207 ور ي ﺮﺑ ﻦﻴﺗﻼﭘ ﺲ ﺎﺑ ن آ ﺐﻴﻛﺮﺗ و ﺲﻧ ﺮﺗ مﺎﻤﺗ ﺳا ﺋﻮﻨ ﺛﺎﺗ (AGS هﺪﻌﻣ نﺎﻃﺮﺳ ﻟﻮﻠﺳ هدر ءﺎﻘﺑ ﺎﻣا ﻲﺒﺘﺠﻣ ﺮﺘﻛد ﻲﻧذﺎﻣ ﺪﻤﺤ ﻣﺮﺘﻛد ﻲﺳﺎﺒﻋ ﷲاﺪﺳا هداز

Transcript

1 27 مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني همدان دوره بيستم شماره 3 پاي يز 1392 شماره مسلسل 69 مقاله پژوهشي تاثير رتينوي يك اسيد تمام ترانس و تركيب آن با سيس پلاتين بر روي بقاء رده سلولي سرطان معده( AGS ) دكتر نوروز نجف زاده * اسداالله عباسي ** دكتر محمد ماذني *** دكتر مجتبي اماني**** پذيرش : 92/4/17 92/1/28 دريافت : چكيده: مقدمه و هدف: رتينوي يك اسيد تمام ترانس يكي از تركيبات گروه رتينوي يدها است كه بر روي رشد تمايز و القاء آپوپتوز در سلول هاي سالم پيش سرطاني و سرطاني موثر مي باشد. سيس پلاتين يكي از داروهاي موثر در درمان اغلب سرطان ها است كه با اتصال متقاطع به DNA موجب آپوپتوز ميگردد. مطالعات اخير اثرات هم افزايي رتينوي يك اسيد با سيس پلاتين بر روي برخي از رده هاي سلولي سرطان ملانوما و تخمدان را نشان داده است و لذا در اين مطالعه اثرات هم افزايي تركيب رتينوي يك اسيد با سيس پلاتين در رده سلولي سرطان معده AGS) ( مورد بررسي قرار گرفت. روش كار: در اين مطالعه تجربي رده سلولي سرطان معده در محيط RPMI-164 كشت داده شد و سپس تاثير رقت هاي مختلف رتينوي يك اسيد و سيس پلاتين بر روي اين سلول ها به روش هاي ارزيابي كلوني و رنگ آميزي آكريدين و اتديوم برومايد بررسي شد. نتايج: يافته ها نشان داد كه رتينوي يك اسيد تمام ترانس به تنهايي اثر قابل ملاحظه اي بر روي مرگ رده سلولي سرطان معده نداشت ولي تركيب درماني رتينوي يك اسيد تمام ترانس با سيس پلاتين باعث افزايش مرگ سلولي نكروز و آپوپتوز شد. در سلولهايي كه با 1 ميكرومولار رتينوي يك اسيد تمام ترانس و 5 و 1 ميكروگرم سيس پلاتين تيمار شده بودند آپوپتوز بيشتري نسبت به گروههاي تيمار با يك دارو مشاهده شد( P<.1 ). به نظر مي رسد حساسيت اين رده سلولي نسبت به رتينوي يك اسيد تمام ترانس وابسته به غلظت سيس پلاتين است. نتيجه نهايي: استفاده همزمان غلظت هاي پايين رتينوي يك اسيد تمام ترانس با سيس پلاتين براي درمان سلولهاي سرطاني موثرتر از استفاده به تنهايي از اين داروها است. كليد واژه ها: آپوپتوز / ترتينوي ين / رده سلولي / سرطان معده / سيس پلاتين مقدمه : سرطان معده چهارمين سرطان شايع در جهان بوده و دومين عامل منجربه مرگ ناشي از سرطان ها بعد از سرطان ريه مي باشد. درمان رايج آن در حال حاضرجراحي و شيمي درماني است كه اغلب به دليل عود و رشد دوباره آن طول عمر افراد مبتلا به سرطان معده كمتر از 5 سال مي باشد. بنابراين تركيباتي كه از تشكيل تومورهاي اوليه و ثانويه جلوگيري كنند مي توانند در درمان سرطان معده مفيد باشند( 1-3 ). * استاديار گروه علوم تشريحي و پاتولوژي دانشكده پزشكي دانشگاه علوم پزشكي اردبيل ** دانشجوي كارشناسي ارشد بيوشيمي دانشگاه علوم پزشكي اردبيل (nowruz3@gmail.com) *** استاديار گروه بيوشيمي دانشكده پزشكي دانشگاه علوم پزشكي اردبيل **** دانشيار گروه بيوفيزيك دانشكده پزشكي دانشگاه علوم پزشكي اردبيل رتينوي يد ها تركيباتي هستند كه از نظر ساختاري و عملكردي آنالوگ ويتامينA مي باشند. رتينوي يك اسيد تمام ترانس كه يكي از تركيبات گروه رتينوي يدها است در بدن انسان به 9- سيس رتينوي يد و 13- سيس رتينوي يد متابوليزه مي شوند و اين متابوليت ها با تمايل بالا به رسپتورهاي رتينوي يدي در داخل هسته متصل شده و باعث فعال شدن آنها و عملكرد فاكتورهاي رونويسي مي گردند( 4 ) بهمين دليل در تنظيم رشد سلول هاي اپيتليالي تمايز و تكثير آنها موثر مي باشند. مطالعات

2 دكتر نوروز نجف زاده و همكاران 28 تاثير رتينوي يك اسيد بر بقاء رده سلولي سرطان اخير نشان داده است كه رتينوي يك اسيد بر روي برخي از رده سلولهاي سرطاني انسان از جمله ملانوما( 5 ) تخمدان( 6 ) و كبد خواص ضد سرطاني دارد( 4 5 ) سيس پلاتين يكي از داروهاي بسيار موثر دردرمان تومورهاي بدخيم سرطان تخمدان ومعده مي باشد كه با اتصال متقاطع به DNA باعث القاي آپوپتوز مي شود ولي به علت اثرات سمي بر روي كليه و سيستم عصبي استفاده از آن محدود مي باشد( 7 8 ). بنابراين مي توان با كاهش اثرات جانبي و افزايش سطح تاثير دارو عملكرد آن را بهبود بخشيد. اخيرا مقاومت نسبت به سيس پلاتين در برخي تومورها از جمله تخمدان و معده افزايش پيدا كرده است كه مكانيسم هاي مختلفي در ايجاد مقاومت نقش دارند و مهمترين آنها افزايش بيان پروتي ين ضد اپوپتوتيكBcl-2 درسلول هاي توموري مي باشد( 6 ). مطالعات اخير نشان دهنده اثرات هم افزايي رتينوي يدها در تركيب با ساير دارو هاي ضد سرطاني مي باشند( 6 ) با توجه به يافته هاي جديد مبني بر اثرات مهاري رتينوي يك اسيد تمام ترانس بر روي رشد و چرخه سلولي در برخي از رده هاي سلولي سرطاني انسان در اين مطالعه اثرات تركيبي رتينوي يك اسيد با سيس بلاتين بر روي مرگ سلولي سرطان معده انسان( AGS ) بررسي شد. روش كار: داروها: جهت انجام اين مطالعه تجربي سيس پلاتين و رتينوي يك اسيد تمام ترانس از شركت سيگما خريداري شد سپس درمحلول فسفات بافر حل شد و استوك اوليه رتينوي يك اسيد تمام ترانس با حل كردن آن در دي متيل سولفواكسيد تهيه گرديد. كشت سلولي : رده سلولي AGS از شركت انيستيتو پاستور ايران خريداري شد و در محيط RPMI-164 حاوي %1 سرم جنين گاوي و %1 محلول آنتي بيوتيك پني سيلين/ استرپتومايسين (جيبكو) كشت داده شد و در انكوباتور در دماي C 37 و %5 CO2 نگهداري گرديد. گروههايي كه در ارزيابي كلوني استفاده شد : الف) گروه كنترل كه به مدت هفت روز تحت تاثيرهيچ گونه دارويي قرار نگرفت. ب) گروه شم كه بهمدت هفت روز تحت تاثير محيط كشت حاوي DMSO كه حلال رتينوي يك اسيد تمام ترانس بود قرار گرفت. پ) گروه درمان در اين گروه سلولها به مدت هفت روز تحت تاثير رتينوي يك اسيد تمام ترانس غلظتهاي 15 و ميكرومولار قرار گرفت. گروههايي كه جهت بررسي مرگ سلولي استفاده شد: الف) سلولها به مدت هفت روز با غلظت 5 ميكرومولار رتينوي يك اسيد تمام ترانس و بعد از آن سه روز تحت تاثير غلظتهاي 5 و 1 ميكروگرم سيس پلاتين قرار گرفتند. ب) سلولها به مدت هفت روز با غلظت 1 ميكرومولار رتينوي يك اسيد تمام ترانس و بعد از آن سه روز تحت تاثير غلظتهاي 5 و 1 ميكروگرم سيس پلاتين قرار گرفتند. ج) سلولها به مدت سه روز تحت تاثير غلظتهاي 5 و 1 ميكروگرم سيس پلاتين قرار گرفتند. ارزيابي مورفولوژي سلولي براي آپوپتوز : سلولها در فلاسكهاي T25 كشت داده شدند سپس آنها را با تريپسين/ ادتا جدا كرده و بعد از سانتريفوژ تعداد 12 سلول را در هر پليت شش خانه( 2 سلول در هر خانه) كشت داده و به مدت هفت روز با غلظت هاي مختلف رتينوي يك اسيد تمام ترانس و سيس پلاتين درمان شدند. بعد از هفت روز (بر اساس مطالعات انجام شده سلول ها در چهار روز اول بعد از كشت رشد كمتري دارند شش تا ده روز پس از كشت رشد سريع و دوازده روز بعد به علت افزايش تعداد سلول هاي زنده بطور قابل ملاحظه اي كاهش مي يابند) /5 ميلي ليتر محلول حاوي 1 ميلي گرم اكريدين اورنج و اتيديوم برومايد به هر خانه پليت اضافه شد و 5 دقيقه بعد با ميكروسكوپ فلوي ورسنت مدل المپيوس تصاوير تهيه گرديد. سلول هاي آپوپتوتيك هسته قطعه قطعه شده دارند و به راحتي از سلول هاي نرمال قابل تشخيص مي باشند علاوه بر آن با اين روش مي توان سلول هاي آپوپتوتيك اوليه با هسته ي متراكم سبز كم رنگ وغشاي سيتوپلاسمي سالم را از سلول هاي آپوپتوتيك تاخيري با هسته متراكم قرمز فلوي وروسنت و قطعه قطعه شده تشخيص داد سلول هاي نكروتيك نيز به رنگ زرد متمايل به قرمز و بدون قطعه قطعه شدن هسته مشخص مي باشند وهمچنين سلول هاي سالم به رنگ سبز پررنگ قابل تشخيص هستند( 9 ). ارزيابي كلوني با شمارش كلوني : براي ارزيابي كلوني سلولي بعد از تريپسينه كردن سلولها با محيط كشت شستشو داده

3 29 دوره بيستم شماره 3 پاي يز 1392 شماره مسلسل 69 مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني همدان شدند و تعداد 12 سلول را در 6 ميليليترمحيطكشت مخلوط كرده و در پليت شش خانه اي به تعداد 2 سلول در ميلي ليتر به هرخانه كشت اضافه شد سپس به مدت يك شب انكوبه شدند تا به كف پليت بچسبند و روز بعد محيط كشت حاوي غلظتهاي و 2 ميكرومولار رتينوي يك اسيد تمام ترانس اضافه شد بعد از 7 روز سلولها با كريستال ويوله (%/5 كريستال ويوله كه در متانول %2 حل شده است) رنگ آميزي شدند از كلوني هاي سلولي تصاويري با ميكروسكوپ معكوس (Invert) تهيه شد و كلوني ها بيش از 5 سلول با برنامه ايميج جي( j ( Image شمارش شدند و تعداد كلوني ها و تمايز سلولي در كلوني ها براساس شكل سلولي (سلولها از لحاظ ظاهري بزرگتر و مسطح تر) مورد بررسي قرار گرفتند( 1 ). تجزيه و تحليل آماري: اطلاعات بدست آمده از شمارش كلوني ها با نرم افزار آماري SPSS (ورژن 16) و تستهاي آماري ANOVA و تست تكميل ي تحليل قرارگرفتند. Tukey مورد تجزيه و نتايج: تمايز سلولي: بعد از تاثير رقت هاي مختلف رتينوي يك اسيد تمام ترانس به مدت 7 روز بر روي سلول هاي سرطان معده تصاوير ميكروسكوپ اينورت نشان داد كه رقتهاي 1 15 و 2 ميكرومولار رتينوي يك اسيد تمام ترانس باعث تمايز سلولي شده ولي رقت 5 ميكرومولار اثري بر روي تمايز سلول هاي سرطان معده نشان نداد (شكل 1 ). ارزيابي تعداد كلوني ها : ارزيابي تعداد كلوني ها با رنگ آميزي كريستال ويوله نشان داد كه غلظت هاي 1 و 15 ميكرومولار رتينوي يك اسيد تمام ترانس تاثير چنداني در كاهش تعداد كلوني ها نسبت به گروه كنترل ندارد اما غلظت 5 ميكرومولار باعث افزايش تعداد كلوني ها نسبت به گروه كنترل وغلظت 2 ميكرومولار باعث كاهش تعداد كلوني ها نسبت به گروه كنترل شد. تركيب رتينوي يك اسيد تمام ترانس با سيس پلاتين باعث كاهش معني داري در تعداد كلوني سلولي شد به طوريكه تركيب 1 ميكرومولار ال- ترانس رتينوي يك اسيد تمام ترانس با 1 ميكروگرم سيس پلاتين باعث كاهش بيشتر تعداد كلوني ها شد (.1> (شكل 2 و 3). شكل 1: مورفولوژي سلولي درگروه كنترل تمايزسلولي مشاهده نشد (A) در گروه هايي كه غلظتهاي 1 و 15 و 2 ميكرومولار رتينوي يك اسيد را دريافت كرده بودند سلول ها پهن شده و خصوصيات تمايزي از خود نشان دادند (D,B),C گروهي كه با رقت 5 ميكرومولار درمان شده بودند تمايزي را نشان نداند (E) RA مخفف رتينوي يك اسيد مي باشد. (P E

4 دكتر نوروز نجف زاده و همكاران 21 تاثير رتينوي يك اسيد بر بقاء رده سلولي سرطان a b شكل 2 : تاثير غلظتهاي مختلف ال-ترانس رتينوي يك اسيد و تركيب آن با سيس پلاتين روي كلوني زاي سلولهاي رده سلولي سرطان معده. شكلa ميانگين تعداد كلونيهاي بعد از تيمار با غلظت هاي مختلف رتينوي يك اسيد را نشان مي دهد. درشكل b تاثير تركيب سيس پلاتين با رتينوي يك اسيد مشاهده مي شود DDp مخفف سيس پلاتين بررسي مرگ سلولي : سلول ها در پليت 6 خانه به مدت 7 روز تحت تاثير رقت هاي مختلف رتينوي يك اسيد و سيس پلاتين قرار گرفتند و بعد از رنگ آميزي با آكريدين اورنج و اتيديوم برومايد سلولهاي زنده آپوپتوتيك و نكروتيك شمارش شدند. نتايج اين رنگ آميزي نشان داد كه در گروه هاي تركيب درماني رتينوي يك اسيد تمام ترانس 5 و 1 ميكرومولار با 5 و 1 ميكروگرم سيس پلاتين نسبت به استفاده به تنهايي از سيس پلاتين و يا رتينوي يك اسيد تمام ترانس مرگ سلولي بيشتري مشاهده مي شود. شكل 3 : تعداد كلوني هاي شكل گرفته بعد از درمان با غلظتهاي مختلف رتينوي يك اسيد( A ) و تركيب رتينوي يك اسيد باسيس پلاتين( B ). تركيب رتينوي يك اسيد تمام ترانس 5 ميكرومول با 5 و 1 ميكروگرم سيس پلاتين باعث افزايش سلول هاي آپوپتوتيك اوليه شده ولي در تركيب درماني رتينوي يك اسيد تمام ترانس 1 ميكرومولار با سيس پلاتين 5 و 1 ميكروگرم مرگ سلولي از نوع آپوپتوتيك تاخيري قابل ملاحظه بود. بهترين نتيجه در تركيب درماني رتينوي يك 1 ميكرومولار با سيس پلاتين 1 ميكروگرم بدست آمد كه كمترين تعداد كلوني را نشان مي داد (شكل 4 جدول 1).

5 211 دوره بيستم شماره 3 پاي يز 1392 شماره مسلسل 69 مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني همدان B شكل 4: مرگ سلولي بعد از رنگ آميزي با آكريدين اورنج و اتديوم برومايد در گروه كنترل تمام سلولها زنده مانده اند( A ) در گروه رتينوي يك اسيد 5 ميكرومولار مرگ سلولي ديده نشد( B ) مقايسه اين گروهها با هم نشان مي دهد كه در گروههاي تركيبي بيشترين مرگ از نوع آپوپتوز ديده مي شود( I,F),G,H سيس پلاتين به تنهايي استفاده شده بود مرگ سلولي آپوپتوتيك كمتري ديده مي شود( E,B),C,D :AP آپوپتوز N: نكروز كنترل در گروههاي كه داروهاي رتينوي يك اسيد و جدول 1: درصد سلولهاي زنده آپوپتوتيك اوليه آپوپتوتيك تاخيري و نكروتيك در گروه هاي مختلف درمان شده با غلظت هاي مختلف رتينوي يك اسيد سيس پلاتين و تركيب آنها بر اساس رنگ آميزي آكريدين اورنج و اتيديوم برمايد رتينوي يك اسيد 5 رتينوي يك اسيد 1 سيس پلاتين 5 سيس پلاتين 1 رتينوي يك اسيد تمام ترانس 5 و سيس پلاتين 5 رتينوي يك اسيد تمام ترانس 5 و سيس پلاتين 1 رتينوي يك اسيد تمام ترانس 1 و سيس پلاتين 5 رتينوي يك اسيد تمام ترانس 1 و سيس پلاتين 1 سلول هاي زنده آپوپتوتيك اوليه 1 آپوپتوتيك تاخيري نكروتيك 37 /635 1 /786 9 /523 4 /59 4 /761* 47 /5* 17 /44 2 /757 1 /581 7 /55 * 35 /99* 16 / / /26 68 /18 85 /716* 11 /555* 12 /5* 1 29 /32 51 /34 39 /69 19 /68 9 /523* 5 /455* 1 /388 واحد رتينوي يك اسيد ميكرو مولار و سيس پلاتين ميكروگرم مي باشد..1> P* مي باشد. 51 /392* 34 /72* CL2) (Cisplatin ; cis pt (II) (NH3)2 و كربوپلاتين از بحث: رتينوي يك اسيد تمام ترانس به عنوان متابوليت فعال ويتامين A در بسياري از مراحل تمايز و تكثير سلولهاي پوششي شركت مي كند. ويتامين A و مشتقات آن از جمله رتينوي يك اسيد تمام ترانس از طريق دو دسته گيرنده RAR وRXR اثرات خود را در سلول هاي بدن اعمال مي كند( 4 ). داروهاي با اساس پلاتينيومي همچون سيس پلاتي ن طريق اتم پلاتين پيوند هاي كوالانسي ايجاد مي كنند سيس پلاتين ملكولي قابل حل در آب مي باشد كه داراي يك اتم پلاتين متصل به چهار گروه كاركردي است پيوند Pt-N (پلاتين- نيتروژن)كوالانسي بوده و غير قابل برگشت مي باشد در حالي كه پيوند با كلر( CL ( ناپايدار است اين داروها تركيب اضافي( adduct ) (X GXG,AG,GG هر بازي مي تواند باشد) را تا %9 در DNA ايجاد مي كنند

6 دكتر نوروز نجف زاده و همكاران 212 تاثير رتينوي يك اسيد بر بقاء رده سلولي سرطان بدنبال آن DNA آسيب مي بيند و سلول از طريق فرايند آپوپتوز ازبين مي رود( 8 11 ). هر چند سيس پلاتين اثر خوبي روي برخي سرطان ها(مانند سرطان تخمدان معده) دارد اما اثر تخريبي غير قابل برگشت روي كليه ها مي گذارد( 6 12 ). ر تينوي يك اسيد تمام ترانس هم جزء داروهاي ضد سرطاني است و يكي از عوامل شناخته شده القاء گر تمايز سلولي مي باشد كه در درمان نوعي از سرطان خون به نام لوسمي پروميلوسيتيك حاد APL) (Acute Promyelocytic Leukemia; به عنوان تمايز دهنده سلول هاي پروميلوسيت به سلول هاي گرانولوسيت استفاده مي شود( ). مطالعه ما بر روي تاثير رتينوي يك اسيد تمام ترانس با سيس پلاتين بر روي رده سلوليAGS نشان داد كه استفاده همزمان از اين داروها اثرات ضد سرطاني بيشتري دارد و رتينوي يك اسيد 5 ميكرومولار با سيس پلاتين باعث افزايش تعداد سلول هاي آپوپتوتيك اوليه ميشوند علاوه بر اين سلول هاي سرطاني بعد از درمان با رتينوي يك اسيد تمام ترانس 1 ميكرومولار و سيس پلاتين دچار آپوپتوز تاخيري و نكروتيك ميگردند به نظر ميرسد كه غلظت هاي پايين رتينوي يك اسيد با افزايش حساسيت سلول ها به سيس پلاتين باعث اين عمل مي شوند. درمطالعه مشابهي ابي و همكارانش در سال 1997 نشان دادند كه تركيب درماني با دوزهاي پايين رتينوي يك اسيد تمام ترانس( 5 ميكرومول) و سيس پلاتين( 5 ميكرومول) تاثير زيادي روي آپوپتوز سلولهاي سرطاني سر و گردن دارد( 6 ) يكي ديگر از نتايج اين مطالعه تمايز سلولي با رقت 2 ميكرومولار رتينوي يك اسيد تمام ترانس بود كه بيشترين تاثير را روي القاي تمايز سلولي داشت بنابراين نتايج بدست آمده نشان مي دهد كه رتينوي يك اسيد تمام ترانس مي تواند باعث القاي تمايز سلولي در سرطان معده شود و از تكثير آنها جلوگيري كند. مكانيسم تاثير رتينوي يك اسيد تمام ترانس شامل كاهش سطح سيكلينD1 وتوقف چرخه سلولي در مرحله G/G1 مي باشد و با افزايش سطح پروتي ينP21 باعث افزايش آپوپتوز مي شود( ). در اين مطالعه نيز نتايج حاصل از ارزيابي كلوني با رنگ آميزي كريستال ويوله نشان داد كه رقت هاي بالاي رتينوي يك اسيد تمام ترانس باعث كاهش تعداد كلوني ها شده ولي رقت پايين باعث افزايش تعداد كلوني ها نسبت به گروه كنترل مي شود. محققان نشان داده اند كه رتينوي يك اسيد در غلظت هاي پايين با اتصال به رسپتور PPARb/d باعث تكثير سلولي و مهار آپوپتوز مي شود ولي در غلظت هاي بالا با اتصال به رسپتور RAR باعث توقف رشد سلولي ميگردد( 17 ). مطالعه ليو و همكارانش نشان داد كه استفاده از رتينوي يك اسيد تمام ترانس همراه با دارو هاي ضد سرطاني سيس پلاتين يا 5 فلوي ورواوراسيل بر روي رده سلولي ملانوما باعث اختلال در سنتز DNA و القائ اپوپتوز مي شود( 5 ) و در موشهاي مبتلا به ملانوما باعث كاهش اندازه و تعداد نودول هاي متاستاز دهنده ريه مي گردد. همچنين در مطالعه ديگري ساكس وهمكارانش اثرات هم افزايي بين رتينوي يك اسيد تمام ترانس وسيس بلاتين و 5-FLU را در يك سري از رده هاي سرطان سلول سنگفرشي گزارش كردند( 18 ). نتيجه نهايي: اين مطالعه نشان داد كه استفاده از رتينوي يك اسيد با داروي سيس پلاتين مي تواند در آينده به عنوان تركيب درماني موثر در درمان سرطان هاي دستگاه گوارشي همچون معده موثر واقع شود. سپاسگزاري: اين مقاله برگرفته از پاياننامه دوره كارشناسي ارشد مصوب شوراي پژوهشي دانشگاه علوم پزشكي اردبيل مي باشد. نويسندگان بر خود لازم مي دانند كه از آقاي دكتر شهاب بهلولي دكتراي تخصصي داروسازي به خاطر مساعدت و همكاري در اين مطالعه قدرداني نمايند. منابع : 1. Hahn WC, Weinberg RA. Rules for making human tumor cells. N Eng J Med 22;347(2): Spillane JB, Henderson MA. Cancer stem cells: A review. ANZ J Surg 27;77(6): Babaei M, Pourfarzi F, Yazdanbod A, Chiniforush MM, Derakhshan MH, Mousavi SM, et al. Gastric cancer in Ardabil, Iran. A review and update on cancer registry data. APJCP 21;11(3): Liu S, Wu Q, Che Z, Su W. The effect pathway of retinoic acid through regulation of retinoic acid receptor alpha in gastric cancer cells. World J Gastroenterol 21;7(5): Liu X, Chan SY, Ho PC. Comparison of the in vitro and in vivo effects of retinoids either alone or in combination with cisplatin and 5- fluorouracil on tumor development and metastasis of melanoma. Cancer Chemother

7 213 دوره بيستم شماره 3 پاي يز 1392 شماره مسلسل 69 مجله علمي دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني همدان Pharmacol 28;63(1): Aebi S, Kroning R, Cenni B, Sharma A, Fink D, Los G,et al. All-trans retinoic acid enhances cisplatin-induced apoptosis in human ovarian adenocarcinoma and in squamous head and neck cancer cells. Clinical cancer research : An official. J Am Assoc Cancer Res1997;3(11): Reedijk J, Lohman PH. Cisplatin: synthesis, antitumour activity and mechanism of action. Pharmaceutisch Weekblad Scientific Edition 1985; 7(5): Wang G, Reed E, Li QQ. Molecular basis of cellular response to cisplatin chemotherapy in non-small cell lung cancer (Review). Oncol Rep 24;12(5): Jafari N, Bohlooli S, Mohammadi S, Mazani M. Cytotoxicity of methylsulfonylmethane on gastrointestinal (AGS, HepG2, and KEYSE-3) cancer cell lines. J Gastrointestinal Cancer 212; 43(3): Munshi A, Hobbs M, Meyn RE. Clonogenic cell survival assay. Methods Mol Med 25; 11: Siddik ZH. Cisplatin: mode of cytotoxic action and molecular basis of resistance. Oncogene 23; 22(47): Fang JY, Xiao SD. Effect of trans-retinoic acid and folic acid on apoptosis in human gastric cancer cell lines MKN-45 and MKN-28. J Gastroenterol 1998;33(5): Huang M, Ye YC, Chen S, Chai JR, Lu JX, Zhoa L, et al. Use of all-trans retinoic acid in the treatment of acute promyelocytic leukemia. Blood 1988;72(2): Lo-Coco F, Avvisati G, Vignetti M, Thiede C, Orlando SM, Iacobelli S, et al. Retinoic acid and arsenic trioxide for acute promyelocytic leukemia. N Eng J Med 213;369(2): Hayashi K, Yokozaki H, Naka K, Yasui W, Lotan R, Tahara E. Overexpression of retinoic acid receptor β induces growth arrest and apoptosis in oral cancer cell lines. Cancer Sci 21;92(1): Wu Q, Chen Z, Su W. Growth inhibition of gastric cancer cells by all-trans retinoic acid through arresting cell cycle progression. Chinese Med J 21;114(9): Soprano KJ, Soprano DR. Retinoic acid receptors and cancer. J Nutr 22; 132(12): 389S-13S. 18. Sacks PG, Harris D, Chou TC. Modulation of growth and proliferation in squamous cell carcinoma by retinoic acid: A rationale for combination therapy with chemotherapeutic agents. Int J Cancer 1995;61(3):49-15.

8 Scientific و همكاران Journal نجف زاده of نوروز Hamadan دكتر University of Medical Sciences سلولي سرطان Vol.2 رده, بقاء No.3 بر, اسيد Autumn رتينوي يك 213 تاثير 214 Original Article Effects of all Trans Retinoic Acid Combined with Cisplatin on Survival of Gastric Cancer Cell Line (AGS) N. Najafzadeh, Ph.D. * ; A. Abbasi, M.Sc. ** ; M. Mazani, Ph.D. *** ; M. Amani, Ph.D. **** Received: Accepted: Abstract Introduction & Objective: All-trans retinoic acid, a derivative of retinoids, is widely used to induce prolifferation, differentiation and apoptosis in normal, precancareous and cancerous cells. Cisplatin, an effective drug for cancer treatment, induces apoptosis via cross-linking to DNA. Previous studies on ovarian and melanoma cancer cells have showed synergistic effects of cisplatin and retinoic acid. Our aim is to study such synergistic effect on gastric derived cell line, AGS. Materials & Methods: In this experimental study gastric cancer cell line was cultured with different concentration of retinoic acid and cisplatin and their combination. The cell death was evaluated with clonogenic assay and Acridine Orange/ Ethidium Bromide staining. Results: The results showed that all-trans retinoic acid had not significant effect on cell death in gastric cancer. The results showed that high doses of retinoic acid and cisplatin can cause cell death via necrosis and early apoptosis, respectively. The plates were treated with the combination of 1 µm retinoic acid and 5, 1 µg cisplatin, and more cell death were observed (P<.1). It seems that, suseptability of this cell line to retinoic acid is dose dependent. Conclusion: In this study, we concluded that the combination of retinoic acid and cisplatin was more effective on cell death than cisplatin and retinoic acid alone. (Sci J Hamadan Univ Med Sci 213; 2 (3):27-214) Keywords: Apoptosis / Cell Line / Cisplatin / Stomach Neoplasms / Tretinoin * Assistant Professor, Department of Anatomy & Pathology, School of Medicine Ardabil University of Medical Sciences & Health Services, Ardabil, Iran. ** M.Sc. in Biochemistry, Ardabil University of Medical Sciences & Health Services, Ardabil, Iran. (nowruz3@gmail.com) *** Assistant Professor, Department of Biochemistry, School of Medicine Ardabil University of Medical Sciences & Health Services, Ardabil, Iran. **** Associate Professor, Department of Biophysics, School of Medicine Ardabil University of Medical Sciences & Health Services, Ardabil, Iran.