Μελέτη της αντοχής στην colistin στελεχών A.baumannii και K.pneumoniae με τέσσερις μεθόδους Μ. Ορφανίδου, Λ. Δροσοπούλου, Α. Τσάκαλος, Ι. Γλυνού, Ε. Ζαφειροπούλου, Δ. Ανταράκη, Μ. Καμπερογιάννη,Γ. Γκαντέρης, Ε. Βαγιάκου Μικροβιολογικό Εργαστήριο ΓΝΑ «Γ.Γεννηματάς»
Εισαγωγή Αυξημένη χρήση colistin για θεραπεία λοιμώξεων από MDR Gram-αρνητικά βακτήρια Απαραίτητες οι ταχείες και αξιόπιστες μέθοδοι για τον έλεγχο ευαισθησίας στην colistin ενδεδειγμένη θεραπευτική αγωγή Μέθοδος διάχυσης δίσκων (DD) = αναξιόπιστη λόγω του ότι η colistin είναι μακρομόριο που δύσκολα διαχέεται στο άγαρ υψηλή αναλογία λαθών και φτωχή επαναληψιμότητα CLSI 2017: απέσυρε τις οδηγίες για DD EUCAST: ποτέ δεν περιελάμβανε στις οδηγίες του το DD CLSI και EUCAST: μέθοδος αναφοράς η «μέθοδος μικροαραιώσεων σε ζωμό (BMD)» Η πλειονότητα των εργαστηρίων εφαρμόζει: 1. Αυτοματοποιημένα συστήματα 2. Μέθοδο E-test Bakthavatchalan YD et al J Clin Diagn Res 2017
EUCAST warnings concerning antimicrobial susceptibility testing products or procedures. The EUCAST disk diffusion development laboratories, a network of laboratories coordinated from the EUCAST development laboratory in Växjö, Sweden, from time to time discover products (disks, media batches, gradient tests or procedures) which are not performing to the expected standard. When this is the case we inform the manufacturer and publish a warning on this page. We do not systematically test all products so the lack of a warning does not imply that there is no problem with the product in question. Laboratories which experience problems with a susceptibility test method, and suspect that this may be related to a particular product, may contact EUCAST for advice. 1. Problems with piperacillin-tazobactam gradient tests from two manufacturers - the warning issued 2015 will be removed when problem is resolved. 2. Wide variation in disk quality in 16 disks from nine manufacturers - this warning was issued in 2015 and reiterated 2016. There is new information on improved quality November 23, 2017 (see below). 3. Problems with colistin susceptibility testing and several commercially available products - the warning initially issued July 2016 was updated 26 June, 2017.
EUCAST warnings concerning antimicrobial susceptibility testing products or procedures. Antimicrobial susceptibility testing of colistin has been fraught with difficulties. A joint EUCAST and CLSI subcommittee recently issued recommendations confirming that broth microdilution (BMD) is so far the only valid method and that disk diffusion does not work because of the poor diffusion of the large colistin molecule. The report did not evaluate gradient tests of colistin, but reports in the literature have questioned the validity of MICs obtained with gradient tests.
Σκοπός Η μελέτη και αξιολόγηση της αντοχής στην colistin στελεχών A.baumannii και K.pneumoniae με τέσσερις μεθόδους: Kirby-Bauer (DD) VITEK II (bio-merieux) E-test (bio-merieux) MICRONAUT MIC-Strip (MERLIN Diagnostika)
Υλικό-Μέθοδοι Μελετήθηκαν 60 στελέχη, 30 από κάθε μικροοργανισμό Κριτήριο μελέτης αποτέλεσε η MIC των στελεχών από το αυτοματοποιημένο σύστημα VITEK II Αριθμός στελεχών που εξετάστηκαν ανά μικροοργανισμό MIC<=0,5μg/ml MIC 1-4μg/ml MIC>8μg/ml A.baumannii 5 20 5 K.pneumoniae 5 20 5 Στελέχη με MIC<=2 μg/ml θεωρήθηκαν ευαίσθητα
Υλικό-Μέθοδοι Ταυτόχρονα ελέγχθηκε και το πρότυπο στέλεχος E.coli ATCC 25922 Ως μέθοδος αναφοράς των αποτελεσμάτων θεωρήθηκε η MICRONAUT MIC-Strip, μια σύγχρονη εμπορική μέθοδος μικροαραιώσεων σε ζωμό Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων έγινε με βάση τις οδηγίες του EUCAST που συνιστά «τη χρήση μεθόδων μικροαραιώσεων σε ζωμό για τον προσδιορισμό της MIC στην colistin»
Αποτελέσματα Απόλυτος αριθμός στελεχών με MICs 2μg/ml ανά μέθοδο 25 20 23 15 18 10 5 0 11 9 13 A.baumannii K.pneumoniae Σχετικά με τη μέθοδο διάχυσης δίσκων (Kirby-Bauer), συμφωνία ως προς την ευαισθησία, παρατηρήθηκε μόνο όταν η διάμετρος αναστολής ήταν >=15mm
Αποτελέσματα «Ουσιώδης συμφωνία»-essential agreement: MIC ±1 αραίωση διαφορά από την MIC αναφοράς VITEK II E-test A.baumannii 75% 50% K.pneumoniae 35% 60%
Αποτελέσματα «Μεγάλα λάθη»-major errors : ψευδής αντοχή «Πολύ μεγάλα λάθη»- very major errors: ψευδής ευαισθησία VITEK II E-test Major errors Very major errors Major errors Very major errors A.baumannii 0 7/20 10/20 1/20 35% 50% 5% K.pneumoniae 0 14/20 3/20 1/20 70% 15% 5% Στελέχη με MIC<=0,5μg/ml και MIC>8 μg/ml εμφάνισαν απόλυτη συμφωνία με όλες τις μεθόδους
Συμπεράσματα Η μέθοδος Kirby-Bauer, παρά το ότι παραμένει η πλέον δημοφιλής μέθοδος για τα εργαστήρια ρουτίνας, είναι η πλέον αναξιόπιστη για τον έλεγχο ευαισθησίας στην colistin Το VITEK II φαίνεται να υπερτερεί στον έλεγχο ευαισθησίας της colistin για το A.baumannii, ενώ το E-test για την K.pneumoniae
Συμπεράσματα Παρόλα αυτά, καμία από τις παραπάνω μεθόδους δε φαίνεται να δίνει λύση στο πρόβλημα του ελέγχου της ευαισθησίας στην colistin που θα πρέπει να αντιμετωπίζεται με σκεπτικισμό τόσο από τους εργαστηριακούς όσο και από τους κλινικούς
Ευχαριστώ