ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΟΥ RAPID POLYMYXIN NP TEST ΣΤΗΝ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ COLISTIN ΑΝΘΕΚΤΙΚΩΝ (ColR) KLEBSIELLA PNEUMONIAE

Transcript

1 ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΟΥ RAPID POLYMYXIN NP TEST ΣΤΗΝ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ COLISTIN ΑΝΘΕΚΤΙΚΩΝ (ColR) KLEBSIELLA PNEUMONIAE Ε.Μάλλη 1, Ι.Βουλγαρίδη 1, Κ.Τσιλιπουνιδάκη 1, Ζ.Φλώρου 1, Α.Στέφος 3, Σ.Ξύτσας 1, Π.Πυρίδου 1, Κ.Παπαγιαννίτσης 1,2, Ε.Πετεινάκη 1 1 Μικροβιολογικό Εργαστήριο, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, Λάρισα 2 Faculty of Medicine and University Hospital in Plzen, Πανεπιστήμιο Charles, Pilsen, Czech Republic 3 Παθολογική Κλινική, Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας

2 Εισαγωγή Η κολιστίνη είναι ένα κυκλικό πολυπεπτίδιο με δράση έναντι GRAM (-) βακτηριδίων Δράση μέσω σύνδεσης με λιπίδιο Α του λιποπολυσακχαρίτη (LPS) και μέσω πρόκλησης αποδιοργάνωσης της κυτταρικής μεμβράνης

3 Εισαγωγή Ο προσδιορισμός της ευαισθησίας στην κολιστίνη αποτελεί κρίσιμη παράμετρο στη θεραπεία των λοιμώξεων στη χώρα μας, λόγω του υψηλού επιπολασμού των πολυανθεκτικών βακτηριδίων Ο προσδιορισμός της MIC της κολιστίνης (polymyxin E) εμφανίζει πολλά τεχνικά προβλήματα Γι αυτό το CLSI και το EUCAST δημιούργησαν κοινή ομάδα εργασίας για τα όρια ευαισθησίας στις πολυμυξίνες Η μόνη αξιόπιστη μέθοδος είναι η μέθοδος μικροαραιώσεων σε ζωμό (BMD) Απαιτητική σε χρόνο και προσωπικό EUCAST March 2016

4 Εισαγωγή RAPID POLYMYXIN NP TEST Χρωματομετρικό τεστ που ανιχνεύει την μικροβιακή ανάπτυξη παρουσία κολιστίνης, βασιζόμενο στην παραγωγή όξινων μεταβολικών προϊόντων, ως συνέπεια του μεταβολισμού της γλυκόζης από τα μικροβιακά κύτταρα Αποτέλεσμα σε 2-3 ώρες

5

6 Σκοπός Σκοπός της εργασίας αυτής είναι η αξιολόγηση του RAPID POLYMYXIN NP TEST

7 Υλικά-μέθοδοι 104 στελέχη Klebsiella pneumoniae (11 ευαίσθητα στην κολιστίνη) που απομονώθηκαν το Ταυτοποίηση με Vitek 2 και προσδιορισμός της MIC στην κολιστίνη με BMD 2. Έλεγχος με PCR για γονίδια που σχετίζονται με παραγωγή καρβαπενεμασών 3. Μοριακή τυποποίηση με MLST 4. Τα στελέχη ελέγχθησαν για την παρουσία mcr γονιδίων και την παρουσία μεταλλάξεων στο mgrb γονίδιο με PCR και sequencing έλεγχος ευαισθησίας με άλλο ένα αυτοματοποιημένο σύστημα (Phoenix) Ταινίες διαβαθμισμένης συγκέντρωσης (Liofilchem) Rapid Polymyxin NP test

8 Αποτελέσματα Από τον μοριακό έλεγχο: 75 στελέχη θετικά για bla KPC 14 στελέχη θετικά για bla VIM (n=7), bla NDM (n=5) and bla OXA-48 (n=2) 6 στελέχη θετικά για bla KPC και bla VIM Τα υπόλοιπα 9 στελέχη ήταν αρνητικά για τα γονίδια που ελέχθηκαν Η πλειοψηφία των στελεχών ανήκαν στους ST 258 (n=26), 14 (n=20), 147 (n=15), and 11 (n=13). Τα υπόλοιπα στελέχη ανήκαν σε μεμονωμένους STs.

9 Αποτελέσματα Από τον μοριακό έλεγχο στα 93 κολιστίνη ανθεκτικά στελέχη: Σε 33 στελέχη η αλληλουχία του mgrb γονιδίου διακόπηκε λόγω εισαγωγής IS στοιχείων 27 στελέχη παρουσίαζαν μεταλλάξεις στο mgrb που είχαν σαν αποτέλεσμα δημιουργία πρόωρου κωδικωνίου τερματισμού Σε κανένα στέλεχος δεν ανιχνεύτηκε mcr γονίδιο Δεν ανιχνεύτηκαν χρωμοσωμιακές μεταλλάξεις στα κολιστίνη ευαίσθητα στελέχη

10 Αποτελέσματα Σε σύγκριση με BMD Rapid Polymyxin NP test: δεν ανίχνευσε 1 ColR στέλεχος Phoenix δεν ανίχνευσε: 3 ColR στελέχη Vitek 2: δεν ανίχνευσε 1 ColR στέλεχος Ταινίες διαβαθμισμένης συγκέντρωσης: δεν ανίχνευσαν 3 ColR στελέχη

11 Αποτελέσματα Σε σύγκριση με BMD Papid Polymyxin NP test: 4 ψευδώς ανθεκτικά στελέχη Phoenix: 2 ψευδώς ανθεκτικά στελέχη Vitek 2: 4 ψευδώς ανθεκτικά στελέχη Ταινίες διαβαθμισμένης συγκέντρωσης: 4 ψευδώς ανθεκτικά στελέχη

12 K. pneumoniae n Rapid Polymyxin NP test Phoenix Vitek-2 E-test Colistin-resistant Colistin-susceptible

13 Μέθοδος Ευαισθησία Ειδικότητα Rapid Polymyxin NP test 99% 64% Phoenix 97% 82% Vitek-2 99% 64% E-test 97% 64% Ο προσδιορισμός της ειδικότητας επηρεάζεται από τον μικρό αριθμό των colistin ευαίσθητων στελεχών

14 Συμπεράσματα Το RAPID POLYMYXIN NP TEST συμφωνεί σε μεγάλο ποσοστό με την BMD Το τεστ αυτό υπερτερεί σε ταχύτητα (3 ώρες) Μπορεί να εφαρμοστεί εύκολα και δεν απαιτεί εξειδικευμένο προσωπικό

15 Σας ευχαριστώ

16 Σας ευχαριστώ

17 Σας ευχαριστώ