The Quarterly journal of School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences

Transcript

1 Research on Medicine The Quarterly journal of School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences Original Article Vol.40; No.3; 2016 Downloaded from pejouhesh.sbmu.ac.ir at 1: on Wednesday January 2nd 2019 The evaluation of expression of genes, which are involved in gamma globin synthesis before and after differentiation of hematopoietic stem cells into erythroid lineage Zahra Shamsi, Amir Atashi*, Saeid Abroun, Kaveh Tari, Mahshid AkhavanRahnama, Azadeh Anbarlou, Masoud Soleimani, Saeid Kaviani Abstract Department of Hematology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran (Received: 2016/04/14 Accept:: 2016/11/14) Backgroundm: Induction of fetal hemoglobin (Hb-F) can improve the patients symptoms of haemoglobinopathies. Several factors can induce gamma globin gene expression and increased Hb-F levels in patients. In this study, the expression of genes is involved in regulation of gamma globin synthesis such as PIPKII-alpha, BCL11a, and mir- 30a during CD34+ hematopoietic stem cell differentiation into erythroid lineage was studied. Material and Methods: In this study, CD34+ cells were isolated from umbilical cord blood. Then, CD34+ cells were cultured in differentiation medium. Erythroid colonies were harvested on days 8, 11, 14 and gene expression of gamma globin, PIPKII-alpha, BCL11a, and mir-30a were analyzed by quantitative RT- PCR. Results: : The results showed that gene expression of gamma-globin gradually at the 8th day after differentiation started and at 14th day reached to the highest level of its expression. In parallel with increasing the expression of gamma-globin (22-folds), the expression of PIPKII-alpha increased (2.5-folds), while the expression of BCL11a decreased (1.2-folds). Moreover, the expression of mir- 30a increased during differentiation into erythroid lineage (2.3-folds) (P<0.05). Conclusion: The results indicated that increased expression of PIPKII-alpha and decreased expression of BCL11a during CD34+ cells differentiation to erythroid lineage. According to expression pattern of mir-30a and its target genes, PIPKII-alpha and BCL11a, we cannot suppose the inhibitory effect of mir-30a on PIPKII-alpha expression, but due to inhibitory effect of mir-30a on BCL11a gene, we can introduce this microrna as a regulatory molecule in the induction of Hb-F pathway. However, the further studies are needed to investigate this interaction. Keywords: Hemoglobinopathy, Gamma globin, PIPKII-alpha, BCL11a, mir-30a * Corresponding author: Amir Atashi atashia@modares.ac.ir Research in Medicine 2016; Vol.40; No.3;

2 مقاهل ژپو هش ی دور 40 شماره صف حات 125 ات 130 Downloaded from pejouhesh.sbmu.ac.ir at 1: on Wednesday January 2nd 2019 بررسی بیان ژنهای موثر در سنتز گاماگلوبین قبل و بعد از تمایز سلولهای بنیادی خونساز به رده سلولهای اریتروئیدی زهرا شمسی امیر آتشی * سعید آبرون کاوه طاری مهشید اخوان رهنما آزاده انبارلو مسعود سلیمانی سعید کاویانی چكيده: گروه هماتولوژی دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس تهران ایران تاریخ دریافت مقاله: 95/1/26 تاریخ پذیرش مقاله: 1395/8/24 سابقه و هدف: القا هموگلوبین جنینی در بیماران مبتال به هموگلوبینوپاتی عالئم بیماری را بهبود میبخشد. عوامل متعددی میتوانند بیان ژن گاماگلوبین را القا کرده و سبب افزایش میزان هموگلوبین جنینی در بیماران شوند. از آنجا که امروزه یکی از بهترین رویکردهای درمانی برای بیماران هموگلوبینوپاتی افزایش هموگلوبین جنینی است در این مطالعه بیان ژنهای دخیل در تنظیم سنتز گاما گلوبین نظیرPIPKII-alpha BCL11a و mir-30a در تمایز سلولهای بنیادی خونساز CD34+ به رده اریتروئیدی بررسی شد. مواد و روشها: این مطالعه از نوع تجربی بود. در این مطالعه از سلول های CD34+ جدا شده از خون بندناف نوزادان سالم استفاده شد. سلولهای CD34+ در محیط کشت تمایزی کشت داده شد. کلونیهای اریتروئیدی در روزهای 8 11 و 14 جداسازی شدند و پس از تایید بیان ژنهای گاماگلوبین BCL11a PIPKII-alpha و mir-30a با استفاده از تکنیک کمی Real-Time PCR ارزیابی شده و با استفاده از فرمول آماری t-test آنالیز قرار شدند. یافتهها: نتایج به دست آمده در این مطالعه نشان داد که در روزهای 8 11 و 14 بعد از تمایز بیان کمی ژن گاماگلوبین به تدریج در روز هشتم شروع شده و در روز 14 تمایز به اوج خود میرسد. به موازات افزایش 22 برابری بیان گاماگلوبین ژن PIPKII-alpha نیز روند افزایش 2/5 برابری از خود نشان داد در حالی که بیان ژن BCL11a در طی تمایز روند کاهشی تا حد 1/2 برابر داشت. عالوه بر این بیان mir-30a در طی تمایز به سمت رده اریتروئیدی با افزایش 2/3 برابری همراه بود (0.05> P). نتیجهگیری: نتایج به دست آمده حاکی از افزایش بیان ژن PIPKII-alpha و کاهش بیان BCL11a در روند تمایز اریتروئیدی سلولهای CD34+ است. با توجه به الگوی بیان mir-30a و ژنهای هدف آن یعنی PIPKII-alpha و BCL11a نمیتوان اثر مهاری این microrna را بر روی PIPKII-alpha مطرح کرد ولی به دلیل اثر مهاری آن روی ژن BCL11a میتوان این microrna به عنوان یکی از مولکولهای تنظیمی مسیر القای هموگلوبین F معرفی کرد. اگرچه مطالعههای بیشتری برای بررسی این ارتباط مورد نیاز است. واژگان کلیدی: هموگلوبینوپاتی گاماگلوبین mir-30a BCL11a PIPKII-alpha مقدمه: تاالسمی مهمترين بيماري در اثر اختالل در زنجيره بتای هموگلوبين A است. وجود زنجيرههاي باند نشده آلفا دلیل اصلي پاتوفيزيولوژيك این بیماری محسوب میشود. بر حسب شدت عالئم باليني اشکال هموزيگوت آن به نام تاالسمي ماژور و هتروزيگوت آن به نام تاالسمي مينور نامیده میشوند. تاالسمي ماژور شكلي از آنمي شديد است كه در دورههاي ابتدايي زندگي بعد از كاهش سنتز زنجيره گاما خود را بروز داده و همراه با برخي عالئم نظير اسپلنومگالي و تغييرهای استخواني است. اين بيماري شايعترين بيماري ژنتيكي در جهان و نمونه بارزی از بيماريهاي ژنتيكي تك ژني است) 1 (. كشور ايران يكي از مناطق جغرافيايي با ميزان شيوع باالي بيماري تاالسمي است. تخمین زده شده است که حدود 2 میلیون ناقل در کشور وجود دارد. بر اساس گزارشهاي سازمان انتقال خون 20 هزار نفر در ايران مبتال به تاالسمی ماژور هستند) 2 (. نخستين گزارش اين بيماري به سال 1979 برميگردد و تا كنون 371 نوع موتاسيون برای اين بيماري گزارش شدهاست. با وجود تمامي درمانهاي مرسوم كوششها در نهایت به فوت بيمار مبتال به تاالسمي ماژور ميانجامد) 3 (. بیماری داسی شکل یکی از اختاللهای ژنتیکی و ارثی است که ناشی از نویسنده مسئول: امیر آتشی پست الکترونیک: atashia@modares.ac.ir Research in Medicine 2016; Vol.40; No.3;

3 127 / گلوبین گاما سنتز در موثر ژنهای بیان بررسی Downloaded from pejouhesh.sbmu.ac.ir at 1: on Wednesday January 2nd 2019 جای به بتا زنجیره 6 شماره موقعیت در گلوتامیک اسید آمینه اسید جایگزینی به داکسیژنه حالت در هموگلوبین جایگزینی این اثر در است. والین آمینه اسید تغییر داسی حالت به قرمز گلبول و میآید در قرمز گلبول در کریستاله صورت به ابتال احتمال افزایش مزمن همولیتیک خونی کم با بیماری این مییابد. شکل به میتوان آن از ناشی عوارض مهمترین از است. همراه عروقی انسداد و عفونت عوارض و تنفسی حاد سندرم و ریوی فشارخون افزایش صورت به ریوی درگیری از استفاده و خون تزریق استخوان مغز پیوند کرد. اشاره مغزی سکته و مغزی این درمانی راههای جمله از 5 -آزاسیتیدین و اوره هیدروکسی نظیر داروهایی است) 4 6 (. بیماری F هموگلوبین افزایش به میتوان هموگلوبینوپاتیها درمان راههای مهمترین از داروهایی باشند. داشته نقش آن افزایش در میتوانند مختلفی عوامل که کرد اشاره هموگلوبین کننده القا عنوان به بوتيرات و اوره هيدروكسي آزاسايتيدين 5 نظیر F هموگلوبین افزایش در داروها نامطلوب آثار به توجه با است. شده استفاده F شامل که شده مشخص F هموگلوبین افزایش برای جدیدی درمانی راهکار راهکار نوع این در واقع در است. F هموگلوبین القای برای مولکولی اهداف کالس تعویض و F هموگلوبین بیان تنظیم مسیر در که مولکولهایی درمانی BCL11a آنها مهمترین که میگیرند هدف دارند نقش بتا به گاما زنجیره از دیگر یکی هستند) 7 9 (. SSP و MYB Ikaros DRED 6-EKLF.1 SOX از است. ها (mir) microrna بیان در تغییر F هموگلوبین افزایش روشهای mir-210 mir-221/222 mir-15a/16 mir -26b به میتوان آنها مهمترین هموگلوبین بیان افزایش در دخیل عوامل دیگر از کرد) (. اشاره mir-96 و زیر مهمترین که کرد اشاره کینازها فسفات اینوزیتول فسفاتیدیل به میتوان F تنظیم نظیر هایی درفعالیت PIPKII- alpha است) 14,15 (. PIPKIIa آن گروه همچنین دارد. نقش هسته از mrna خروج و pre-mrna پردازش ژن بیان کاهش و F هموگلوبین گلوبین گاما افزایش به alpha PIPKII- ژن شدن خاموش خانواده میشود. منجر داسی خونی کم و تاالسمی به مبتال بیماران عوارض دارای هستند PIPKII- alpha و BCL11a مهارکنندههای از که انسانی mir-30 نشان بیوانفورماتیک آنالیزهای همچنین است. 30a 30b 30c 30d 30e عضو 5 در دلیل این به و میدهد قرار هدف را مطالعه مورد ژن دو هر mir-30a که داد ژنهای بیان بررسی تجربی مطالعه این از هدف شد. انتخاب mir این مطالعه این در خونساز بنیادی سلولهای اریتروپوئز طی گاماگلوبین ژن بیان تنظیم در دخیل است. آزمایشگاهی محیط روشها: و مواد تربیت دانشگاه در 1394 سال طی و بود تجربی مطالعههای نوع از حاضر مطالعه شد. انجام شناسی خون گروه و پزشکی علوم دانشکده مدرس CD34+ ساز خون بنیادی سلولهای جداسازی جمعآوری تهران خون انتقال مرکز از ناف بند خون نمونههای به هستهای تک سلولهای جداسازی برای بالفاصله و شد تک سلولهاي جداسازي برای یافت. انتقال آزمایشگاه اتیل هیدروکسی از استفاده با ابتدا ناف بند خون از هستهاي فایکول روي رویی مایع سپس شد. رقیق به 1 5 نسبت به استارچ داده انتقال 1:2 نسبت به غلظت 1/077 با (GE Healthcare) CD34 ضد آنتیبادي با هستهای تک سلولهاي سپس شد. دقیقه 30 مدت به و (Miltenyi Biotec, USA) شده نشاندار سلولهای نهایت در شدند. انکوبه سانتیگراد درجه 4 دماي در MACS (Miltenyi ستون از استفاده با CD34+ خونساز بنیادی شدند) 12 (. جداسازی Biotec, USA) فلوسایتومتری: روش با شده جداسازی خونساز بنیادی سلولهای هویت تعیین (ABI Attune Flow فلوسیتومتری روش از استفاده با MACS دمای در دقیقه 45 مدت به سلولها شد. انجام cytometer) FITC anti-cd34 مونوکلونال بادی آنتی با سانتیگراد درجه 4 طول محصول( bp ) کنترل ایزوتایپ عنوان به Mouse IgG1 شدند. انکوبه (ebiosciences, USA) شد. استفاده این به شد. استفاده فلوسایتومتری روش از نیز اریتروئیدی کلنیهای تایید برای سلولها سپس شد. تهیه اریتروئیدی کلنیهای از سلولی سوسپانسیون ابتدا منظور FITC مونوکلونال بادی آنتی با سانتیگراد درجه 4 دمای در دقیقه 45 مدت به PBS بافر با سلولها سپس شدند. انکوبه anti-cd71 (ebiosciences, USA) درجه 4 دمای در دقیقه 45 مدت به ثانویه بادی آنتی با و شدند داده شستوشو شدند. انکوبه تاریکی در و سانتیگراد اریتروئیدی: تمایز H4434 (Stem Cell سلولز متیل جامد نیمه کشت محیط در سلولها درصد با انكوباتور در IMDM (Sigma) کشت محیط حاوی Technology) و درصد 5 كربن اكسيد دي و سانتيگراد 37 درجه دماي درصد 90 حداقل رطوبت كلونيهاي ريختشناسي تشخيص از پس گرفتند. قرار کشت محيط تعويض بدون محيط از 14 و 11 8 روزهای در ميكروپيپت كمك با كلنيها اين اريتروييدي سلولي تك سوسپانسيون آوردن دست به برای شدند. برداشته جامد نيمه كشت موالر ميلي 2 حاوي سرد PBS بافر ميليليتر در 6 شده جمعآوری کلونیهای درصد بررسي و هموسيتومتر از استفاده با سلولي شمارش شدند. حل EDTA انجام (Trypan Blue) بلو تریپان حياتي رنگآميزي از استفاده با زنده سلولهاي شد) 12 (. اریتروئیدی: کلنیهای تایید انجام فلوسیتومتری و گیمسا رنگآمیزی از استفاده با اریتروئیدی کلنیهای تایید رنگآمیزی و شد تهیه سيتواسپين روش با الم گیمسا رنگآمیزی برای شد. رده تمایزی شاخص عنوان به CD71 بیان فلوسیتومتری در شد. انجام گیمسا FITC anti-cd71(ebiosciences, USA) بادی آنتی از استفاده با اریتروئیدی شد. بررسی :Real-Time PCR داده کشت سلولهای از RNA کلروفرم فنل روش و RNX plus از استفاده با ابتدا mirna خاص cdna سنتز کیت از استفاده با cdna سنتز شد. استخراج شده و PIPKII-alpha و گاماگلوبین ژنهای برای CinnaGen کیت و (Stratagene) mastermix 2X PCR (CinnaGen) از استفاده با PCR شد. انجام BCL11a ریخته آگارز 2 درصد ژل چاهکهای درون PCR محصوالت پایان در شد. انجام برای Real Time PCR (inc. Applied سپس( Biosystem شدند. ارزیابی و شده RealQ PCR Master Mix از استفاده با نظر مورد ژنهای کمی بیان بررسی انجام Housekeeping ژن عنوان به U6 و GAPDH ژنهای و (Ampliqon) است. آمده زیر جدولهای در پرایمرها توالی شد. Gamma globin ژنهای- PIP برای استفاده مورد پرایمرهای توالی GAPDH و KII-alpha BCL11a دمای annealing پرایمر توالی TGTGGAAGATGCTGGAGGAGA 60 ºC 71 پرایمر Gamma globin-f Gamma globin-r PIPKII-alpha-F PIPKII-alpha-R BCL11a-F BCL11a-R GAPDH-F GAPDH-R CAAAGAACCTCTGGGTCCATG CCACCGTTTGTCTGTGTATAGGA TTCAGAGTTGGCAGTTCTTTGG CGCAGCGACACCTTGTTCTTC GCTTCCATCCATCCGAAAACTGCC CGCTGAGTACGTCGTGGAGTC GCAGGAGGCATTGCTGATGA 62 ºC 61 ºC 60 ºC ات 125 حات صف شماره 40 دور

4 همکاران و آتشی امیر / 128 U6 و mir-30a ژنهای برای استفاده مورد پرایمرهای توالی محصول( bp ) طول پرایمر توالی پرایمر annealing دمای Downloaded from pejouhesh.sbmu.ac.ir at 1: on Wednesday January 2nd ºC 75 آماری: آنالیز از استفاده با آماری آنالیز شدند. انجام تکرار بار سه صورت به تستها تمامی آماری معناداری شد. انجام آماري آناليز برای -T test و SPSS 18.0 نرمافزار شد. گرفته نظر در P)0.05 value<0.05) از کمتر یافتهها: ناف: بند خون از شده جدا خونساز بنیادی سلولهای خلوص بررسی استفاده خونساز بنیادی سلولهای جداسازی برای ناف بند خون نمونه سه تعداد درصد 81/1 خلوص میانگین طور به CD34-FITC آنتی با فلوسیتومتری نتایج شد. شکل در آن فلوسیتومتری گراف که دادند نشان شده جداسازی سلولهای برای را است. شده آورده 1 MACS روش به شده جدا خونساز بنیادي سلولهاي فلوسیتومتري بررسی نتایج را درصد 81/1 خلوص حاصل نتایج تمایز. از قبل CD34+ مارکر درصد نظر از میدهند. نشان hsa-mir-30a-f U6-F TGTAAACATCCTCGACTGGAAG AAATTGGAACGATACAGAGAAGG 60ºC 78 کننده القا کشت محیط در روز 14 از پس را اریتروئیدی 2.کلنی شکل 400 بزرگنمایی میدهد. نشان تمایز رایت با شده رنگآمیزی و تمايز از حاصل اريتروئيدي هاي سلول شکل اوليه بزرگنمايي است. شده داده نشان نشانگر با که گیمسا.CD34+ (CD34-FITC) بنیادي سلولهاي خلوص ارزیابی 1. شکل تمایز از بعد فلوسیتومتری و رنگآمیزی کلنی مورفولوژیک ارزیابی اریتروئیدی رده به ایتروئیدی رده سمت به خونساز سلولهای تمایز نشاندهنده کلنیها مورفولوژی 3(. )شکل بود تمایز نشاندهنده گیمسا رنگآمیزی همچنین 2(. )شکل بودند مارکر سلولها 70 درصد حدود که داد نشان اریتروئیدی کلنیهای فلوسیتومتری 4(. )شکل میکنند بیان CD71 از بعد BCL11a و گلوبین گاما mir-30a PIPKII-alpha بیان بررسی اریتروئیدی رده به تمایز نشان را 2/3 1/3 و 1/9 افزایش ترتیب به 14 و 11 8 روزهای در mir-30a بیان همچنین 5(. )شکل (P-value<0.05) بود معنادار کنترل گروه به نسبت که داد ترتیب )به گلوبین گاما برابر(و 2/5 و 1/8 0/9 ترتیب )به PIPKII-alpha ژنهای تمایز. 14 روز در CD71 مارکر بیان درصد به مربوط نتیجه 4. شکل میکنند. بیان را CD71 مارکر سلولها درصد ات 125 حات صف شماره 40 دور

5 129 / گلوبین گاما سنتز در موثر ژنهای بیان بررسی Downloaded from pejouhesh.sbmu.ac.ir at 1: on Wednesday January 2nd 2019 تمایز و روزهای در mir-30a ژن بیان افزایش 5. شکل نشان 14 و 11 8 روزهای در ترتیب به را معناداری بیان افزایش 22 برابر( و 8 0/7 معناداری کاهش BCL11a ژن بیان که درحالی و 7 (. )شکل 6 (P-value<0.05) دادند 8(. )شکل (P-value<0.05) داد نشان را بحث: بتا زنجيره اختاللهای درمان برای نو هاي استراتژي كردن پيدا براي وجو جست معطوف خصوص به موارد از بسياري در وجو جست اين گرفت. رونق 80 دهه از كمي مقادير حتي كه است شده داده نشان شد. تاالسمي شايع بيماري درمان به مي تاالسمی به مبتال یا داسي خونی کم به مبتال بيماران در جنيني هموگلوبين از مسیرهای امروزه دهد) 2(alpha)16. تخفيف زيادي حد تا را باليني عوارض تواند جمله از که است گرفته قرار توجه مورد F هموگلوبین القای برای جدیدی درمانی و F هموگلوبین بیان کننده تنظیم مولکولهای دادن قرار هدف به میتوان آنها بتا( به گاما زنجیره کالس )تعویض سوئیچینگ هموگلوبین مسیر در که مولکولهایی داروها واسطه به تنظیمی مکانیسمهای در که مولکولهایی همچنین و دارند نقش سوئیچینگ هموگلوبین در دخیل ژنهای مهمترین از یکی کرد. اشاره دارند نقش موجب که است رونویسی فاکتور یک BCL11a کرد. اشاره BCL11a به میتوان این در میشود) 17 (. F-Hb تولید کاهش باعث آن افزایش و بتا به گاما زنجیره سوئیچ با تدریج به و داشت پایینی بیان اریتروپوئز اولیه مراحل در گلوبین گاما ژن بیان مطالعه در که یابد کاهش اریتروپوئز هنگام باید BCL11a ژن بیان نتیجه در رفت. باال تمایز شد. مشاهده اریتروئیدی رده سمت به تمایز هنگام بیان کاهش این نیز حاضر مطالعه گلوبینها سنتز در PIPKII-alpha احتمالی نقش به اندکی مطالعههای دیگر طرفی از ژن بیان که دادند نشان همچنین همکارانش) 2014 ( و وبتو کردهاند) 18,19 (. اشاره نشان مطالعه این نتایج مییابد) 18 (. افزایش اریتروئیدی تمایز طی PIPKII- alpha نسبت مطالعه مورد روزهای در PIPKII- alpha بیان اریتروئیدی تمایز طول در که داد دارد. تطابق همکارانش) 2014 ( و وبتو مطالعه با که مییابد افزایش کنترل نمونه به ها AmiRNA هموگلوبین پروتئین جمله از پروتئینها بیان تنظیمی عوامل از یکی هموگلوبین بیان تنظیم در دخیل مولکولهای بهتر شدن مشخص برای هستند. آنالیزهای شد. انجام بیوانفورماتیک آنالیز ژنها بیان کنترل در mirnas نقش و میدهد. قرار هدف را مطالعه مورد ژن دو هر mir-30a که داد نشان بیوانفورماتیک اریتروئیدی تمایز طی mir این که دادند نشان )2007) همکارانش و (Choong) چونگ جیانگ دیگر طرف از دارد. تطابق حاضر مطالعه نتایج با که دارد) 20 ( بیان افزایش mir-30a هدف ژنهای از یکی BCL11a که دادند نشان همکارانش و (Jiang) mir- بیان افزایش که کرد استنباط میتوان آمده دست به نتایج به توجه با است) 21 (. شدن برداشته با که میشود منجر اریتروپوئز طی 11a BCL ژن بیان کاهش به 30a اریتروئیدی رده سمت به تمایز طی گلوبین گاما بیان رونویسی فاکتور این مهاری اثر بیان کاهش با mir-30a بیان افزایش داد نشان نتایج که همانطور مییابد. افزایش مستقیمی ارتباط احتمال به که کرد عنوان میتوان و نبود همراه PIPKII- alpha ژن PIPKII- کنترل mir-30a که دارد وجود نیز احتمال این البته ندارد. وجود آنها بین دیگری احتمالی قویتر القاگرهای وجود ولی باشد داشته عهده بر حدودی تا را alpha بیشتری مطالعههای هرحال به کند. پیدا نمود mir-30a مهاری اثر نمیدهند اجازه بیان و هموگلوبین سنتز در دخیل ژنهای بین ارتباط این دقیق مکانیسم تا است الزم حاکی آمده دست به نتایج که گفت میتوان مجموع در شود. مشخص mir-30a اریتروئیدی تمایز روند در BCL11a بیان کاهش و PIPKII-alpha بیان افزایش از یعنی آن هدف ژنهای و mir-30a بیان الگوی به توجه با است. سلولهای+ CD34 PIPKII- روی را microrna این مهاری اثر نمیتوان BCL11a و PIPKII-alpha این میتوان BCL11a ژن روی آن مهاری اثر دلیل به ولی کرد مطرح alpha معرفی F هموگلوبین القای مسیر تنظیمی مولکولهای از یکی عنوان به microrna است. نیاز مورد ارتباط این بررسی برای بیشتری مطالعههای اگرچه کرد (P-value <0.01 **, P-value <0.001 ***) 14 و 11 8 روزهای در PIPKII-alpha ژن بیان افزایش 6. شکل (P-value <0.05 *, P-value <0.01 **, P-value <0.001 ***) تمایز 14 و 11 8 روزهای در گلوبین گاما ژن بیان افزایش 7. شکل تمایز 14 و 11 8 روزهای طی BCL11a ژن بیان کاهش 8. شکل (P-value <0.05 *, P-value <0.01 **, P-value <0.001 ***) (P-value <0.05 *, P-value <0.01 **, P-value <0.001 ***) 130 ات 125 حات صف شماره 40 دور

6 / 130 امیر آتشی و همکاران Downloaded from pejouhesh.sbmu.ac.ir at 1: on Wednesday January 2nd 2019 منابع: 1. Liaska A, Petrou P, Georgakopoulos CD, Diamanti R, Papaconstantinou D, Kanakis MG, et al. β-thalassemia and ocular implications: a systematic review. BMC Ophthalmol. 2016;16(1): Najmabadi H, Karimi-Nejad R, Sahebjam S, Pourfarzad F, Teimourian S, Sahebjam F, et al. The β-thalassemia mutation spectrum in the Iranian population. Hemoglobin. 2001;25(3): Sankaran VG, Nathan DG. Thalassemia: an overview of 50 years of clinical research. Hematol Oncol Clin North Am. 2010;24(6): Stuart MJ, Nagel RL. Sickle-cell disease. Lancet. 2004;364(9442): Meier ER, Rampersad A. Pediatric Sickle Cell Disease - Past Successes and Future Challenges. Pediatr Res. 2016; [Epub ahead of print]. 6. Steven A, Raghavan P, Rath TJ, Gandhi D. Neurologic and Head and Neck Manifestations of Sickle Cell Disease. Hematol Oncol Clin North Am. 2016;30(4): Zhou D, Liu K, Sun C-W, Pawlik KM, Townes TM. KLF1 regulates BCL11A expression and gamma-to beta-globin gene switching. Nat Genet. 2010;42(9): Sankaran VG, Menne TF, Xu J, Akie TE, Lettre G, Van Handel B, et al. Human fetal hemoglobin expression is regulated by the developmental stagespecific repressor BCL11A. Science. 2008;322(5909): Jiang J, Best S, Menzel S, Silver N, Lai MI, Surdulescu GL, et al. cmyb is involved in the regulation of fetal hemoglobin production in adults. Blood. 2006;108(3): Zhang Z, Sun H, Dai H, Walsh R, Imakura M, Schelter J, et al. MicroRNA mir-210 modulates cellular response to hypoxia through the MYC antagonist MNT. Cell cycle. 2009;8(17): Sankaran VG, Menne TF, Šćepanović D, Vergilio J-A, Ji P, Kim J, et al. MicroRNA-15a and-16-1 act via MYB to elevate fetal hemoglobin expression in human trisomy 13. Proc Natl Acad Sci. 2011;108(4): Gabbianelli M, Testa U, Morsilli O, Pelosi E, Saulle E, Petrucci E, et al. Mechanism of human Hb switching: a possible role of the kit receptor/mir complex. Haematologica. 2010;95(8): Azzouzi I, Moest H, Winkler J, Fauchère J-C, Gerber AP, Wollscheid B, et al. MicroRNA-96 directly inhibits γ-globin expression in human erythropoiesis. PLoS One. 2011;6(7):e Zaccariotto TR, Lanaro C, Albuquerque DM, Santos MN, Bezerra MA, Cunha FG, et al. Expression profiles of phosphatidylinositol phosphate kinase genes during normal human in vitro erythropoiesis. Genet Mol Res GMR. 2012;11(4): Tang DC, Zhu J, Liu W, Chin K, Sun J, Chen L, et al. The hydroxyureainduced small GTP-binding protein SAR modulates gamma-globin gene expression in human erythroid cells. Blood. 2005;106(9): Thein SL, Menzel S, Lathrop M, Garner C. Control of fetal hemoglobin: new insights emerging from genomics and clinical implications. Hum Mol Genet. 2009;18(2): Xu J, Peng C, Sankaran VG, Shao Z, Esrick EB, Chong BG, et al. Correction of sickle cell disease in adult mice by interference with fetal hemoglobin silencing. Science. 2011;334(6058): de Albuquerque Wobeto VP, Machado-Neto JA, Zaccariotto TR, Ribeiro DM, Duarte A da SS, Saad STO, et al. PIPKIIα is widely expressed in hematopoietic-derived cells and may play a role in the expression of alphaand gamma-globins in K562 cells. Mol Cell Biochem. 2014;393(1 2): Wenning MRSC, Mello MP, Andrade TG, Lanaro C, Albuquerque DM, Saad STO, et al. PIP4KIIA and β-globin: Transcripts differentially expressed in reticulocytes and associated with high levels of Hb H in two siblings with Hb H disease. Eur J Haematol. 2009;83(5): Choong ML, Yang HH, McNiece I. MicroRNA expression profiling during human cord blood-derived CD34 cell erythropoiesis. Exp Hematol. 2007;35(4): Jiang B, Zhang X, Su J, Meng W, Yang X, Yang J, et al. BCL11A overexpression predicts survival and relapse in non-small cell lung cancer and is modulated by microrna-30a and gene amplification. Mol Cancer. 2013;12(1):1. دور 40 شماره صف حات 125 ات 130