i=méíê~öå~åá=jéçáìã=pä~åíë= =

Transcript

1 iméíê~öå~åájéçáìãpä~åíë Αναθ. 09 Ιανουάριος 2011 ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΕΣ ΠΟΙΟΤΙΚΟΥ ΕΛΕΓΧΟΥ I ΕΙΣΑΓΩΓΗ Το Petragnani Medium είναι χρήσιμο για την απομόνωση και την καλλιέργεια μυκοβακτηριδίων. II ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ A. Διαδικασία παρασκευής ενοφθαλμισμάτων NK Ενοφθαλμίστε σωληνάρια κεκλιμένης καλλιέργειας Lowenstein-Jensen Medium με καλλιέργειες παρακαταθήκης των σχετικών μυκοβακτηριδιακών στελεχών με χρήση στείρων μπατονετών ενοφθαλμισμού. OKΕπωάστε τα σωληνάρια με ξεσφιγμένα καπάκια σε αερόβια ατμόσφαιρα συμπληρωμένη με διοξείδιο του άνθρακα, στους 35 ± 2 C, έως ότου επιτευχθεί έντονη ανάπτυξη (συνήθως εντός 2 έως 3 εβδομάδων). PKΣυλλέξτε το υλικό της ανάπτυξης με στείρα ακονισμένη μπατονέτα, αφαιρώντας απαλά τα κύτταρα από την επιφάνεια του υλικού καλλιέργειας με προσοχή, έτσι ώστε να μη συμπεριλάβετε υλικό καλλιέργειας με τη συγκομιδή των κυττάρων. α. Για το Mycobacterium tuberculosis ATCC 25177: ENF Μεταφέρετε το υλικό της ανάπτυξης σε 5,0 ml Middlebrook 7H9 Broth with Glycerol (ζωμού Middlebrook 7H9 με γλυκερόλη) σε στείρο γυάλινο σωληνάριο με βιδωτό καπάκι, το οποίο περιέχει στείρα γυάλινα σφαιρίδια. EOF Υποβάλετε σε περιδίνηση καλά (επί αρκετά λεπτά) έως ότου το εναιώρημα δεν περιέχει πλέον μεγάλα συσσωματώματα. EPF Συγκρίνετε το εναιώρημα αυτό με ένα πρότυπο νεφελομέτρου McFarland αρ. 1.Το εναιώρημα θα πρέπει να είναι πιο θολερό από το πρότυπο. EQF Τοποθετήστε το σωληνάριο σε βάση σωληναρίων επί 2 έως 3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, έτσι ώστε να επιτραπεί η καθίζηση των μεγάλων σωματιδίων στον πυθμένα. ERF Μεταφέρετε το υπερκείμενο σε στείρο δοχείο. ESF Ρυθμίστε τη θολερότητα του εναιωρήματος στο πρότυπο McFarland αρ. 1 προσθέτοντας αργά στείρο Middlebrook 7H9 Broth with Glycerol (ζωμό Middlebrook 7H9 με γλυκερόλη).ανακινήστε καλά. ETF Αραιώστε έως τα 10 5 CFU/mL πριν από τη χρήση.αναμείξτε καλά και ενοφθαλμίστε με γραμμωτή επίστρωση το υλικό καλλιέργειας της εξέτασης με χρήση βαθμονομημένου κρίκου 0,01 ml. β. Για όλα τα άλλα μυκοβακτηριδιακά στελέχη: ENF Μεταφέρετε το υλικό της ανάπτυξης σε ένα στείρο σωληνάριο φυγοκέντρου 50 ml με βιδωτό καπάκι, το οποίο περιέχει 8 έως 12 στείρα γυάλινα σφαιρίδια (διαμέτρου 2 mm) και 5 ml αραιωτικού μυκοβακτηριδίων που παρασκευάζεται ως εξής: Αναμείξτε τα ακόλουθα συστατικά σε ένα δοχείο του 1 L και ρυθμίστε το ph μεταξύ 6,7 και 7,0, με χρήση υδροξειδίου του νατρίου 1 N. Βόεια αλβουμίνη (χωρίς λιπαρά οξέα) 1,0 g Polysorbate 80 MINmL Κεκαθαρμένο νερό RMMmL Αποστειρώστε με διήθηση σε μεμβράνη (φίλτρο 0,2 µ) Διανείμετε ασηπτικά σε ποσότητες των 5,5 ml σε στείρα σωληνάρια με βιδωτά καπάκια. EOF Γαλακτωματοποιήστε το υλικό μυκοβακτηριδιακής ανάπτυξης στο πλευρικό τοίχωμα ενός σωληναρίου φυγοκέντρου με βιδωτό καπάκι, με χρήση μπατονέτας.αναμείξτε το υλικό της ανάπτυξης με το αραιωτικό. EPF Πωματίστε το σωληνάριο και υποβάλετε σε περιδίνηση επί 10 min περίπου, έως ότου εναιωρηθεί καλά το υλικό της ανάπτυξης και απαλλαγεί από μεγάλα συσσωματώματα. EQF Προσθέστε 15 ml στείρου αραιωτικού μυκοβακτηριδίων και αναμείξτε σχολαστικά. ERF Συγκρίνετε το εναιώρημα αυτό με ένα πρότυπο νεφελομέτρου McFarland αρ. 1.Το εναιώρημα θα πρέπει να είναι πιο θολερό από το πρότυπο. ESF Τοποθετήστε το σωληνάριο σε βάση επί 2 έως 3 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, έτσι ώστε να επιτραπεί η καθίζηση των μεγάλων σωματιδίων στον πυθμένα. ETF Αναρροφήστε το υπερκείμενο και μεταφέρετέ το σε ένα στείρο δοχείο.το εναιώρημα πρέπει να είναι πιο θολερό από ένα πρότυπο McFarland αρ. 1 και απαλλαγμένο από 1

2 μεγάλα σωματίδια.εάν υπάρχουν ακόμα μεγάλα σωματίδια, αναμείξτε το εναιώρημα και αφήστε το να σταθεί επί 1 ώρα επιπλέον.μεταφέρετε το υπερκείμενο σε στείρο δοχείο. EUF Ρυθμίστε τη θολερότητα του εναιωρήματος στο πρότυπο McFarland αρ. 1 προσθέτοντας αργά στείρο αραιωτικό μυκοβακτηριδίων.ανακινήστε καλά. EVF Διανείμετε κλάσματα του εναιωρήματος σε φιαλίδια καταψύκτη, τα οποία φέρουν σήμανση με την ταυτοποίηση του μικροοργανισμού που περιέχουν και την ημερομηνία παρασκευής. ENMFΚαταψύξτε τα εναιωρήματα τοποθετώντας τα φιαλίδια σε καταψύκτη χαμηλής θερμοκρασίας στους -60 C.Τα φιαλίδια είναι δυνατό να φυλαχθούν επί 6 μήνες το πολύ. ENNFΓια τη χρήση, αφαιρέστε το κατεψυγμένο φιαλίδιο από τον καταψύκτη και αποψύξτε ταχέως το περιεχόμενο, τοποθετώντας το σωληνάριο σε υδατόλουτρο 30 έως 35 C. Αραιώστε έως τα 10 5 CFU/mL πριν από τη χρήση.αναμείξτε καλά και ενοφθαλμίστε με γραμμωτή επίστρωση το υλικό καλλιέργειας της εξέτασης με χρήση βαθμονομημένου κρίκου 0,01 ml. Β. Διαδικασία για υλικό καλλιέργειας εξέτασης NK Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τις καλλιέργειες που παρατίθενται παρακάτω. α. Με χρήση στείρων αναλώσιμων βαθμονομημένων κρίκων του 0,01 ml, ενοφθαλμίστε το υλικό καλλιέργειας με μυκοβακτηριδιακές καλλιέργειες που παρασκευάζονται όπως περιγράφεται παραπάνω. β. Επωάστε τα σωληνάρια με ξεσφιγμένα καπάκια στους 35 ± 2 C, σε αερόβια ατμόσφαιρα, συμπληρωμένη με διοξείδιο του άνθρακα. OK Εξετάστε τα σωληνάρια μετά από 7, 14 και, εάν είναι απαραίτητο, 21 ημέρες ως προς την ανάπτυξη, την εκλεκτικότητα και τη χρώση. PK Αναμενόμενα αποτελέσματα *Mycobacterium tuberculosis KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKΑνάπτυξη H37Ra ATCC *Mycobacterium kansasii, KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK Ανάπτυξη Ομάδα I ATCC *Mycobacterium scrofulaceum,kkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkkανάπτυξη Ομάδα ΙI ATCC GMycobacterium intracellulare, KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKΑνάπτυξη Ομάδα ΙIΙ ATCC *Mycobacterium fortuitum, KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK Ανάπτυξη Ομάδα IV ATCC 6841 *Συνιστώμενο στέλεχος μικροοργανισμού για ποιοτικό έλεγχο χρήστη. III ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ NK Εξετάστε τα σωληνάρια όπως περιγράφεται στην ενότητα Αλλοίωση του προϊόντος. OK Εξετάστε αντιπροσωπευτικά σωληνάρια οπτικώς για να βεβαιωθείτε ότι τυχόν υπάρχοντα φυσικά ελαττώματα δε θα επηρεάσουν δυσμενώς κατά τη χρήση. PK Προσδιορίστε το ph ποτενσιομετρικά σε θερμοκρασία δωματίου για την τήρηση της προδιαγραφής των 7,0 ± 0,2. QK Επωάστε τα μη ενοφθαλμισμένα αντιπροσωπευτικά σωληνάρια στους 20 έως 25 C και στους 30 έως 35 C και εξετάστε μετά από 7 και 14 ημέρες για τυχόν μικροβιακή μόλυνση. ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ IV ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το Petragnani Medium χρησιμοποιείται σε ποιοτικές διαδικασίες για την απομόνωση και την καλλιέργεια μυκοβακτηριδίων από κλινικά δείγματα. V ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ Το Petragnani Medium περιγράφηκε από τους Norton et al. στην εργασία τους με θέμα μεθόδους καλλιέργειας των βακίλλων της φυματίωσης. 1,2 Το Petragnani Medium είναι ένα γλυκερολιωμένο υλικό καλλιέργειας αυγού με βάση γάλακτος που περιέχει πράσινο του μαλαχίτη.επειδή είναι κάπως πιο ανασταλτικό από το ATS και τα υλικά καλλιέργειας Lowenstein-Jensen λόγω της υψηλότερης περιεκτικότητάς του σε χρωστική, το Petragnani Medium συνιστάται ιδιαίτερα για παλαιά δείγματα και για χρήση παράλληλα με άλλα υλικά καλλιέργειας για την απομόνωση βακίλλων της φυματίωσης. 2 2

3 VI ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η πεπτόνη καζεΐνης, το άλευρο γεωμήλων και το αποβουτυρωμένο γάλα περιέχουν αμινοξέα, πρωτεΐνες και υδατάνθρακες που είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη των μυκοβακτηριδίων.η γλυκερόλη είναι μια πηγή ενέργειας.η ασπαραγίνη προάγει την εκκίνηση της ανάπτυξης και αυξάνει το ρυθμό ανάπτυξης.ο κρόκος αυγού είναι μια πηγή λιπιδίων για το μεταβολισμό των μυκοβακτηριδίων.με την παρουσία της χρωστικής πράσινου του μαλαχίτη, επιτυγχάνεται μερική αναστολή των βακτηριδίων. VII ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Petragnani Medium Σύνθεση* κατά προσέγγιση ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού L-ασπαραγίνη KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK5,1 g Παγκρεατικό αφομοίωμα καζεΐνης...5,1 g Άλευρο γεωμήλων...36,4 g Αποβουτυρωμένο γάλα...100,0 g Πράσινο του μαλαχίτη...1,2 g Πλήρες αυγό ,0 ml Κρόκος αυγού KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK121,0 ml Γλυκερόλη KKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKKK60,0 ml *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Τα σωληνάρια με σφιγμένα καπάκια θα πρέπει να ανοίγονται προσεκτικά για την αποφυγή τυχόν τραυματισμού λόγω θραύσης του γυαλιού. Σε κλινικά δείγματα ενδέχεται να υπάρχουν παθογόνοι μικροοργανισμοί, συμπεριλαμβανομένων των ιών της ηπατίτιδας και του ιού της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου. Κατά το χειρισμό όλων των ειδών που είναι μολυσμένα με αίμα και άλλα σωματικά υγρά, θα πρέπει να ακολουθούνται οι Τυπικές προφυλάξεις 3-6 και οι κατευθυντήριες οδηγίες των ιδρυμάτων. Μετά τη χρήση, τα παρασκευασμένα σωληνάρια, τα δοχεία δείγματος και άλλα μολυσμένα υλικά πρέπει να αποστειρώνονται σε αυτόκαυστο πριν από την απόρριψη. Για χειρισμούς κλινικών δειγμάτων που δεν παράγουν αερόλυμα, όπως π.χ. κατά την παρασκευή επιχρισμάτων οξυάντοχων μικροοργανισμών, απαιτούνται πρακτικές και διαδικασίες, εξοπλισμός και εγκαταστάσεις περιορισμού βιοασφάλειας επιπέδου 2. Όλες οι δραστηριότητες που παράγουν αερολύματα πρέπει να διεξάγονται σε θάλαμο βιολογικής ασφάλειας τάξης I ή II. Για εργαστηριακές δραστηριότητες πολλαπλασιασμού και χειρισμού καλλιεργειών του M. tuberculosis και του M. bovis απαιτούνται πρακτικές, εξοπλισμός και εγκαταστάσεις περιορισμού βιοασφάλειας επιπέδου 3. Οι μελέτες με πειραματόζωα απαιτούν επίσης ειδικές διαδικασίες. 5 Οδηγίες φύλαξης Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα σωληνάρια στο σκότος στους 2 8 C.Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση.μην ανοίγετε παρά μόνον όταν είστε έτοιμοι για χρήση. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση στο φως. Υλικά καλλιέργειας σε σωληνάρια, τα οποία φυλάσσονται σύμφωνα με την επισήμανση έως ακριβώς πριν από τη χρήση, είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης και να επωάζονται για τους συνιστώμενους χρόνους επώασης.αφήστε το υλικό καλλιέργειας να θερμανθεί σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τον ενοφθαλμισμό. Μετά τη φύλαξη σε όρθια θέση, τα σωληνάρια πηγμένου υλικού καλλιέργειας αυγού ενδέχεται να εμφανίζονται ότι περιέχουν μεγάλη ποσότητα νερού στον πυθμένα των κεκλιμένων καλλιεργειών. Εάν τα σωληνάρια τοποθετηθούν σε οριζόντια θέση, το υγρό θα επαναπορροφηθεί στο υλικό καλλιέργειας, έτσι ώστε να καλύψει την επιφάνεια της κεκλιμένης καλλιέργειας.η φύλαξη στη θέση αυτή θα έχει ως αποτέλεσμα τη σχεδόν πλήρη επαναπορρόφηση της περίσσειας υγρού. Αλλοίωση των προϊόντων Μη χρησιμοποιείτε τα σωληνάρια εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα ή άλλα σημεία αλλοίωσης. VIIIΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΧΕΙΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Δείγματα κατάλληλα για καλλιέργεια είναι δυνατό να υποβληθούν σε χειρισμό με χρήση διαφόρων τεχνικών.για λεπτομερείς πληροφορίες, συμβουλευτείτε τα κατάλληλα κείμενα. 7,8 Τα δείγματα θα πρέπει να λαμβάνονται πριν από τη χορήγηση αντιμικροβιακών παραγόντων.πρέπει να λαμβάνονται μέτρα για την άμεση μεταφορά στο εργαστήριο. 3

4 IX ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενο υλικό Petragnani Medium Slants Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια, μικροοργανισμοί ποιοτικού ελέγχου και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Διαδικασία της εξέτασης Εφαρμόζετε άσηπτες τεχνικές. Οι διαδικασίες εξέτασης είναι εκείνες που συνιστώνται από τα Centers for Disease Control and Prevention (CDC) για πρωτογενή απομόνωση από δείγματα που περιέχουν μυκοβακτηρίδια. 9 Το διάλυμα N-ακετυλ-L-κυστεΐνης-υδροξειδίου του νατρίου (NALC-NaOH) συνιστάται ως ήπιος, αλλά αποτελεσματικός παράγοντας πέψης και απολύμανσης.τα αντιδραστήρια αυτά παρέχονται στο BBL MycoPrep Mycobacterial Specimen Digestion/Decontamination Kit.Για λεπτομερείς οδηγίες απολύμανσης και καλλιέργειας, συμβουλευτείτε τις κατάλληλες αναφορές Μετά τον ενοφθαλμισμό, διατηρείτε τα δοχεία της εξέτασης προστατευμένα από το φως και τοποθετήστε τα σε κατάλληλο σύστημα που παρέχει αερόβια ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με διοξείδιο του άνθρακα.επωάστε στους 35 ± 2 C. Τα υλικά κεκλιμένης καλλιέργειας θα πρέπει να ενοφθαλμίζονται σε οριζόντιο επίπεδο, έως ότου απορροφηθεί το ενοφθάλμισμα.τα σωληνάρια θα πρέπει να έχουν ξεσφιγμένα τα βιδωτά καπάκια τους για τις πρώτες 3 εβδομάδες, έτσι ώστε να επιτρέπεται η κυκλοφορία του διοξειδίου του άνθρακα για την έναρξη της ανάπτυξης.ακολούθως, για την πρόληψη της αφυδάτωσης, σφίξτε τα καπάκια και ξεσφίγγετέ τα για λίγο μία φορά την εβδομάδα.τοποθετήστε τα σωληνάρια σε όρθια θέση εάν δεν υπάρχει επαρκής διαθέσιμος χώρος. ΣΗΜΕΙΩΣΗ:Καλλιέργειες από δερματικές βλάβες για τις οποίες υπάρχει υποψία ότι είναι M. marinum ή M. ulcerans θα πρέπει να επωάζονται στους 25 έως 33 C για πρωτογενή απομόνωση. Καλλιέργειες για τις οποίες υπάρχει υποψία ότι περιέχουν M. avium ή M. xenopi εμφανίζουν βέλτιστη ανάπτυξη στους 40 έως 42 C. 9 Επωάστε μια καλλιέργεια εις διπλούν στους 35 έως 37 C. Ποιοτικός έλεγχος χρήστη Δείτε την ενότητα Διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου. Πρέπει να τηρούνται οι απαιτήσεις ποιοτικού ελέγχου σύμφωνα με τους ισχύοντες τοπικούς, πολιτειακούς ή/και ομοσπονδιακούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης και τις πρότυπες διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου του εργαστηρίου σας.συνιστάται ο χρήστης να ανατρέχει στις σχετικές κατευθυντήριες οδηγίες του CLSI και τους κανονισμούς του CLIA για τις κατάλληλες πρακτικές ποιοτικού ελέγχου. X ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Η παρατήρηση των καλλιεργειών πρέπει να γίνεται εντός 5 έως 7 ημερών μετά την επώαση και μία φορά την εβδομάδα ακολούθως, επί έως 8 εβδομάδες. Καταγράψτε τις παρατηρήσεις 9 NK Αριθμός ημερών που απαιτήθηκαν για να καταστούν οι αποικίες μακροσκοπικά ορατές.οι μικροοργανισμοί που αναπτύσσονται ταχέως σχηματίζουν ώριμες αποικίες εντός 7 ημερών.οι μικροοργανισμοί που αναπτύσσονται βραδέως απαιτούν περισσότερες από 7 ημέρες για το σχηματισμό ώριμων αποικιών. OK Παραγωγή χρωστικής Λευκό, κρεμ ή ωχροκίτρινο μη χρωμογόνο (NC) Λεμονί, κίτρινο, πορτοκαλί, κόκκινο χρωμογόνο (Ch) Τα χρωματισμένα επιχρίσματα ενδέχεται να εμφανίζουν οξυάντοχους βακίλλους, οι οποίοι αναφέρονται μόνον ως οξυάντοχοι βάκιλλοι, εκτός εάν πραγματοποιηθούν οριστικές εξετάσεις. XI ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Για την ταυτοποίηση, οι μικροοργανισμοί πρέπει να είναι σε καθαρή καλλιέργεια.για την τελική ταυτοποίηση, θα πρέπει να εκτελούνται μορφολογικές, βιοχημικές ή/και ορολογικές εξετάσεις. Συμβουλευτείτε τα κατάλληλα κείμενα για λεπτομερείς πληροφορίες και τις συνιστώμενες διαδικασίες. 7,8 4

5 XII ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Πριν από τη διάθεσή τους, όλες οι παρτίδες του Petragnani Medium εξετάζονται ως προς τα χαρακτηριστικά απόδοσης.αντιπροσωπευτικά δείγματα της παρτίδας ενοφθαλμίζονται με κυτταρικά εναιωρήματα μυκοβακτηριδίων, παρασκευασμένα σε BBL Middlebrook 7H9 Broth, τα οποία αραιώθηκαν για την παραγωγή μέτριας έως έντονης ανάπτυξης.τα σωληνάρια επωάζονται με ξεσφιγμένα καπάκια στους C επί έως 21 ημέρες σε ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με CO 2.Σε όλες τις παρτίδες παρατηρείται σωστό χρώμα και σωστή μορφολογία των μικροοργανισμών που εξετάζονται. XIII ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ Αρ. κατ. Περιγραφή BBL Petragnani Medium, συσκευασία των 10 σωληναρίων μεγέθους C XIVΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ NK kçêíçåigkckigkdkqüçã~ëi~åçkkek_êççãknvpoki~äçê~íçêóíéëíëñçêíìäéêåäéä~åáääáäóåìäíìêéãéíüççëk^ãkoéîk qìäéêåkorwptujpuok OK j~åc~ççáåigkcknvurkjéçá~ñçêáëçä~íáçåjåìäíáî~íáçåjáçéåíáñáå~íáçåjã~áåíéå~ååéçñãéçáå~ää~åíéêá~iîçäkfk táääá~ãëctáäâáåëi_~äíáãçêék PK k~íáçå~ä`çããáííééñçê`äáåáå~äi~äçê~íçêópí~åç~êçëkommnk^ééêçîéçdìáçéäáåéjovj^okmêçíéåíáçåçñ ä~äçê~íçêóïçêâéêëñêçãçååìé~íáçå~ääó~åèìáêéçáåñéåíáçåëioåçéçkk``ipit~óåéim~k QK d~êåéêigkpknvvskeçëéáí~äfåñéåíáçå`çåíêçämê~åíáåéë^çîáëçêó`çããáííééirkpkaéé~êíãéåíçñeé~äíü~åçeìã~å péêîáåéëi`éåíéêëñçêaáëé~ëé`çåíêçä~åçmêéîéåíáçåkdìáçéäáåéñçêáëçä~íáçåéêéå~ìíáçåëáåüçëéáí~äëkfåñéåík `çåíêçäeçëéáí~äbéáçéãáçäkntwrpjumk RK rkpkaéé~êíãéåíçñeé~äíü~åçeìã~åpéêîáåéëknvvvk_áçë~ñéíóáåãáåêçäáçäçöáå~ä~åçäáçãéçáå~ää~äçê~íçêáéëi eepmìääáå~íáçåe`a`fiqíüéçkrkpkdçîéêåãéåímêáåíáåölññáåéit~ëüáåöíçåiak`k SK aáêéåíáîéommmlrqlb`çñíüébìêçéé~åm~êäá~ãéåí~åççñíüé`çìååáäçñnupééíéãäéêommmçåíüééêçíéåíáçåçñ ïçêâéêëñêçãêáëâëêéä~íéçíçéñéçëìêéíçäáçäçöáå~ä~öéåíë~íïçêâeëéîéåíüáåçáîáçì~äçáêéåíáîéïáíüáåíüé ãé~åáåöçñ^êíáåäénsenfçñaáêéåíáîéuvlpvnlbb`fklññáåá~ägçìêå~äiosointlnmlommmiékmmonjmmqrk TK jìêê~óimkokibkgk_~êçåigkekgçêöéåëéåijk^kmñ~ääéêi~åçokekvçäâéåeéçkfommpkj~åì~äçñåäáåáå~äãáåêçäáçäçöói UíÜÉÇK^ãÉêáÅ~åpçÅáÉíóÑçêjáÅêçÄáçäçÖóIt~ëÜáåÖíçåIaK`K UK cçêäéëi_k^kiakckp~üãi~åç^kpktéáëëñéäçkommok_~áäéócpåçííûëçá~öåçëíáåãáåêçäáçäçöóinníüéçkjçëäóifååkipík içìáëk VK héåíimkqki~åçdkmkhìäáå~knvurkmìääáåüé~äíüãóåçä~åíéêáçäçöów~öìáçéñçêíüéäéîéäfffä~äçê~íçêókrpaeepk `ÉåíÉêëÑçêaáëÉ~ëÉ`çåíêçäI^íä~åí~K NMK `ÉêåçÅÜImKiKIoKhKbååëIjK^Kp~ìÄçääÉI~åÇoKgKt~ää~ÅÉIgêKNVVQK`ìãáíÉÅÜNS^Ii~Äçê~íçêóÇá~ÖåçëáëçÑíÜÉ ãóåçä~åíéêáçëéëk`ççêçáå~íáåöéçki^kpktéáëëñéäçk^ãéêáå~åpçåáéíóñçêjáåêçäáçäçöóit~ëüáåöíçåiak`k NNKjÉíÅÜçÅâI_KdKIcKpKkçäíÉI~åÇoKgKt~ää~ÅÉIgêKNVVVKjóÅçÄ~ÅíÉêáìãIéKPVVJQPTKfåmKoKjìêê~óIbKgK_~êçåIjK^K mñ~ääéêick`kqéåçîéêi~åçokekvçäâéåeéçkfij~åì~äçñåäáåáå~äãáåêçäáçäçöóitíüéçk^ãéêáå~åpçåáéíóñçê jáåêçäáçäçöóit~ëüáåöíçåiak`k NOK eçäíigkdkikkokhêáéöimkek^kpåé~íüigkqkpí~äéói~åçpkqktáääá~ãëeéçkfknvvqk_éêöéóûëj~åì~ä»çñçéíéêãáå~íáîé Ä~ÅíÉêáçäçÖóIVíÜÉÇKtáääá~ãëCtáäâáåëI_~äíáãçêÉK _ÉÅíçåIaáÅâáåëçå~åÇ`çãé~åó _ÉåÉñiáãáíÉÇ TiçîÉíçå`áêÅäÉ oáåé~åå~eçìëé pé~êâëijaonnrorp^ pü~ååçåcêééwçåé UMMJSPUJUSSP pü~ååçåi`çìåíó`ä~êéifêéä~åç ïïïkäçkåçãlçë ^q``áë~íê~çéã~êâçñíüé^ãéêáå~åqóéé`ìäíìêé`çääéåíáçåk _ai_aiçöçi i~åçjóåçmêéé~êéíê~çéã~êâëçñ_éåíçåiaáåâáåëçå~åç`çãé~åók«omnn_a 5