Involvement of Vanilloid Receptors in the Anti-inflammatory Effect of Hydroalcoholic Extract of Heated Female Cannabis sativa Flowers in Rat

Transcript

1 Qom Univ Med Sci J 2016 May Original Article Involvement of Vanilloid Receptors in the Anti-inflammatory Effect of Hydroalcoholic Extract of Heated Female Cannabis sativa Flowers in Rat Masoud Fereidoni 1*, Bahram Farhadi Moghaddam 2, Keyhan Farhadi Moghaddam 3 1 Department of Biology, Faculty of Science, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran. 2 Faculty of Medicine, Zahedan University of Medical Sciences; Zahedan, Iran. * Corresponding Author: Masoud Fereidoni, Department of Biology, Faculty of Science, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran. fereidoni@um.ac.ir Received: 16 Apr, 2015 Accepted: 9 Sep, 2015 Abstract Background and Objectives: Decarboxylated phytocannabinoids activate endocannabinoid system in the central nervous system and peripheral tissues via activation of cannabinoid receptors. In this investigation, the effect of interaction between decarboxylated phytocannabinoids and capsaicin at the central level and naloxone at the systemic level, was investigated on inflammatory rat paw edema induced by by sub-plantar injection. Methods: In this experimental study, male Wistar rats ( g) were used. To study the effect of interaction with opioid system, intraperitoneal administration of hydroalcoholic extract (dose, 50mg/kg), naloxone (dose, 2mg/kg) and co-administration of the extract and naloxone were performed. To investigate the effect of interaction with vanilloid system, intrathecal administration of extract (0.01mg/10μl), capsaicin (0.002mg/10μl) and co-administration of extract and capsaicin were performed. Paw volume was measured before and one hour after sub-plantar administration of formalin using plethysmometer method in order to assess inflammatory edema. Results: Intraperitoneal administration of extract alone or in combination with naloxone reduced the inflammatory rat paw edema volume (p<0.001). On the other hand, capsaicin increased rat paw edema volume (p<0.01), but intrathecal administration of extract alone and in combination with capsaicin decreased the inflammatory rat paw edema volume (p<0.01). Conclusion: The results of this study showed that decarboxylated cannabinoids in hydroalcoholic extract decrease the capsaicin-induced inflammatory rat paw edema through activation of CB1 and CB2 receptors and desensitization of TRPV1 receptor. On the contrary, administration of naloxone has not antagonized the reduction effect of extract on inflammatory paw edema, and it is likely that the effect of the extract has not exerted through opioid receptors. Keywords: Cannabis sativa; Receptors, Cannabinoid; Naloxone; Capsaicin. Qom Univ Med Sci J 2016;10(3):

2 مجله دانشگاه علم پزشکی قم دره دهم شماره سم خرداد 59 صفحه 10 الی 11 مقاله پژهشي (Original Article) درگیری گیرندههای انیلئیدی در خاصیت ضدالتهابی عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده پایه ماده گیاه شاهدانه در مش صحرایی 1 گره زیستشناسی دانشکده علم دانشگاه فردسی مشهد مشهد ایران. 2 دانشکده علم پزشکی دانشگاه علم پزشکی زاهدان زاهدان ایران. * نیسنده مسئل مکاتبات: مسعد فریدنی گره زیستشناسی دانشکده علم دانشگاه فردسی مشهد مشهد ایران آدرس پست الکترنیکی: تاریخ دریافت: 49/1/22 تاریخ پذیرش: 49/6/11 fereidoni@um.ac.ir 2 1 *1 مسعد فریدنی بهرام فرهادیمقدم کیهان فرهادیمقدم چکیده زمینه هدف: کانابینئیدهای گیاهی دکربکسیله با فعالسازی گیرندههای سیستم اندکانابینئیدی در سطح سیستم عصبی مرکزی بافتهای محیطی این سیستم را فعال میکنند. در این تحقیق اثر برهمکنش کانابینئیدهای گیاهی دکربکسیله با کپسایسین در سطح مرکزی نالکسان در سطح سیستمیک بر حجم ادم التهابی پا ناشی از تزریق کفپایی فرمالین بررسی شد. رش بررسی: در این مطالعه تجربی از مشهای صحرایی نر بالغ نژاد یستار ) گرم( استفاده گردید. برای بررسی اثر برهمکنش با سیستم اپیئیدی عصاره هیدرالکلی گیاه )دز 52 میلیگرم برکیلگرم( نالکسان )دز 2 میلیگرم برکیلگرم( همزمان عصاره نالکسان بهصرت درن صفاقی تجیز شدند برای بررسی اثر برهمکنش با سیستم انیلئیدی عصاره )دز شد. 2/21 میلیگرم بر 12 میکرلیتر( کپسایسین )دز 2/222 میلیگرم بر 12 میکرلیتر( همزمان عصاره کپسایسین بهصرت نخاعی تجیز شدند. حجم پا قبل از تجیز یکساعت پس از تزریق کف پایی فرمالین به رش پلتیسمتری برای سنجش میزان ادم التهابی اندازهگیری یافتهها: تجیز درن صفاقی عصاره به تنهایی همراه با نالکسان حجم ادم التهابی پا را کاهش داد )2/221>p(. ازطرفی کپسایسین منجر به افزایش حجم ادم التهابی شد )2/21>p( اما تجیز.)p<2/21( نخاعی نتیجههگیهری: عصاره به تنهایی همراه با کپسایسین حجم ادم التهابی پا را کاهش داد نتاایا ایان مطالعاه نشاان داد کانابینئیادهای دکربکسایله مجاد در عصااره هیدرالکلی باا فعاال کاردن گیرنادههاای افزایش ادم التهابی ناشی از کپسایسین CB1 CB2 غیرحسااس نمادن گیرناده TRPV1 را کاهش میدهند. در مقابل تجیز نالکسان اثر کاهشای عصاره را بر ادم التهابی پا آنتاگنیزه نکرده این احتمال جد دارد که تاثثیر عصااره از مسایر گیرندهه یا اپیئیدی اعمال نشده باشد. کلید اژهها: شاهدانه گیرندهه یا کانابینئیدی نالکسان کپسایسین. لطفا به این مقاله بهصرت زیر استناد نمایید: Fereidoni M, Farhadi Moghaddam B, Farhadi Moghaddam K. Involvement of vanilloid receptors in the Anti-inflammatory effect مقدمه of hydroalcoholic extract of heated female Cannabis sativa flowers in rat. Qom Univ Med Sci J 2016;10(3):10-18.[Full Text in Persian] 11

3 کانابینئیدهای گیاهی گرهی از کانابینئیدها هستند که به میزان زیادی اصلیترین در گلهای آنها پایه ماده گیاه شاهدانه تلید (Tetrahydrocannabinolic Acid) میشند THCA CBDA میباشد.)1( (Cannabidiolic Acid) این ترکیبات غیرقطبی در گیاه به فرم کربکسیلیک اسید تلید میشند )2(. کانابینئیدها اثرات خد را با فعال کردن سیستم اندکانابینئیدی از طریق اتصال به گیرندهه یا کانابینئیدی هماچانایان اتاصاال باه گایارنادههاای CB1 CB2 غیارکااناابیانائایادی (Transient Receptor Potential Vanilloid 1) TRPV1 PPARs (Peroxisome Proliferator Activated Receptor) (Orphan G Protein Coupled Receptor) GPR119 GPR55 اعمال میکنند )9 3(. یافتههای حاصل از تحقیقات پیشین بیانگر حضر فعالیت سیستم اندکانابینئیدی در سطح سیستم عصبی مرکزی )5 9( اعمال اثرات فیزیلژیکی هم سیستم این بهصرت مستقیم هم در برهمکنش با سایر سیستمها از قبیل سیستمه یا اپیئیدی )6( انیلئیدی )2( سرتنینی )1( دپامینی )4( میباشد. با تجه به یافتههای مطالعه حاضر نتایا پژهش پیشین در مرد اثر تجیز درن صفاقی عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده )دز 52 میلیگرم برکیلگرم( گلهای حرارتندیده پایه ماده گیاه شاهدانه بر ادم التهابی پا ناشی از تزریق کفپایی فرمالین این فرضیه مطرح است که تجیز نخاعی عصاره هیدرالکلی گلهای پایه ماده گیاه شاهدانه ممکن است مجب کاهش حجم ادم التهابی پا ناشی از تزریق فرمالین گردد. از طرفی آگنیست کاناله یا مطالعات نشان میدهد کپسایسین کاتی ین که در سطح شاخ پشتی پاسخهای التهابی میشد )12(. دریچهدار این ماده با فعال کردن گیرندههای TRPV1 نخاع اعمال میکند Aδ C مجب افزایش رد کاتینه یا نرن افزایش میگردد که همچن ماده P حساسیت منجر به آزادسازی TRPV1 بهعنان بهاسطه اثراتی منجر به برز ری فیبرهای آران سدیم تحریکپذیری میانجیه یا کلسیم به درن فیبرهای پپتیدی عصبی التهابی بههمین منظر برای یافتن مکانیسم اثر عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده پایه گیرندهه یا TRPV1 ماده گیاه شاهدانه التهابی ادم بر از طریق در سطح مرکزی از کپسایسین استفاده شد. همچنین بهمنظر بررسی برهمکنش احتمالی اثر عصاره سیستم اپیئیدی بر ادم التهابی آنتاگنیست گیرندهه یا از نالکسان )Naloxone( اپیئیدی بهعنان )6( استفاده گردید. در این مطالعه اثرات برهمکنشی تجیز درن صفاقی این عصاره )با دز 52 میلیگرم برکیلگرم( به همراه نالکسان همچنین اثر تجیز نخاعی عصاره با غلظت معادل دز 52 میلیگرم برکیلگرم به تنهایی به همراه کپسایسین فرمالین مرد بررسی قرار گرفت. رش بررسی بر ادم التهابی پا ناشی از تزریق در این پژهش تجربی از 22 رأس مش صحرایی نر نژاد یستار با زن تقریبی گرم استفاده شد. حیانات در حیانخانه گره زیستشناسی دانشگاه فردسی مشهد در شرایط استاندارد )با درجه حرارت 21 درجه سانتیگراد رطبت %52 سیکل نری 12 ساعت رشنایی 12 ساعت تاریکی امکان دسترسی آزاد به آب غذای کافی( نگهداری شدند. مشها بهصرت تصادفی در د دسته بزرگ به شرح زیر قرار گرفتند: 1- دربردارنده 5 گره 2 تایی شامل: گره کنترل )بدن تیمار( گره شم )دریافتکننده حالل شامل: ترکیب اتانل تئین 12 سالین به ترتیب با نسبتهای 1:1:1( گره دریافتکننده عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده )دز 52 میلیگرم برکیلگرم( گره دریافتکننده نالکسان )دز 2 میلیگرم برکیلگرم( )12( گره دریافتکننده همزمان عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده نالکسان که پس از گذشت 22 دقیقه عصاره بهآنها تجیز شد. تمامی تجیزها در این دسته بهصرت درن صفاقی انجام گرفت. -2 دربردارنده گره 5 2 تایی شامل: گره کنترل )جراحی کانلگذاری بدن تیمار( گره شم )همچن دسته 1( گره دریافتکننده عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده )غلظت 2/21 میلیگرم بر 12 میکرلیتر که این غلظت با تجه به زن تقریبی قطعه کمری نخاع معادل 2/2 گرم برای دز 52 میلایگارم (Calcitonin Gene Related Peptide) CGRP میشد )11(. 12

4 برکیلگرم عصاره معادلسازی شد( گره دریافتکننده محلل کاپساایسیان )غلظات 2/222 میلیگارم بار 12 میکارلایتار( )13( گره دریافتکننده همزمان عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده )دز 2/21 میلیگرم بر 5 میکرلیتر( کپسایسین )دز 2/222 میلیگرم بر 5 میکرلیتر( که پس از گذشت 5 دقیقه عصاره به آنها تجیز شد. تمامی تجیزها در این دسته بهصرت نخاعی به حجم 12 میکرلیتر انجام شد. تمامی مراحل انجام آزمایشها تحت مقررات بینالمللی رعایت حقق حیانات آزمایشگاهی صرت گرفت )19(. بهمنظر عصارهگیری از گلهای پایه ماده گیاه شاهدانه که تسط آزمایشگاه بیسیستماتیک گیاهی تهیه با کد هرباریمی تسط پژهشکده علم گیاهی دانشگاه فردسی تثیید نگهداری شده بد استفاده گردید. ابتدا گلها عاری از برگ ساقه شده جهت خشک شدن در مکانی تاریک خشک به مدت 2 هفته نگهداری شدند سپس برای هر بار عصارهگیری از ماده خشک 52 به میزان گرم استفاده شد. جهت تهیه عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده ماده خشک به مدت 12 دقیقه در دمای 112 درجه سانتیگراد در آن حرارت داده شد در ادامه با استفاده از اتانل %22 رش ماسراسین )خیساندن( )15( عصارهگیری شد سپس تسط کاغذ صافی صاف گردید. پس از عصارهگیری حاللها بهطر کامل تبخیر شدند. جهت تجیز نخاعی کانلگذاری در فضای تحت عنکبتیه براساس رش Yaksh Rudy انجام گرفت. در این رش ابتدا مشها با تجیز درنصفاقی کتامین )122 میلیگرم برکیلگرم( زایالزین )22 میلیگرم برکیلگرم( بیهش شدند. سپس مهای پشت سر حیان تراشیده شد سر در دستگاه استرئتاکس ثابت گردید. آنگاه در فاصله بین گشها بهطرف پایین برشی به اندازه 2 سانتیمتر ایجاد عضالت به آرامی کنار زده شدند تا غشای اطلس اکسیپیتیال نمایان شد. پس از سراخ کردن این غشا یک لله پلیاتیلن )PE10( 12 به طل 11 سانتیمتر که در فاصله 1 سانتیمتری یک طرف آن بهسیله پارافیلم برجستگی کچکی ایجاد شده بد بهآرامی به فضای تحت عنکبتیه ارد شد بهطریکه انتهای کانل بین قطعات کمری 5 9 قرار میگرفت. 3 سانتیمتر از لله کاه خاارج از نخااع بد جهات تجیزها استفاده گردید. )شایان ذکر است در هیچیک از حیانات بعد از کانلگذاری نباید نقص حرکتی دیده شد.( پس از جراحی کانلگذاری گذشت دره زمانی 5-2 رزه بهمنظر بهبدی اطمینان از سالم بدن حیان سایر مراحل آزمایشها انجام شد. برای تجیز از لله رابط سرنگ هامیلتن 52 میکرلیتر استفاده گردید )16(. جهت سنجش میزان التهاب حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین سنجش شد. بدین ترتیب ابتدا حجم الیه پای حیان به رش پلتیسممتری دیجیتالی )Plethysmometery( اندازهگیری شد. در این رش پای حیان تا ناحیه مچ که بهسیله ماژیک عالمتگذاری شده بد به درن ستن جیه که ری ترازی دیجیتالی قرار داشت فر برده شد عدد نشان دادهشده ثبت گردید. پس از گذشت مدت زمان 32 دقیقه از تجیزهای درنصفاقی دقیقه از 5 تجیزهای نخاعی برای القای ادم التهابی میزان 2/25 میلیلیتر محلل فرمالین %2/5 بهصرت زیرجلدی به کف پای حیان تزریق شد. از آنجاییکه پس از گذشت 62 دقیقه از تزریق کف پایی فرمالین میزان ادم التهابی ایجادشده به حداکثر میرسد حجم ثانیه پا پس از گذشت یکساعت مجددا به رش پلتیسممتری اندازهگیری شد. سپس با استفاده از فرمل محاسباتی زیر حجم ادم القاشده تسط فرمالین محاسبه گردید )12(. حجم الیه پا حجم ثانیه پا = حجم ادم التهابی ایجادشده 13/6 )جرم حجمی جیه( نتایا بهصرت mean±sem ارائه گردید. دادهها با استفاده از نرمافزار آماری GraphPad Prism نسخه 6 آزمن یکطرفه )جهت تفات معنیدار بین میانگینها( آزمن تی نیمن- کلز استدنت (T-Student-Neumann-keuls) )جهت میانگینها( با حداقل سطح معنیداری 2/25>p تحلیل شدند. یافتهها مقایسه طبق نتایا حاصل از اندازهگیری حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین در دسته ال حیانات اختالف معنیداری میان گرههای کنترل شم دریافتکننده نالکسان بهتنهایی جد نداشت. 13

5 از طرفی تجیز درن صفاقی عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده بهتنهایی در مقایسه با گره کنترل منجر به کااهاش حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین شد )2/221>p( همچنین حجم ادم التهابی در گره دریافتکننده عصاره نالکسان در مقایساه با گاره کنتارل کاهش معنیداری یافت )2/221>p(. مقایسه نتایا میان گره دریافاتکنناده عصااره به تنهایی گره دریافتکننده عصاره نالکسان اختالف معنیداری را در حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین نشان نداد )جدل نمدار شماره 1(. گرهها میانگین ± انحراف از معیار نمدار شماره 1: جدل شماره 1: تغییرات حجم ادم التهابی پا ناشی از تزریق کفپایی فرمالین بین گرههای آزمایششده کنترل شم براساس نتایا حاصل از آزمن پلتیسممتری در دسته دم حیانات حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین در گره کنترل شم تفات معنیداری نداشت اما تجیز نخاعی کپسایسین به تنهایی )2/222 میلیگرم بر 12 میکرلیتر( منجر به افزایش حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین در مقایسه با گره کنترل گردید )2/21>p(. از طرفی تجیز نخاعی غلظت معادل عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده بهتنهایی )2/21 میلیگرم بر 12 میکارلیتار( منجار به کاهش معنیداری در نالکسان )2 میلیگرم برکیلگرم( حجم ادم التهابی مقایسه عصاره )2/21 2/222( 252 ± 3/2 251/4 ± 12/1 252/6 ± 29 مقایسه تغییرات حجم ادم التهابی پا ناشی از تزریق کفپایی فرمالین میان گرهه یا القاشده با گره کنترل میلیگرم بر 5 حجم ادم التهابی عصاره هیدرالکلی گیاه )90 میلیگرم برکیلگرم( میلیگرم بر 5 بهسیله عصاره هیدرالکلی + نالکسان تزریق 114 ± 6/2 123/4 ± 13/1 کنترل شم گره دریافتکننده نالکسان )2 میلیگرم برکیلگرم( دریافتکننده عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده )90 میلیگرم برکیلگرم( دریافتکننده عصاره نالکسان. تجیز درن صفاقی عصاره به تنهایی به همراه نالکسان منجر به کاهش حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین شده است. دادهها بهصرت mean±sem ارائه شدهاند. )7=n( )0/001>p*** در مقایسه با گره کنترل(. کفپایی در فرمالین شد )2/21>p(. همچنین تجیز نخاعی میکرلیتر( به همراه کپسایسین میکرلیتر( سبب کاهش معنیداری در القاشده بهسیله تزریق کفپایی فرمالین در مقایسه با گره کنترل )2/21>p( گره دریافتکننده کپسایسین به تنهایی گردید )2/221>p( )جدل نمدار شماره 2(. گرهها میانگین ± انحراف از معیار جدل شماره 2: تغییرات حجم ادم التهابی پا ناشی از تزریق کفپایی فرمالین بین گرههای آزمایششده کنترل 212±5 شم 222/2±9/1 کپسایسین )0/002 میلیگرم بر 10 میکرلیتر( 326/3±3/1 عصاره هیدرالکلی گیاه )0/01 میلیگرم بر 10 میکرلیتر( 11/2±1/3 عصاره هیدرالکلی+کپسایسین 121/3±6/9 14

6 نمدار شماره 2: مقایسه تغییرات حجم ادم التهابی پا ناشی از تزریق کفپایی فرمالین بحث میان گرهه یا کنترل شم گره دریافتکننده کپسایسین )0/002 میلیگرم بر 10 میکرلیتر( دریافتکننده غلظت معادل عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده )0/01 میلیگرم بر 10 میکرلیتر( دریافتکننده عصاره کپسایسین. تجیز نخاعی کپسایسین منجر به افزایش حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین شده است درحالیکه تجیز نخاعی عصاره به تنهایی به همراه کپسایسین منجر به کاهش حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین شده است. دادهها بهصرت mean±sem ارائه شدهاند. )7=n( )0/01>p** در مقایسه با گره کنترل 0/001>p ### در مقایسه با گره دریافتکننده کپسایسین به تنهایی(. مطالعات پیشین حاکی از آن است که فعال شدن گیرندههای کانابینئیدی CB1 متصل به CB2 G پرتئین در اثر اتصال کانابینئیدها در پایانه پیشسیناپسی فعالیت آنزیم آدنیلیل سیکالز را مهار میکند درپی آن کاهش میزان )camp( حلقی AMP PKA نیز مهار میشد. در نتیجه این قایع منجر به کاهش فسفریالسین کانالهای پتاسیمی نع کانالها به همراه کانالهای پتاسیمی یکسیه که به A GIRK G باز شدن این )کانالهای پتاسیمی پرتئین جفت شدهاند( میگردد همچنین با مهار کانالهای دریچهدار ابسته به لتاژ کلسیمی N,P/Q,L خرج پتاسیم را زیاد رد کلسیم را کاهش میدهد که از این طریق میتاند بر آزادسازی میانجیهایی همچن گلتامات استیلکلین نرآدرنالین اثرگذار بده آنها را کاهش دهد )9 5(. یافتههای پیشین نشان داده است کانابینئیدهای گیاهی در اثر حرارت دیدن دکربکسیله شده تغییر ساختار میدهند بهعنان مثال میتان به THCA حرارت به ترتیب به CBDA THC اشاره کرد که در اثر )Tetrahydrocannabinol( )Cannabidiol( CBD تبدیل میشند. معمال فرم دکربکسیله فرم فعال کانابینئیدهای گیاهی محسب میشد )2(. عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده پایه ماده گایاه شااهاداناه حاای کانابینئیدهای دکربکسیله میباشد که احتماال از طریق همین کانابینئیدها مکانیسمهای ابسته به آنها میتاند اثرات خد را بر فرآیند التهاب اعمال کند. در ریشه پشتی نخاع که منبع آرانهای ردی به نخاع است هر د نع گیرنده CB1 CB2 حضر دارند. فرمالین میتاند با تحریک گیرندههای محیطی فیبرهای عصبی C Aδ میانجیهای التهابی ماده P در ریشه پشتی نخاع مجب آزادسازی CGRP همراه با گلتامات گردد. این ترکیبات پس از آزاد شدن نرنهای پسسیناپسی خد را در شاخ پشتی نخاع تحریک میکنند )11(. همچنین یافتههای دیگر مطالعات نشان میدهد در زمان برز التهاب با افزایش عامل پیشبرنده التهاب نظیر سیتکاینها برخی از اینترفرنها بیان گیرنده CB2 حاضر بر سطح سللهای ایمنی B T ماستسیتها ماکرفاژها میکرگلیای نخاع افزایش مییابد که با اتصال کانابینئیدهای دکربکسیله این گیرندهها فعال با مهار تلید گرهی از عامل التهابی پاسخهای التهابی را مهار میکنند )14(. عاله بر این ترکیباتی نظیر فرمالین باعث القای بیان ژن پرتئین Fos Fos در شاخ پشتی ناحیه کمری نخاع میگردند پرتئینی است که میتاند منجر به پیشرفت التهاب گردد بهعنان یک مارکر در فرآیند التهاب نیز شناخته میشد. احتماال کانابینئیدهای دکربکسیله با فعالنمدن گایارنده CB2 ماجاب 15

7 مهار آزادسازی میانجیهای التهابی سرکب بیان ژن پرتئین Fos همچنین مهار تلید فاکتر رشد عصبی از ماستسلها تجمع نترفیلها در محل التهاب میشد )22(. در پایانه فیبرهای عصبی C Aδ حضر دارند که فعالسازی میکنند در شاخ پشتی نخاع گیرندههای TRPV1 CB1 CB1 فعالیت TPRV1 )2(. کپسایسین با فعال کردن گیرندههای را تعدیل TRPV1 مجب افزایش رد ینهای کلسیم سدیم افزایش تحریکپذیری حساس نمدن فیبرهای آران میشد که نتیجه آن افزایش آزادسازی گلتامات است. گلتامات با فعال کردن گیرندههای خد مجب آزادسازی پپتیدهای التهابی CGRP P شده که با فعالسازی گیرندههای نرکینین بهیژه نرکینین 2 همراه است همچنین سللهای اندتلیال ایمنی را فعال منجر به اتساع عرق التهاب میگردد )21 12(. از طرفی گلتامات با فعال کردن گیرندههای خد بر ری اینترنرنهای گاباارژیک در سطح نخاع منجر به افزایش آزادسازی میانجی گاما- GABAa آمینبتریک اسید )GABA( فعالسازی گیرنده میشد. این افزایش فعالیت گیرندههای گابا باعث ایجاد فرآیندی در سطح نخاع کمری بهنام رفلکس ریشه پشتی DRR) )Dorsal Root Reflex, شده که در آن بهاسطه خرج ین کلر از گیرنده GABAa فعالشده دپالریزاسین شدیدی در فیبرهای آران صرت گرفته درپی آن آزادسازی پپتیدهای التهابی انجام میشد )12(. کپسایسین با فعالسازی camp پرتئین کینازها را فعال کرده که منجر به افزایش بیان آنزیمهای COX2 تلید پرستاگالندین E میشد )2( همچنین فسفریالسین کانالهای کلسیمی مجب افزایش رد ین کلسیم به سلل میگردد. ین کلسیم نیز اگزسیتز میانجیهای التهابی را افزایش میدهد )12(. بنابراین تجیز نخاعی کپسایسین از مسیرهای یادشده میتاند منجر به ایجاد پاسخهای التهابی شدید گردد که نتایا این پژهش نیز آن را تثیید میکند. کانابینئیدها با فعال نمدن گیرنده میتانند التهاب ناشی از فعالیت گیرندههای CB1 از راههای مختلفی را کاهش TRPV1 دهند: اال با مهار تلید camp مسیر فعالیت کپسایسین بهاسطه TRPV1 را مختل میکنند )2( ثانیا باا کااهاش فاسفاریالسیان کانالها خرج ین پتاسیم از سلل افزایش یافته رد ین کلسیم از کانالهای کلسیمی کاهش مییابد که منجر به کاهش تحریکپذیری اگزسیتز میانجیهای مؤثر در التهاب )گلتامات گابا P )CGRP از فیبرهای آران در سطح نخاع میگردد )2(. عاله بر این اثرات کانابینئیدها بهطر مستقیم با اتصال به گیرندههای TRPV1 این گیرندهها را در سطح نخاع غیرحساس میکنند )22(. بدین ترتیب احتماال کانابینئیدهای دکربکسیله مجد در عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده میتانند در سطح نخاع با فعال نمدن گیرندههای CB2 ادم التهابی پا را کاهش دهند با اثر مستقیم غیرمستقیم بر گیرندههای TRPV1 افزایش ادم التهابی پا در اثر کپسایسین را مهار کنند. با تجه به اینکه کانابینئیدها اپیئیدها اثرات مشابهی را بر فرآیندهایی از قبیل درد اعمال میکنند )23( در برخی از تحقیقات نیز برهمکنش د سیستم کانابینئیدی اپیئیدی در سطح گیرندههای CB1 µ اپیئیدی گزارش شده است )6(. در این تحقیق به بررسی اثر این د سیستم بر ادم التهابی پرداخته شد که با تجه به یافتههای حاصل میتان بیان کرد اثرات کانابینئیدهای مجد در عصاره بهسیله نالکسان )آنتاگنیست اپیئیدی( آنتاگنیزه نشده است. پس احتماال کانابینئیدهای عصاره از طریق سیستم اپیئیدی بر کاهش حجم پای ناشی از تزریق کف پایی فرمالین اثرگذار نبدهاند. الزم به ذکر است که برخی از تحقیقات نیز به این عدم تثثیر اشاره داشتهاند )11(. نتیجهگیری نتایا این مطالعه نشان داد کانابینئیدهای گیاهی دکربکسیلهشده مجد در عصاره هیدرالکلی گلهای حرارتدیده در سطح نخاعی سیستمیک با فعال کردن گیرندههای کانابینئیدی CB1 CB2 مهار فعالیت گیرندههای TRPV1 مجب کاهش حجم ادم التهابی ناشی از تزریق کفپایی فرمالین شده است که بیانگر برهمکنش د سیستم اندکانابینئیدی انیلئیدی در مسیر التهاب است. در مقابل این احتمال مطرح است که اثر کانابینئیدها بر التهاب بهاسطه سیستم اپیئیدی نمیباشد. 16

8 References: 1. Robson PJ. Therapeutic potential of cannabinoid medicines. Drug Test Anal 2014;6(1-2): Takeda S, Misawa K, Yamamoto I, Watanabe K. Cannabidiolic acid as a selective cyclooxygenase-2 inhibitory component in cannabis. Drug Metab Dispos 2008;36(9): Haj-Dahmane S, Shen RY. Modulation of the serotonin system by endocannabinoid signaling. Neuropharmacology 2011;61(3): Svízenská I, Dubový P, Sulcová A. Cannabinoid receptors 1 and 2 (CB1 and CB2), their distribution, ligands and functional involvement in nervous system structures--a short review. Pharmacol Biochem Behav 2008;90(4): Sidhpura N, Parsons LH. Endocannabinoid-mediated synaptic plasticity and addiction-related behavior. Neuropharmacology 2011;61(7): Schoffelmeer AN, Hogenboom F, Wardeh G, De Vries TJ. Interactions between CB1 cannabinoid and mu opioid receptors mediating inhibition of neurotransmitter release in rat nucleus accumbens core. Neuropharmacology 2006;51(4): Oshita K, Inoue A, Tang HB, Nakata Y, Kawamoto M, Yuge O. CB(1) cannabinoid receptor stimulation modulates transient receptor potential vanilloid receptor 1 activities in calcium influx and substance P release in cultured rat dorsal root ganglion cells. J Pharmacol Sci 2005;97(3): Egashira N, Matsuda T, Koushi E, Mishima K, Iwasaki K, Shoyama Y, et al. Involvement of 5-hydroxytryptamine1A receptors in Delta9-tetrahydrocannabinol-induced catalepsy-like immobilization in mice. Eur J Pharmacol 2006;550(1-3): Roser P, Gallinat J, Weinberg G, Juckel G, Gorynia I, Stadelmann AM. Psychomotor performance in relation to acute oral administration of Delta9-tetrahydrocannabinol and standardized cannabis extract in healthy human subjects. Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci 2009;259(5): Lin Q, Wu J, Willis WD. Dorsal root reflexes and cutaneous neurogenic inflammation after intradermal injection of capsaicin in rats. J Neurophysiol 1999;82(5): Ko MC, Woods JH. Local administration of delta9-tetrahydrocannabinol attenuates capsaicin-induced thermal nociception in rhesus monkeys: A peripheral cannabinoid action. Psychopharmacology (Berl) 1999;143(3): Zamani N, Hassanian-Moghaddam H, Bayat AH, Haghparast A, Shadnia S, Rahimi M, et al. Reversal of opioid overdose syndrome in morphine-dependent rats using buprenorphine. Toxicol Lett 2014;232(3): Trevisan G, Rossato MF, Hoffmeister C, Oliveira SM, Silva CR, Matheus FC, et al. Mechanisms involved in abdominal nociception induced by either TRPV1 or TRPA1 stimulation of rat peritoneum. Eur J Pharmacol 2013;714(1-3): Zimmermann M. Ethical considerations in relation to pain in animal experimentation. Acta Physiol Scand Suppl 1986;554: Makkizadeh Tafti M, Farhoudi R, Rabii M, Rastifar M. Evaluation allelopathic effect of Hemp (Cannabis sativa L.) on germination and growth of three kinds of weeds. Crop Physiol 2011;3(11): [Full Text in Persian] 16. Yaksh TL, Rudy TA. Chronic catheterization of the spinal subarachnoid space. Physiol Behav 1976;17(6): Fereidoni M, Ahmadiani A, Semnanian S, Javan M. An accurate and simple method for measurement of paw edema. J Pharmacol Toxicol Methods 2000;43(1): Lever IJ, Malcangio M. CB(1) receptor antagonist SR141716A increases capsaicin-evoked release of Substance P from the adult mouse spinal cord. Br J Pharmacol 2002;135(1):

9 19. Maresz K, Carrier EJ, Ponomarev ED, Hillard CJ, Dittel BN. Modulation of the cannabinoid CB2 receptor in microglial cells in response to inflammatory stimuli. J Neurochem 2005;95(2): Nackley AG, Makriyannis A, Hohmann AG. Selective activation of cannabinoid CB(2) receptors suppresses spinal fos protein expression and pain behavior in a rat model of inflammation. Neuroscience 2003;119(3): Beirith A, Santos AR, Calixto JB. The role of neuropeptides and capsaicin-sensitive fibres in glutamate-induced nociception and paw oedema in mice. Brain Res 2003;969(1-2): Maione S, Piscitelli F, Gatta L, Vita D, De Petrocellis L, Palazzo E, et al. Non-psychoactive cannabinoids modulate the descending pathway of antinociception in anaesthetized rats through several mechanisms of action. Br J Pharmacol 2011;162(3): Cichewicz DL, McCarthy EA. Antinociceptive synergy between delta (9)-tetrahydrocannabinol and opioids after oral administration. J Pharmacol Exp Ther 2003;304(3):