RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B

RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B Αρ. προϊόντος: N0803 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D-64297 Darmstadt, Germany Τηλ.: +49 (0) 61 51 81 02-0 / Φαξ: +49 (0) 61 51 81 02-20

1. Πεδίο εφαρμογής Για in vitro διαγνωστική χρήση. Το προϊόν RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B είναι μια ταχεία ανοσοχρωματογραφική εξέταση για τον ποιοτικό προσδιορισμό των τοξινών A και B του βακτηρίου Clostridium difiicile σε δείγματα κοπράνων. 2. Περίληψη και εξήγηση της εξέτασης Οι διάρροιες είναι σχετικά συχνές παρενέργειες θεραπείας με αντιβιοτικά. Ιδιαίτερα μετά την εμφάνιση του Clindamycin στις αρχές της δεκαετίας του 70, παρουσιάζονται όλα και συχνότερα σοβαρότερες μορφές της νόσου, οι οποίες συνέβαλλαν στο σχηματισμό της ψευδομεμβρανώδους κολίτιδας (PMC). Αυτή η διάρροια που σχετίζεται με τη χρήση αντιβιοτικών (AAD), ουσιαστικά προκαλείται από το βακτήριο Clostridium difficile και για το λόγο αυτό ονομάζεται διάρροια σχετιζόμενη με το βακτήριο Clostridium difficile (CDAD). Αποτελεί μία από τις πιο κοινές νοσοκομειακές λοιμώξεις στις βιομηχανικές χώρες. Το ποσοστό φορέων σε νοσηλευμένους ασθενείς αυξήθηκε στο μεταξύ σε 16-35 %. Εντωμεταξύ, αναγνωρίστηκαν στελέχη με αυξανόμενη μολυσματική ισχύ, εξαιτίας συγκεκριμένων μηχανισμών παθογονικότητας, τα οποία κατέστησαν την επιμόλυνση με Clostridium difficile (CDI) έναν σημαντικό παράγοντα δαπανών στον τομέα της δημόσιας υγείας. Για το φαινότυπο της ασθένειας, κατά κύριο λόγο έχει σημασία η παραγωγή των τοξινών Α και Β μέσω τοξικογενών στελεχών Clostridium difficile. Αυτές, με περ. 300 kda μεγαλομοριακές τοξικές πρωτεΐνες η κάθε μια, διαφέρουν ανοσολογικά και λειτουργικά. Η τοξίνη A είναι εντεροτοξίνη, ενώ η τοξίνη B είναι κυτταροτοξίνη. Και οι δύο τοξίνες επιδρούν μεμονωμένα, αλλά και συνεργικά. Καθώς δεν είναι όλα τα στελέχη του Clostridium difficile τοξικογενή και περίπου το 2-8 % των υγιών ενήλικων ατόμων, καθώς και έως το 80 % των ανηλίκων κάτω των 2 ετών, μπορούν να έχουν το Clostridium difficile στον οργανισμό τους, η κατάδειξη των τοξίνων A και B στο δείγμα κοπράνων σε συνδυασμό με την εμφάνιση της CDAD παίζει σημαντικό ρόλο στη διάγνωση και τον καθορισμό της θεραπείας. Το προϊόν RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B είναι μια ταχεία εξέταση, με την οποία καταδεικνύεται ταυτόχρονα συγκεκριμένα η παρουσία τοξίνης Α και τοξίνης Β σε δείγματα κοπράνων ασθενών, με χρήση μονοκλωνικών και πολυκλωνικών αντισωμάτων. Το αξιόπιστο αποτέλεσμα της εξέτασης προκύπτει έπειτα από 15 λεπτά, ώστε να μπορούν να ληφθούν εγκαίρως τα κατάλληλα θεραπευτικά μέτρα. 3. Αρχή της εξέτασης Η εν λόγω ταχεία εξέταση είναι μια ανοσοχρωματογραφική εξέταση πλευρικής ροής που διενεργείται σε ένα στάδιο, για την οποία χρησιμοποιούνται τόσο βιοτινυλιωμένα όσο και σημασμένα με χρυσό αντισώματα αντιτοξίνης A και B. Μόλις ανιχνευθούν σε θετικό δείγμα οι τοξίνες Α ή/και Β του Clostridium difficile, τότε σχηματίζουν ανοσοσυμπλέγματα με τα σημασμένα αντισώματα αντιτοξίνης A και B, τα οποία έπειτα διαπερνούν τη μεμβράνη. Η στρεπταβιδίνη που υπάρχει στην ταινία εξέτασης T δεσμεύει τα ρεόντα ανοσοσυμπλέγματα RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 2

μέσω της βιοτίνης που είναι συζευγμένη στα αντισώματα αντιτοξίνης A και B και προκαλεί το ροζ/βιολετί χρωματισμό της ταινίας T. Στην επόμενη ταινία ελέγχου C δεσμεύονται τα ρέοντα μη συμπλεγμένα σημασμένα με χρυσό αντισώματα. Σε αρνητικά δείγματα δεν πραγματοποιείται επομένως καμία δέσμευση των σημασμένων με χρυσό ανοσοσυμπλεγμάτων στην ταινία T, αλλά μόνο στην ταινία C. Η κόκκινη ταινία C υποδεικνύει πάντα αν η διαδικασία της εξέτασης ήταν έγκυρη. 4. Περιεχόμενο συσκευασίας Τα αντιδραστήρια μίας συσκευασίας επαρκούν για 25 προσδιορισμούς Cassette 25 προσδ. 25 ξεχωριστά συσκευασμένες κασέτες εξέτασης Reagent A 13,5 ml Ειδικά αντισώματα αντιτοξινών A και B, περιέχει 0,05 % αζωτίδιο, έτοιμο προς χρήση, σε μπλε χρώμα Reagent B 13,5 ml Ειδικά αντισώματα αντιτοξινών A και B, περιέχει 0,05 % αζωτίδιο, έτοιμο προς χρήση, σε κίτρινο χρώμα Pipet 25 τμχ. Συσκευασία με 25 πιπέττες μίας χρήσης Reagent vial 25 τμχ. Συσκευασία με 25 φιαλίδια αντιδραστηρίου Pipet Tip 25 τμχ. Συσκευασία με 25 ρύγχη πιπέττας Microlit Pipet 1 τμχ. Πιπέττα χωρητικότητας 150 µl 5. Αντιδραστήρια και αποθήκευση αυτών Η συσκευασία μπορεί να αποθηκευθεί στους 2 25 C και μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως και την ημερομηνία λήξης. Με την παρέλευση της ημερομηνίας λήξης δεν μπορεί πλέον να ισχύει καμία εγγύηση ποιότητας. Επίσης, δεν ισχύει καμία εγγύηση για τη δυνατότητα χρήσης των κασετών σε περίπτωση που παρουσιάζεται φθορά στη συσκευασία τους. 6. Αντιδραστήρια που θα χρειαστούν συμπληρωματικά - απαιτούμενα εξαρτήματα - Αναδευτήρας τύπου vortex (προαιρετικός) - Δοχείο αποβλήτων με διάλυμα υποχλωριούχου νατρίου 0,5% RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 3

7. Μέτρα ασφαλείας Μόνο για in vitro διαγνωστική χρήση. Αυτή η εξέταση πρέπει να εκτελείται μόνο από εκπαιδευμένο εργαστηριακό προσωπικό. Πρέπει να δοθεί προσοχή στις οδηγίες εργασίας σε ιατρικά εργαστήρια. Πρέπει να τηρούνται αυστηρά οι οδηγίες χρήσης σχετικά με τη διεξαγωγή της εξέτασης. Τα αντιδραστήρια περιέχουν αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό μέσο. Πρέπει να αποφεύγεται η επαφή με το δέρμα ή τους βλεννογόνους. Μη φυσάτε τα δείγματα ή τα αντιδραστήρια με το στόμα. Αποφεύγετε την επαφή με τραύματα στο δέρμα ή τους βλεννογόνους. Κατά την εργασία με δείγματα να φοράτε γάντια μίας χρήσης και να πλένετε τα χέρια σας μετά το τέλος της εξέτασης. Αποφεύγετε το κάπνισμα και την κατανάλωση φαγητού ή ποτού στους χώρους όπου λαμβάνει χώρα εργασία με τα δείγματα. Όλα τα αντιδραστήρια και τα υλικά, τα οποία έρχονται σε επαφή με πιθανώς μολυσματικά δείγματα, πρέπει να τα επεξεργάζεστε με τα κατάλληλα απολυμαντικά μέσα (π.χ. με υποχλωριούχο νάτριο) ή να αποστειρώνονται για μία ώρα τουλάχιστον στους 121 C. 8. Συγκέντρωση και αποθήκευση των δειγμάτων Τα δείγματα των κοπράνων πρέπει να συλλέγονται σε καθαρά φιαλίδια χωρίς να γίνεται προσθήκη ουσιών και να αποθηκεύονται στους 2 8 C πριν από τη διεξαγωγή της εξέτασης. Όσον αφορά την αποθήκευση για περισσότερες από 3 ημέρες, το δείγμα θα πρέπει να φυλάσσεται στους -20 C. Στην περίπτωση αυτή, θα πρέπει να διεξάγεται πλήρης τήξη του δείγματος πριν από τη διεξαγωγή της εξέτασης και να βρίσκεται σε θερμοκρασία δωματίου. Αποφεύγετε την επανειλημμένη ψύξη και απόψυξη του δείγματος. Εάν πρέπει να χρησιμοποιηθούν επιχρίσματα ορθού, πρέπει να προσέξετε να υπάρχει αρκετό υλικό κοπράνων (περ. 50 mg) για την εκτέλεση της εξέτασης. 9. Διεξαγωγή της εξέτασης 9.1. Γενικά Πριν από τη χρήση, τα δείγματα, τα αντιδραστήρια και οι κασέτες εξέτασης πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (20 25 C). Οι κασέτες εξέτασης πρέπει να αφαιρούνται από τη συσκευασία τους λίγο πριν από τη χρήση. Οι κασέτες που χρησιμοποιήθηκαν μία φορά δεν πρέπει να ξαναχρησιμοποιηθούν. Αποφύγετε την άμεση έκθεση σε ηλιακή ακτινοβολία κατά τη διεξαγωγή της εξέτασης. Η περίσσεια αντιδραστηρίου δεν επιτρέπεται να ξαναμπεί στο φιαλίδιο, επειδή μπορεί να υπάρξει μόλυνση. RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 4

9.2. Προετοιμασία της εξέτασης δείγματος Σε ένα επισημασμένο φιαλίδιο αντιδραστηρίου Reagent vial προετοιμάζονται 0,5 ml (περ.12-14 σταγόνες) αντιδραστηρίου A Reagent A και αντιδραστηρίου Β Reagent B. Σε αυτή τη διαδικασία είναι πολύ σημαντικό να τηρείται η βαθμονόμηση 0,5 ml και 1,0 ml στο φιαλίδιο αντιδραστηρίου ανεξάρτητα από τον εκάστοτε αριθμό σταγόνων των αντιδραστηρίων A και B. Πρέπει να υπάρχει αναλογία 1+1 μεταξύ των αντιδραστηρίων Α και Β. 9.2.1 Χρήση δειγμάτων κοπράνων Σε περίπτωση υγρού δείγματος κοπράνων, αυτά διαλύονται με την πιπέττα μίας χρήσης Pipet 50 μl (έως τη δεύτερη πύκνωση) στο παρεχόμενο μίγμα αντιδραστηρίων. Σε περίπτωση στερεού δείγματος κοπράνων διαλύονται αναλογικά περ 50 mg. Στη συνέχεια, το φιαλίδιο αντιδραστηρίου κλείνει καλά και το δείγμα ομογενοποιείται μέσω προσεκτικής ανάδευσης (προαιρετικά μέσω περιδίνησης). Έπειτα, το ομογενοποιημένο διάλυμα πρέπει να κατακάτσει 5 λεπτά, για να σχηματιστεί εναιώρημα καθαρό από σωματίδια. Για την καθίζηση, το φιαλίδιο αντιδραστηρίου μπορεί να τοποθετηθεί σε ένα από τα τρία μεσαία ανοίγματα της εισόδου αντιδραστηρίων. 9.2.2. Χρήση υγρών και στερεών καλλιεργειών του Clostridium difficile 50 µl μέσου καλλιέργειας (π.χ. μερκαπτοοξικό μέσο) προστίθεται με πιπέττα και αναμιγνύεται σε 1,0 ml από το μίγμα αντιδραστηρίων, δηλ. αντιδραστήριο A (0,5 ml) και αντιδραστήριο B (0,5 ml), που παράχθηκε προηγουμένως στο φιαλίδιο αντιδραστηρίου. Από το μίγμα χρησιμοποιούνται 150 µl για την εξέταση του δείγματος (Σημ. 9.3.). Κατά τη χρήση στερεού μέσου καλλιέργειας λαμβάνονται όσο το δυνατόν περισσότερες αποικίες από την πλάκα του μέσου καλλιέργειας και, στη συνέχεια, διαλύονται πλήρως σε 1 ml αποσταγμένου νερού ή διαλύματος χλωριούχου νατρίου (0,9% NaCl). 50 µl αυτού του εναιωρήματος προστίθεται με πιπέττα έπειτα και αναμιγνύεται σε 1,0 ml από το μίγμα αντιδραστηρίων, δηλ. αντιδραστήριο A (0,5 ml) και αντιδραστήριο B (0,5 ml), που παράχθηκε προηγουμένως στο φιαλίδιο αντιδραστηρίου. Από το μίγμα χρησιμοποιούνται 150 µl για τη εξέταση του δείγματος (Σημ. 9.3.). 9.3. Εξέταση του δείγματος Η κασέτα εξέτασης Cassette αφαιρείται από την ξεχωριστή συσκευασία και τοποθετείται σε λεία επιφάνεια. Έπειτα, τοποθετείται ένα μη χρησιμοποιημένο ρύγχος πιπέττας Pipet Tip στη μικροπιπέττα Microlit Pipet, λαμβάνονται 150 µl εναιωρήματος από το εκάστοτε φιαλίδιο αντιδραστηρίου και προστίθενται με πιπέττα στο πεδίο εφαρμογής της κασέτας εξέτασης. Βεβαιωθείτε ότι η ροή του δείγματος διαμέσου της μεμβράνης δεν παρουσιάζει προβλήματα. Κατά τη σωστή διεξαγωγή εμφανίζεται η λωρίδα ελέγχου στην ταινία ελέγχου C μετά από περίπου 3 λεπτά. Σε περίπτωση που η ταινία ελέγχου δεν είναι ορατή μετά από 3 λεπτά, τότε πρέπει να διενεργηθεί υψηλή ιζηματαπόθεση ενός νέου δείγματος (προαιρετικά μέσω μιας 2- RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 5

λεπτης φυγοκέντρησης στα 2000 g) και να προστεθεί με πιπέττα στο πεδίο εφαρμογής της νέας κασέτας εξέτασης. Το αποτέλεσμα της εξέτασης πρέπει πάντα να ελέγχεται μετά από 15 λεπτά. Ο χρωματισμός των ταινιών και η έντασή του μπορεί να αλλάξει κατά το συνολικό χρόνο ανάπτυξης και αφού στεγνώσει η λωρίδα από ροζ-βιολετί σε μπλε έως γκρι-βιολετί. 10. Έλεγχος ποιότητας Ενδείξεις αλλοίωσης αντιδραστηρίων Η εξέταση μπορεί μόνο να διενεργηθεί αν δεν υπάρχει κανένα ίχνος φθοράς των κασετών εξέτασης πριν από την τοποθέτηση στο διάλυμα του δείγματος και αν δεν υπάρχουν χρωματικές ή άλλες αλλοιώσεις που να είναι ορατές. Επιπλέον, μετά τον 15-λεπτο χρόνο επώασης πρέπει να είναι ορατή τουλάχιστον η κόκκινη-βιολετί λωρίδα ελέγχου. Σε περίπτωση που δεν είναι ορατή, θα πρέπει να ελεγχθούν τα ακόλουθα σε επαναληπτική εξέταση: - Ανθεκτικότητα της κασέτας εξέτασης και των χρησιμοποιούμενων αντιδραστηρίων - Ακρίβεια στη διεξαγωγή της εξέτασης - Μόλυνση των αντιδραστηρίων Σε περίπτωση που, ακόμη και μετά την επανάληψη της εξέτασης με νέα κασέτα, η ταινία ελέγχου δεν είναι ορατή, απευθυνθείτε στον κατασκευαστή ή στον τοπικό διανομέα της R- Biopharm. 11. Αξιολόγηση και ερμηνεία Πρέπει να εμφανιστούν έως δύο λωρίδες, με την ακόλουθη σειρά κοιτώντας στο πεδίο εφαρμογής δείγματος: Μια κόκκινη-βιολετί λωρίδα αντίδρασης στην ταινία εξέτασης T και μια κόκκινη-βιολετί λωρίδα ελέγχου στην ταινία ελέγχου C. Σε περίπτωση που λείπει η λωρίδα ελέγχου, η εξέταση δεν μπορεί να αναλυθεί και δεν ισχύει! Οι ακόλουθες ερμηνείες είναι πιθανές: - Θετικό στην τοξίνη Clostridium difficile: και οι δύο λωρίδες είναι ορατές. - Αρνητικό στην τοξίνη Clostridium difficile: μόνο η λωρίδα ελέγχου είναι ορατή. - Άκυρο: καμία λωρίδα δεν είναι ορατή ή άλλος συνδυασμός όπως περιγράφεται παραπάνω. Επίσης, οι χρωματισμοί των λωρίδων, που εμφανίζονται μετά από 15 λεπτά, δεν έχουν διαγνωστική αξία και σημασία. 12. Όρια της μεθόδου Το προϊόν RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B εντοπίζει την τοξίνη A ή/και B του Clostridium difficile σε δείγματα κοπράνων ή μετά τον εμπλουτισμό τους σε καλλιέργειες C.difficile. Δεν υφίσταται σχέση μεταξύ της έντασης του χρωματισμού των λωρίδων και της εμφάνισης ή των βαριών κλινικών συμπτωμάτων. Τα αποτελέσματα πρέπει πάντα να αξιολογούνται σε συνδυασμό με την κλινική εικόνα. RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 6

Ένα θετικό αποτέλεσμα δεν αποκλείει την ύπαρξη κι άλλων μολυσματικών παραγόντων ή αιτιών. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν αποκλείει ενδεχόμενη λοίμωξη από Clostridium difficile. Αυτό μπορεί να οφείλεται στον ασυνεχή διαχωρισμό της τοξίνης μικροβίου ή στη μικρή ποσότητα τοξίνης στο δείγμα. Εάν υπάρχει αιτιολογημένη υποψία λοίμωξης βάσει του ιστορικού του ασθενούς, θα πρέπει να εξεταστεί ένα επιπρόσθετο δείγμα κοπράνων. Η υπερβολική ποσότητα δείγματος κοπράνων μπορεί να προκαλέσει καστανόχρωμο χρωματισμό της λωρίδας εξέτασης που επικαλύπτει τον κόκκινο-βιολετί χρωματισμό της συγκεκριμένης λωρίδας εξέτασης. Σε ανάλογες περιπτώσεις είναι απαραίτητη η επανάληψη της εξέτασης με μικρότερη ποσότητα δείγματος κοπράνων ή ένα διαυγέστερο εναιώρημα κοπράνων μέσω φυγοκέντρησης, για να διασαφηνιστεί αν υπάρχει η τοξίνη Clostridium difficile στο δείγμα και επικαλύπτεται εξαιτίας της αυξημένης ποσότητας δείγματος κοπράνων. 13. Χαρακτηριστικά απόδοσης 13.1 Κλινική ευαισθησία και ακρίβεια Σε μια μελέτη επαλήθευσης με 181 κατεψυγμένα και προηγουμένως χαρακτηρισμένα PCR δείγματα κοπράνων (116 αρνητικά και 65 θετικά) η ταχεία εξέταση RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B συγκρίθηκε με 5 εμπορικά διαθέσιμα κιτ ELISA. Για αυτόν το σκοπό, τα δείγματα κοπράνων ετήχθησαν, ομογενοποιήθηκαν και χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τις προδιαγραφές του κατασκευαστή στις 5 διαφορετικές εξετάσεις. Βάσει των αποτελεσμάτων υπολογίστηκε η ευαισθησία και η ακρίβεια για όλα τα κιτ εξέτασης που χρησιμοποιήθηκαν και συγκεντρώθηκαν στον Πίνακα 1. Πιν. 1. Ευαισθησία και ακρίβεια του RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B σε σύγκριση με 5 εμπορικά διαθέσιμα κιτ εξέτασης Elisa για τον προσδιορισμό των τοξινών A και B του Clostridium difficile σε δείγματα κοπράνων. [ % ] RIDA QUICK ELISA 1 ELISA 2 ELISA 3 ELISA 4 ELISA 5 Ευαισθησία 100 97 100 93 87 83 Ακρίβεια 91 99 89 96 91 97 13.2 Αναλυτική ευαισθησία Για την εξακρίβωση της αναλυτικής ευαισθησίας της ταχείας εξέτασης RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B οι καθαρές τοξίνες A και B αναμίχθηκαν σε καθορισμένη συγκέντρωση κάθε RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 7

φορά σε αρνητικό δείγμα κοπράνων και αραιώθηκαν. Οι μεμονωμένοι βαθμοί αραίωσης ελέγχθηκαν τόσο στην εξέταση RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B όσο και σε δύο ακόμα εμπορικά διαθέσιμες ανοσοχρωματογραφικές ταχείες εξετάσεις σε σχέση με την αντιδραστικότητά τους. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται στον Πίνακα 2. Πίν. 2. Αναλυτική ευαισθησία του προϊόντος RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B σε σύγκριση με 2 ακόμα εμπορικά διαθέσιμες ταχείες εξετάσεις για τον προσδιορισμό των τοξινών A και B του Clostridium difficile. Συγκέντρωση τοξίνης Τοξίνη A και B [ ng/ml ] RIDA QUICK C.difficileToxin A/B Rapid Immunoassay 1 Rapid Immunoassay 2 A B A B A B 0 - - - - - - 1 - - - - - - 2 - (+) - - (+) - 4 (+) + - + + - 8 + ++ - + + (+) 16 ++ +++ (+) + ++ + Η αναλυτική ευαισθησία των εξετάσεων RIDA QUICK Clostridium difficile καθορίστηκε με 4,2 ng/ml για την τοξίνη A και 2,1 ng/ml για την τοξίνη B με τη χρήση κεκαθαρμένων τοξινών. 13.3 Πιστότητα: Για τον καθορισμό της πιστότητας των εξετάσεων RIDA QUICK Clostridium difficile εξετάστηκαν η αναπαραγωγιμότητα εντός της εξέτασης, η αναπαραγωγιμότητα εντός της ημέρας (10 ημέρες), η αναπαραγωγιμότητα εντός τελεστή (3 τελεστές) και η αναπαραγωγιμότητα εντός παρτίδας (3 παρτίδες). Για κάθε εξέταση μετρήθηκαν 5 αναφορές σε αντίγραφα: ένα αρνητικό, ένα μεσαία θετικό με τοξίνη A και ένα με τοξίνη B, ένα ελαφρώς θετικό με τοξίνη A και ένα με τοξίνη B. Οι εξετάσεις RIDA QUICK Clostridium difficile επέδειξαν το αναμενόμενο αποτέλεσμα στο 100% των μετρήσεων. 13.4 Διασταυρούμενη αντιδραστικότητα Διάφορα παθογόνα μικρόβια της εντερικής οδού υποβλήθηκαν σε δοκιμή με τις εξετάσεις RIDA QUICK Clostridium difficile και δεν παρουσίασαν διασταυρούμενη αντιδραστικότητα. Οι εξετάσεις διενεργήθηκαν με εναιωρήματα βακτηρίων (10 7 έως 10 9 cfu/ml), με καλλιέργειες παράσιτων (10 7 έως 10 9 οργανισμοί/ml) και με εναιωρήματα καλλιέργειας κυττάρων μολυσμένων με τον ιό. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 8

Μικρόβιο δοκιμής Προέλευση Περιγραφή / Προέλευση Αποτέλεσμα Αδενοϊός Εναιώρημα καλλιέργειας κυττάρων Micromun GmbH αρνητικό Aeromonas hydrophila Καλλιέργεια DSM 30014 αρνητικό Αστροϊός Εναιώρημα καλλιέργειας κυττάρων Micromun GmbH αρνητικό Bacillus cereus Καλλιέργεια DSM 22650 αρνητικό Candida albicans Καλλιέργεια DSM 11948 αρνητικό Citrobacter freundii Καλλιέργεια DSM 30039 αρνητικό Cryptosporidium muris Καλλιέργεια Waterborne Inc. αρνητικό Cryptosporidium parvum Καλλιέργεια Waterborne Inc. αρνητικό E. coli EPEC Καλλιέργεια DSM 8695 αρνητικό E. coli ETEC Καλλιέργεια DSM 10973 αρνητικό E. coli STEC Καλλιέργεια DSM 8579 αρνητικό Enterobacter cloacae Καλλιέργεια DSM 30054 αρνητικό Enterococcus faecalis Καλλιέργεια DSM 2570 αρνητικό Giardia lamblia Καλλιέργεια Waterborne Inc. αρνητικό Klebsiella oxytoca Καλλιέργεια DSM 6673 αρνητικό Proteus vulgaris Καλλιέργεια DSM 13625 αρνητικό Pseudomonas aeruginosa Καλλιέργεια DSM 288 αρνητικό Ροταϊός Εναιώρημα καλλιέργειας κυττάρων Micromun GmbH αρνητικό Serratia liquefaciens Καλλιέργεια DSM 30068 αρνητικό Shigella flexneri Καλλιέργεια DSM 4782 αρνητικό Staphylococccus aureus Καλλιέργεια DSM 20372 αρνητικό Staphylococcus epidermidis Καλλιέργεια DSM 1798 αρνητικό Vibrio parahaemolyticus Καλλιέργεια DSM 2172 αρνητικό Yersinia enterocolitica Καλλιέργεια DSM 11502 αρνητικό 14. Παρεμβατικές ουσίες Οι παρακάτω αναφερόμενες ουσίες δεν παρουσίασαν καμία επίδραση στα αποτελέσματα της εξέτασης, όταν αναμίχθηκαν με δείγματα κοπράνων θετικά και αρνητικά στο βακτήριο Clostridium difficile Toxin A/B στις αναφερόμενες συγκεντρώσεις: Θειϊκό βάριο (5 % w/w), Loperamid (αντιδιαρροϊκό, 5 % w/w), Pepto-Bismol (αντιδιαρροϊκό, 5 % v/w), Muzin (5 % w/w), κυκλαμικό οξύ (τεχνητή γλυκαντική ουσία 5 % v/w), ανθρώπινο αίμα (5 % v/w), στεατικό οξύ / παλμιτελαϊκό οξύ (μίγμα 1:1, 40 % w/w), μετρονιδαζόλη (0,5) (αντιβιοτικό 5 % v/w), Diclofenac (0,00263 % v/w). RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 9

Βιβλιογραφία 1. Lyerly, D.M. et al.: Clostridium difficile: Its disease and toxins. Clin. Microbiol. Rev. (1988); 1: 1-18. 2. Knoop, F.C. et al.: Clostridium difficile: Clinical disease and diagnosis. Clin. Microb. Rev. (1993); 6: 251-265. 3. Kelly, C.P. et al.: Clostridium difficile Colitis. New Engl. J. Med. (1994); 330: 257-262. 4. Sullivan, N.M. et al.: Purification and characterization of toxins A and B of Clostridium difficile. Infect. Immun. (1982); 35: 1032-1040. 5. Thomas, D.R. et al.: Postantibiotic colonization with Clostridium difficile in nursing home patients. J. Am Geriatr. Soc. 38, 415-420 (1990). 6. Bartlett, J.G.: Clostridium difficile: Clinical considerations. Rev. Infect. Dis. (1990); 12: 243-251. 7. Loeschke,K., Ruckdeschel, G.: Antibiotikaassoziierte Kolitis - aktualisiert. Internist (1989); 30: 345-353. 8. Enzensberger, R. et al.: Clostridium difficile-induzierte Enterokolitis. DMW(1986); 111: 56-59. 9. Cefai, C. et al.: Gastrointestinal carriage rate of Clostridium difficile in elderly, chronic care hospital patients. J. Hosp. Infect. (1988); 11: 335-339. 10. Samore, M.H. et al.: Wide diversity of Clostridium difficile types at a tertiary referral hospital. J. Infect. Dis. (1994);170: 615-621. 11. Lipsett, P.A. et al.:pseudomembranous colitis: A surgical disease? Surgery (1994);116: 491-496. 12. Asha, N.J. et al.: Comparative analysis of prevalence, risk factors and molecular epidemiology of Antibiotic associated diarrhea due to Clostridium difficile, Clostridium perfringens, and Staphylococcus aureus. J.Clin. Microbiol. (2006); 44: 2785-2791. 13. Voth, D.E., Ballard, J.: Clostridium difficile toxins: Mechanism of action and role in disease. J.Clin. Microbiol. (2005); 18: 247-263. 14. Borgmann, S. et al.: Increased number of Clostridium difficile infections and prevalence of Clostridium difficile PCR ribotype 001 in southern Germany. Eurosurveillance (2008); Vol 13: No.49. 15. Mc.Donald, L.C. et al.: An epidemic, toxin gene-variant strain of Clostridium difficile. N.Engl.J.Med. (2005); 353: 23. 16. Loo,V.G. et al.: A predominantly clonal multi-institutional outbreak of Clostridium difficileassociated diarrhea with high morbidity and mortality. N.Engl.J.Med. (2005); 353.23 17. Bartlett,J.G., Gerding,D.N.: Clinical recognition and diagnosis of Clostridium difficile infection. CID (2008); 46(Suppl. 1): 12-18. RIDA QUICK Clostridium difficile Toxin A/B 10-04-20 10