo plazmě indikuje prodělanou infekci nebo očkování a získanou imunitu. 5 Stanovení je možné použít k vyhodnocení imunitního stavu přirozeně infikovaných 6 a experimentálně očkovaných jedinců 7 a pro epidemiologický výzkum. 8,9 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06) 7

Princip Stanovení Stenovení IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM je oboustranná sekvenční chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgM. Kapalná fáze se skládá ze tří částí: 1) pufr na bázi bílkoviny, 2) antigen HAV v pufru a 3) alkalická fosfatáza (z telecího střeva) konjugovaná s polyklonální králičí protilátkou proti HAV v pufru. V prvním kroku se inkubuje naředěný vzorek pacienta (1 : 40) a bílkovinný pufr s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. IgM protilátky proti HAV ve vzorku pacienta se přitom navážou na monoklonální myší protilátku proti lidskému IgM na kuličce. Nenavázaný vzorek se odstraní centrifugačním mytím. V druhém kroku se do původní reakční zkumavky přidá reagencie obsahující antigen HAV a protilátka proti lidskému IgM kojugovaná s enzymem a probíhá další inkubace po dobu 30 minut. Nyní se imobilizovaný lidský IgM proti HAV naváže na antigen HAV a ten se naváže na protilátku proti HAV konjugovanou s enzymem a vznikne sendvičový komplex. Nenavázaný konjugát se odstraní centrifugačním mytím. Nakonec se do reakční zkumavky přidá chemiluminiscenční substrát a výsledný signál je přímo úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut. Odebírání vzorků Pacient nemusí být nalačno a není nutná žádná speciální příprava. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Zakalené vzorky nebo vzorky s částicemi je třeba upravit nízkootáčkovou centrifugací. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Anti- HAV IgM na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 10 µl séra nebo plazmy (heparinová, s citrátem sodným nebo EDTA). Skladování: 3 dny při 2 8 C, 10 déle při teplotě 20 C. 11 Faktor automatického ředění: 40. Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfylis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Vzhledem k tomu, že žádná testovací metoda neposkytuje úplnou jistotu, že laboratorní vzorky neobsahují HIV, virus hepatitidy B virus nebo jiné infekční látky, musí se se vzorky zacházet v souladu s BSL2, jak je doporučeno pro jakékoli potenciálně infekční lidské sérum nebo vzorek krve v manuálu CDC-NIH, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 1993. 8 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06)

Anti-HAV IgM Kalibrátor, Anti-HAV IgM Mírně pozitivní kontrola a Anti-HAV IgM Pozitivní kontrola mohou obsahovat HAV. Se všemi kontrolami nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Koncentrace protilátek proti HAV v daném vzorku stanovená pomocí souprav od jiných výrobců se může lišit v závislosti na odlišnostech v použité metodě a specificitě reagencií. Proto by výsledky, které laboratoř hlásí lékaři, měly obsahovat poznámku: "Následující výsledky byly získány metodou IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM EIA. Výsledky získané se soupravami od jiných výrobců se nesmí zaměňovat." Kalibrátor a kontroly dodávané se soupravou musí být po rekonstituci dokonale rozpuštěné. Pokud nejsou roztoky homogenní, není možné zaručit reprodukovatelnost výsledků. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty soupravy zásobník kuliček, reagenční nádobka a kalibrátor představují ucelenou sadu. Čárové kódy obsahují informaci o metodě, včetně data expirace, šarže jednotlivých komponentů a parametry cut-off. Anti-HAV IgM zásobník s kuličkami (L2VM12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgM. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KVM2: 1 balení. L2KVM6: 3 balení. Anti-HAV IgM Reagencie (L2VMA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml pufru na bázi bílkoviny. 11,5 ml antigenu HAV, v pufru, 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s králičí polyklonální protilátkou proti HAV, v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do exspirace. L2KVM2: 1 nádobka. L2KVM6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Před každým kolem měření reagenční nádobku několikrát jemně překlopte, aby bylo dosaženo důkladného promíchání a odstranění bublin z povrchu, tím se zabrání chybám v pipetování reagencie. Anti-HAV IgM Kalibrátor (LVMR) Jedna ampule obsahující lyofilizované lidské sérum s IgM reaktivním vůči HAV v pufru, s konzervačním prostředkem. Rekonstituujte 4,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchejte jemným kroužením nebo překlápěním do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. (Žádné další ředění není nutné.) Stabilní při 2 8 C 14 dní po rozpuštění, nebo 6 měsíců při 20 C rozdělené na alikvotní části. L2KVM2: 1 ampule. L2KVM6: 2 ampulky. Anti-HAV IgM Kontroly (LVMC1, LVMC2, LVMC3) Tři ampule (Negativní, mírně pozitivní a pozitivní). LVMC1 (Negativní kontrola): lyofilizované lidské serum nereaktivní vůči HAV, s konzervačním prostředkem. LVMC2, LVMC3 (Mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): lyofilizované lidské sérum s IgM reaktivním vůči HAV, s konzervačním prostředkem. Rekonstituujte každou ampuli 2,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchejte jemným kroužením nebo překlápěním do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní při 2 8 C 14 dní po rozpuštění, nebo 6 měsíců při 20 C rozdělené na alikvotní části. L2KVM2: 2 sady. L2KVM6: 3 sady. Kontroly Anti-HAV IgM vyžadují stejné automatické ředění 1: 40 jako pacientské vzorky. Software analyzátoru IMMULITE 2000 provádí automatickén ředění kontrolních vzorků a výsledky se ukládají do databáze kontrol (QC). Kontroly zadávejte jako kontroly. Se soupravou se dodávají štítky s čárovými kódy pro kalibrátory a kontroly. Před použitím nalepte na zkumavky příslušné štítky tak, aby je analyzátor mohl přečíst čtečkou čárových kódů. IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06) 9

IgG/IgM Diluent Vzorků (L2IGZ2) Pro automatické ředění pacientských vzorků a kontrol. 55 ml koncentrované (připravené k použití) nehumánní protein/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KVM2: 1 ampule. L2KVM6: 1 ampule. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KVM2: 3 štítky. L2KVM6: 5 štítků. Materiál dodávaný zvlášť IgG/IgM Diluent Vzorků (L2IGZ2) Pro automatické ředění pacientských vzorků a kontrol. 55 ml koncentrované (připravené k použití) nehumánní protein/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2IGZ2: 1 ampule. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2IGZ2: 5 štítků. L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 Testovací zkumavky na diluent vzorků (16 100 mm) L2ZC: 250 Uzávěru na testovací zkumavky na diluent vzorků Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly dodávané se soupravou by měly být použity jako kontrolní materiál kvality k sledování znaků metody. Kontroly by měly být měřeny na začátku (nebo blízko začátku) každého kola měření obsahujícího vzorky pacientů určené k testu Anti-HAV IgM a také při readjustaci. Aktuální rozmezí kontrolního ukazatele najdete na informačním letáčku přiloženém ke kontrole. Pozitivní kontrola je určena k validaci stanovení IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM na kritické hladině při stanovování přítomnosti aktivní infekce hepatitidy A. Kromě kontrol dodávaných v soupravě může užitavel stanovovat další kontroly pro vlastní účely. V souladu s pokyny a požadavky místních, státních a/nebo federálních předpisů nebo akreditačních organizací je možné testovat i další kontroly. Pro zajištění přesného pipetování v kroku ředění se doporučuje pravidelné testování známých reaktivních a nereaktivních vzorků. Je doporučeno, aby se uživatel řídil publikovanými předpisy pro doporučení obecné kvality kontroly a intervaly pro testování. Zacházení s reagencií: Opatrně několikrát obraťte reagenční nádobku tak, aby bylo zajištěno důkladné promíchání a aby byly odstraněny bubliny z povrchu reagencie před každým kolem měření, aby se zabránilo chybě při odebírání reagencie. Výpočet hodnoty cut-off a poměru S/CO: Kalibrační hodnota cut off stanovení byla určena z reprezentativních vzorků tak, aby bylo dosaženo optimální senzitivity a specificity metody stanovení. Cut off hodnota je rovná průměrné hodnotě cps kalibrátoru (z poslední adjustace) vynásobené parametrem kalibrační křivky 1 (Curve Parameter 1). (Viz políčka Low Adjustor CPS a Curve Parameter 1 na obrazovce Kit 10 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06)

information přístroje IMMULITE 2000. Přístup je možný z nabídky přes Data Entry: Kit Entry.) K výpočtu poměru signál/cutoff (s/co) je použita následující rovnice: S/CO poměr = cps vzorku nebo kontroly Průměr cps adjustoru P1 Výpočet poměru s/co a hlášení kvalitativních výsledků (udávaných ve tvaru Reaktivní/Nereaktivní/Neurčitý (reactive/nonreactive/indeterminate) ) provádí analyzátor IMMULITE 2000 automaticky. Výsledek pro vzorek je Neurčitý (Indeterminate), když je cps vzorku v rámci intervalu ±10% hodnoty cut off. Výsledek je Reaktivní (Reactive), když je cps vzorku nad rozmezím Neurčitý (Indeterminate) a Nereaktivní (Nonreactive), když je pod tímto rozmezím. Vyhodnocení výsledků Výsledek"Reaktivní" (poměr 1,1) znamená, že vzorek pacienta je reaktivní a že ve vzorku byly detekovány IgM protilátky proti HAV. Výsledek"Nereaktivní" (poměr <0,9) znamená, že vzorek pacienta je nereaktivní a ve vzorku nebyly detekovány IgM protilátky proti HAV. Všechny výsledky označené "Neurčitý" (poměr mezi 0,9 a <1,1) je třeba znovu analyzovat. Pokud je výsledek opět Neurčitý, je třeba použít jinou metodu nebo, pokud je to možné, za přiměřenou dobu (např. jeden týden) odebrat další vzorek Velikost naměřených výsledků (cps), které jsou nad hodnotou cut off, neudává celkové množství zjištěných protilátek. Výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, měl obsahovat sdělení: Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Anti-HAV IgM EIA na analyzátorech IMMULITE 2000. Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat. Interpretace výsledků není doporučena, pokud pozitivní nebo negativní kontrola vyjde mimo rozsah specifikovaný v sekci Quality Control. Omezení Výsledky stanovení je třeba posuzovat s ohledem na klinickou anamnézu pacienta, symptomatiku a ostatní laboratorní nálezy. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all imunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v poměru signal-to-cut-off. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. (Viz tabulka Precision.) Specificita: Byla provedena studie vyhodnocující, zda stanovení IgM protilátek proti HAV je ovlivněno blízce příbuznými mikroorganismy. Metodou IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM byla měřena séra obsahující protilátky proti: HCV (n=10), virus Epstein-Barr (n=20), HBcAg (n=10), revmatoidní faktor (n=10), HSV (n=10), ANA (n=6), HIV (n=10), CMV (n=10), Toxoplasma (n=20), Rubella (n=20). Sto dvacet pět ze 126 vzorků bylo nereaktivních vůči HAV IgM. Jeden vzorek pozitivní na protilátky proti HIV vykazoval neurčitý výsledek. Tento vzorek byl dále IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06) 11

testován komerčně dostupnou metodou HAV IgM (Abbott HAVAB -M EIA) a vykázal nereaktivní výsledek. Bilirubin: Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 540 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K určení vlivu alternativních typů vzorků byla odebrána krev od 40 dobrovolníků do obyčejných, heparinizovaných, s citrátem sodným, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer umělohmotných zkumavek. Všechny vzorky byly analyzovány na přistroji IMMULITE 2000 metodou Anti- HAV IgM. Lineární regresí: (Heparin) = 0,90 (Sérum) + 0,05 r = 0,996 (EDTA) = 0,98 (Sérum) + 0,01 r = 0,999 (SST) = 0,97 (Sérum) + 0,02 r = 0,998 (Citrát sodný) = 1,02 (Sérum) + 0,01 r = 0,999 Střední hodnoty: 1,21 (Sérum) 1,27 (Heparin) 1,15 (EDTA) 1,23 (SST) 1,18 (Citrát sodný) Srovnání metody: Metoda byla porovnána s komerčně dostupnou metodou Abbott HAVAB -M EIA na 257 vzorcích. Deset vzorků, které byly nereaktivní u IMMULITE 2000 a pozitivní u HAVAB -M EIA, bylo změřeno na analyzátoru Abbott AxSYM. V následující tabulce jsou uvedeny výsledky této studie. IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM Abbott Reaktivní Neurč. Nereaktivní Pozitivní 36 1 0 Neurčitý 0 0 3 Negativní 1 0 216 Celková shoda: 98,1% Relativní citlivost: 97,3% Relativní specificita: 98,6% Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM Ενδεδειγμένη χρήση: Για την in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποιοτική ανίχνευση των IgM αντισωμάτων έναντι του ιού της ηπατίτιδας Α (HAV) στον ανθρώπινο ορό ή πλάσμα (ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA), ως βοήθημα στον καθορισμό της οξείας λοίμωξης HAV. Αριθμός Καταλόγου: L2KVM2 (200 εξετάσεις), L2KVM6 (600 εξετάσεις) Κωδικός ανάλυσης: HAM Χρώμα: Καφέ Περίληψη και Επεξήγηση Η ηπατίτιδα είναι μία μολυσματική ηπατική νόσος που προκαλείται από τον ιό της Ηπατίτιδας Α (HAV). Ο ιός της Ηπατίτιδας ταυτοποιήθηκε για πρώτη φορά σε ανθρώπινα περιττώματα το 1973 1 και διαφέρει σε πολλές θεμελιώδεις πλευρές από τον ιό της Ηπατίτιδας Β (HBV), τον ιό της Ηπατίτιδας C (HCV) και άλλους ιούς που προκαλούν ηπατίτιδα. Ο ιός είναι ένας μικρός, χωρίς φάκελλο, σχετικά σταθερός στη θερμότητα RNA ιός και κατατάσσεται με την ομάδα των εντεροϊών της οικογένειας Picornaviridae. 2,3,4 Ο ιός HAV θεωρείται ως η κύρια αιτία της οξείας ηπατίτιδας στον άνθρωπο σε ολόκληρο τον κόσμο. Η νόσος που προκαλείται από τον HAV χαρακτηρίζεται από πυρετό, ναυτία, κοιλιακό άλγος, απώλεια όρεξης και ίκτερο. Αυτά τα συμπτώματα μπορεί να εμφανιστούν 10-14 ημέρες μετά την κατανάλωση μολυσμένων τροφών. Ο ιός HAV μπορεί να βρεθεί στα περιττώματα ορισμένων 12 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06)

ανθρώπων πριν την εμφάνιση των συμπτωμάτων της νόσου. Η διάγνωση της λοίμωξης HAV γίνεται με ανίχνευση της ανοσοσφαιρίνης M (IgM) και των IgG αντισωμάτων έναντι του HAV στον ανθρώπινο ορό. Τα αντί-hav IgM είναι παρόντα στην οξεία ή την πρώιμη φάση ανάρρωσης της λοίμωξης. Τα αντί- HAV IgG, που εμφανίζονται σύντομα αφότου ο τίτλος IgM εμφανίζεται στην πορεία της λοίμωξης, παραμένουν ανιχνεύσιμα σε όλη τη ζωή ενός ανθρώπου και παρέχουν ισόβια προστασία έναντι της νόσου. 4 Ένας αντιδραστικός συνολικός αντί-hav (IgG και IgM) έλεγχος στον ορό ή το πλάσμα του ασθενούς υποδηλώνει παλαιά λοίμωξη ή ανοσοποίηση και συνδεόμενη ανοσία. 5 Ο έλεγχος μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την εξακρίβωση της κατάστασης ανοσίας σε φυσιολογικά μολυσμένους 6 και πειραματικά εμβολιασμένα άτομα 7 και για επιδημιολογικές μελέτες. 8,9 Αρχή της Διαδικασίας Η IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM είναι μία ξηρής φάσης, διαδοχική, δι-φασική, ανοσομετρική ανάλυση. Η στερεά φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με μονοκλωνικό αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ποντικού IgM. Η υγρή φάση αποτελείται από τρία αντιδραστήρια: 1) υπόστρωμα πρωτεϊνικού ρυθμιστικού διαλύματος, 2) αντιγόνο HAV σε ρυθμιστικό διάλυμα και 3) αλκαλική φωσφατάση (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε πολυκλωνικό αντι-hav αντίσωμα κουνελιού σε ρυθμιστικό διάλυμα. Στον πρώτο κύκλο, το προαραιωμένο δείγμα ασθενούς (1 προς 40) και το α πρωτεϊνικό ρυθμιστικό διάλυμα επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Μέσα σε αυτό το χρόνο, τα αντισώματα IgM έναντι του HAV στο δείγμα του ασθενούς προσδένονται στο μονοκλωνικό αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ποντικού IgM στο σφαιρίδιο. Το μη προσδεδεμένο δείγμα στη συνέχεια απομακρύνεται με φυγοκεντρική έκπλυση. Στο δεύτερο κύκλο, τα αντιδραστήρια που περιέχουν αντιγόνο HAV και το συνδεδεμένο ένζυμο σε αντί-ανθρώπινο αντίσωμα IgM προστίθενται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης για μία επιπλέον 30- λεπτη επώαση. Μέσα σε αυτό το χρόνο, η ακινητοποιημένη ανθρώπινη αντί-hav IgM δένεται στο αντιγόνο HAV, το οποίο με τη σειρά του δένεται στο συνδεδεμένο ένζυμο σε αντι-hav αντίσωμα για το σχηματισμό του σάντουϊτς συμπλέγματος αντισωμάτων. Το μη προσδεδεμένο σύμπλεγμα απομακρύνεται με φυγοκεντρική έκπλυση. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στον αρχικό σωλήνα αντίδρασης και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το προσδεδεμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 2 30 λεπτά. Συλλογή Δείγματος Ο ασθενής δεν χρειάζεται να είναι νηστικός και δεν είναι απαραίτητη καμμία ειδική προετοιμασία. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Συνίσταται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Απαιτείται η φυγοκέντριση των θολών δειγμάτων ή δειγμάτων που περιέχουν σωματίδια σε χαμηλές ταχύτητες. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα την παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν την φυγοκέντρηση το αίμα έπηξε πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος από διαφορετικές εταιρείες μπορεί να φέρουν διάφορες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 Anti- HAV IgM δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορού ή πλάσματος (ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA). IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06) 13

Φύλαξη: 3 μέρες στους 2 8 C 10 ή για μακροβιότερη αποθήκευση στους 20 C. 11 Αυτόματος παράγοντας προαραίωσης: 40. Προειδοποιήσεις και Προφυλάξεις Για διαγνωστική in vitro χρήση Αντιδραστήρια : Αποθηκεύετε στους 2 8 C. Καταστρέψτε σύμφωνα με την τοπική νομοθεσία. Ακολουθείτε τις κοινές οδηγίες και μεταχειρίζεστε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα ανθρώπινου αίματος προέλευσης υλικά που χρησιμοποιούνται στην παρασκευή αυτού του κιτ εξετάστηκαν για σύφιλη, για αντισώματα έναντι Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 και 2, για ηπατίτιδας B αντιγόνο επιφανείας, και για αντισώματα ηπατίτιδας C και βρέθηκαν αρνητικά. Αζιδιο του Νατρίου έχει προστεθεί σε συγκέντρωση μικρότερη του 0,1 g/dl,σαν συντηρητικό. Κατά την απόθεση, ξεπλύνετε με πολύ νερό προκειμένου να εμποδίσετε την δημιουργία εκρηκτικών αζιδίων στους χάλκινους ή μολύβδινους σωλήνες αποχέτευσης. Επειδή καμμία μέθοδος ελέγχου μπορεί ναπροσφέρει απόλυτη βεβαιότητα ότι τα εργαστηριακά δείγματα δεν περιέχουν HIV, ιό ηπατίτιδας Β ή άλλα μολυσματικούς παράγοντες, τα δείγματα πρέπει να χειρίζονται σύμφωνα με τη BSL2 όπως συστήνεται για οποιαδήποτε δυνητικά μολυσμένο ανθρώπινο ορό ή δείγμα αίματος στο εγχειρίδιο CDC-NIH, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 1993. Ο ρυθμιστής αντί-hav IgM, ο χαμηλός θετικός ορός ελέγχου αντί-hav IgM και ο θετικός ορός ελέγχου αντί-hav IgM μπορεί να περιέχουν HAV. Πάντα να χειρίζεστε όλους τους ορούς ελέγχου ως ικανούς να μεταφέρουν μολυσματικούς παράγοντες. Η συγκέντρωση του αντί-hav σε ένα συγκεκριμένο δείγμα με εξετάσεις από διαφορετικούς κατασκευαστές μπορεί να ποικίλλει εξαιτίας διαφορών στις μεθόδους εξετάσεων και την ειδικότητα των αντιδραστηρίων. Για αυτό, τα αποτελέσματα που αναφέρονται από το εργαστήριο στον ιατρό θα πρέπει να περιλαμβάνουν: «Τα ακόλουθα αποτελέσματα προέκυψαν με την IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM EIA. Αποτελέσματα που προέκυψαν από μεθόδους εξέτασης άλλων κατασκευαστών πιθανά δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν εναλλακτικά μεταξύ τους.» Ο ρυθμιστής και οι οροί ελέγχου που παρέχονται στη συσκευασία πρέπει να διαλυτοποιούνται πλήρως μετά την ανασύσταση. Αποτυχία στην διασφάλιση της ομοιογένειας του διαλύματος μπορεί να οδηγήσει σε φτωχή αναπαραγωγιμότητα των αποτελεσμάτων. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας είναι φωτοευαίσθητο και δεν πρέπει να εκτίθεται σε απευθείας ηλιακό φως. Δεν πρέπει να μολυνθεί. Προσφύγετε στο ένθετο για λεπτομέρειες. Νερό: Χρησιμοποιείτε δισαπεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα κύρια συστατικά Συσκευασία Σφαιριδίων, Δοχείο Αντιδραστηρίου και Ρθθμιστής είναι μία ολοκληρωμένη ενότητα. Οι γραμμικοί κώδικες περιέχουν πληροφορίες σχετικά με την εξέταση, που περιλαμβάνουν τις ημερομηνίες λήξης, τους αριθμούς παρτίδας των συστατικών και τις παραμέτρους ορίου αποκοπής. Anti-HAV IgM Συσκευασία σφαιριδίων (L2VM12) Με γραμμογράφηση. 200 σφαιρίδια καλυμμένα με μονοκλωνικά αντί ανθρώπινα IgM αντισώματα ποντικού. Φυλάσσεται στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην συσκευασία. L2KVM2: 1 συσκευασία. L2KVM6: 3 συσκευασίες. Δοχείο Αντιδραστηρίων Anti-HAV IgM (L2VMA2) Με γραμμογράφηση. 11,5 ml υποστρώματος πρωτεϊνης ρυθμιστικού διαλύματος. 11,5 ml HAV αντιγόνου, σε ρυθμιστικό διάλυμα, 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένη σε πολυκλωνικό αντι-hav αντίσωμα κουνελιού, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερό στους 2 8 C μέχρι την 14 IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06)

ημερομηνία λήξης. L2KVM2: 1 δοχείο. L2KVM6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα, χωρίς να καταστρέψετε το barcode. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Αναδεύστε ήπια το δοχείο αντιδραστηρίου μερικές φορές για να εξασφαλιστεί πλήρης ανάμιξη και απομακρύνετε όποιες φυσαλίδες από την επιφάνεια πριν από κάθε κύκλο μέτρησης για την αποφυγή σφάλματος λήψης αντιδραστηρίου. Ρυθμιστές Anti-HAV IgM (LVMR) Ένα φιαλίδιο που περιέχει λυοφιλιμένο ανθρώπινο ορό με IgM αντιδραστικό έναντι του HAV σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλίδιου με 4,0 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Αναδεύστε με ελαφρά περιστροφή ή αναστροφή μέχρι το λυοφιλιμένο υλικό διαλυθεί πλήρως. (Δεν απαιτείται περαιτέρω αραίωση.) Είναι σταθεροί στους 2 8 C για 14 μέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένοι) στους 20 C. L2KVM2: 1 φιαλίδιο. L2KVM6: 2 φιαλίδια. Οροί Ελέγχου Anti-HAV IgM (LVMC1, LVMC2, LVMC3) Τρία φιαλίδια (Αρνητικός, Χαμηλό Θετικός και Θετικός). LVMC1 (Αρνητικός Ορός Ελέγχου): λυοφιλιμένος ανθρώπινος ορός μη αντιδραστικός έναντι του HAV, με συντηρητικό. LVMC2, LVMC3 (Χαμηλός Θετικός Ορός Ελέγχου, Θετικός Ορός Ελέγχου): λυοφιλιμένος ανθρώπινος ορός με IgM αντιδραστικό έναντι του HAV, με συντηρητικό. Κάνετε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου με 2,0 ml απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναδεύστε με ελαφρά περιστροφή ή αναστροφή μέχρι το λυοφιλιμένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Είναι σταθεροί στους 2 8 C για 14 μέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένοι) στους 20 C. L2KVM2: 2 σετ. L2KVM6: 3 σετ. Οι οροί ελέγχου Anti-HAV IgM απαιτούν την ίδια 1 προς 40 αραίωση επί του αναλυτή προαραίωση όπως τα δείγματα ασθενών. Το λογισμικό του IMMULITE 2000 πραγματοποιεί αυτόματη αραίωση στον αναλυτή στους ορούς ελέγχου και τα αποτελέσματα καταλήγουν στη βάση δεδομένων ποιοτικού ελέγχου. Εισάγετε τους ορούς ελέγχου σαν controls. Ετικέτες με γραμμικό κώδικα για τους διαμοιρασμένους ρυθμιστές και ορούς ελέγχου παράχονται με τη συσκευασία. Πριν τη χρήση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες στα σωληνάρια εξέτασης, έτσι ώστε οι γραμμικοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης γραμμικού κώδικα του IMMULITE 2000. Αραιωτικό δείγματος IgG/IgM (L2IGZ2) Για την αραίωση στον αναλυτή δειγμάτων ασθενών και ορών ελέγχου. 55 ml συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση) μη ανθρώπινου υποστρώματος πρωτεϊνης/ρυθμιστικού διαλύματος, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KVM2: 1 φιαλίδιο. L2KVM6: 1 φιαλίδιο. Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2KVM2: 3 ετικέτες. L2KVM6: 5 ετικέτες. Συστατικά του Kit που παρέχονται ξεχωριστά Αραιωτικό δείγματος IgG/IgM (L2IGZ2) Για την αραίωση στον αναλυτή δειγμάτων ασθενών και ορών ελέγχου. 55 ml συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση) μη ανθρώπινου υποστρώματος πρωτεϊνης/ρυθμιστικού διαλύματος, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2IGZ2: 1 φιαλίδιο. Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετείστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. L2IGZ2: 5 ετικέτες. IMMULITE 2000 Anti-HAV IgM (PIEL2KVM-4 {12}, 2009-10-06) 15