ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA-255082.02 Αναθ.: Ιούνιος 2003 BD Modified CNA Agar BD Modified CNA Agar with Crystal Violet ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖONTAI Το BD Modified CNA Agar CNA) είναι ένα επιλεκτικό υλικό για την απομόνωση Gram θετικών βακτηρίων από κλινικά δείγματα. Το BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA με κρυσταλλικό ιώδες) χρησιμοποιείται για την απομόνωση των στρεπτόκοκκων και των εντερόκοκκων και αναστέλλει τους σταφυλόκοκκους και τα Gram αρνητικά βακτήρια. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Η θρεπτική σύνθεση του άγαρ σόγιας Trypticase (TSA) το έχει καταστήσει ένα δημοφιλές υλικό, τόσο στη μη συμπληρωμένη του μορφή όσο και ως βάση για υλικά που περιέχουν αίμα. 1 Το άγαρ σόγιας Trypticase ΙΙ (TSA II), όταν συμπληρώνεται με 5% αίμα προβάτου, είναι μια βελτιωμένη έκδοση, που περιέχει παράγοντες ανάπτυξης, ώστε να παρέχει πιο ευδιάκριτες αιμολυτικές ζώνες από το άγαρ σόγιας Trypticase (TSA). Παρέχει εξαιρετική ανάπτυξη και των β-αιμολυτικών στρεπτόκοκκων και άλλων οργανισμών. Ο Ellner και οι συνεργάτες του ανακάλυψαν ότι ένα υλικό που περιείχε κολιστίνη και ναλιδιξικό οξύ σε βάση άγαρ Columbia εμπλουτισμένη με 5% αίμα προβάτου θα ενίσχυε την ανάπτυξη των σταφυλόκοκκων, των αιμολυτικών στρεπτόκοκκων και ταυτόχρονα θα ανέστειλε την ανάπτυξη των ειδών Proteus, Klebsiella και Pseudomonas. 2 Η βάση άγαρ Columbia έχει σχετικά υψηλή περιεκτικότητα σε υδατάνθρακες και συνεπώς οι β-αιμολυτικοί στρεπτόκοκκοι μπορεί να παράγουν μια πρασινωπή αιμολυτική αντίδραση, η οποία μπορεί να θεωρηθεί εσφαλμένα ως α-. Το άγαρ σόγιας Trypticase II παρέχει σαφέστερες αιμολυτικές αντιδράσεις, ωστόσο συνήθως μικρότερες αποικίες. Στο BD Modified CNA Agar και το BD Modified CNA Agar with Crystal Violet, το άγαρ σόγιας Trypticase II είναι το υλικό βάσης που παρέχει θρεπτικά συστατικά και συμπληρώνεται με κολιστίνη και ναλιδιξικό οξύ, ώστε να παρέχει επιλεκτικότητα για Gram θετικά βακτήρια. Το αίμα προβάτου και ο πρόσθετος ορός μόσχου ενισχύουν την ανάπτυξη και επιτρέπουν την ανίχνευση αιμολυτικών αντιδράσεων. Εκτός από αυτά τα συστατικά, το BD Modified CNA Agar with Crystal Violet περιέχει κρυσταλλικό ιώδες, το οποίο είναι ένας αποτελεσματικός αναστολέας των σταφυλόκοκκων. Συνεπώς, το υλικό αυτό χρησιμοποιείται για την απομόνωση των στρεπτόκοκκων και εντερόκοκκων που δεν αναστέλλονται από τη συγκεκριμένη χρωστική. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Τύποι* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού BD Modified CNA Agar CNA BD) Παγκρεατικό υδρόλυμα καζεΐνης 14,5 g Παπαϊκό αφομοίωμα σογιάλευρου 5,0 Χλωριούχο νάτριο 5,0 Άγαρ 14,0 Παράγοντες ανάπτυξης 1,5 Κολιστίνη 0,01 Ναλιδιξικό οξύ 0,01 Ορός μόσχου 50,0 ml Αίμα προβάτου, απινωδογονωμένο 5% ph 7,3 +/- 0,2 PA-255082.02-1 -
Το BD Modified CNA Agar with Crystal Violet επιπροσθέτως των προαναφερθέντων συστατικών περιέχει 2 mg κρυσταλλικού ιώδους ανά λίτρο υλικού. *Προσαρμοσμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται έτσι, ώστε να πληρούνται τα κριτήρια σχετικά με την απόδοση. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Προορίζεται αποκλειστικά για επαγγελματική χρήση. Μη χρησιμοποιείτε τρυβλία που εμφανίζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημάδια αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες των 10 τρυβλίων για μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε στους 35 ± 2 C για 18 έως 24 ώρες, κατά προτίμηση σε αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με διοξείδιο του άνθρακα. Στελέχη Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Proteus mirabilis ATCC 12453 BD Modified CNA Agar CNA BD) εξαιρετική, πρασινωπέςγκρίζες αποικίες, α- εξαιρετική, μικρές υπόλευκες αποικίες με β- εξαιρετική, μεσαίου μεγέθους λευκές έως κίτρινες αποικίες, με ή χωρίς εξαιρετική, υπόλευκες αποικίες με γκριζωπή ζώνη, χωρίς Αναστολή μερική έως πλήρης, απουσία BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA BD με κρυσταλλικό ιώδες) Ανάπτυξη αρκετά καλή έως εξαιρετική, γκριζωπέςπρασινωπές αποικίες, α- εξαιρετική, μικρές κυανέςγκρίζες αποικίες, β- Πλήρης αναστολή Ανάπτυξη αρκετά καλή έως εξαιρετική, μικρές κυανωπές αποικίες, χωρίς Αναστολή μερική έως πλήρης, απουσία Μη ενοφθαλμισμένο Ερυθρό (χρώμα αίματος) Ερυθρό (χρώμα αίματος), κυανωπή απόχρωση PA-255082.02-2 -
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά To BD Modified CNA Agar CNA BD) και το BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA BD με κρυσταλλικό ιώδες) παρέχονται σε τρυβλία Stacker των 90 mm. Μικροβιολογικά ελεγμένα. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το BD Modified CNA Agar CNA BD) είναι ένα επιλεκτικό υλικό για πολλά Gram θετικά βακτήρια σε αερόβια βακτηριολογία και μπορεί να χρησιμοποιηθεί με όλους τους τύπους βακτηριολογικών δειγμάτων. Το BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA BD με κρυσταλλικό ιώδες) είναι ένα επιλεκτικό υλικό για στρεπτόκοκκους και εντερόκοκκους και αναστέλλει τους σταφυλόκοκκους. Χρησιμοποιείται κυρίως για την ανίχνευση των στρεπτόκοκκων σε δείγματα από σημεία του σώματος, όπου αυτοί οι οργανισμοί παίζουν σημαντικό ρόλο ως μολυσματικοί παράγοντες, π.χ. για την ανίχνευση των στρεπτόκοκκων της ομάδας Α (=Streptococcus pyogenes) σε δείγματα από την ανώτερη αναπνευστική οδό, αλλά μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση αυτών και άλλων στρεπτόκοκκων και εντερόκοκκων από άλλα κλινικά δείγματα. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με αυτά τα υλικά, δείτε την ενότητα ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ. Διαδικασία της εξέτασης Επιστρώστε το δείγμα σε BD Modified CNA Agar CNA BD) ή BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA BD με κρυσταλλικό ιώδες) κατά το συντομότερο δυνατόν μετά την παραλαβή του από το εργαστήριο. Το τρυβλίο επίστρωσης χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση κεκαθαρμένων καλλιεργειών από δείγματα που περιέχουν ανάμεικτη χλωρίδα. Εναλλακτικά, εάν καλλιεργείται υλικό απευθείας από επίχρισμα, κυλήστε το στυλεό σε μια μικρή περιοχή της επιφάνειας στο άκρο και μετά επιστρώστε από αυτή την ενοφθαλμισμένη περιοχή. Για να μπορούν να ανιχνευθούν όλα τα παθογόνα που περιέχονται στο δείγμα, πρέπει να συμπεριληφθεί το BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood (Άγαρ Columbia με 5% αίμα προβάτου BD) και, ανάλογα με τον τύπο του δείγματος, πρόσθετα επιλεκτικά υλικά. 3,4 Επειδή πολλοί παθογόνοι μικροοργανισμοί χρειάζονται διοξείδιο του άνθρακα κατά την πρωτογενή απομόνωση, τα τρυβλία θα πρέπει να επωαστούν σε αερόβιο περιβάλλον που περιέχει 3% έως 10% CO 2 περίπου. Επωάστε τα τρυβλία στους 35-37 C για 18 έως 24 ώρες ή περισσότερο, εάν απαιτείται. Αποτελέσματα Η τυπική μορφολογία των αποικιών στο BD Modified CNA Agar CNA BD) είναι η ακόλουθη: Στρεπτόκοκκοι (μη ομάδας D) Μικρές, λευκές έως γκριζωπές. Ενδεχομένως αιμολυτικές, ανάλογα με τα είδη Εντερόκοκκοι (Ομάδα D) Μικρού έως μεσαίου μεγέθους, αλλά μεγαλύτερες από των στρεπτόκοκκων ομάδας Α, γκρίζες Σταφυλόκοκκοι Μεσαίου μεγέθους, λευκές έως γκρίζες ή κρεμ έως κίτρινες. Ενδεχομένως αιμολυτικές, ανάλογα με τα είδη Μικρόκοκκοι Μεγάλες, λευκές έως γκρίζες ή κίτρινες προς πορτοκαλί Κορυνοβακτηρίδια Μικρές έως μεγάλες, λευκές έως γκρίζες ή κίτρινες Candida spp. Μικρές, λευκές Listeria monocytogenes Μικρές, γκρίζες με ασθενή Gram αρνητικά βακτήρια Μερική έως πλήρης αναστολή PA-255082.02-3 -
Στο BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA BD με κρυσταλλικό ιώδες) οι σταφυλόκοκκοι και τα Gram αρνητικά βακτήρια θα ανασταλούν μερικώς έως πλήρως, ενώ οι στρεπτόκοκκοι και οι εντερόκοκκοιι θα παράγουν τις ίδιες αντιδράσεις ανάπτυξης όπως στο BD Modified CNA Agar. Ωστόσο, οι αποικίες έχουν την τάση να λαμβάνουν μια κυανωπή απόχρωση λόγω της συσσώρευσης του κρυσταλλικού ιώδους. Άλλα Gram θετικά βακτήρια μπορεί να αναπτυχθούν ή όχι, ανάλογα με την ευαισθησία τους στους αναστολείς. Για λεπτομέρειες σχετικά με την ερμηνεία της ανάπτυξης σε τρυβλία πρωτογενούς απομόνωσης, συμβουλευτείτε τις βιβλιογραφικές αναφορές. 4-7 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το BD Modified CNA Agar CNA BD) χρησιμοποιείται για την απομόνωση Gram θετικών βακτηρίων, π.χ. στρεπτόκοκκοι, σταφυλόκοκκοι, κορυνόμορφα, Listeria spp και άλλα. 2 Το BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA BD με κρυσταλλικό ιώδες) χρησιμοποιείται για την απομόνωση των στρεπτόκοκκων και των εντερόκοκκων. Οι σταφυλόκοκκοι αναστέλλονται σε αυτό το υλικό. Άλλα Gram θετικά βακτήρια μπορεί να αναπτυχθούν στο υλικό ή όχι, ανάλογα με τα είδη και την ευαισθησία τους στους αναστολείς. Τα περισσότερα Gram αρνητικά βακτήρια, όπως τα Enterobacteriaceae, αναστέλλονται σε αυτά τα υλικά. Αποτελέσματα σχετικά με τις επιδόσεις Σε μια εσωτερική αξιολόγηση, εξετάστηκαν στελέχη από τα ακόλουθα είδη για ανάπτυξη και αιμολυτικές αντιδράσεις σε αυτά τα υλικά. Το BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Άγαρ Columbia CNA με 5% αίμα προβάτου BD) χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς ανάπτυξης. Τα τρυβλία επωάσηκαν στους 35 έως 37 C για 20 ώρες, σε αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με CO 2. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στον πίνακα 1. Περιορισμοί της διαδικασίας Παρόλο που πρόκειται για Gram θετικά βακτήρια, οι αερόβιοι οργανισμοί σπορογένεσης (Bacillus spp. και τα σχετικά γένη) μπορεί να ανασταλούν σε αυτά τα υλικά. Αυτά τα υλικά δεν είναι ανασταλτικά στους μύκητες. Ο αριθμός και οι τύποι βακτηριακών ειδών που εμφανίζονται ως λοιμώδεις παράγοντες είναι πολύ μεγάλος. Συνεπώς, πριν χρησιμοποιηθούν τα υλικά ως υλικά ρουτίνας για μικροοργανισμούς που απομονώνονται σπάνια ή έχουν περιγραφεί πρόσφατα, πρέπει πρώτα να εξετάζεται η καταλληλότητά τους από το χρήστη με την καλλιέργεια καθαρών καλλιεργειών του εν λόγω οργανισμού. Παρότι ορισμένες διαγνωστικές εξετάσεις είναι δυνατό να εκτελεστούν απευθείας στα υλικά καλλιέργειας, για πλήρη ταυτοποίηση είναι απαραίτητες βιοχημικές και, εάν υποδεικνύεται, ανοσολογικές εξετάσεις, με χρήση καθαρών καλλιεργειών. Πίνακας 1: Αποτελέσματα σχετικά με τις επιδόσεις Είδος BD Modified CNA Agar (Τροποποιημένο άγαρ CNA BD) BD Modified CNA Agar with Crystal Violet CNA BD με κρυσταλλικό ιώδες) Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae Streptococcus pneumoniae α- α- Streptococcus sanguis ασθενής ασθενής α- α- PA-255082.02-4 - BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Άγαρ Columbia CNA με 5% αίμα προβάτου BD) α- ασθενής α- Enterococcus faecalis Ανάπτυξη Ανάπτυξη Ανάπτυξη
Staphylococcus aureus Απουσία ανάπτυξης Staphylococcus epidermidis Ανάπτυξη Απουσία ανάπτυξης Ανάπτυξη Listeria monocytogenes ασθενής Απουσία ανάπτυξης πολύ ασθενής Escherichia coli Απουσία ανάπτυξης Απουσία ανάπτυξης Απουσία ανάπτυξης Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Απουσία ανάπτυξης Απουσία ανάπτυξης Απουσία ανάπτυξης ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Vera, H.D., and D.A. Power. 1980. Culture media, p. 969. In: E.H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbiology, 3rd ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45:502-504. 3. Forbes, B.A. and P.A. Granato. 1995. Processing specimens for bacteria. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Baron, E. J, L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey & Scott s diagnostic microbiology, 9th ed., p. 415. Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO. 5. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture media, Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Ruoff, K. L., R.A. Whiley, and D. Beighton. 2003. Streptococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Teixeira, L.M., and R.R. Facklam. 2003. Enterococcus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD Modified CNA Agar with 5% Sheep Blood Αρ. κατ. 255082 Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία BD Modified CNA Agar with Crystal Violet and 5% Sheep Blood Αρ. κατ. 255086 Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès 38800 Le Pont de Claix/France Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292 http://www.bd.com BD, BD logo, Trypticase and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton, Dickinson and Company PA-255082.02-5 -