CandiSelect 20 63740 Επιλεκτικό χρωμογόνο μέσο καλλιέργειας για την απομόνωση ζυμομυκήτων, την άμεση αναγνώριση του Candida albicans και την τεκμαιρόμενη αναγνώριση των C. tropicalis, C. glabrata και C. krusei 2014/10 Πίνακας περιεχομένων 1. ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 2. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 3. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ 4. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ 5. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ 6. ΔΕΙΓΜΑΤΑ 7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ 8. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΕΞΕΤΑΣΗΣ 9. ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΤΙΜΕΣ 10. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ 11. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1 (EL)
1. ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το CandiSelect είναι ένα επιλεκτικό χρωμογόνο μέσο άγαρ για την απομόνωση και τη διαφοροποίηση ζυμομυκήτων. Το CandiSelect επιτρέπει την άμεση αναγνώριση του Candida albicans και την τεκμαιρόμενη αναγνώριση ορισμένων άλλων παθογόνων ειδών ζυμομυκήτων, συγκεκριμένα των C. glabrata, C. tropicalis και C. krusei. 2. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ Η εμφάνιση επιθετικών μυκητιασικών λοιμώξεων έχει αυξηθεί σταθερά κατά τις τελευταίες δύο δεκαετίες. Με την πρόσφατη πρόοδο στις ιατρικές και χειρουργικές παρεμβάσεις, καθώς και με τον αυξημένο πληθυσμό ασθενών με καταπονημένο ανοσοποιητικό σύστημα, η ποικιλομορφία ανθρώπινων μυκητιασικών παθογόνων οργανισμών εξακολουθεί να μεγαλώνει. Είναι κοινώς αποδεκτό πως τα είδη του μύκητα Candida αποτελούν συνήθη αιτία νοσοκομειακών λοιμώξεων με σημαντική σχετική νοσηρότητα και θνησιμότητα, καθώς και με αυξημένες δαπάνες ιατροφαρμακευτικής περίθαλψης (1). Ο C. albicans είναι το συνηθέστερο είδος Candida που εμπλέκεται σε αυτές τις λοιμώξεις, αλλά η αναφερόμενη λίστα των ειδών Candida που δεν είναι albicans μεγαλώνει, ενώ ορισμένα από αυτά παρουσιάζουν μειωμένη ευαισθησία σε αντιμυκητιασικά μέσα (2). Ως εκ τούτου, ο γρήγορος προσδιορισμός των απομονωθέντων μυκήτων σε επίπεδο είδους είναι απαραίτητος για τη βελτιστοποίηση της αντιμετώπισης μυκητιασικών λοιμώξεων (3). Το CandiSelect είναι ένα επιλεκτικό χρωμογόνο μέσο για την απομόνωση και τη διαφοροποίηση ζυμομυκήτων. Άμεση αναγνώριση του C. albicans με βάση την ανίχνευση συγκεκριμένης ενζυματικής δραστηριότητας εξοζαμινιδάσης, Τεκμαιρόμενη αναγνώριση των C. tropicalis, C. glabrata και C. krusei, με βάση την ανίχνευση ενζυματικής δραστηριότητας φωσφατάσης η οποία είναι συσχετισμένη με χαρακτηριστική μορφολογία αποικιών για κάθε είδος, Ανίχνευση μικτών καλλιεργειών ζυμομυκήτων 3. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το CandiSelect αποτελείται από μια πλούσια θρεπτική βάση που περιλαμβάνει χρωμογόνα υποστρώματα, τα οποία επιτρέπουν την ανίχνευση ενζυματικών δραστηριοτήτων που παράγονται συγκεκριμένα από ζυμομύκητες, με αποτέλεσμα τη δημιουργία αποικιών με διάφορους χρωματισμούς και τη δυνατότητα αναγνώρισης ζυμομυκήτων σε επίπεδο είδους με την μέτρηση τόσο χρωματικών όσο και μορφολογικών χαρακτηριστικών των αποικιών (1). Η παρουσία χλωραμφαινικολης και γενταμικίνης αναστέλλει την ανάπτυξη των περισσότερων βακτηρίων. Η μέτρηση των πλακών του CandiSelect είναι δυνατή εντός 24-48 ωρών επώασης: Ο C. albicans παράγει χαρακτηριστικές αποικίες ροζ-μοβ χρώματος, Οι C. tropicalis, C. glabrata και C. krusei παράγουν αποικίες μπλε-πράσινου χρώματος. Η τεκμαιρόμενη αναγνώριση κάθε είδους βασίζεται στη χρωματική ένταση που είναι συσχετισμένη με την τυπική μορφολογία των αποικιών. 4. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ 4.1. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ Το CandiSelect (CANDI) είναι διαθέσιμο στην ακόλουθη μορφή: Αναγνωριστικά στοιχεία ετικέτας Περιγραφή Παρουσίαση/προετοιμασία CandiSelect 63740 Κουτί πλακών άγαρ 20 x 90 mm / Έτοιμες προς χρήση Σύνθεση μέσου κατά προσέγγιση (g/l) Επαγωγείς ανάπτυξης και ενζύμων 40 Υδατάνθρακες 10 Πεπτόνες 7.6 Μέσα αντίθεσης 3 Μίγμα χλωραμφαινικόλης + γενταμικίνης 0.5 Μίγμα αλάτων 0.4 Χρωμογόνα υποστρώματα 0.2 Άγαρ 14 4.2. ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗΣ ΚΑΙ ΧΕΙΡΙΣΜΟΥ Τα αντιδραστήρια μπορούν να χρησιμοποιηθούν μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία και στις πλάκες. Παρουσίαση Αδιαφανείς πλάκες άγαρ Αποθήκευση +2-8 C, μακριά από το φως Φυλάσσετε τις πλάκες στην αρχική τους συσκευασία, μέχρι να τις χρησιμοποιήσετε, για να τις προστατεύσετε από το φως. Κλείνετε τη συσκευασία μετά από κάθε αφαίρεση πλάκας. 2 (EL)
5. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Για "in vitro" διαγνωστική χρήση. Μόνο για χρήση από επαγγελματίες στον χώρο της υγειονομικής περίθαλψης. 5.1. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΥΓΕΙΑΣ ΚΑΙ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ Ο χειρισμός του παρόντος μέσου θα πρέπει να διεξάγεται μόνο από ειδικευμένο προσωπικό, καταρτισμένο στις εργαστηριακές διαδικασίες και εξοικειωμένο με τους δυνητικούς κινδύνους τους. Φορέστε κατάλληλο προστατευτικό ρουχισμό, γάντια και προστατευτικά για τα μάτια/το πρόσωπο και χειριστείτε τον εξοπλισμό σύμφωνα με την απαιτούμενη Ορθή Εργαστηριακή Πρακτική (3-8). Ακολουθήστε την ασηπτική τεχνική και τηρήστε τις απαιτούμενες προφυλάξεις για μικροβιολογικούς κινδύνους καθ' όλη τη διάρκεια των διαδικασιών. Απορρίπτετε όλα τα δείγματα και τα υλικά που χρησιμοποιούνται για τη διεξαγωγή της εξέτασης ως εάν περιείχαν μολυσματικό παράγοντα. Η διαχείριση και η απόρριψη των εργαστηριακών, των χημικών και των βιολογικά επικίνδυνων αποβλήτων πρέπει να γίνεται σύμφωνα με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς (4,8,9). Για συστάσεις αναφορικά με τους κινδύνους και τις προφυλάξεις που σχετίζονται με κάποια χημικά συστατικά αυτού του μέσου, ανατρέξτε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας (ΔΔΑ) που είναι διαθέσιμο στη διεύθυνση www.bio-rad.com ή κατόπιν αίτησης. 5.2. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΩΣ ΠΡΟΣ ΤΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ 5.2.1. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ Ελαχιστοποιήστε την έκθεση του μέσου CandiSelect στο φως (<6 ώρες, βλ. Περιορισμοί εξέτασης 8α). Πριν από τον ενοφθαλμισμό, αφήστε τις πλάκες να θερμανθούν σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C) μακριά από το φως. Η επιφάνεια άγαρ του CandiSelect θα πρέπει να είναι λεία και υγρή. Μην χρησιμοποιείτε πλάκες εάν φέρουν ενδείξεις επιμόλυνσης, εάν έχουν ξεραθεί, εάν έχουν σπάσει ή εάν παρουσιάζουν οποιαδήποτε άλλη αλλοίωση. 5.2.2. ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑ Διεξάγετε την εξέταση σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Μην αλλάζετε τη διαδικασία της δοκιμασίας. 6. ΔΕΙΓΜΑΤΑ Ανατρέξτε στις κατάλληλες οδηγίες κλινικής μικροβιολογίας ή στα κατάλληλα πρότυπα για λεπτομέρειες σχετικά με τη συλλογή δειγμάτων και τις διαδικασίες χειρισμού (7-10). Χρησιμοποιήστε κατάλληλα μέσα μεταφοράς και ακολουθήστε τις συνιστώμενες οδηγίες του κατασκευαστής της συσκευής μεταφοράς. 7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ 7.1. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Μέσο CandiSelect 7.2. ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ Οργανισμοί ποιότητας ελέγχου, ανάλογα με τις απαιτήσεις. Αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, ανάλογα με τις απαιτήσεις 7.3. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΔΟΚΙΜΑΣΙΑΣ Ενοφθαλμίστε το δείγμα απευθείας στο μέσο CandiSelect χρησιμοποιώντας την καθιερωμένη μέθοδο δημιουργίας τεταρτημορίων για την απομόνωση: Ξεκινώντας από το αρχικό σημείο ενοφθαλμισμού του δείγματος, χωρίστε λωρίδες σε κοντινές αποστάσεις, προκειμένου να δημιουργήσετε καλά απομονωμένες αποικίες αναφορικά με τον διακριτό χρωματισμό και μορφολογία (βλ. Περιορισμοί εξέτασης 8η). Επωάστε τις πλάκες σε αντεστραμμένη θέση σε επωαστήρα με αέρα περιβάλλοντος στους 35-37 C για 24-48 ώρες, μακριά από το φως. Μην επωάζετε σε επωαστήρα CO 2. 7.4. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ Οι δοκιμές ελέγχου ποιότητας θα πρέπει να πραγματοποιούνται σε συμμόρφωση με τους τοπικούς, κρατικούς και ομοσπονδιακούς κανονισμούς ή με τις προϋποθέσεις πιστοποίησης και τις καθιερωμένες διαδικασίες ελέγχου ποιότητας του εργαστηρίου. Ανατρέξτε στη σχετική καθοδήγηση και τους κανονισμούς για κατάλληλες διαδικασίες ελέγχου ποιότητας (10). Εξετάστε τις πλάκες για τυχόν αλλοιώσεις (βλ. Ενότητα 5.2.1 παραπάνω). Η απόδοση του μέσου CandiSelect μπορεί να επαληθευτεί με τους ακόλουθους οργανισμούς ελέγχου ποιότητας. Προετοιμάστε 3 (EL)
ένα αιώρημα 0,5 της κλίμακας McFarland για κάθε στέλεχος. Αραιώστε το αιώρημα σε αναλογία 1:10 με στείρο φυσιολογικό ορό, μεταφέρετε 10 μl στην επιφάνεια άγαρ του CandiSelect και χωρίστε σε λωρίδες για απομόνωση. Στελέχη C. albicans ATCC 24433 C. tropicalis ATCC 750 E. coli ATCC 25922 S. aureus ATCC 25923 Αναμενόμενα αποτελέσματα στους 35-37 C Ανάπτυξη εντός 24 ωρών Ανάπτυξη εντός 24 ωρών Καμία ανάπτυξη εντός 48 ωρών Καμία ανάπτυξη εντός 48 ωρών Χρώμα και μορφολογία αποικιών στο CandiSelect Αποικίες ροζ-μοβ χρώματος, Λείες προς τραχιές (Λ-Τ) Αποικίες με έντονο μπλε-πράσινο χρώμα, Σφαιρικές αποικίες, Λείες (Λ) - - 7.5. ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Πραγματοποιήστε μέτρηση των πλακών εντός 24-48 ωρών επώασης. Αποτελέσματα εντός 24-48 ωρών στους 35-37 C Άμεση αναγνώριση Τεκμαιρόμενη αναγνώριση Χρώμα αποικιών Τυπική μορφολογία αποικιών Ερμηνεία Αποικίες ροζ-μοβ χρώματος Αποικίες με έντονο μπλεπράσινο χρώμα Αποικίες με αχνό μπλεπράσινο χρώμα Αποικίες μπλε-πράσινου χρώματος Λευκές ή αχνά χρωματισμένες Λείες προς τραχιές (Λ-Τ) Σφαιρικές αποικίες, Λείες (Λ) Επίπεδες και γυαλιστερές αποικίες, λείες (Λ), οι οποίες παρουσιάζουν συνήθως ένα χαρακτηριστικό χρωματικό μοτίβο ματιού ψαριού (αποικίες με σκουρότερο κέντρο) Μεγάλες αποικίες, ξηρή εμφάνιση και ανώμαλο περίγραμμα, τραχιές (Τ) Δεν εμφανίζουν κάποια τυπική μορφολογία C. albicans C. tropicalis C. glabrata C. krusei Χωρίς προγνωστική αναγνώριση Εάν δεν παρατηρηθεί ανάπτυξη ή διακριτός χρωματισμός εντός 24 ωρών, επωάστε για 48 ώρες. Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων της εξέτασης θα πρέπει να πραγματοποιείται λαμβάνοντας υπόψη το ιστορικό του ασθενούς, την πηγή του δείγματος, τη μορφολογία της αποικίας και τη μορφολογία στο μικροσκόπιο και, εάν είναι απαραίτητο, τα αποτελέσματα τυχόν άλλων εξετάσεων που έχουν διεξαχθεί. Για οριστική αναγνώριση, συνιστώνται περαιτέρω καθιερωμένες εξετάσεις. 7.6. ΣΧΟΛΙΑ Μπορούν να εκτελεστούν απευθείας περαιτέρω εξετάσεις αναγνώρισης, όπως εξετάσεις συγκόλλησης σε καταλάση ή ανάλυση των βιοχημικών, μορφολογικών και μεταβολικών χαρακτηριστικών, καθώς και εξετάσεις ευαισθησίας σε αντιμυκητιασικά φάρμακα, χρησιμοποιώντας αποικίες που έχουν απομονωθεί σε CandiSelect [δηλαδή, Bio-Rad AuxaColor 2 (κωδικός 56513) και FUNGITEST (κωδικός 60780)]. Σημείωση: Τα Bio-Rad AuxaColor 2 και FUNGITEST δεν είναι διαθέσιμα στις ΗΠΑ. 8. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΕΞΕΤΑΣΗΣ α) Η παρατεταμένη έκθεση στο φως ( 6 ώρες) ενδέχεται να οδηγήσει μειωμένη ανάκτηση ή/και σε αποχρωματισμό των οργανισμών ελέγχου ποιότητας ή των στελεχών των ασθενών. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση των πλακών του CandiSelect στο φως (<6 ώρες) τόσο πριν όσο και κατά τη διάρκεια της επώασης. Η επώαση σε CO 2 ενδέχεται να έχει ως αποτέλεσμα ψευδώς αρνητικές καλλιέργειες. Επωάζετε μόνο σε επωαστήρες με αέρα περιβάλλοντος. β) Η απόδοση του CandiSelect έχει βελτιστοποιηθεί για επώαση στους 35-37 C για 24-48 ώρες. Η μέτρηση των πλακών είναι δυνατή ανά πάσα στιγμή σε αυτό το χρονικό πλαίσιο. Χαμηλότερες ή υψηλότερες θερμοκρασίες επώασης (π.χ. 33 ή 39 C) ή μικρότεροι χρόνοι επώασης (<20 ώρες για τον C. albicans και <24 ώρες για άλλα είδη Candida) ενδέχεται να μειώσουν την ευαισθησία του CandiSelect. Ο συνδυασμός και των δύο παραγόντων (θερμοκρασία και χρόνοι επώασης) είχε ως αποτέλεσμα μεταβλητές αποδόσεις στο χρώμα και τις διαμέτρους των αποικιών. γ) Ορισμένα ασυνήθιστα στελέχη ζυμομυκήτων που έχουν ειδικές μεταβολικές απαιτήσεις ίσως να μην αναπτυχθούν στο μέσο CandiSelect (π.χ., C. zeylanoides, C. curvata, C. norvegica, C. sake). δ) Για τους κρυπτόκοκκους συνιστάται εκτεταμένος χρόνος επώασης έως 72 ωρών. ε) Τα στελέχη C. dubliniensis (το οποίο απομονώνεται μόνο σε σπάνιες περιπτώσεις (11,12) ) παρουσιάζουν δραστηριότητα εξοζαμινιδάσης και ροζ προς μοβ χρώμα στο μέσο CandiSelect, ωστόσο, συχνά το χρώμα είναι ασθενέστερο και παρουσιάζεται αργότερα σε σχέση με τη στιγμή παρουσίασης του χρώματος για τον C. albicans (στις 48 ώρες επώασης). 4 (EL)
στ) Τα στελέχη των C. ciferri και C. stellatoidea ενδέχεται να εμφανίσουν ροζ χρωματισμό στις 48 στο μέσο CandiSelect, ωστόσο, μπορούν εύκολα να διακριθούν από το μέγεθος των αποικιών, οι οποίες είναι πολύ μικρότερες σε σχέση με αυτές του C. albicans. ζ) Σπάνια στελέχη του C. albicans εμφανίζουν λευκές αποικίες στις 24 ώρες επώασης, αλλά εντός 48 ωρών παρουσιάζεται ροζ χρωματισμός σε αυτές τις αποικίες. η) Ορισμένα δείγματα ενδέχεται να οδηγήσουν σε μη συγκεκριμένο χρωματισμό του μέσου CandiSelect στο σημείο ενοφθαλμισμού. Η ερμηνεία του χρώματος της αποικίας πρέπει να εκτελεστεί σε αποικίες που είναι καλά απομονωμένες από αυτό το σημείο ενοφθαλμισμού. θ) Τα στελέχη του Candida που παρουσιάζουν χαμηλή δραστηριότητα φωσφατάσης ενδέχεται να δημιουργήσουν αποικίες με λευκό έως αχνό μπλε-πράσινο χρώμα στο πλαίσιο επώασης 48 ωρών. ι) Ορισμένα ασυνήθιστα είδη Candida μπορούν να δημιουργήσουν αποικίες παρόμοιες με αυτές των ειδών C. tropicalis, C. glabrata ή C. krusei. 9. ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΤΙΜΕΣ Τα είδη του γένους Candida είναι οι παράγοντες που εμπλέκονται συχνότερα σε επιθετικές μυκητιασικές λοιμώξεις. Μια μορφή επιθετικής καντιντίασης, η καντινταιμία, είναι η τέταρτη συχνότερη λοίμωξη του κυκλοφορικού ανάμεσα στους νοσηλευόμενους ασθενείς στις Ηνωμένες Πολιτείες. Μια έρευνα που διεξήχθη στο αμερικανικό Κέντρο ελέγχου ασθενειών (CSC) διαπίστωσε πως η καντινταιμία παρουσιάζεται σε 8 άτομα από 100.000 ετησίως. Στα άτομα που διατρέχουν υψηλό κίνδυνο καντινταιμίας περιλαμβάνονται βρέφη με χαμηλό βάρος κατά τη γέννηση, χειρουργημένοι ασθενείς και όλοι όσοι έχουν ανεπαρκές ανοσοποιητικό σύστημα (13). 10. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ 10.1. ΜΕΛΕΤΗ ΑΚΡΙΒΕΙΑΣ Εξετάστηκε ένα πάνελ οκτώ γνωστών στελεχών εις διπλούν από δύο διαφορετικούς χειριστές. Εξετάστηκαν δύο διαφορετικές παρτίδες CandiSelect για την επαναληψιμότητα της απόδοσης των καλλιεργειών (ανάπτυξη και χρωματισμός αποικιών) σε περίοδο τεσσάρων ημερών. Εκτελέστηκαν μετρήσεις στις 24 και 48 ώρες επώασης. Όλες οι εξετάσεις εναρμονίστηκαν με τα αναμενόμενα αποτελέσματα. 10.2. ΚΛΙΝΙΚΗ ΑΠΟΔΟΣΗ Πραγματοποιήθηκε προοπτική μελέτη στη Γαλλία σε 517 διάφορα δείγματα (30% ούρα, 21% βρογχική αναρρόφηση, 15% πτύελα, 11% τραχεία, 3% κολπικά και 20% διάφορα) στο CandiSelect σε σχέση με το CandiSelect 4 και δύο άλλες χρωμογόνες πλάκες άγαρ. Η ανάγνωση και η ερμηνεία των αποτελεσμάτων εκτελέστηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Κάθε στέλεχος αναγνωρίστηκε μέσω τεχνολογίας Maldi-Tof. Ανιχνεύτηκε μυκητιασική ανάπτυξη σε 241 δείγματα (επιπολασμός 46,6%), 204 δείγματα περιείχαν ένα μόνο είδος μύκητα ενώ, σε 37 δείγματα, βρέθηκαν δύο σχετικά είδη. Απομονώθηκαν συνολικά 278 δείγματα. Άμεση αναγνώριση Αναγνωρίστηκαν 191 στελέχη C. albicans (68,7%) σε όλα τα μέσα καλλιέργειας. Μόνο οι χρωματισμένες αποικίες θεωρήθηκαν θετικές. Το CandiSelect επέτρεψε την ανίχνευση επιπλέον στελεχών του C. albicans στις 24 ώρες σε σύγκριση με τα άλλα μέσα. Η ευαισθησία του CandiSelect (91,6%) ήταν υψηλότερη σε σχέση με αυτήν του CandiSelect 4 και των δύο άλλων μέσων κατά τις μετρήσεις στις 48 ώρες. Ευαισθησία CandiSelect CandiSelect 4 Χρωμογόνο A Χρωμογόνο B Χρόνος έως τα αποτελέσματα C. albicans 24 ώρες 48 ώρες 24 ώρες 48 ώρες 24 ώρες 48 ώρες 24 ώρες 48 ώρες 153 (80,1%) 175 (91,6%) 128 (67,0%) 167 (87,4%) 88 (46,1%) 150 (78,5%) 123 (64,4%) 165 (86,4%) Τεκμαιρόμενη αναγνώριση Η τεκμαιρόμενη αναγνώριση του C. glabrata (από τα 36 στελέχη που απομονώθηκαν), του C. tropicalis (από τα 18 στελέχη που απομονώθηκαν) και του C. krusei (από τα 5 στελέχη που απομονώθηκαν) μελετήθηκε μέσω καταμέτρησης τόσο των χρωματισμένων όσο και των μη χρωματισμένων αποικιών ως θετικών: - 86% των στελεχών του C. glabrata απομονώθηκαν στο CandiSelect εντός 48 ωρών. - 89% των στελεχών του C. tropicalis απομονώθηκαν στο CandiSelect εντός 48 ωρών. - Όλα τα στελέχη του C. krusei (100%) απομονώθηκαν στο CandiSelect εντός 48 ωρών. Η αναγνώρισή τους είναι εύκολη, χάρη στις χαρακτηριστικές τραχιές αποικίες μπλε-πράσινου χρώματος. Ευαισθησία Αριθμός στελεχών CandiSelect CandiSelect 4 Χρωμογόνο A Χρωμογόνο B 24 ώρες 48 ώρες 24 ώρες 48 ώρες 24 ώρες 48 ώρες 24 ώρες 48 ώρες C. glabrata 36 (13%) 25 (69%) 31 (86%) 25 (69%) 32 (89%) 25 (69%) 30 (83%) 27 (75%) 30 (83%) C. tropicalis 18 (6,5%) 12 (67%) 16 (89%) 15 (83%) 17 (94%) 11 (61%) 17 (94%) 14 (78%) 17 (94%) C. krusei 5 (1,8%) 3 (60%) 5 (100%) 3 (60%) 5 (100%) 3 (60%) 4 (80%) 2 (40%) 5 (100%) 5 (EL)
Ανίχνευση μικτών δειγμάτων Στα 37 δείγματα ανιχνεύτηκαν 74 στελέχη όπου βρέθηκαν δύο σχετικά είδη. Το 86,5% αυτών των δειγμάτων ήταν θετικά σε C. albicans μικτών με C. glabrata (45,9%), C. tropicalis (24,3%), C. parapsilosis (10,8%) και C. krusei (5.4%). Αυτή η μελέτη έδειξε ότι το CandiSelect είναι χρήσιμο για την άμεση αναγνώριση του C. albicans και την αναγνώριση των συνηθέστερων ζυμομυκήτων, όταν είναι μικτοί, εξασφαλίζοντας εύκολο διαχωρισμό πολλών ειδών στα δείγματα. Η ευαισθησία του CandiSelect (86,5%) ήταν υψηλότερη σε σχέση με αυτήν του CandiSelect 4 και των δύο άλλων μέσων κατά τις μετρήσεις στις 24 και στις 48 ώρες. Αρ.=74 CandiSelect CandiSelect 4 Χρωμογόνο A Χρωμογόνο B 24 ώρες 52 (70,3%) 52 (70,3%) 45 (60,8%) 48 (64,9%) 48 ώρες 64 (86,5%) 62 (83,8%) 59 (79,7%) 63 (85,1%) 10.3. ΜΕΛΕΤΗ ΑΝΑΚΤΗΣΗΣ Για να προσδιοριστεί η ποσοστιαία ανάκτηση του CandiSelect, έξι στελέχη τοποθετήθηκαν σε δύο παρτίδες του μέσου (C. albicans ATCC 24433 και ATCC 10231, C. glabrata ATCC 66032, C. tropicalis ATCC 750, C. krusei ATCC 14243 και C. parapsilosis ATCC 22019 ). Ενοφθαλμίστηκε αραίωση 10 µl σε αναλογία 1:10 αιωρημάτων 0,5 της κλίμακας McFarland. Χρησιμοποιήθηκαν πλάκες άγαρ Sabouraud για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης ενοφθαλμίσματος κάθε αραίωσης. Ο αριθμός των αποικιών καταγράφηκε μετά την επώαση σε 35-37 C σε αέρα περιβάλλοντος, για 24 και 48 ώρες επώασης. Τα δεδομένα επιβεβαιώνουν ότι η ανάκτηση είναι ισοδύναμη με αυτήν του αγάρ Sabouraud και του CandiSelect 4; το όριο ανίχνευσης (επίπεδο ανίχνευσης) ζυμομυκήτων στο CandiSelect διαπιστώθηκε ότι ήταν μεταξύ 10 2-10 3 CFU/mL ανάλογα με το είδος. 10.4. ΑΝΑΛΥΤΙΚΗ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ Από την καλλιέργεια 18-24 ωρών στελεχών συλλογής στο άγαρ Sabouraud στους 30 C (ορισμένα στελέχη χρειάστηκαν επώαση 48 ωρών). Δημιουργήθηκαν αιωρήματα που αντιστοιχούν σε 0,5 της κλίμακας MacFarland με φυσιολογικό ορό. Στη συνέχεια, τα αιωρήματα αραιώθηκαν σε αναλογία 1:100. 10 µl του τελικού αιωρήματος χωρίστηκαν σε λωρίδες σε πλάκες CandiSelect. 63 χαρακτηρισμένα στελέχη συλλογής 25 ειδών ζυμομυκήτων (ανάμεσα στα οποία περιλαμβάνονταν 15 C. albicans, 5 C. tropicalis, 5 C. glabrata και 5 C. krusei) ενοφθαλμίστηκαν σε πλάκες CandiSelect σε συγκέντρωση 10 5 CFU/mL. 59 από αυτά τα 63 στελέχη (93,7%) ανακτήθηκαν στο CandiSelect εντός 48 ωρών. Τα 4 στελέχη που δεν αναπτύχθηκαν ήταν τα C. zeylanoides, C. curvata, C. norvegica, C. sake (βλ. Περιορισμοί εξέτασης 8γ). Αρ.=63 CandiSelect Χρόνοι μετρήσεων 24 ώρες 48 ώρες Ευαισθησία 82,5% 93,7% Η μελέτη έδειξε πως το μέσο CandiSelect είναι κατάλληλο για: Άμεση αναγνώριση του Candida albicans: Όλα τα στελέχη του C. albicans που εξετάστηκαν (100%) παρουσίασαν ροζ-μοβ χρωματισμό εντός 24 ωρών. Τεκμαιρόμενη αναγνώριση άλλων ειδών Candida: Όλα τα στελέχη των C. tropicalis και C. krusei που εξετάστηκαν (100%) αναπτύχθηκαν παρουσιάζοντας τον αναμενόμενο χρωματισμό εντός 24 ωρών, ενώ ο C. glabrata αναπτύχθηκε παρουσιάζοντας το χαρακτηριστικό σχήμα ματιού ψαριού εντός 48 ωρών. 10.5. ΑΝΑΛΥΤΙΚΗ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΤΙΚΟΤΗΤΑ 63 χαρακτηρισμένα στελέχη συλλογής 25 ειδών ζυμομυκήτων (ανάμεσα στα οποία περιλαμβάνονταν 15 C. albicans, 5 C. tropicalis, 5 C. glabrata και 5 C. krusei) εξετάστηκαν στο μέσο CandiSelect για να καθοριστεί η προσδιοριστικότητα των χρωματισμών τους και η επιλεκτικότητα του μέσου εντός 48 ωρών. Προσδιοριστικότητα ροζ χρωματισμού Από τα 25 είδη που εξετάστηκαν, μόνο το είδος C. dubliniensis παρουσίασε το χαρακτηριστικό ροζ-μοβ χρώμα εντός 48 ωρών (βλ. Περιορισμοί εξέτασης 8ε). Δύο άλλα δείγματα, ο C. ciferri (1 στέλεχος εξετάστηκε) και ο C. stellatoidea (1 στέλεχος εξετάστηκε), παρουσίασαν άχρωμες αποικίες στις 24 ώρες, οι οποίες εμφάνισαν ροζ χρωματισμό μόνο στις 48 ώρες (βλ. Περιορισμοί εξέτασης 8στ). Προσδιοριστικότητα μπλε-πράσινου χρωματισμού (βλ. Περιορισμοί εξέτασης 8θ και ι) Οι καλά χρωματισμένες αποικίες των C. parapsilosis ή C. guilliermondii διακρίνονταν εύκολα από τον C. tropicalis από την ετερογένεια στον χρωματισμό τους (ο χρωματισμός των αποικιών σε συσπειρωμένες αποικίες ήταν εντονότερος σε σχέση με αυτόν τον απομονωμένων αποικιών), ενώ οι αποικίες του C. tropicalis (απομονωμένες ή όχι) παρουσίαζαν ομοιογενή και ίδια ένταση χρωματισμού. Το στέλεχος του C. rugosa που εξετάστηκε εμφάνισε αποικίες μπλε-πράσινου χρώματος και μορφολογία παρόμοια με αυτές του C. krusei. Το στέλεχος του C. lusitaniae που εξετάστηκε εμφάνισε αποικίες μπλε-πράσινου χρώματος και μορφολογία παρόμοια με αυτές του C. tropicalis. Για οριστική αναγνώριση, συνιστώνται περαιτέρω καθιερωμένες εξετάσεις. 6 (EL)
Επιλεκτικότητα του μέσου S. aureus ATCC 25923 και E. coli ATCC 25922 χωρίστηκαν σε λωρίδες σε πλάκες CandiSelect. Ενοφθαλμίστηκαν αραιώσεις 10 µl σε αναλογία 1:10 αιωρημάτων 0,5 της κλίμακας McFarland. Η ανάπτυξη και των δύο στελεχών ανεστάλη εντός 48 ωρών από την επώαση, όπως αναμενόταν. 11. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Sendid B. and al. Prospective evaluation of the new chromogenic medium CandiSelect 4 for differentiation and presumptive identification of the major pathogenic Candida species. J Med Microbiol. 2007 Apr;56 (Pt 4):495-9. 2. Pfaller M.A. and D.J. Diekema (2007). Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem. Clin. Microbiol. Rev.20:133-163Pappas PG, Rex JH, Sobel JD, Filler SG, Dismukes WE, Walsh TJ, Edwards JE, Infectious Diseases Society of America. Guidelines for treatment of candidiasis. Clin Infect Dis. 2004 Jan 15;38 (2):161-89. 3. Garner, J.S. 2007. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80. 4. U.S. Department of Health and Human Services (2009). Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 5. Isenberg, H.D. (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology. Washington, D.C. 6. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work. Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045. 7. Basic laboratory procedures clinical bacteriology. J. Vandepitte et al. World Health Organization. Geneva. 2003. 2nd edition. 8. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, PA. 9. Miller JM, HT Holmes, K Krisher 2007. General principles of specimen collection and handling. Clinical Microbiology procedures handbook ASM Washington. 10. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2004. Volume 24 Number 19. M22-A3. Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media; Approved Standard - Third Edition. 11. Pfaller M.A. and al (2012). Epidemiology and outcomes of candidemia in 3648 patients: data from the Prospective Antifungal Therapy (PATH Alliance ) registry, 2004 2008. Diagnostic Microbiol and Infect Dis. 74 323 331. 12. Tortorano A. M. and al (2004). Epidemiology of candidaemia in Europe: Results of 28-Month European Confederation of Medical Mycology (ECMM). Hospital-Based Surveillance Study. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 23: 317 322. 13. Invasive candidiasis CDC website: http://www.cdc.gov/fungal/diseases/candidiasis/invasive/. Οι πλάκες θα πρέπει να αποθηκεύονται μακριά από το φως. Πιστοποιητικά ανάλυσης διατίθενται στη διεύθυνση http://www.bio-rad.com/certificate Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare 92430 Marnes-la-Coquette - Γαλλία Τηλ.: +33 (0) 1 47 95 60 00 2014/10 Φαξ: +33 (0) 1 47 41 91 33 www.bio-rad.com 7 (EL)