BD Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar)

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA Αναθ.: Ιούνιος 2003 BD Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar) ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖONTAI Το BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD), όταν χρησιμοποιείται ως σε τρυβλία, χρησιμοποιείται για τη διαφοροποίηση των Enterobacteriaceae, ιδίως για τη διαφοροποίηση του Salmonella από άλλα εντερικά βακτήρια. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Ο Hajna ανέπτυξε τη σύνθεση για το άγαρ TSI προσθέτοντας σακχαρόζη στη σύνθεση διπλού σακχάρου (γλυκόζη και λακτόζη) του άγαρ σιδήρου Kligler. 1,2 Το άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου περιέχει τρεις υδατάνθρακες (γλυκόζη, λακτόζη και σακχαρόζη). Όταν ζυμώνονται αυτοί οι υδατάνθρακες, η παραγωγή οξέος που προκύπτει ανιχνεύεται από το δείκτη ερυθρού της φαινόλης. Οι χρωματικές μεταβολές που προκύπτουν είναι κίτρινο για την παραγωγή οξέος και ερυθρό για την αλκαλοποίηση. Καθώς η λακτόζη και η σακχαρόζη είναι παρούσες σε πολύ υψηλότερες συγκεντρώσεις από τη γλυκόζη, ο σχηματισμός οξέος στον πυθμένα οφείλεται σε αυτά τα σάκχαρα, ενώ ο σχηματισμός οξέος από τη γλυκόζη καταστέλλεται από ταχεία οξείδωση της μικρής ποσότητας οξέος στην κεκλιμένη περιοχή του σωληναρίου, με αποτέλεσμα να προκύψει μια αντίδραση ουδέτερου ή αλκαλικού ph, όταν ζυμώνεται μόνο η γλυκόζη. Η προσθήκη σακχαρόζης επιτρέπει τον αποκλεισμό ορισμένων κολοβακτηριοειδών και οργανισμών Proteus, τα οποία μπορούν να επιτεθούν στη σακχαρόζη, αλλά όχι στη λακτόζη, εντός μιας περιόδου επώασης ωρών. Σε ουδέτερο ή αλκαλικό ph, το υδρόθειο (που παράγεται από το θειοθειικό νάτριο) αντιδρά με το θειικό αμμώνιο σιδήρου, αποδίδοντας θειούχο σίδηρο. Το χλωριούχο νάτριο διατηρεί την οσμωτική ισορροπία του υλικού. Η αρχική εφαρμογή της σύνθεση TSI είναι η χρήση της ως σωληναρίου, το οποίο περιέχει έναν πυθμένα και μια κεκλιμένη περιοχή. Επιτρέπει τη διαφοροποίηση των ζυμωτικών γλυκόζης, λακτόζης ή/και της σακχαρόζης και την ανίχνευση της παραγωγής υδρόθειου. Όταν χρησιμοποιείται ως σε τρυβλία, οι παρατηρούμενες αντιδράσεις στη στρώση του άγαρ του τρυβλίου περιορίζονται στο σχηματισμό αλκαλικών προϊόντων (που παράγονται από τις πεπτόνες του υλικού, αν δεν γίνει ζύμωση της γλυκόζης, της λακτόζης ή/και της σακχαρόζης) ή όξινων προϊόντων από τη λακτόζη ή/και τη σακχαρόζη, τα οποία είναι τα κύρια σάκχαρα του υλικού. Επιπλέον, παρατηρείται παραγωγή υδρόθειου, αν κανένα από τα σάκχαρα δεν ζυμωθεί σε όξινα προϊόντα, καθώς ο σχηματισμός υδρόθειου απαιτεί ουδέτερο έως αλκαλικό ph. Τα περισσότερα στελέχη Proteus, τα οποία είναι γνωστό ότι παράγουν υδρόθειο σε ουδέτερο ή αλκαλικό ph, καθιστούν όξινο το, καθώς ζυμώνουν σακχαρόζη και δεν εμφανίζονται μαύρα σε αυτό το, ενώ τα στελέχη Salmonella που δεν ζυμώνουν τη σακχαρόζη ή τη λακτόζη, παράγουν μαύρες αποικίες. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD) Σύνθεση* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Παγκρεατικό υδρόλυμα καζεΐνης 10,0 g Πεπτικό αφομοίωμα ζωικού ιστού 10,0 Χλωριούχο νάτριο 5,0 Λακτόζη 10,0 Σακχαρόζη 10,0 Γλυκόζη 1,0 Θειικό αμμώνιο σιδήρου 0,2 Θειοθειικό νάτριο 0,2 Ερυθρό της φαινόλης 0,025 Άγαρ 13,0 ph 7,3 ± 0,2 PA

2 *Προσαρμοσμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται έτσι, ώστε να πληρούνται τα κριτήρια σχετικά με την απόδοση. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Προορίζεται αποκλειστικά για επαγγελματική χρήση. Μη χρησιμοποιείτε τρυβλία που εμφανίζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημάδια αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες των 10 τρυβλίων για μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε στους 35 έως 37 C επί 18 έως 24 ώρες. Συμπεριλάβετε ένα μη επιλεκτικό, όπως το άγαρ Columbia με 5% αίμα προβάτου, ως αναφορά ανάπτυξης. Στελέχη Αποτελέσματα ανάπτυξης Escherichia coli ATCC Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, κίτρινες αποικίες που περιβάλλονται από κίτρινο Salmonella Typhimurium Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, ρόδινες αποικίες με μαύρο ATCC κέντρο, ερυθρό Salmonella Abony DSM 4224 Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, ρόδινες αποικίες με μαύρο κέντρο, ερυθρό Shigella flexneri ATCC Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, ρόδινες αποικίες, ερυθρό ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου) (τρυβλία Stacker των 90 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένα. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το προϊόν αυτό είναι ένα διαφορικό, το οποίο δεν πρέπει να χρησιμοποιείται ως πρωτογενής απομόνωση παθογόνων από κλινικά δείγματα. Χρησιμοποιείται στη διαφοροποίηση καθαρών καλλιεργειών που λαμβάνονται σε υλικά απομόνωσης και μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ως για την ανακαλλιέργεια από ζωμό εμπλουτισμού Salmonella (δείτε επίσης την ενότητα ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ). Διαδικασία της εξέτασης Ενοφθαλμίστε το BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD) με μια ύποπτη αποικία από ένα τρυβλίο πρωτογενούς απομόνωσης ή με έναν γεμάτο κρίκο υλικού από ζωμό εμπλουτισμού Salmonella (π.χ. ζωμό Selenite). Επωάστε σε αερόβιο περιβάλλον στους 35 έως 37 C επί 18 έως 24 ώρες. Μην επωάσετε σε αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με διοξείδιο του άνθρακα και μην επωάσετε περισσότερο από 24 ώρες, καθώς θα μπορούσαν να προκύψουν εσφαλμένα αποτελέσματα. PA

3 Αποτελέσματα Οι τυπικές αντιδράσεις στα τρυβλία BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD) είναι οι εξής: Οργανισμοί Αποτελέσματα ανάπτυξης Escherichia coli Κίτρινες αποικίες, κίτρινο Klebsiella/Enterobacter Proteus Salmonella (H 2 S θετικά στελέχη) Shigella και H 2 S αρνητικό Salmonella Enterococcus Κίτρινες βλεννώδεις αποικίες, κίτρινο Ερυθρωπές έως γκριζωπές αποικίες, σμηνουργία, ερυθρό. Τα θετικά στη σακχαρόζη στελέχη ενδέχεται να παράγουν κίτρινες αποικίες που περιβάλλονται από κίτρινους δακτυλίους Ρόδινες αποικίες με μαύρο κέντρο, ερυθρό Ρόδινες αποικίες, ερυθρό Μικρές κίτρινες αποικίες, οι οποίες περιβάλλονται από ερυθρό Η ανάπτυξη από αυτό το πρέπει να διαφοροποιείται περαιτέρω μέσω βιοχημικών ή/και ορολογικών εξετάσεων, ώστε να παρέχεται μια πλήρης ταυτοποίηση των απομονωμένων στελεχών. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD) είναι ένα μη επιλεκτικό που χρησιμοποιείται για τη διαφοροποίηση των αποικιών πιθανής Salmonella από άλλα Enterobacteriaceae που λαμβάνονται σε υλικά απομόνωσης ή ως για ανακαλλιέργεια από ζωμό εμπλουτισμού Salmonella. Τα περισσότερα στελέχη Salmonella θα παράγουν ρόδινες αποικίες με μαύρο κέντρο σε αυτό το, ενώ οι αποικίες άλλων οργανισμών θα είναι ερυθρές ή κίτρινες χωρίς μαύρο κέντρο. Ωστόσο, συγκεκριμένα στελέχη Salmonella δεν θα εμφανίσουν μαύρο κέντρο και ενδεχομένως να μην ανιχνευτούν, αν δεν υπάρξει περαιτέρω διαφοροποίηση. Επίσης, το δεν επιτρέπει τη διαφοροποίηση του Shigella από άλλα συγκεκριμένα Enterobacteriaceae. Συνεπώς, όλες οι ρόδινες αποικίες χωρίς μαύρο κέντρο θα πρέπει επίσης να εξετάζονται για Salmonella και Shigella, π.χ. με εξετάσεις συγκόλλησης σε αντικειμενοφόρους πλάκες με τους κατάλληλους αντιορούς. Τα αποτελέσματα που προκύπτουν σε αυτό το πρέπει να επιβεβαιώνονται με πρόσθετες βιοχημικές ή ορολογικές εξετάσεις. 3 Οι αντιδράσεις που προκύπτουν στο BD Triple Sugar Iron Agar που παρέχεται ως σε τρυβλία, ενδεχομένως να διαφέρουν από εκείνες που περιγράφονται για το άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου που παρέχεται σε σωληνάρια. 4 Το BD Triple Sugar Iron Agar δεν είναι πρωτογενούς απομόνωσης για Salmonella ή άλλα παθογόνα. Αξιολόγηση απόδοσης Σε μια εσωτερική αξιολόγηση (δείτε τον πίνακα 1), εξετάστηκαν τριάντα στελέχη Enterobacteriaceae, Enterococcus spp. και Staphylococcus aureus, συμπεριλαμβανομένων δέκα στελεχών Salmonella διαφόρων οροτύπων, σε BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD). 5 Τα τρυβλία επωάστηκαν σε αέρα περιβάλλοντος επί 20 ώρες σε θερμοκρασία 35 έως 37 C. Από τα δέκα στελέχη Salmonella, από τα εννέα προέκυψαν ερυθρές αποικίες με μαύρα κέντρα, ενώ το ένα δεν εμφάνισε το μαύρο κέντρο της αποικίας. Όλα τα άλλα συμπεριλαμβανόμενα είδη εμφάνισαν τις αναμενόμενες αντιδράσεις. Από αυτά τα στοιχεία προκύπτει ευαισθησία 96,8% για όλα τα στελέχη που εξετάστηκαν και 91% για τα στελέχη Salmonella. PA

4 ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Hajna, A. A Triple-sugar iron agar medium for the identification of the intestinal group of bacteria. J. Bacteriol. 49: Kligler, I. J Modifications of culture media used in the isolation and differentiation of typhoid, dysentery, and allied bacilli. J. Exp. Med. 28: Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London 5. Αρχειοθετημένα στοιχεία. BD Diagnostic Systems Europe. Χαϊδελβέργη, Γερμανία. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD) Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton, Dickinson and Company Πίνακας 1: Αποτελέσματα σχετικά με τις επιδόσεις Είδη (Αρ. στελεχών) Αποτελέσματα ανάπτυξης με το άγαρ BD Triple Sugar Iron Agar (Άγαρ σιδήρου τριπλού σακχάρου BD) Enterococcus faecalis (1) Μικρές κίτρινες αποικίες, κίτρινο Enterococcus faecium (1) Escherichia coli, θετικό στη Μεσαίου έως μεγάλου μεγέθους κίτρινες αποικίες, κίτρινο λακτόζη (4) Escherichia coli, αρνητικό στη Μεσαίου προς μεγάλου μεγέθους ρόδινες αποικίες, ερυθρό λακτόζη (1) Morganella morganii (1) Proteus mirabilis (2) Μεσαίου έως μεγάλου μεγέθους ρόδινες αποικίες με ζώνες Proteus penneri (1) σμηνουργίας, ερυθρό Μεσαίου έως μεγάλου μεγέθους κίτρινες αποικίες με ζώνες Proteus vulgaris (1) σμηνουργίας, κίτρινο Providencia alcalifaciens (1) Providencia rettgeri (1) Providencia stuartii (1) Salmonella Abony (1) PA Μεσαίου έως μεγάλου μεγέθους ρόδινες αποικίες με μαύρο

5 Salmonella Augustenborg (1) Salmonella Bovismorbificans (1) Salmonella Enteritidis (1) Salmonella Gallinarum (1) Salmonella Hadar (1) Salmonella Saintpaul (1) Salmonella Senftenberg (1) Salmonella Typhimurium (1) Salmonella Typhimurium (1) Shigella boydii (1) Shigella flexneri (1) Shigella sonnei (1) Staphylococcus aureus (2) κέντρο, ερυθρό Μικρού έως μεσαίου μεγέθους κίτρινες αποικίες, κίτρινο PA