COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, version 2.0

Transcript

1 COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, version 2.0 ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ. COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV HCVQLV2 72 Tests P/N: Qualitative Test, v2.0 COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan PG WR 5.1 Liters P/N: Wash Reagent Πίνακας Περιεχομένων ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ... 1 ΣΥΝΟΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ... 2 ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ... 2 ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ... 5 ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ... 8 ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΧΕΙΡΙΣΜΟΥ... 9 ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΣΥΛΛΟΓΗ, ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΠΑΡΕΜΒΑΛΛΟΜΕΝΕΣ ΟΥΣΙΕΣ AΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΜΗ ΚΛΙΝΙΚΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ To COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 είναι μια ποιοτική in vitro εξέταση ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος για την ανίχνευση των γονότυπων 1 έως 6 του RNA του Ιού Ηπατίτιδας C (HCV) σε ανθρώπινο πλάσμα EDTA ή ορό χρησιμοποιώντας το COBAS AmpliPrep Όργανο για την αυτόματη επεξεργασία δειγμάτων και τον COBAS TaqMan Αναλυτή ή τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή για αυτόματη ενίσχυση και ανίχνευση. Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 ενδείκνυται για ασθενείς που παρουσιάζουν κλινικές και/ή βιοχημικές ενδείξεις ηπατικής νόσου καθώς και ενδείξεις ύπαρξης αντισωμάτων λόγω μόλυνσης από HCV και για τους οποίους υπάρχει υποψία ενεργής μόλυνσης με HCV. Η εξέταση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την επιβεβαίωση δειγμάτων θετικών σε αντισώματα. Η ανίχνευση HCV RNA υποδεικνύει αντιγραφή του ιού και αποτελεί συνεπώς ένδειξη ενεργής μόλυνσης. Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 δεν προορίζεται για χρήση ως τεστ ελέγχου (screening test) για την παρουσία HCV σε αίμα ή παράγωγα αίματος. Η ενότητα «Πληροφορίες Αναθεώρησης Εγγράφου» βρίσκεται στο τέλος του παρόντος εγγράφου EL 1 Doc Rev. 1.0

2 ΣΥΝΟΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Ο ιός της ηπατίτιδας C θεωρείται ότι είναι ο βασικός αιτιολογικός παράγοντας υπεύθυνος για το 90 έως 95% των περιπτώσεων της ηπατίτιδας μετά από μετάγγιση 1-4. Ο HCV είναι ένας ιός με θετικής κατεύθυνσης μονόκλωνο RNA με ένα γονιδίωμα περίπου νουκλεοτιδίων που κωδικοποιεί για αμινοξέα. Ως ιός που μεταδίδεται με το αίμα, ο HCV μπορεί να μεταδοθεί με το αίμα και τα παράγωγα αίματος. Η ευρεία εφαρμογή μέτρων διαγνωστικού ελέγχου του HCV στο αίμα έχει μειώσει αισθητά τον κίνδυνο της ηπατίτιδας που σχετίζεται με τη μετάγγιση αίματος. Η συχνότητα εμφάνισης της μόλυνσης HCV είναι υψηλότερη σε σχέση με την ενδοφλέβια χρήση ναρκωτικών και σε μικρότερο βαθμό με άλλες διαδερμικές εκθέσεις 4. Η παγκόσμια επικράτηση της μόλυνσης HCV, όπως προσδιορίστηκε από την ανοσοορολογία, κυμαίνεται από 0,6% στον Καναδά έως 1,5% στην Ιαπωνία 3. Οι ρυθμοί αυθόρμητης ιικής κάθαρσης σε άτομα που έχουν εκτεθεί στον ιό είναι εξαιρετικά μεταβλητοί. Ποσοστό μεταξύ 10 και 60% έχει αναφερθεί ότι μετρήθηκε κλινικά μέσω κανονικοποίησης των ηπατικών ενζύμων και κάθαρσης του HCV RNA πλάσματος 5. Τα σωματίδια του ιού HCV δεν μπορούν να καλλιεργηθούν από μολυσμένα δείγματα αίματος. Συνεπώς, η παρουσία αντισωμάτων anti-hcv σε ασθενείς που έχουν μολυνθεί με HCV οδήγησε στην ανάπτυξη ανοσοορολογικών αναλύσεων που είναι ειδικές για αυτά τα αντισώματα. Η παρουσία των αντισωμάτων anti-hcv, ωστόσο, είναι μια μέτρηση για προηγηθείσα έκθεση σε μόλυνση HCV, αλλά δεν μπορεί να θεωρηθεί ένδειξη για τρέχουσα μόλυνση. Η μέτρηση των επιπέδων της τρανσφεράσης της αλανίνης (ALT) θεωρείται υποκατάστατος δείκτης της μόλυνσης HCV, αλλά δεν αποτελεί άμεση μέτρηση της ιαιμίας. Εναλλακτικά, η ανίχνευση του HCV RNA με εξετάσεις νουκλεϊκού οξέος μπορεί να παρέχει στοιχεία για την τρέχουσα μόλυνση. Με τη χρήση εξετάσεων νουκλεϊκού οξέος, είναι δυνατή η ανίχνευση της ιαιμίας HCV πριν την ανοσολογική ορομετατροπή 6,7. Εφόσον είναι δυνατή η άμεση ανίχνευση του HCV RNA με τις εξετάσεις νουκλεϊκού οξέος, δηλ. ανεξαρτήτως της ανοσολογικής κατάστασης του ασθενή, μια εξέταση με βάση τα νουκλεϊκά οξέα έχει μεγάλη αξία όσον αφορά την ανίχνευση HCV RNA σε ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς 8. ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 είναι μια εξέταση ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος για την ανίχνευση του RNA του Ιού Ηπατίτιδας C (HCV) σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα EDTA. Η προετοιμασία δειγμάτων αυτοματοποιείται με τη χρήση του COBAS AmpliPrep Οργάνου με αυτοματοποιημένη ενίσχυση και ανίχνευση με τη χρήση του COBAS TaqMan Aναλυτή ή του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή. Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 βασίζεται σε τρεις κύριες διαδικασίες: (1) προετοιμασία δειγμάτων για απομόνωση του HCV RNA, (2) αντίστροφη μεταγραφή του RNA στόχου για δημιουργία συμπληρωματικού DNA (cdna) και (3) ταυτόχρονη ενίσχυση PCR του cdna στόχου και ανίχνευση διπλά επισημασμένων διασπώμενων ολιγονουκλεοτιδικών ιχνηθετών ανίχνευσης ειδικών για το στόχο. Προετοιμασία Δειγμάτων Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 χρησιμοποιεί αυτοματοποιημένη προετοιμασία δειγμάτων στο COBAS AmpliPrep Όργανο με τη γενική τεχνική δέσμευσης σε βάση διοξειδίου του πυριτίου. Ο όγκος εισόδου δείγματος είναι 650 µl, ενώ η διαδικασία περιλαμβάνει την επεξεργασία 500 µl πλάσματος EDTA ή ορού. Πραγματοποιείται λύση των σωματιδίων του ιού HCV μέσω επώασης σε υψηλή θερμοκρασία με πρωτεάση και χαοτροπικό ρυθμιστικό διάλυμα λύσης/δέσμευσης που απελευθερώνει νουκλεϊκά οξέα και προστατεύει το απελευθερωμένο HCV RNA από RNase σε ορό ή πλάσμα EDTA. Σε κάθε δείγμα εισάγεται πρωτεάση και ένας γνωστός αριθμός μορίων RNA Εσωτερικού Προτύπου Ελέγχου (IC) HCV με το αντιδραστήριο λύσης και τα μαγνητικά σωματίδια γυαλιού. Στη συνέχεια, το μίγμα επωάζεται και το HCV RNA και το HCV IC RNA δεσμεύονται στην επιφάνεια των μαγνητικών σωματιδίων γυαλιού. Οι αδέσμευτες ουσίες όπως άλατα, πρωτεΐνες και άλλες κυτταρικές ακαθαρσίες, απομακρύνονται με την πλύση των μαγνητικών σωματιδίων γυαλιού. Μετά το διαχωρισμό των σωματιδίων και την ολοκλήρωση των βημάτων πλύσης, τα νουκλεϊκά οξέα που προσροφήθηκαν εκλούονται με υδατικό διάλυμα σε υψηλή θερμοκρασία. Το επεξεργασμένο δείγμα, που περιέχει το απελευθερωμένο HCV RNA και το HCV IC RNA, προστίθεται στο μίγμα ενίσχυσης και μεταφέρεται στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή EL 2 Doc Rev. 1.0

3 Αντίστροφη Μεταγραφή και Ενίσχυση PCR Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 χρησιμοποιεί αντίστροφη μεταγραφή του HCV RNA σε συμπληρωματικό DNA (cdna) και ενίσχυση PCR του cdna με εκκινητές που καθορίζουν μια αλληλουχία μέσα στην υψηλής διατήρησης περιοχή της 5'-μη μεταφραζόμενης περιοχής του γονιδιώματος HCV 9. Η αλληλουχία νουκλεοτιδίων των εκκινητών έχει βελτιστοποιηθεί για την επίτευξη συγκρίσιμης ενίσχυσης των γονότυπων 1 έως 6 του HCV. Η αντίστροφη μεταγραφή και η αντίδραση ενίσχυσης PCR εκτελείται με ένα βελτιστοποιημένο μίγμα θερμοσταθερών ανασυνδυασμένων ενζύμων: ZO5 και ZO5D DNA Πολυμεράση. Παρουσία μαγγανίου (Mn 2+ ) και με τις κατάλληλες συνθήκες ρυθμιστικού διαλύματος, τα ZO5 και ZO5D παρουσιάζουν δραστηριότητα ανάστροφης μεταγραφάσης καθώς και DNA πολυμεράσης. Αυτό επιτρέπει την εκτέλεση αντίστροφης μεταγραφής και ενίσχυσης PCR παράλληλα με την ανίχνευση του κλώνου (amplicon) σε πραγματικό χρόνο. Τα επεξεργασμένα δείγματα προστίθενται στο μίγμα ενίσχυσης σε σωληνάρια ενίσχυσης (K-tube), στα οποία πραγματοποιείται αντίστροφη μεταγραφή και ενίσχυση PCR. Το μίγμα αντίδρασης θερμαίνεται για να επιτρέψει στον αντινοηματικό εκκινητή να υβριδιστεί ειδικά με το RNA στόχο του HCV και το HCV IC RNA. Με την παρουσία Mn 2+ και πλεονάσματος τριφωσφορικών δεοξυνουκλεοζιτών (dntp), καθώς και τριφωσφορικής δεοξυαδενοσίνης, δεοξυγουανοσίνης, δεοξυκυτιδίνης και δεοξυουριδίνης, οι πολυμεράσες ZO5 και ZO5D επιμηκύνουν τους υβριδισμένους εκκινητές σχηματίζοντας έναν κλώνο DΝA συμπληρωματικό προς το RNA στόχο. Ενίσχυση Στόχου Μετά την αντίστροφη μεταγραφή του RNA στόχου του HCV και του HCV IC RNA, ο Θερμοκυκλοποιητής στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή θερμαίνει το μίγμα αντίδρασης για την αποδιάταξη του υβριδίου RNA:cDNA και την έκθεση των ειδικών αλληλουχιών στόχου εκκινητή. Καθώς το μίγμα ψύχεται, οι εκκινητές υβριδίζονται στο cdna στόχο. Οι θερμοσταθερές DNA Πολυμεράσες (ZO5 και ZO5D), με την παρουσία Mn 2+ και πλεονάσματος τριφωσφορικών δεοξυνουκλεοτιδίων (dntp), επιμηκύνουν τους υβριδισμένους εκκινητές κατά μήκος του προτύπου στόχου, με αποτέλεσμα τη δημιουργία ενός δίκλωνου μορίου DNA που ονομάζεται κλώνος (amplicon). Ο COBAS TaqMan Αναλυτής ή ο COBAS TaqMan 48 Αναλυτής επαναλαμβάνει αυτόματα τη διαδικασία αυτή για έναν καθορισμένο αριθμό κύκλων, καθένας από τους οποίους προορίζεται για το διπλασιασμό του DNA κλώνου (amplicon). Ο απαιτούμενος αριθμός κύκλων προγραμματίζεται εκ των προτέρων στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή. Η ενίσχυση πραγματοποιείται μόνο στην περιοχή του γονιδιώματος HCV μεταξύ των εκκινητών. Δεν ενισχύεται ολόκληρο το γονιδίωμα HCV. Επιλεκτική Ενίσχυση Η επιλεκτική ενίσχυση του νουκλεϊκού οξέος στόχου από το δείγμα επιτυγχάνεται με το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 με τη χρήση του ενζύμου AmpErase (ουρακίλη-ν-γλυκοζυλάση) και της τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης (dutp). Το ένζυμο AmpErase αναγνωρίζει και καταλύει τη διάσπαση των κλώνων DNA που περιέχουν δεοξυουριδίνη 10, αλλά όχι του DNA που περιέχει δεοξυθυμιδίνη. Η δεοξυουριδίνη δεν υπάρχει στο φυσικό DNA, αλλά υπάρχει πάντοτε στον κλώνο (amplicon) λόγω της χρήσης τριφωσφορικής δεοξυουριδίνης ως ενός από τα dntp του αντιδραστηρίου Κύριου Μίγματος. Για το λόγο αυτό, μόνο ο κλώνος (amplicon) περιέχει δεοξυουριδίνη. Η δεοξυουριδίνη καθιστά το μολυσματικό κλώνο (amplicon) ευαίσθητο στη διάσπαση από το ένζυμο AmpErase πριν από την ενίσχυση του DNA στόχου. Επίσης, οποιοδήποτε μη ειδικό προϊόν που σχηματίζεται μετά την αρχική ενεργοποίηση του Κύριου Μίγματος από μαγγάνιο καταστρέφεται από το ένζυμο AmpErase. To ένζυμο AmpErase, που περιλαμβάνεται στο αντιδραστήριο Κύριου Μίγματος, καταλύει την απομάκρυνση των καταλοίπων δεοξυουριδίνης από το DNA που περιέχει δεοξυουριδίνη ανοίγοντας την αλυσίδα της δεοξυριβόζης στη θέση C1. Όταν θερμαίνεται στο πρώτο βήμα θερμοκυκλοποίησης, η αλυσίδα DNA του κλώνου (amplicon) διασπάται στη θέση της δεοξυουριδίνης, καθιστώντας το DNA μη ενισχύσιμο. Το ένζυμο AmpErase παραμένει αδρανές για παρατεταμένο χρονικό διάστημα μόλις εκτεθεί σε θερμοκρασίες πάνω από 55 C, δηλαδή σε όλα τα βήματα της θερμοκυκλοποίησης και για το λόγο αυτόν δεν καταστρέφει τον κλώνο (amplicon) στόχο που δημιουργείται κατά τη διάρκεια της αντίδρασης PCR EL 3 Doc Rev. 1.0

4 Ανίχνευση διπλά επισημασμένων διασπώμενων εκκινητών και HCV RNA Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 χρησιμοποιεί τεχνολογία PCR πραγματικού χρόνου 16,17. Η χρήση ιχνηθετών με διπλή φθορίζουσα επισήμανση επιτρέπει την ανίχνευση της συσσώρευσης προϊόντων PCR σε πραγματικό χρόνο παρακολουθώντας την ένταση εκπομπής των φθοριζουσών χρωστικών αναφορέα (reporter) που απελευθερώνονται κατά τη διαδικασία της ενίσχυσης. Οι ιχνηθέτες αποτελούνται από ειδικούς για το HCV και το HCV IC ολιγονουκλεοτιδικούς ιχνηθέτες με χρωστική αναφορέα (reporter) και παρεμποδιστή (quencher). Στο COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0, οι ιχνηθέτες HCV και HCV IC επισημαίνονται με διαφορετικές φθορίζουσες χρωστικές αναφορέα (reporter). Όταν αυτοί οι ιχνηθέτες είναι ανέπαφοι, ο φθορισμός της χρωστικής αναφορέα (reporter) καταστέλλεται από την εγγύτητα της χρωστικής παρεμποδιστή (quencher), λόγω των φαινομένων μεταφοράς ενέργειας τύπου Förster. Στη διάρκεια της PCR, ο ιχνηθέτης υβριδίζεται σε μια αλληλουχία στόχο και διασπάται από την 5' 3' δραστηριότητα νουκλεάσης των θερμοσταθερών πολυμερασών DNA ZO5 και ZO5D. Μόλις απελευθερωθούν και αποχωριστούν οι χρωστικές αναφορέα (reporter) και παρεμποδιστή (quencher), δεν πραγματοποιείται πλέον παρεμπόδιση και η φθορίζουσα δραστηριότητα της χρωστικής αναφορέα (reporter) αυξάνεται. Η ενίσχυση του HCV RNA και του HCV IC RNA μετρώνται ανεξάρτητα σε διαφορετικά μήκη κύματος. Η διαδικασία αυτή επαναλαμβάνεται για έναν καθορισμένο αριθμό κύκλων, καθένας από τους οποίους έχει ως αποτέλεσμα την αύξηση της έντασης εκπομπής των μεμονωμένων χρωστικών αναφορέα (reporter), επιτρέποντας την ανεξάρτητη ταυτοποίηση του HCV RNA και του HCV IC RNA. Στις διαδικασίες ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος, η αποτελεσματικότητα μπορεί να μειωθεί από αναστολείς που ενδέχεται να είναι παρόντες στο δείγμα. Το HCV IC προστέθηκε στο COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 για τον εντοπισμό των επεξεργασμένων δειγμάτων τα οποία περιέχουν ουσίες που ενδέχεται να αλληλεπιδράσουν με την ενίσχυση PCR. Το HCV IC είναι μια μη μολυσματική σύνθεση armored RNA (arna) που περιέχει τμήματα αλληλουχιών HCV με τις ίδιες ακριβώς περιοχές δέσμευσης εκκινητή με το RNA στόχο του HCV και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη που επιτρέπει το διαχωρισμό του κλώνου (amplicon) του HCV IC από τον κλώνο (amplicon)- στόχο του HCV. Χρησιμοποιείται ως ορός ελέγχου εκχύλισης και ενίσχυσης για κάθε ανεξάρτητα επεξεργασμένο δείγμα. Κατά τη διάρκεια της φάσης της επιμήκυνσης της PCR στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή, τα δείγματα εκτίθενται σε φως και διεγείρονται από φιλτραρισμένο φως, ενώ τα δεδομένα εκπομπής φθορισμού συλλέγονται φιλτραρισμένα για κάθε δείγμα. Στη συνέχεια, οι τιμές κάθε δείγματος διορθώνονται για τυχόν διακυμάνσεις που προκύπτουν από το όργανο. Αυτές οι τιμές φθορισμού αποστέλλονται από το όργανο στο AMPLILINK λογισμικό και αποθηκεύονται σε βάση δεδομένων. Εκτελούνται προέλεγχοι για να προσδιοριστεί εάν τα δεδομένα του HCV RNA και του HCV IC RNA αντιπροσωπεύουν έγκυρα σετ και το σύστημα δημιουργεί ενδείξεις όταν τα δεδομένα βρίσκονται εκτός των προκαθορισμένων ορίων. Μετά την επιτυχή ολοκλήρωση όλων των προελέγχων, οι τιμές φθορισμού υποβάλλονται σε επεξεργασία για τη δημιουργία τιμών Ct για το HCV RNA και το HCV IC RNA. Τα αποτελέσματα αναφέρονται ως θετικά ή αρνητικά EL 4 Doc Rev. 1.0

5 ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 (P/N: ) HCVQLV2 72 Εξετάσεις HCV QL v2.0 CS1 (Κασέτα Αντιδραστηρίου Μαγνητικών Σωματιδίων Γυαλιού HCV) Μαγνητικά σωματίδια γυαλιού Ρυθμιστικό διάλυμα Tris 0,09% Αζίδιο του νατρίου 0,1% Μεθυλπαραμπένη HCV QL v2.0 CS2 (Κασέτα Αντιδραστηρίου Λύσης HCV) Διένυδρο κιτρικό νάτριο 42,5% Θειοκυανική γουανιδίνη < 6% Πολιδοκανόλη 0,9% Διθειοθρεϊτόλη Xn 42,5% (w/w) Θειοκυανική γουανιδίνη 1 x 72 Εξετάσεις 1 x 72 Εξετάσεις Επιβλαβές R20/21/22-R52/53-R32: Επιβλαβές όταν εισπνέεται, σε επαφή με το δέρμα και σε περίπτωση καταπόσεως. Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, μπορεί να προκαλέσει μακροχρόνιες δυσμενείς επιπτώσεις στο υδάτινο περιβάλλον. Σε επαφή με οξέα ελευθερώνονται πολύ τοξικά αέρια. S13-S61: Μακριά από τρόφιμα, ποτά και ζωοτροφές. Αποφύγετε την ελευθέρωσή του στο περιβάλλον. Αναφερθείτε σε ειδικές οδηγίες/δελτίο δεδομένων ασφαλείας. Xn < 6% Πολιδοκανόλη Επιβλαβές R22-R41-R50: Επιβλαβές σε περίπτωση καταπόσεως. Κίνδυνος σοβαρών οφθαλμικών βλαβών. Πολύ τοξικό για τους υδρόβιους οργανισμούς. S26-S39-S61: Σε περίπτωση επαφής με τα μάτια πλύνετέ τα αμέσως με άφθονο νερό και ζητήστε ιατρική συμβουλή. Χρησιμοποιείτε συσκευή προστασίας ματιών/προσώπου. Αποφύγετε την ελευθέρωσή του στο περιβάλλον. Αναφερθείτε σε ειδικές οδηγίες/δελτίο δεδομένων ασφαλείας EL 5 Doc Rev. 1.0

6 HCV QL v2.0 CS3 Κασέτα Πολλαπλού Αντιδραστηρίου HCV που περιέχει: Pase (Διάλυμα Πρωτεϊνάσης) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris < 0,05% EDTA Χλωριούχο ασβέστιο Οξικό ασβέστιο 7,8% Πρωτεϊνάση Γλυκερόλη Xn 7,8% (w/w) Πρωτεϊνάση 1 x 72 Εξετάσεις 1 x 3,8 ml Επιβλαβές R37/38-R41-R42: Ερεθίζει το αναπνευστικό σύστημα και το δέρμα. Κίνδυνος σοβαρών οφθαλμικών βλαβών. Μπορεί να προκαλέσει ευαισθητοποίηση όταν εισπνέεται. S22-S24-S26-S36/37/39: Μη αναπνέετε την σκόνη. Αποφεύγετε την επαφή με το δέρμα. Σε περίπτωση επαφής με τα μάτια πλύνετέ τα αμέσως με άφθονο νερό και ζητήστε ιατρική συμβουλή. Φοράτε κατάλληλη προστατευτική ενδυμασία, γάντια και συσκευή προστασίας ματιών/προσώπου. EB (Ρυθμιστικό Διάλυμα Έκλουσης) Ρυθμιστικό διάλυμα με βάση tris 0,09% Αζίδιο του νατρίου HCV QL v2.0 CS4 Κασέτα Αντιδραστηρίου Ειδική για την Εξέταση HCV που περιέχει: IC (Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου HCV) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris EDTA < 0,002% Poly ra RNA (συνθετικό) < 0,001% Σύνθεση Armored HCVRNA που περιέχει αλληλουχίες δέσμευσης εκκινητή HCV και μια μοναδική περιοχή δέσμευσης ιχνηθέτη (μη μολυσματικό RNA σε βακτηριοφάγο MS2) 0,05% Αζίδιο του νατρίου MMX (HCV Κύριο Μίγμα) Ρυθμιστικό διάλυμα Tricine Οξικό κάλιο Υδροξείδιο του καλίου < 20% Διμεθυλοσουλφοξείδιο Γλυκερόλη < 0,004% datp, dctp, dgtp, dutp < 0,002% Νοηματικοί και αντινοηματικοί ανιχνευτές HCV στην περιοχή 5' UTR του HCV < 0,001% Ειδικοί για το HCV και το Εσωτερικό Πρότυπο Ελέγχου HCV ολιγονουκλεοτιδικοί ιχνηθέτες με φθορίζουσα επισήμανση < 0,001% Ολιγονουκλεοτιδικό απταμερές < 0,05% DNA πολυμερασών ZO5 και ZO5D (μικροβιακό) < 0,1% Ένζυμο AmpErase (ουρακίλη-n-γλυκοζυλάση) (μικροβιακό) 0,09% Αζίδιο του νατρίου 1 x 8,1 ml 1 x 72 Εξετάσεις 1 x 3,6 ml 1 x 3,5 ml EL 6 Doc Rev. 1.0

7 Mn 2+ (CAP/CTM Διάλυμα Μαγγανίου) < 0,5% Οξικό μαγγάνιο Παγόμορφο οξικό οξύ 0,09% Αζίδιο του νατρίου HCV (+) C, v2.0 (Θετικός Ορός Ελέγχου HCV) < 0,001% Σύνθεση Armored HCV RNA που περιέχει αλληλουχίες HCV (μη μολυσματικό RNA σε βακτηριοφάγο MS2) Αρνητικό Ανθρώπινο Πλάσμα, μη αντιδρών σύμφωνα με εξετάσεις ανίχνευσης αντισωμάτων HCV, αντισωμάτων HIV-1/2, HIV p24 αντιγόνου και HBsAg. Τα HIV-1 RNA, HCV RNA και HBV DNA δεν ανιχνεύτηκαν με μεθόδους PCR. 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 Xi Μίγμα (3:1) 5-Χλωρο-2-μεθυλο-2H-ισοθειαζολ-3-όνης και 2-μεθυλο-2H-ισοθειαζολ-3-όνης 1 x 19,8 ml 6 x 0,85 ml Ερεθιστικό R36/38: Ερεθίζει τα μάτια και το δέρμα. R43: Μπορεί να προκαλέσει ευαισθητοποίηση σε επαφή µε το δέρμα. CTM ( ) C [COBAS TaqMan Αρνητικός Ορός Ελέγχου (Ανθρώπινο Πλάσμα)] Αρνητικό Ανθρώπινο Πλάσμα, μη αντιδρών σύμφωνα με εξετάσεις ανίχνευσης αντισωμάτων HCV, αντισωμάτων HIV-1/2, HIV p24 αντιγόνου και HBsAg. Τα HIV-1 RNA, HCV RNA και HBV DNA δεν ανιχνεύτηκαν με μεθόδους PCR. 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 Xi Μίγμα (3:1) 5-Χλωρο-2-μεθυλο-2H-ισοθειαζολ-3-όνης και 2-μεθυλο-2H-ισοθειαζολ-3-όνης 6 x 1,0 ml Ερεθιστικό R36/38: Ερεθίζει τα μάτια και το δέρμα. R43: Μπορεί να προκαλέσει ευαισθητοποίηση σε επαφή µε το δέρμα. HCV (+) C, v2.0 Clip (Κλιπ Γραμμωτού Κώδικα Θετικού Ορού Ελέγχου HCV) HCV ( ) C, v2.0 Clip (Κλιπ Γραμμωτού Κώδικα Αρνητικού Ορού Ελέγχου HCV) 1 x 6 Κλιπ 1 x 6 Κλιπ COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Wash Reagent PG WR 1 x 5,1 L COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Αντιδραστήριο Πλύσης (P/N: ) PG WR (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Αντιδραστήριο Πλύσης) Διένυδρο κιτρικό νάτριο < 0,1% N-μεθυλισοθειαζολόνη-HCl EL 7 Doc Rev. 1.0

8 ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Όπως συμβαίνει με όλες τις διαδικασίες εξέτασης, η ορθή εργαστηριακή πρακτική είναι απαραίτητη για τη σωστή εκτέλεση αυτής της ανάλυσης. Λόγω της υψηλής ευαισθησίας της παρούσας εξέτασης, θα πρέπει να είστε ιδιαίτερα προσεκτικοί ώστε να αποφευχθεί η μόλυνση των αντιδραστηρίων και των μιγμάτων ενίσχυσης. A. ΓΙΑ IN VITRO ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ. B. Η παρούσα εξέταση προορίζεται για χρήση μόνο με ανθρώπινο ορό ή πλάσμα που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό EDTA. Γ. Μην αναρροφάτε με πιπέτα από το στόμα. Δ. Απαγορεύεται η κατανάλωση τροφίμων και ποτών και το κάπνισμα στους χώρους εργασίας των εργαστηρίων. Φοράτε προστατευτικά γάντια μίας χρήσης, ποδιές εργαστηρίου και προστατευτικά γυαλιά κατά το χειρισμό δειγμάτων και αντιδραστηρίων των κιτ. Πλένετε καλά τα χέρια σας μετά το χειρισμό δειγμάτων και αντιδραστηρίων εξέτασης. E. Αποφεύγετε τη μόλυνση των αντιδραστηρίων από μικρόβια και ριβονουκλεάση όταν αφαιρείτε τις μερίδες δείγματος από τις φιάλες ορών ελέγχου. ΣΤ. Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένων πιπετών μιας χρήσης με ακροφύσια ελεύθερα από RNase. Ζ. Μη συνδυάζετε ορούς ελέγχου από διαφορετικές παρτίδες ή από διαφορετικά φιαλίδια της ίδιας παρτίδας. H. Μην αναμιγνύετε κασέτες αντιδραστηρίων ή ορούς ελέγχου από διαφορετικά κιτ. Θ. Μην ανοίγετε τις κασέτες COBAS AmpliPrep και μην αλλάζετε, αναμιγνύετε, αφαιρείτε ή προσθέτετε φιάλες. Ι. Η απόρριψη των αχρησιμοποίητων αντιδραστηρίων, των απορριμμάτων και των δειγμάτων θα πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς. ΙΑ. Μη χρησιμοποιείτε κιτ μετά την ημερομηνία λήξης τους. ΙΒ. Διατίθενται Δελτία Δεδομένων Ασφάλειας Υλικών (MSDS) κατόπιν αίτησης από τα τοπικά γραφεία της Roche. ΙΓ. Τα δείγματα και οι οροί ελέγχου θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να εκτελείται σύμφωνα με τις ασφαλείς εργαστηριακές πρακτικές, όπως αυτές περιγράφονται στην τεκμηρίωση Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 11 και στο Έγγραφο CLSI M29-A3 12. Καθαρίζετε καλά και απολυμαίνετε όλες τις επιφάνειες εργασίας με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απιονισμένο ή απoσταγμένο νερό. ΙΔ. Τα CTM ( ) C και HCV (+) C, v2.0 περιέχουν Ανθρώπινο Πλάσμα που προέρχεται από ανθρώπινο αίμα. Το υλικό προέλευσης έχει ελεγχθεί και έχει βρεθεί μη αντιδρών για την παρουσία Αντιγόνου Επιφανείας Ηπατίτιδας Β (HBsAg), αντισωμάτων HIV-1/2 και HCV και HIV p24 Αντιγόνου. Η εξέταση του αρνητικού ανθρώπινου πλάσματος με τις μεθόδους PCR δεν έδειξε ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1, του HCV ή DNA του HBV. Καμία γνωστή μέθοδος εξέτασης δεν διασφαλίζει απόλυτα ότι τα παράγωγα που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα δεν μεταδίδουν μολυσματικούς παράγοντες. Συνεπώς, όλα τα υλικά ανθρώπινης προέλευσης, συμπεριλαμβανομένων των CTM ( ) C και HCV (+) C, v2.0 πρέπει να θεωρούνται εν δυνάμει μολυσματικά. ΙΕ. Τα EB, IC, Mn 2+ και MMX περιέχουν αζίδιο του νατρίου. Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με το μόλυβδο και το χαλκό των σωληνώσεων και να δημιουργήσει υψηλής εκρηκτικότητας αζίδια μετάλλου. Κατά την απόρριψη διαλυμάτων που περιέχουν αζίδιο του νατρίου στους νεροχύτες των εργαστηρίων, ρίχνετε άφθονη ποσότητα νερού για να αποφευχθεί ο σχηματισμός αζιδίων EL 8 Doc Rev. 1.0

9 ΙΣΤ. Φοράτε προστατευτικά γυαλιά, ποδιές εργαστηρίου και γάντια μίας χρήσης όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια. Αποφεύγετε την επαφή των υλικών αυτών με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού. Αν δεν υπάρξει άμεση αντιμετώπιση, μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Σε περίπτωση διαρροής αυτών των αντιδραστηρίων, αραιώστε με νερό πριν τα σκουπίσετε. ΙΖ. Μην επιτρέπετε την επαφή μεταξύ του HCV QL v2.0 CS2 και υγρών αποβλήτων, συμπεριλαμβανομένων των χρησιμοποιημένων COBAS AmpliPrep Μονάδων Επεξεργασίας Δειγμάτων (SPU) από το COBAS AmpliPrep Όργανο, που περιέχουν θειοκυανική γουανιδίνη, με το διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου (λευκαντικό). Τα μίγματα αυτά μπορεί να παράγουν ένα ιδιαίτερα τοξικό αέριο. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΧΕΙΡΙΣΜΟΥ A. Αποθηκεύετε τα HCV QL v2.0 CS1, HCV QL v2.0 CS2, HCV QL v2.0 CS3 και HCV QL v2.0 CS4 στους 2-8 C. Τα αντιδραστήρια που δεν έχουν χρησιμοποιηθεί παραμένουν σταθερά μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μετά το άνοιγμα, τα αντιδραστήρια αυτά παραμένουν σταθερά για 70 ημέρες στους 2-8 C ή μέχρι την ημερομηνία λήξης, ανάλογα με την κατάσταση που θα επέλθει πρώτη. Τα HCV QL v2.0 CS1, HCV QL v2.0 CS2, HCV QL v2.0 CS3 και HCV QL v2.0 CS4 μπορούν να χρησιμοποιηθούν για έως και 96 ώρες συνολικά μετά την τοποθέτησή τους στο COBAS AmpliPrep Όργανο. Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποθηκεύονται στους 2-8 C μεταξύ των κύκλων των οργάνων. B. Αποθηκεύετε τα HCV (+) C, v2.0 και CTM ( ) C στους 2-8 C. Οι οροί ελέγχου παραμένουν σταθεροί μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μετά το άνοιγμα, η ποσότητα που δεν έχει χρησιμοποιηθεί πρέπει να απορρίπτεται. Γ. Αποθηκεύετε τα κλιπ Γραμμωτού κώδικα [HCV (+) C, v2.0 Clip και HCV ( ) C, v2.0 Clip] στους 2-30 C. Δ. Αποθηκεύετε το PG WR στους 2-30 C. Το PG WR που δεν έχει χρησιμοποιηθεί παραμένει σταθερό μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης. Μετά το άνοιγμα, το αντιδραστήριο αυτό παραμένει σταθερό για 28 ημέρες στους 2-30 C ή μέχρι την ημερομηνία λήξης, ανάλογα με την κατάσταση που θα παρέλθει πρώτη EL 9 Doc Rev. 1.0

10 ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 HCVQLV2 HCV QL v2.0 CS1 (Κασέτα Αντιδραστηρίου Μαγνητικών Σωματιδίων Γυαλιού HCV) HCV QL v2.0 CS2 (Κασέτα Αντιδραστηρίου Λύσης HCV) HCV QL v2.0 CS3 (Κασέτα Πολλαπλών Αντιδραστηρίων HCV) HCV QL v2.0 CS4 (Κασέτα Αντιδραστηρίου Ειδική για την Εξέταση HCV) HCV (+) C, v2.0 (Θετικός Ορός Ελέγχου HCV) CTM ( ) C [COBAS TaqMan Αρνητικός Ορός Ελέγχου (Ανθρώπινο Πλάσμα)] HCV (+) C, v2.0 Clip (Κλιπ Γραμμωτού Κώδικα Θετικού Ορού Ελέγχου HCV) HCV ( ) C, v2.0 Clip (Κλιπ Γραμμωτού Κώδικα Αρνητικού Ορού Ελέγχου HCV) COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Wash Reagent COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Αντιδραστήριο Πλύσης PG WR PG WR (COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan Αντιδραστήριο Πλύσης) ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Όργανα και Λογισμικό COBAS AmpliPrep Όργανο COBAS TaqMan Αναλυτής ή COBAS TaqMan 48 Αναλυτής Docking Station (προαιρετικό) cobas p 630 όργανο (προαιρετικό) AMPLILINK λογισμικό - έκδοση σειράς 3.3 Σταθμός Δεδομένων για το AMPLILINK λογισμικό, με εκτυπωτή Εγχειρίδια οργάνου και λογισμικού: Εγχειρίδιο Εφαρμογής AMPLILINK λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.3 για χρήση με το COBAS AmpliPrep όργανο, τον COBAS TaqMan αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 αναλυτή, τον COBAS AMPLICOR αναλυτή και το cobas p 630 όργανο Εγχειρίδιο COBAS AmpliPrep Οργάνου για χρήση με τον COBAS TaqMan Αναλυτή, τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή, τον COBAS AMPLICOR Αναλυτή ή το cobas p 630 όργανο και το AMPLILINK Λογισμικό, Έκδοση Σειράς 3.2 και 3.3 Εγχειρίδιο Οργάνου του COBAS TaqMan αναλυτή (και του προαιρετικού docking station) για χρήση με το Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK λογισμικού, έκδοση σειράς 3.2 και 3.3 Εγχειρίδιο Οργάνου του COBAS TaqMan 48 αναλυτή για χρήση με το Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK λογισμικού, έκδοση σειράς 3.2 και 3.3 Εγχειρίδιο Χειριστή cobas p 630 οργάνου, Έκδοση Λογισμικού 2.2 (προαιρετικό) EL 10 Doc Rev. 1.0

11 Άλλα Υλικά Υποδοχέας Δειγμάτων (υποδοχέας SK24) Υποδοχέας Αντιδραστηρίων Υποδοχέας SPU K-carrier Σύστημα μεταφοράς K-carrier Υποδοχέας K-carrier Συσκευές πιπέτας με ακροφύσια φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης χωρίς RNase (χωρητικότητα µl). Το εύρος ακρίβειας των συσκευών πιπέτας πρέπει να είναι μέχρι 3% του δηλούμενου όγκου. Τα ακροφύσια με φραγή αερολυμάτων ή θετική μετατόπιση χωρίς RNase πρέπει να χρησιμοποιούνται για την αποφυγή της διασταυρούμενης μόλυνσης των δειγμάτων και των κλώνων (amplicon). Γάντια μίας χρήσης, χωρίς πούδρα Αναδευτήρας τύπου Vortex Αναλώσιμα Μονάδες Επεξεργασίας Δειγμάτων (SPU) Σωληνάριο εισόδου δείγματος (S-tube) με κλιπ γραμμωτού κώδικα Υποδοχέας K-tip Κιβώτιο των 12 x 96 K-tube ΣΥΛΛΟΓΗ, ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όλα τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται ανάλογα. Συλλογή και Αποθήκευση Δειγμάτων Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 προορίζεται για χρήση με δείγματα ορού ή πλάσματος EDTA. Το αίμα πρέπει να συλλέγεται σε Σωληνάρια Διαχωρισμού Ορού SST, σε Σωληνάρια Προετοιμασίας Πλάσματος BD Vacutainer PPT για Μεθόδους Μοριακής Διαγνωστικής Εξέτασης ή σε αποστειρωμένα σωληνάρια χρησιμοποιώντας EDTA (μοβ πώμα) ως αντιπηκτικό. Ακολουθείτε τις οδηγίες του κατασκευαστή για το χειρισμό των σωληναρίων συλλογής. Τα φρέσκα δείγματα συλλογής (ολικό αίμα) μπορούν να αποθηκευτούν σε θερμοκρασία 2-25 C για έως και 24 ώρες πριν από τη φυγοκέντριση. Μετά τη φυγοκέντριση, μεταφέρετε τον ορό ή το πλάσμα EDTA σε αποστειρωμένο σωληνάριο πολυπροπυλενίου. Συνιστάται η αποθήκευση των δειγμάτων σε μερίδες των µl σε αποστειρωμένα σωληνάρια πολυπροπυλενίου 2,0 ml με βιδωτό πώμα (όπως το μικροσωληνάριο 2 ml με βιδωτό πώμα Sarstedt). Τα δείγματα ορού ή πλάσματος EDTA μπορούν να αποθηκευτούν ως εξής: Στους 2-8 C έως και 72 ώρες Στους -20 C ή -80 C για έως και 6 εβδομάδες Τα δείγματα ορού και πλάσματος EDTA μπορούν να καταψυχθούν και να αποψυχθούν έως και πέντε φορές χωρίς απώλεια του HCV RNA. Μεταφορά Δειγμάτων Η μεταφορά του ολικού αίματος, του ορού ή του πλάσματος EDTA πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους κρατικούς και τοπικούς κανονισμούς που αφορούν στη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων 13. Το ολικό αίμα πρέπει να μεταφέρεται στους 2-25 C και να υποβάλλεται σε φυγοκέντριση εντός 24 ωρών από τη συλλογή. Το πλάσμα ή ο ορός EDTA πρέπει να μεταφέρονται σε θερμοκρασία 2-8 C ή κατεψυγμένα σε θερμοκρασία -20 C ή -80 C EL 11 Doc Rev. 1.0

12 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Για λεπτομερείς οδηγίες λειτουργίας, μια περιγραφή των πιθανών διευθετήσεων, την εκτύπωση αποτελεσμάτων και την ερμηνεία ενδείξεων, σχολίων και μηνυμάτων σφάλματος, ανατρέξτε στα εγχειρίδια του AMPLILINK λογισμικού έκδοση σειράς 3.3, όπως αναφέρονται στην ενότητα «Όργανα και Λογισμικό». Μέγεθος Παρτίδας και Ροή Εργασιών Κάθε κιτ περιέχει αντιδραστήρια για 72 εξετάσεις, οι οποίες μπορούν να εκτελεστούν σε παρτίδες των 12 έως 24 εξετάσεων. Από κάθε ορό ελέγχου [CTM ( ) C και HCV (+) C, v2.0] πρέπει να περιλαμβάνεται τουλάχιστον ένας σε κάθε παρτίδα (βλ. ενότητα «Ποιοτικός έλεγχος»). Η ανάλυση του COBAS TaqMan Αναλυτή ή του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή πρέπει να ξεκινήσει εντός 240 λεπτών μετά την ολοκλήρωση της προετοιμασίας των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ ή ΑΠΟΘΗΚΕΥΕΤΕ τα επεξεργασμένα δείγματα και ορούς ελέγχου στους 2-8 C. Προετοιμασία Δειγμάτων και Ορών Ελέγχου Αν χρησιμοποιείτε κατεψυγμένα δείγματα, τοποθετήστε τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου έως την πλήρη απόψυξή τους και στροβιλίστε για 3-5 δευτερόλεπτα πριν από τη χρήση. Οι οροί ελέγχου θα πρέπει να απομακρύνονται από το χώρο αποθήκευσης σε θερμοκρασία 2-8 C, να περιέρχονται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος και να στροβιλίζονται για 3-5 δευτερόλεπτα πριν από τη χρήση. Ρύθμιση του COBAS AmpliPrep Οργάνου Μέρος Α. Συντήρηση και Εκκίνηση A1. Το COBAS AmpliPrep Όργανο είναι έτοιμο για λειτουργία στον τρόπο λειτουργίας αναμονής. A2. Ενεργοποιήστε το Σταθμό Δεδομένων για το AMPLILINK λογισμικό (ON). Προετοιμάστε το Σταθμό Δεδομένων ως εξής: α. Συνδεθείτε στα Windows XP. β. Κάντε διπλό κλικ στο εικονίδιο του AMPLILINK λογισμικού. γ. Συνδεθείτε στο AMPLILINK λογισμικό εισάγοντας τον καθορισμένο κωδικό χειριστή και τον κωδικό πρόσβασης. A3. Ελέγξτε την παροχή του PG WR χρησιμοποιώντας την οθόνη Status και αντικαταστήστε αν χρειάζεται. A4. Διεξαγάγετε όλες τις εργασίες συντήρησης που αναφέρονται στην καρτέλα Due. Το COBAS AmpliPrep Όργανο θα πραγματοποιήσει αυτόματη εκκίνηση στο σύστημα. Μέρος B. Φόρτωση Κασετών Αντιδραστηρίου ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όλες οι κασέτες αντιδραστηρίου θα πρέπει να απομακρύνονται από το χώρο αποθήκευσης σε θερμοκρασία 2-8 C, να φορτώνονται αμέσως στο COBAS AmpliPrep Όργανο και να περιέρχονται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος στο όργανο για τουλάχιστον 30 λεπτά πριν από την επεξεργασία του πρώτου δείγματος. Μην αφήσετε τις κασέτες αντιδραστηρίου να περιέλθουν σε θερμοκρασία περιβάλλοντος εκτός οργάνου, καθώς ενδέχεται να σχηματιστεί υγρασία στις ετικέτες γραμμωτού κώδικα. Μη σκουπίζετε την υγρασία από τις ετικέτες γραμμωτού κώδικα. B1. Τοποθετήστε το HCV QL v2.0 CS1 σε έναν υποδοχέα αντιδραστηρίων. Τοποθετήστε τα HCV QL v2.0 CS2, HCV QL v2.0 CS3 και HCV QL v2.0 CS4 σε έναν ξεχωριστό υποδοχέα αντιδραστηρίων. B2. Φορτώστε τον υποδοχέα αντιδραστηρίων που περιέχει το HCV QL v2.0 CS1 στη θέση υποδοχέα A του COBAS AmpliPrep Οργάνου. B3. Φορτώστε τον υποδοχέα αντιδραστηρίου που περιέχει τα HCV QL v2.0 CS2, HCV QL v2.0 CS3 και HCV QL v2.0 CS4 στη θέση υποδοχέα B, C, D ή E του COBAS AmpliPrep Οργάνου (για πρόσθετες και λεπτομερείς πληροφορίες, ανατρέξτε στα κατάλληλα Εγχειρίδια Οργάνων) EL 12 Doc Rev. 1.0

13 Μέρος Γ. Φόρτωση Αναλώσιμων ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Καθορίστε τον αριθμό των COBAS AmpliPrep κασετών αντιδραστηρίου, των Μονάδων Επεξεργασίας Δειγμάτων (SPU), των Σωληναρίων Δειγμάτων Εισόδου (S-tube), των K-tips και των K-tube που απαιτούνται. Απαιτείται μια μονάδα επεξεργασίας δείγματος (SPU), ένα S-tube Εισόδου, ένα K-tip και ένα Κ-tube για κάθε δείγμα ή ορό ελέγχου. Υπάρχει δυνατότητα πολλαπλών διευθετήσεων για χρήση του COBAS AmpliPrep Οργάνου με τον COBAS TaqMan Αναλυτή ή τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή. Ανάλογα με τη διευθέτηση που χρησιμοποιείται, φορτώστε τον κατάλληλο αριθμό υποδοχέων κασετών αντιδραστηρίου, υποδοχέων δειγμάτων με S-tube Εισόδου, υποδοχέων SPU, υποδοχέων K-tip, υποδοχέων K-tube και K-carrier σε υποδοχείς K-carrier στις αντίστοιχες θέσεις υποδοχέων του COBAS AmpliPrep Οργάνου. Γ1. Τοποθετήστε τις μονάδες επεξεργασίας δειγμάτων (SPU) στους υποδοχείς SPU και φορτώστε τους υποδοχείς στις θέσεις υποδοχέα J, K ή L του COBAS AmpliPrep Οργάνου. Γ2. Ανάλογα με τη διευθέτηση που χρησιμοποιείται, φορτώστε τους γεμάτους υποδοχείς K-tube στις θέσεις υποδοχέα M, N, O ή P του COBAS AmpliPrep Οργάνου. Γ3. Φορτώστε τους γεμάτους υποδοχείς K-tip στις θέσεις υποδοχέα M, N, O ή P του COBAS AmpliPrep Οργάνου. Γ4. Ανάλογα με τη διευθέτηση που χρησιμοποιείται, φορτώστε τα K-carrier στους υποδοχείς K-carrier στις θέσεις υποδοχέα M, N, O ή P του COBAS AmpliPrep Οργάνου. Μέρος Δ. Εντολή και Φόρτωση Δειγμάτων Δ1. Προετοιμάστε τους υποδοχείς δειγμάτων ως εξής: προσαρμόστε ένα κλιπ ετικέτας γραμμωτού κώδικα σε κάθε θέση υποδοχέα δειγμάτων όπου πρόκειται να τοποθετηθεί δείγμα (S-tube). Προσαρμόστε ένα από τα ειδικά για τους ορούς ελέγχου κλιπ ετικέτας γραμμωτού κώδικα [CTM ( ) C και HCV (+) C, v2.0] σε κάθε θέση υποδοχέα δείγματος όπου πρόκειται να τοποθετηθούν οροί ελέγχου (S-tube). Τα κλιπ ετικέτας γραμμωτού κώδικα για τους ορούς ελέγχου πρέπει να έχουν τον ίδιο αριθμό παρτίδας ορού ελέγχου με τον αριθμό παρτίδας που υπάρχει στα φιαλίδια ορού ελέγχου του κιτ. Φροντίστε να τοποθετήσετε το σωστό ορό ελέγχου στη θέση με το κατάλληλο κλιπ γραμμωτού κώδικα ορού ελέγχου. Τοποθετήστε ένα S-tube Εισόδου σε κάθε θέση που περιλαμβάνει ένα κλιπ ετικέτας γραμμωτού κώδικα. Δ2. Χρησιμοποιώντας το AMPLILINK λογισμικό, δημιουργήστε εντολές δείγματος για κάθε δείγμα και ορό ελέγχου στην καρτέλα Sample του παραθύρου Orders. Επιλέξτε το κατάλληλο αρχείο εξέτασης και ολοκληρώστε τη διαδικασία με αποθήκευση. Δ3. Αντιστοιχίστε τις εντολές δειγμάτων και ορών ελέγχου στις θέσεις υποδοχέα δειγμάτων στην καρτέλα Sample Rack του παραθύρου Orders. Ο αριθμός υποδοχέα δειγμάτων πρέπει να προορίζεται για τον υποδοχέα που προετοιμάστηκε στο Βήμα Δ1. Δ4. Εκτυπώστε την αναφορά Sample Rack Order για να τη χρησιμοποιήσετε ως φύλλο εργασίας. Δ5. Προετοιμάστε υποδοχείς δειγμάτων και ορών ελέγχου στην καθορισμένη περιοχή για προσθήκη δειγμάτων και ορών ελέγχου ως εξής: Στροβιλίστε κάθε δείγμα και ορό ελέγχου [CTM ( ) C και HCV (+) C, v2.0] για 3 έως 5 δευτερόλεπτα. Φροντίστε να μην μολυνθούν τα γάντια κατά το χειρισμό των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Δ6. Μεταφέρετε 650 µl κάθε δείγματος και ορού ελέγχου [CTM ( ) C και HCV (+) C, v2.0] στο αντίστοιχο S-tube Εισόδου με επισήμανση γραμμωτού κώδικα χρησιμοποιώντας μια συσκευή μικροπιπέτας με ακροφύσιο φραγής αερολυμάτων ή θετικής μετατόπισης χωρίς RNase. Αποφεύγετε τη μεταφορά σωματιδίων και/ ή θρόμβων ινώδους από το αρχικό δείγμα στο S-tube Εισόδου. Τα δείγματα και οι οροί ελέγχου θα πρέπει να μεταφέρονται σε θέσεις σωληναρίων όπως καθορίζεται και καταγράφεται στο φύλλο εργασίας στο βήμα Δ4. Τα κλιπ ετικέτας γραμμωτού κώδικα για τους ορούς ελέγχου πρέπει να έχουν τον ίδιο αριθμό παρτίδας ορού ελέγχου με τον αριθμό παρτίδας που υπάρχει στα φιαλίδια ορού ελέγχου του κιτ. Τοποθετήστε το σωστό ορό ελέγχου στη θέση με το κατάλληλο κλιπ γραμμωτού κώδικα ορού ελέγχου. Αποφεύγετε την επιμόλυνση του επάνω μέρους των S-tubes με δείγματα ή ορούς ελέγχου EL 13 Doc Rev. 1.0

14 Δ7. Αν χρησιμοποιείτε το cobas p 630 όργανο για την προετοιμασία δειγμάτων, ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χειριστή του cobas p 630 οργάνου. Δ8. Ανάλογα με τη διευθέτηση που χρησιμοποιείται, φορτώστε τους υποδοχείς δειγμάτων που είναι γεμάτοι με S-tube Εισόδου στις θέσεις υποδοχέα F, G ή H του COBAS AmpliPrep Οργάνου. Δ9. Ανάλογα με τη διευθέτηση που χρησιμοποιείται, φορτώστε τους υποδοχείς δειγμάτων με S-tube Εισόδου και K-tube (ένα για κάθε S-tube Εισόδου, φορτωμένο στη δεξιά θέση, δίπλα στα S-tube Εισόδου) στις θέσεις υποδοχέα F, G ή H του COBAS AmpliPrep Οργάνου. Μέρος E. Έναρξη ανάλυσης στο COBAS AmpliPrep Όργανο E1. Θέστε σε λειτουργία το COBAS AmpliPrep Όργανο χρησιμοποιώντας το AMPLILINK λογισμικό. Μέρος ΣΤ. Τερματισμός Ανάλυσης στο COBAS AmpliPrep Όργανο και Μεταφορά στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή (μόνο για χειροκίνητη μεταφορά) ΣΤ1. Ελέγξτε αν υπάρχουν τυχόν ενδείξεις ή μηνύματα σφάλματος. ΣΤ2. Μεταφέρετε τα δείγματα και τους ορούς ελέγχου που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία από το COBAS AmpliPrep Όργανο σε υποδοχείς δειγμάτων (για τον COBAS TaqMan Αναλυτή χωρίς Docking Station) ή σε υποδοχείς K-carrier (για τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή), ανάλογα με τη διευθέτηση. ΣΤ3. Απομακρύνετε τα απορρίμματα από το COBAS AmpliPrep Όργανο. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Όλα τα δείγματα και οι οροί ελέγχου που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία δεν πρέπει να εκτίθενται σε φως μετά την ολοκλήρωση της προετοιμασίας δειγμάτων και ορών ελέγχου. Ενίσχυση και Ανίχνευση Ρύθμιση του COBAS TaqMan Αναλυτή ή του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή Η ανάλυση του COBAS TaqMan Αναλυτή ή του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή πρέπει να ξεκινήσει εντός 240 λεπτών μετά την ολοκλήρωση της προετοιμασίας των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ ή ΑΠΟΘΗΚΕΥΕΤΕ τα επεξεργασμένα δείγματα και ορούς ελέγχου στους 2-8 C. Μέρος Ζ. Φόρτωση Δειγμάτων που Έχουν Υποβληθεί σε Επεξεργασία Ζ1. Ανάλογα με τη διευθέτηση του οργάνου, εκτελέστε τα κατάλληλα βήματα για τη μεταφορά των K-tube στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή: Μέρος Η. Έναρξη Ανάλυσης στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή H1. Έναρξη του COBAS TaqMan Αναλυτή ή του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή ανάλογα με τη διευθέτηση που χρησιμοποιείται. Μέρος Θ. Τερματισμός Ανάλυσης στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή Θ1. Μετά την ολοκλήρωση της ανάλυσης στον COBAS TaqMan Αναλυτή ή στον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή, εκτυπώστε την Αναφορά Αποτελεσμάτων. Ελέγξτε αν υπάρχουν τυχόν ενδείξεις ή μηνύματα σφάλματος στην Αναφορά αποτελεσμάτων. Δείγματα με ενδείξεις και σχόλια ερμηνεύονται σύμφωνα με την περιγραφή στην ενότητα «Αποτελέσματα». Μετά την αποδοχή, αποθηκεύστε τα δεδομένα σε αρχείο. Θ2. Αφαιρέστε τα χρησιμοποιημένα K-tube από τον COBAS TaqMan Αναλυτή ή από τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή EL 14 Doc Rev. 1.0

15 ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ Σε κάθε παρτίδα εξέτασης πρέπει να συμπεριληφθεί ένας COBAS TaqMan Αρνητικός Ορός Ελέγχου και ένας Θετικός Ορός Ελέγχου HCV. Η παρτίδα είναι έγκυρη, εάν δεν εμφανίζονται ενδείξεις για κανέναν ορό ελέγχου [HCV (+) C, v2.0 και CTM ( ) C]. Δεν υπάρχουν απαιτήσεις όσον αφορά τη θέση των ορών ελέγχου στον υποδοχέα δειγμάτων. Ελέγξτε αν υπάρχουν ενδείξεις και σχόλια στην εκτύπωση της παρτίδας για να βεβαιωθείτε ότι η παρτίδα είναι έγκυρη. Αρνητικός Ορός Ελέγχου Το CTM ( ) C πρέπει να δίνει αποτέλεσμα «Negative». Αν το CTM ( ) C επισημαίνεται ως μη έγκυρο, τότε ολόκληρη η παρτίδα είναι μη έγκυρη. Επαναλάβετε ολόκληρη τη διαδικασία (προετοιμασία δειγμάτων και ορών ελέγχου, ενίσχυση και ανίχνευση). Σε περίπτωση που προκύπτει διαρκώς μη έγκυρο CTM ( ) C σε πολλές παρτίδες, επικοινωνήστε με τα τοπικά γραφεία της Roche για την παροχή τεχνικής υποστήριξης. Θετικός Ορός Ελέγχου Το HCV (+) C, v2.0 πρέπει να δίνει αποτέλεσμα «Positive». Αν το HCV (+) C, v2.0 επισημαίνεται ως μη έγκυρο, τότε ολόκληρη η παρτίδα είναι μη έγκυρη. Επαναλάβετε ολόκληρη τη διαδικασία (προετοιμασία δειγμάτων και ορών ελέγχου, ενίσχυση και ανίχνευση). Σε περίπτωση που προκύπτει διαρκώς μη έγκυρο HCV (+) C, v2.0 σε πολλές παρτίδες, επικοινωνήστε με τα τοπικά γραφεία της Roche για την παροχή τεχνικής υποστήριξης. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Ο COBAS TaqMan Αναλυτής ή ο COBAS TaqMan 48 Αναλυτής προσδιορίζει αυτόματα την παρουσία HCV RNA για τα δείγματα και τους ορούς ελέγχου. AMPLILINK Λογισμικό: Καθορίζει την τιμή Ct για το HCV RNA και το HCV IC RNA. Προσδιορίζει την παρουσία HCV RNA και HCV IC RNA βάσει των τιμών Ct για το HCV RNA και το HCV IC RNA. Επαλήθευση Παρτίδας: Ελέγξτε το παράθυρο αποτελεσμάτων του AMPLILINK λογισμικού ή την εκτύπωση για ενδείξεις και σχόλια για να βεβαιωθείτε ότι η παρτίδα είναι έγκυρη. Για εντολές ορών ελέγχου, διεξάγεται έλεγχος για να καθοριστεί εάν η τιμή Ct για τον ορό ελέγχου βρίσκεται εντός του καθορισμένου εύρους. Εάν η τιμή Ct για τον ορό ελέγχου είναι εκτός του εύρους, εμφανίζεται μια ΕΝΔΕΙΞΗ που υποδεικνύει ότι ο ορός ελέγχου δεν είναι αποδεκτός. Η παρτίδα είναι έγκυρη, εάν δεν εμφανίζονται ενδείξεις για κανέναν ορό ελέγχου [HCV (+) C, v2.0 και CTM ( ) C]. Η παρτίδα δεν είναι έγκυρη αν εμφανιστεί οποιαδήποτε από τις παρακάτω ενδείξεις για τους HCV Ορούς Ελέγχου: Αρνητικός Ορός Ελέγχου: Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία Μη έγκυρο αποτέλεσμα ή το αποτέλεσμα για τον NC_INVALID Invalid αρνητικό ορό ελέγχου δεν είναι αρνητικό EL 15 Doc Rev. 1.0

16 Θετικός Ορός Ελέγχου HCV: Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία PC_INVALID Invalid Μη έγκυρο αποτέλεσμα ή το αποτέλεσμα για το θετικό ορό ελέγχου δεν είναι θετικό. Αν η παρτίδα δεν είναι έγκυρη, επαναλάβετε την εξέταση ολόκληρης της παρτίδας, συμπεριλαμβανομένης της προετοιμασίας δειγμάτων και ορών ελέγχου, της αντίστροφης μεταγραφής, της ενίσχυσης και της ανίχνευσης. Ερμηνεία Αποτελεσμάτων: Για μια έγκυρη παρτίδα, ελέγξτε κάθε μεμονωμένο δείγμα για ενδείξεις ή σχόλια στην εκτύπωση αποτελεσμάτων. Μια έγκυρη παρτίδα μπορεί να περιλαμβάνει έγκυρα και μη έγκυρα αποτελέσματα δείγματος, ανάλογα με τις ενδείξεις και/ή τα σχόλια που λαμβάνονται για τα μεμονωμένα δείγματα. Τα αποτελέσματα δειγμάτων ερμηνεύονται ως εξής: Αποτέλεσμα Ερμηνεία Negative Positive Τιμή Ct για HCV πάνω από το όριο για την ανάλυση ή καμία τιμή Ct για το HCV. Αναφέρετε τα αποτελέσματα ως «Δεν ανιχνεύτηκε HCV RNA». Αναφέρετε τα αποτελέσματα ως «Ανιχνεύτηκε HCV RNA». Αν το στοιχείο εμφάνισης αποτελέσματος του δείγματος είναι «Failed», «Invalid» ή «Aborted», ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Εφαρμογής του AMPLILINK λογισμικού, Έκδοση Σειράς 3.3 στην ενότητα «Απαιτούμενα Μη Παρεχόμενα Υλικά». ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ 1. Η παρούσα εξέταση έχει εγκριθεί μόνο για χρήση με ανθρώπινο ορό ή πλάσμα που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό EDTA. Η εξέταση άλλων τύπων δειγμάτων μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα. 2. Σε σπάνιες περιπτώσεις, τυχόν μεταλλάξεις στις περιοχές υψηλής διατήρησης του ιικού γονιδιώματος που καλύπτονται από τους εκκινητές και/ή τους ιχνηθέτες της εξέτασης ενδέχεται να οδηγήσουν σε αποτυχία ανίχνευσης του ιού. 3. Η ανίχνευση του HCV RNA εξαρτάται από τον αριθμό σωματιδίων ιού που υπάρχουν στο δείγμα και μπορεί να επηρεαστεί από τις μεθόδους συλλογής του δείγματος, από παράγοντες που αφορούν τον ασθενή (π.χ. ηλικία, εμφάνιση συμπτωμάτων) και/ή το στάδιο μόλυνσης. 4. Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων εξαρτάται από τις ορθές διαδικασίες συλλογής, μεταφοράς, αποθήκευσης και επεξεργασίας των δειγμάτων. 5. Η παρουσία του ενζύμου AmpErase στο Κύριο Μίγμα του COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV μειώνει τον κίνδυνο μόλυνσης του κλώνου (amplicon). Ωστόσο, η μόλυνση από ορούς ελέγχου και κλινικά δείγματα θετικά για HCV μπορεί να αποφευχθεί μόνο ακολουθώντας τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές και τις διαδικασίες που περιγράφονται στο παρόν Ένθετο Συσκευασίας. 6. Το παρόν προϊόν πρέπει να χρησιμοποιείται μόνο από προσωπικό εκπαιδευμένο στο χειρισμό του cobas p 630 οργάνου (προαιρετικό), του COBAS AmpliPrep Οργάνου και του COBAS TaqMan Αναλυτή ή του COBAS TaqMan 48 Αναλυτή. Ο χειριστής θα πρέπει να γνωρίζει καλά τις εφαρμογές που εκτελούνται στα όργανα και θα πρέπει να ακολουθεί τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές EL 16 Doc Rev. 1.0

17 7. Το παρόν προϊόν μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο με το cobas p 630 όργανο (προαιρετικό), το COBAS AmpliPrep Όργανο και τον COBAS TaqMan Αναλυτή ή τον COBAS TaqMan 48 Αναλυτή. 8. Λόγω εγγενών διαφορών μεταξύ των τεχνολογιών, πριν από τη μετάβαση στην επόμενη τεχνολογική μέθοδο, συνιστάται η πραγματοποίηση μελετών συσχετισμού μεθόδων από το χειριστή στο εργαστήριο για την αξιολόγηση των διαφορών τεχνολογίας. ΠΑΡΕΜΒΑΛΛΟΜΕΝΕΣ ΟΥΣΙΕΣ Τα αυξημένα επίπεδα τριγλυκεριδίων (3.300 mg/dl), συζευγμένης χολερυθρίνης (25 mg/dl) και ασύζευκτης χολερυθρίνης (20 mg/dl), λευκωματίνης (6.000 mg/dl), αιμοσφαιρίνης (200 mg/dl) και ανθρώπινου DNA (40 mg/dl) στα δείγματα καθώς και η παρουσία αυτοάνοσων νοσημάτων όπως Συστηματικός Ερυθηματώδης Λύκος (ΣΕΛ), Ρευματοειδής Αρθρίτιδα (ΡΑ) και Αντιπυρηνικό Αντίσωμα (ΑΝΑ) δεν αλληλεπίδρασαν με την ανίχνευση του HCV RNA από το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0. Οι παρακάτω φαρμακευτικές ουσίες, που υποβλήθηκαν σε έλεγχο στο Υψηλότερο Επίπεδο Συγκέντρωσης στο Πλάσμα (C max ) και σε επίπεδο τριπλάσιο του C max, δεν βρέθηκαν να αλληλεπιδρούν με την ανίχνευση του HCV RNA από το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0: Νουκλεοτιδικοί Αναστολείς της Ανάστροφης Μεταγραφάσης και της DNA Πολυμεράσης Τενοφοβίρη Αδεφοβίρη διπιβοξίλη Αναστολείς HIV Πρωτεάσης Αταζαναβίρη Σακιναβίρη Ριτοναβίρη Λοπιναβίρη/Ριτοναβίρη Νελφιναβίρη Δαρουναβίρη Τιπραναβίρη Φοσαμπρεναβίρη Αναστολέας Σύντηξης HIV Ενφουβιρτίδη Σύμπλοκα για τη Θεραπεία των Ιών Έρπη Γκανσικλοβίρη Βαλγκανσικλοβίρη Ασυκλοβίρη Αναστολέας Ιντεγκράσης HIV Ραλτεγκραβίρη Μη Νουκλεοσιδικοί Αναστολείς Ανάστροφης Μεταγραφάσης Εφαβιρένζη Νεβιραπίνη Νουκλεοσιδικοί Αναστολείς Ανάστροφης Μεταγραφάσης Λαμιβουδίνη Ζιδοβουδίνη Σταβουδίνη Αμπακαβίρη Διδανοσίνη Εμτρισιταβίνη Εντεκαβίρη Τελμπιβουδίνη Αναστολέας εισόδου HIV Μαραβιρόκη Ανοσοτροποποιητής PEG-ιντερφερόνη άλφα-2β Ριμπαβιρίνη PEG-ιντερφερόνη άλφα-2α EL 17 Doc Rev. 1.0

18 AΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΜΗ ΚΛΙΝΙΚΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ A. Όριο Ανίχνευσης Το όριο ανίχνευσης του COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 προσδιορίστηκε με ανάλυση διαδοχικών αραιώσεων του Διεθνούς Προτύπου του ΠΟΥ σχετικά με το RNA του Ιού Ηπατίτιδας C για Αναλύσεις Τεχνολογίας Ενίσχυσης Νουκλεϊκού Οξέος, γονότυπου 1a, που λήφθηκε από το NIBSC σε αρνητικό για HCV ανθρώπινο πλάσμα EDTA ή ορό. Για κάθε τύπο δείγματος εκτελέστηκε ανάλυση τριών ανεξάρτητων σειρών αραιώσεων. Για κάθε τύπο δείγματος εξετάστηκε ένα σύνολο 252 αντιγράφων ανά επίπεδο συγκέντρωσης. Η μελέτη πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τρεις παρτίδες αντιδραστηρίων COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0. Τα αποτελέσματα για το πλάσμα EDTA και τον ορό παρουσιάζονται στους Πίνακες 1 και 2 και υποδεικνύουν ότι το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 ανίχνευσε HCV RNA σε συγκεντρώσεις 15 IU/mL ή μεγαλύτερες με ποσοστό ευστοχίας 95%. Η διαφορά μεταξύ του ορού και του πλάσματος EDTA δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Πίνακας 1 Όριο Ανίχνευσης (LOD) στο Πλάσμα EDTA που προσδιορίστηκε με το Διεθνές Πρότυπο του ΠΟΥ σχετικά με το RNA του Ιού Ηπατίτιδας C για Αναλύσεις Τεχνολογίας Ενίσχυσης Νουκλεϊκού Οξέος Τίτλος Εισαγωγής (HCV RNA IU/mL) Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) , LOD βάσει ανάλυσης PROBIT σε Ποσοστό Ευστοχίας 95 % LOD βάσει Ποσοστού Ευστοχίας 12 IU/mL διάστημα εμπιστοσύνης 95%: IU/mL 15 IU/mL EL 18 Doc Rev. 1.0

19 Πίνακας 2 Όριο Ανίχνευσης (LOD) στον Ορό που προσδιορίστηκε με το Διεθνές Πρότυπο του ΠΟΥ σχετικά με το RNA του Ιού Ηπατίτιδας C για Αναλύσεις Τεχνολογίας Ενίσχυσης Νουκλεϊκού Οξέος Τίτλος Εισαγωγής (HCV RNA IU/mL) Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) , LOD βάσει ανάλυσης PROBIT σε Ποσοστό Ευστοχίας 95 % LOD βάσει Ποσοστού Ευστοχίας 11 IU/mL διάστημα εμπιστοσύνης 95%: IU/mL 15 IU/mL B. Ακρίβεια Η ακρίβεια του COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 προσδιορίστηκε με ανάλυση διαδοχικών αραιώσεων του Διεθνούς Προτύπου του ΠΟΥ σχετικά με το RNA του Ιού Ηπατίτιδας C για Αναλύσεις Τεχνολογίας Ενίσχυσης Νουκλεϊκού Οξέος σε αρνητικό για HCV ανθρώπινο πλάσμα EDTA ή σε ορό. Εξετάστηκαν δύο επίπεδα συγκέντρωσης (5 IU/mL και 50 IU/mL) σε έως 168 και αντίγραφα σε 12 αναλύσεις σε 4 ημέρες. Για κάθε δείγμα εκτελέστηκε ολόκληρη η διαδικασία του COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0, συμπεριλαμβανομένης της προετοιμασίας δειγμάτων, της ενίσχυσης και της ανίχνευσης. Η μελέτη πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τρεις παρτίδες αντιδραστηρίων COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0. Όλα τα έγκυρα δεδομένα ακρίβειας αξιολογήθηκαν με υπολογισμό του Ποσοστού Ευστοχίας (%) για κάθε στοιχείο του πίνακα ανά παρτίδα αντιδραστηρίων (συνδυασμός και των δύο τύπων δειγμάτων). Το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 παρουσιάζει σταθερή απόδοση σε επίπεδα συγκέντρωσης 5 IU/mL και 50 IU/mL για δείγματα πλάσματος EDTA και ορού και για τις τρεις παρτίδες αντιδραστηρίων που υποβλήθηκαν σε εξέταση (Πίνακας 3). Πίνακας 3 Ακρίβεια του COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 (Συνδυασμός Δειγμάτων Πλάσματος EDTA και Ορού) Ονομαστική Συγκέντρωση [IU/mL] Ποσ. Ευστ. (%) Παρτίδα 1 Παρτίδα 2 Παρτίδα EL 19 Doc Rev. 1.0

20 Γ. Συμπερίληψη Η απόδοση του COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 σε γονότυπους HCV αξιολογήθηκε με επαλήθευση του Ορίου Ανίχνευσης για τους γονότυπους 1 έως 6. Αραιώθηκαν κλινικά δείγματα HCV RNA για 8 διαφορετικούς γονότυπους/υπότυπους (1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4, 5 και 6) σε έως τρία διαφορετικά επίπεδα συγκέντρωσης σε πλάσμα EDTA ή ορό και προσδιορίστηκε το Ποσοστό Ευστοχίας για κάθε επίπεδο με έως και 63 αντίγραφα. Η μελέτη πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μία παρτίδα αντιδραστηρίων COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0. Τα αποτελέσματα για το πλάσμα EDTA και τον ορό παρουσιάζονται στους Πίνακες 4 και 5 και επαληθεύουν ότι το COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Qualitative Test, v2.0 ανίχνευσε HCV RNA για 8 διαφορετικούς γονότυπους/υπότυπους σε συγκεντρώσεις 15 IU/mL ή μεγαλύτερες με ποσοστό ευστοχίας 95%. Η διαφορά μεταξύ του ορού και του πλάσματος EDTA δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Πίνακας 4 Επαλήθευση Ορίου Ανίχνευσης Γονότυπου HCV RNA σε Πλάσμα EDTA Γονότ. Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. 5 IU/mL 15 IU/mL 45 IU/mL Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) 1a b a b Γονότ. Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. Πίνακας 5 Επαλήθευση Ορίου Ανίχνευσης Γονότυπου HCV RNA σε Ορό 5 IU/mL 15 IU/mL 45 IU/mL Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) Αρ. Έγκυρ. Αντιγρ. Αρ. Θετ. Ποσ. Ευστ. (%) 1a b a b EL 20 Doc Rev. 1.0