INS-EASIA KAP1251. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium

Transcript

1 INS-EASIA KAP1251 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium

2 : 0908/1

3 en Read entire protocol before use. INS-EASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro quantitative measurement of human Insulin (INS) in serum. II. GENERAL INFORMATION A. Proprietary name : DIAsource INS-EASIA Kit B. Catalogue number : KAP1251 : 96 tests C. Manufactured by : DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgium. III. CLINICAL BACKGROUND For technical assistance or ordering information contact : Tel : +32 (0) Fax : +32 (0) A Biological activities of insulin Insulin, a polypeptide hormone with a molecular weight of 5800 Da, is secreted by the beta cells of the islets of Langerhans from the pancreas. Insulin possesses a wide spectrum of biological actions. It stimulates cellular glucose uptake, glucose oxidation, glycogenesis, lipogenesis, proteogenesis and the formation of DNA and RNA. Insulin plays a key role in the regulation of plasma glucose levels (hepatic output inhibition, stimulation of peripheral glucose utilisation). The resulting hypoglycemic effects of insulin are counterbalanced by hormones with hyperglycemic effects (glucagon, growth hormone, cortisol, epinephrin). Insulin secretion is mainly controlled by the plasma glucose levels : hyperglycemia induces a prompt and important increase in circulating insulin levels. Neural influences, as well as various metabolic and hormonal factors (amino acids, glucagon, gastro intestinal hormone) also participate to the control of insulin secretion. Type I (insulin dependent : "juvenile") diabetes is due to a destruction of the beta cells, with a consequence of absolute lack of insulin. In type II (noninsulin-dependent : "maturity onset") diabetes, insulin resistance may play an important role; however after several years of evolution, beta-cells failure may occur, leading to a relative insulinopenia requiring, in some cases, insulin administration. Insulin resistance is associated with high circulation levels of the hormone. The most common case of insulin resistance is represented by obesity. Various endocrinopathies (acromegaly, Cushing syndrome) as well as rare cases of insulin receptor defects or cases with anti-insulin receptor antibodies are associated with glucose intolerance or even diabetes due to insulin resistance. The determination of plasma insulin levels is an important parameter in the diagnosis of hypoglycemia. Insulin levels are high in cases of insulinoma (beta-cell tumor). Functional postprandial hypoglycemia may also be associated with inappropriate insulin release to carbohydrate intake. Insulin levels are determined either in the fasting state or during dynamic test : a) stimulation test : carbohydrate rich meal, oral glucose tolerance test (OGTT), arginin infusion, tolbutamide or other sulfonylureas administration. b) inhibition test : fasting, somatostatine infusion B. Clinical application of insulin determination. Determination of the beta-cell reserve during glucose tolerance test or after a carbohydrate rich meal, as a guide for the instauration of insulin therapy;. Contribution to the diagnosis of insulin and non-insulin-dependent diabetes;. Characterisation and follow-up of states of glucose intolerance;. Diagnosis and study of cases of insulin resistance;. Diagnosis of insulinoma and other causes of hypoglycemia.

4 IV. PRINCIPLES OF THE METHOD VI. SUPPLIES NOT PROVIDED The DIAsource INS-EASIA is a solid phase Enzyme Amplified Sensitivity Immunoassay performed on breakable microtiterplates. The assay uses monoclonal antibodies (MAbs) directed against distinct epitopes of insulin. Calibrators and samples react with the capture monoclonal antibody (MAb 1) coated on microtiter well and with a monoclonal antibody (MAb 2) labelled with horseradish peroxidase (HRP). After an incubation period allowing the formation of a sandwich: coated MAb 1 human insulin MAb 2 HRP, the microtiterplate is washed to remove unbound enzyme labelled antibody. Bound enzyme-labelled antibody is measured through a chromogenic reaction. Chromogenic solution (TMB ready for use) is added and incubated. The reaction is stopped with the addition of Stop Solution and the microtiterplate is then read at the appropriate wavelength. The amount of substrate turnover is determined colourimetrically by measuring the absorbance, which is proportional to the insulin concentration. A calibration curve is plotted and INS concentration in samples is determined by interpolation from the calibration curve. V. REAGENTS PROVIDED The following material is required but not provided in the kit: 1. High quality distilled water 2. Pipettes for delivery of: μl, 0 µl and 2 ml (the use of accurate pipettes with disposable plastic tips is recommended) 3. Vortex mixer 4. Magnetic stirrer 5. Washer for Microtiterplates 6. Microtiterplate reader capable of reading at 4 nm nm and 6 nm (bichromatic reading) VII. REAGENT PREPARATION A. Calibrators : Reconstitute the zero calibrator with 2.0 ml distilled water and other calibrators with 0.5 ml distilled water. B. Controls : Reconstitute the controls with 0.5 ml distilled water. C. Working Wash solution : Prepare an adequate volume of Working Wash solution by adding 199 volumes of distilled water to 1 volume of Wash Solution (200x). Use a magnetic stirrer to homogenize. Discard unused Working Wash solution at the end of the day. Ab Reagents Microtiterplate with 96 anti INS (monoclonal antibodies) coated breakable wells. Conjugate: HRP labelled anti-ins (monoclonal antibodies) in TRIS- HCl buffer with bovine serum albumin and thymol CAL HRP 0 96 tests Kit Color Code Reconstitution 96 wells blue Ready for use 1 vial 6 ml 1 vial lyophilized red yellow Ready for use Add 2.0 ml distilled water VIII. STORAGE AND EXPIRATION DATING OF REAGENTS Before opening or reconstitution, all kits components are stable until the expiry date, indicated on the vial label, if kept at 2 to 8 C. Unused wells must be stored, at 2-8 C, in a sealed bag containing a desiccant until expiration date. After reconstitution, calibrators and controls are stable for 1 week at 2 to 8 C. For longer storage periods, aliquots should be made and kept at -20 C. Avoid successive freeze thaw cycles. The concentrated Wash Solution is stable at room temperature until expiration date. Freshly prepared Working Wash solution should be used on the same day. After its first use, the conjugate is stable until expiry date, if kept in the original well-closed vial at 2 to 8 C. Alterations in physical appearance of kit reagents may indicate instability or deterioration. Zero calibrator in human serum and thymol IX. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Calibrator N = 1 to 5 (see exact values on vial labels) in human serum and thymol WASH CAL SOLN N CONC Wash Solution (Tris-HCl) 5 vials lyophilized 1 vial 10 ml yellow brown Add 0.5 ml distilled water Dilute 200 x with distilled water (use a magnetic stirrer). Serum must be kept at 2-8 C. If the test is not run within 24 hours, storage in aliquots at -20 C is recommended. Avoid subsequent freeze thaw cycles. Prior to use, all samples should be at room temperature. It is recommended to vortex the samples before use. Do not use haemolysed samples. X. PROCEDURE CONTROL Controls - N = 1 or 2 in human serum with thymol CHROM Chromogenic TMB Solution (Tetramethylbenzydine) STOP SOLN N TMB Stop solution: HCl 1.0 N 2 vials lyophilized 1 vial 12 ml 1 vial 12 ml silver black white Add 0.5 ml distilled water Ready for use Ready for use Note: 1. Use the zero calibrator for sample dilutions μiu of the calibrator preparation is equivalent to 1 μiu of 2 nd IRP 66/304. A. Handling notes Do not use the kit or components beyond expiry date. Do not mix materials from different kit lots. Bring all the reagents to room temperature prior to use. Thoroughly mix all reagents and samples by gentle agitation or swirling. Perform calibrators, controls and samples in duplicate. Vertical alignment is recommended. Use a clean plastic container to prepare the Wash Solution. In order to avoid cross-contamination, use a clean disposable pipette tip for the addition of each reagent and sample. For the dispensing of the Chromogenic Solution and the Stop Solution avoid pipettes with metal parts. High precision pipettes or automated pipetting equipment will improve the precision. Respect the incubation times. To avoid drift, the time between pipetting of the first calibrator and the last sample must be no longer than 30 minutes. Prepare a calibration curve for each run, do not use data from previous runs. Dispense the Chromogenic Solution within 15 minutes following the washing of the microtiterplate. During incubation with Chromogenic Solution, avoid direct sunlight on the microtiterplate.

5 B. Procedure 1. Select the required number of wells for the run. The unused wells should be resealed in the bag with a desiccant and stored at 2-8 C. 2. Secure the wells into the holding frame. 3. Pipette µl of each Calibrator, Control and Sample into the appropriate wells. 4. Pipette µl of anti-ins-hrp conjugate into all the wells. 5. Incubate for 30 minutes at room temperature 6. Aspirate the liquid from each well. 7. Wash the plate 3 times by: dispensing 0.4 ml of Wash Solution into each well aspirating the content of each well 8. Pipette 100 µl of Chromogenic Solution the into each well within 15 minutes following the washing step. 9. Incubate the microtiterplate for 15 minutes at room temperature. 10. Pipette 100 µl of Stop Reagent into each well. 11. Read the absorbances at 4 nm (reference filter 630 nm or 6 nm) within 1 hour and calculate the results as described in section XI. C. Precision INTRA ASSAY Serum N <X> ± SD (μiuml) A B ± ± 1.9 CV SD : Standard Deviation; CV: Coefficient of variation D. Accuracy Sample Added INS INTER ASSAY Serum N <X> ± SD (μiuml) A B RECOVERY TEST 8 7 Recovered INS ± ± 3.1 Recovery CV XI. CALCULATION OF RESULTS 1. Read the plate at 4 nm against a reference filter set at 6 nm (or 630 nm). 2. Calculate the mean of duplicate determinations. 3. On semi-logarithmic or linear graph paper plot the OD values (ordinate) for each calibrator against the corresponding concentration of INS (abscissa) and draw a calibration curve through the calibrator points by connecting the plotted points with straight lines. 4. Read the concentration for each control and sample by interpolation on the calibration curve. 5. Computer assisted data reduction will simplify these calculations. If automatic result processing is used, a 4 parameter logistic function curve fitting is recommended. Serum DILUTION TEST Sample Dilution Theoretical Concent Measured Concent. XII. TYPICAL DATA The following data are for illustration only and should never be used instead of the real time calibration curve. Serum 1 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/ Calibrator INS-EASIA 0 μiu/ml 5.1μIU/ml 13.8 μiu/ml 44.4 μiu/ml 128 μiu/ml 2 μiu/ml OD units Polychromatic model Serum 2 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 Samples were diluted with zero calibrator XIII. PERFORMANCE AND LIMITATIONS A. Detection Limit Twenty zero calibrators were assayed along with a set of other calibrators. The detection limit, defined as the apparent concentration two standard deviations above the average OD at zero binding, was 0.17 μiu/ml. B. Specificity Cross-reactive hormones were added to a high value calibrator (100 μiu/ml or 4 ng/ml). The apparent INS response was measured. As shown hereafter, animal insulins (except rat insulin) cross-react whereas human, pork and beef proinsulins present no cross-reaction. E. Time delay between last calibrator and sample dispensing As shown hereafter, assay results remain accurate even when a sample is dispensed 30 minutes after the calibrators have been added to the coated wells C I C II T0 10 min 20 min 30 min Added analyte to a high value serum Theoretical INS values (ng/ml) Observed INS values (ng/ml) Cross-reaction F. Hook effect A sample spiked with INS up to μiu/ml gives higher OD s than the last calibrator point. Porcine insulin Bovine insulin Dog insulin Rabbit insulin Rat insulin Human proinsulin Porcine proinsulin Bovine proinsulin 8 ng/ml 8 ng/ml 16 ng/ml 16 ng/ml 16 ng/ml 32 ng/ml 16 ng/ml 16 ng/ml > 100 > XIV. INTERNAL QUALITY CONTROL If the results obtained for Control 1 and/or Control 2 are not within the range specified on the vial label, the results cannot be used unless a satisfactory explanation for the discrepancy has been given. If desirable, each laboratory can make its own pools of control samples, which should be kept frozen in aliquots. Acceptance criteria for the difference between the duplo results of the samples should rely on Good Laboratory Practises It is recommended that Controls be routinely assayed as unknown samples to measure assay variability. The performance of the assay should be monitored with quality control charts of the controls. It is good practise to check visually the curve fit selected by the computer.

6 XV. REFERENCE INTERVALS XVIII. SUMMARY OF THE PROTOCOL The range of insulin levels in 29 subjects with normal oral glucose tolerance tests, was 5 to 19 µiu/ml, the range is based on 2.5 to 97.5 percentiles of the dataset. These values are given only for guidance; each laboratory should establish its own normal range of values. CALIBRATORS (µl) SAMPLE(S) CONTROLS (µl) XVI. PRECAUTIONS AND WARNINGS Safety For in vitro diagnostic use only. The human blood components included in this kit have been tested by European approved and/or FDA approved methods and found negative for HBsAg, anti- HCV, anti-hiv-1 and 2. No known method can offer complete assurance that human blood derivatives will not transmit hepatitis, AIDS or other infections. Therefore, handling of reagents, serum or plasma specimens should be in accordance with local safety procedures. All animal products and derivatives have been collected from healthy animals. Bovine components originate from countries where BSE has not been reported. Nevertheless, components containing animal substances should be treated as potentially infectious. Avoid any skin contact with all reagents, Stop Solution contains HCl. In case of contact, wash thoroughly with water Do not smoke, drink, eat or apply cosmetics in the working area. Do not pipette by mouth. Use protective clothing and disposable gloves. Calibrators (0-5) Samples, Controls Anti-INS-HRP conjugate - Incubate for 30 min at room temperature. Aspirate the contents of each well. Wash 3 times with 400 µl of Wash Solution and aspirate. Revelation Solution Incubate for 15 min at room temperature m. Stop Solution 100 Read on a microtiterplate reader and record the absorbance of each well at 4 nm (versus 630 or 6 nm) XVII. BIBLIOGRAPHY 1. FLIER, J.S., KAHN, C.R. and ROTH, J. (1979). Receptors, antireceptor antibodies and mechanisms of insulin resistance. N. Engl. J. Med., 300; 8: DIAsource Catalogue Nr : KAP1251 P.I. Number : /en Revision nr : 0908/1 Revision date : FRIER, B.M., ASHBY, J.P., NAIRN, I.M. and BAIRS, J.D. (1981). Plasma insulin, C-peptide and glucagon concentrations in patients with insulin-dependent diabetes treated with chlorpropamide. Diab. Metab., 7;1: JUDZEWITSCH, R.G., PFEIFER, M.A., BEST, J.D., BEARD, J.C., HALTER, J.B. and PORTE D.Jr. (1982). Chronic chlorpropamide therapy of non-insulin-dependent diabetes augments basal and stimulated insulin secretion by increasing islet sensitivity to glucose. J.Clin. End. and Metab., 55;2: KOSAKA, K., HAGURA, R. and KUZUYA, T. ( 1977). Insulin responses in equivocal and definite dlabetes, with special reference to subjects who had mild glucose intolerance but later developed definite diabetes. Diabetes, 26;10: STARR, J.I., MAKO, M.E., JUHN, D. and RUBENSTEIN, A.H. (1978). Measurement of serum proinsulin-like material : cross-reactivity of porcine and human proinsulin in the insulin radioimmunoassay. J. Lab. Clin. Med., 91;4: TEMPLE, R.C., CARRINGTON, C.A., LUZIO, S.D., OWENS, D.R., SCHNEIDER, A.E., SOBEY, W.J., HALES, C.N. ( 1989). Insulin deficiency in non-insulin-dependent diabetes. The Lancet, Feb.11: TEMPLE, R.C., CLARK, P.M., NAGI, D.K., SCHNEIDER, A.E., YUDKIN, J.S., HALES, C.N. ( 1990). Clin. Endocrin., 32: TEMPLE, R.C., CLARK, P.M., HALES, C.N. (1992). Measurement of insulin secretion in type 2 diabetes : problems and pitfalls. Diabetic medicine, 9:3-512.

7 el Διαβάστε ολόκληρο το πρωτόκολλο πριν από τη χρήση. INS-EASIA Ι. ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Ανοσοενζυμομετρικός προσδιορισμός για την in vitro ποσοτική μέτρηση της ανθρώπινης ινσουλίνης (INS) στον ορό. II. ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ A. Εμπορική ονομασία: Κιτ INS-EASIA της DIAsource B. Αριθμός καταλόγου: KAP1251: 96 προσδιορισμοί Γ. Κατασκευάζεται από την: DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgium. Για τεχνική βοήθεια ή πληροφορίες σχετικά με παραγγελίες επικοινωνήστε στα: Τηλ.: +32 (0) Φαξ: +32 (0) III. ΚΛΙΝΙΚΟ ΥΠΟΒΑΘΡΟ A Βιολογική δράση της ινσουλίνης Η ινσουλίνη, μια πολυπεπτιδική ορμόνη με μοριακό βάρος 5800 Da, απεκκρίνεται από τα β-κύτταρα των νησίδων του Langerhans από το πάγκρεας. Η ινσουλίνη διαθέτει ένα ευρύ φάσμα βιολογικών δράσεων. Διεγείρει την κυτταρική πρόσληψη της γλυκόζης, την οξείδωση της γλυκόζης, τη γλυκογένεση, τη λιπογένεση, την πρωτεϊνογένεση και το σχηματισμό του DNA και του RNA. Η ινσουλίνη παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση των επιπέδων της γλυκόζης του πλάσματος (αναστολή της ηπατικής παραγωγής, διέγερση της περιφερικής χρησιμοποίησης της γλυκόζης). Οι προκύπτουσες υπογλυκαιμικές ενέργειες της ινσουλίνης αντισταθμίζονται από ορμόνες με υπεργλυκαιμικές ενέργειες (γλυκαγόνο, αυξητική ορμόνη, κορτιζόλη, επινεφρίνη). Η απέκκριση της ινσουλίνης ελέγχεται κυρίως από τα επίπεδα της γλυκόζης στο πλάσμα: η υπεργλυκαιμία προκαλεί άμεση και σημαντική αύξηση στα επίπεδα της κυκλοφορούσας ινσουλίνης. Νευρικές επιδράσεις, καθώς και διάφοροι μεταβολικοί και ορμονικοί παράγοντες (αμινοξέα, γλυκαγόνο, γαστρεντερική ορμόνη) επίσης συμμετέχουν στον έλεγχο της απέκκρισης της ινσουλίνης. Ο τύπου I (ινσουλινοεξαρτώμενος: "νεανικός") διαβήτης οφείλεται σε καταστροφή των β-κυττάρων, με συνέπεια την απόλυτη έλλειψη ινσουλίνης. Στο τύπου II (μη ινσουλινοεξαρτώμενος: "με έναρξη στην ώριμη ηλικία") διαβήτη, ενδέχεται να παίζει σημαντικό ρόλο η αντίσταση στην ινσουλίνη. Ωστόσο, μετά από αρκετά χρόνια εξέλιξης, μπορεί να εμφανιστεί ανεπάρκεια των β-κυττάρων, που οδηγεί σε σχετική ινσουλινοπενία, η οποία απαιτεί, σε μερικές περιπτώσεις, χορήγηση ινσουλίνης. Η αντίσταση στην ινσουλίνη συσχετίζεται με υψηλά επίπεδα κυκλοφορίας της ορμόνης. Η πιο συνήθης αιτία αντίστασης στην ινσουλίνη έγκειται στην παχυσαρκία. Διάφορες ενδοκρινοπάθειες (ακρομεγαλία, σύνδρομο Cushing) καθώς και σπάνιες περιπτώσεις ελλειμμάτων στους υποδοχείς της ινσουλίνης ή περιπτώσεις με αντισώματα των υποδοχέων αντιινσουλίνης συσχετίζονται με δυσανεξία στη γλυκόζη ή ακόμη και διαβήτη λόγω αντίστασης στην ινσουλίνη. Ο προσδιορισμός των επιπέδων της ινσουλίνης στο πλάσμα αποτελεί σημαντική παράμετρο στη διάγνωση της υπογλυκαιμίας. Τα επίπεδα της ινσουλίνης είναι υψηλά σε περιπτώσεις ινσουλινώματος (όγκος των β-κυττάρων). Η λειτουργική μεταγευματική υπογλυκαιμία μπορεί επίσης να συσχετίζεται με μη ενδεδειγμένη απελευθέρωση ινσουλίνης κατά την πρόσληψη υδρογονανθράκων. Τα επίπεδα της ινσουλίνης προσδιορίζονται είτε σε κατάσταση νηστείας είτε κατά τη διάρκεια δυναμικής εξέτασης: α) Εξέταση διέγερσης: γεύμα πλούσιο σε υδρογονάνθρακες, τεστ ανοχής σε γλυκόζη ληφθείσα από το στόμα (OGTT), έγχυση αργινίνης, χορήγηση τολβουταμίδης ή άλλων σουλφανυλουριών. β) Εξέταση αναστολής: νηστεία, έγχυση σωματοστατίνης B. Κλινική εφαρμογή του προσδιορισμού ινσουλίνης. Προσδιορισμός του αποθέματος των β-κυττάρων κατά τη διάρκεια της εξέτασης ανοχής στη γλυκόζη ή μετά από ένα γεύμα πλούσιο σε υδρογονάνθρακες, ως οδηγός για τον καθορισμό της θεραπείας με ινσουλίνη.. Συμβολή στη διάγνωση ινσουλινοεξαρτώμενου και μη ινσουλινοεξαρτώμενου διαβήτη. Χαρακτηρισμός και παρακολούθηση καταστάσεων δυσανεξίας στη γλυκόζη.. Διάγνωση και μελέτη περιπτώσεων αντίστασης στην ινσουλίνη.. Διάγνωσηινσουλινώματοςαιάλλωναιτίωνυπογλυκαιμίας.

8 IV. ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ Ο προσδιορισμός INS-EASIA της DIAsource είναι ένας ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός ενισχυμένης ευαισθησίας στερεής φάσης που εκτελείται σε αποσπώμενες πλάκες μικροτιτλοδότησης. Ο προσδιορισμός χρησιμοποιεί μονοκλωνικά αντισώματα (MAbs) που κατευθύνονται εναντίον διακριτών επιτόπων της ινσουλίνης. Οι βαθμονομητές και τα δείγματα αντιδρούν με το μονοκλωνικό αντίσωμα σύλληψης (MAb 1) που είναι επιστρωμένο στην υποδοχή της πλάκας μικροτιτλοδότησης και με ένα μονοκλωνικό αντίσωμα (MAb 2) σημασμένο με ραφανιδική υπεροξειδάση (HRP). Μετά από μια περίοδο επώασης που επιτρέπει το σχηματισμό ενός σάντουιτς: επιστρωμένο MAb 1 ανθρώπινη ινσουλίνη MAb 2 HRP, η πλάκα μικροτιτλοδότησης υποβάλλεται σε πλύση για να απομακρυνθεί το σημασμένο με ένζυμο αδέσμευτο αντίσωμα. Το σημασμένο με ένζυμο δεσμευμένο αντίσωμα μετράται μέσω μιας χρωμογόνου αντίδρασης. Προστίθεται και επωάζεται χρωμογόνο διάλυμα (ΤΜΒ έτοιμο για χρήση). Η αντίδραση σταματά με την προσθήκη ανασχετικού διαλύματος και στη συνέχεια γίνεται ανάγνωση της πλάκας μικροτιτλοδότησης στο κατάλληλο μήκος κύματος. Η ποσότητα μετατροπής του υποστρώματος καθορίζεται χρωματομετρικά μετρώντας την απορρόφηση, η οποία είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση της ινσουλίνης. Παριστάνεται γραφικά μια καμπύλη βαθμονόμησης και προσδιορίζεται η συγκέντρωση της INS στα δείγματα με αναγωγή από την καμπύλη βαθμονόμησης. V. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Σύζευγμα: Αντι-INS (μονοκλωνικά αντισώματα) σημασμένα με HRP σε ρυθμιστικό διάλυμα TRIS-HCl με βόεια ορολευκωματίνη και θυμόλη Μηδενικός βαθμονομητής σε ανθρώπινο ορό και θυμόλη Βαθμονομητής N = 1 έως 5 (δείτε τις ακριβείς τιμές πάνω στις ετικέτες των φιαλιδίων) σε ανθρώπινο ορό και θυμόλη Διάλυμα πλύσης (Tris-HCl) Οροί ελέγχου - N = 1 ή 2 σε ανθρώπινο ορό με θυμόλη CHROM Διάλυμα χρωμογόνου TMB (τετραμεθυλβενζυδίνη) STOP Ab WASH Πλάκα μικροτιτλοδότησης με 96 αποσπώμενες υποδοχές επιστρωμένες με CAL CAL SOLN CONTROL SOLN HRP Ανασχετικό αντιδραστήριο: HCl 1,0 N 0 N CONC N TMB Αντιδραστήρια Κιτ 96 προσδιορισμών Χρωματικός κωδικός Ανασύσταση 96 υποδοχές μπλε Έτοιμο για χρήση 1 φιαλίδιο 6 ml 1 φιαλίδιο λυοφιλοποιημένο 5 φιαλίδια λυοφιλοποιημένο 1 φιαλίδιο 10 ml 2 φιαλίδια λυοφιλοποιημένο 1 φιαλίδιο 12 ml 1 φιαλίδιο 12 ml κόκκινο κίτρινο κίτρινο καφέ ασημί μαύρο λευκό Έτοιμο για χρήση Προσθέστε 2,0 ml απεσταγμένου νερού Προσθέστε 0,5 ml απεσταγμένου νερού Αραιώστε 200 x με απεσταγμένο νερό (χρησιμοποιήστε μαγνητικό αναδευτήρα). Προσθέστε 0,5 ml απεσταγμένου νερού Έτοιμο για χρήση Έτοιμο για χρήση Σημείωση:1.Χρησιμοποιείτε το μηδενικό βαθμονομητή για αραιώσεις δειγμάτων. 2.1 μiu του παρασκευάσματος του βαθμονομητή είναι ισοδύναμο με 1 μiu του 2 ου IRP 66/304. VI. ΑΝΑΛΩΣΙΜΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ Τα ακόλουθα υλικά απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται στο κιτ: 1. Απεσταγμένο νερό υψηλής ποιότητας 2. Πιπέτες για διανομή: μl, 0 μl και 2 ml (συνιστάται η χρήση πιπετών ακριβείας με αναλώσιμα πλαστικά ρύγχη) 3. Αναμείκτης στροβιλισμού 4. Μαγνητικός αναδευτήρας 5. Συσκευή πλύσης για πλάκες μικροτιτλοδότησης 6. Συσκευή ανάγνωσης πλακών μικροτιτλοδότησης με δυνατότητα ανάγνωσης στα 4 nm, και 6 nm (Διχρωματική ανάγνωση) VII. ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟΥ A. αθμονομητές: Ανασυστήστε το μηδενικό βαθμονομητή με 2,0 ml απεσταγμένου νερού και άλλους βαθμονομητές με 0,5 ml απεσταγμένου νερού. B. Οροί ελέγχου: Ανασυστήστε τους ορούς ελέγχου με 0,5 ml απεσταγμένου νερού. C. Γ. Διάλυμα πλύσης εργασίας: Προετοιμάστε επαρκή όγκο διαλύματος πλύσης εργασίας με προσθήκη 199 όγκων απεσταγμένου νερού σε 1 όγκο διαλύματος πλύσης (200x). Χρησιμοποιήστε μαγνητικό αναδευτήρα για την ομογενοποίηση. Απορρίψτε το μη χρησιμοποιημένο διάλυμα πλύσης εργασίας στο τέλος της ημέρας. VIII. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ ΛΗΞΗΣ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Πριν από το άνοιγμα ή την ανασύσταση, όλα τα συστατικά του κιτ παραμένουν σταθερά έως την ημερομηνία λήξης, η οποία αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου, εφόσον διατηρούνται σε θερμοκρασία 2 έως 8 C. Οι μη χρησιμοποιημένες υποδοχές πρέπει να φυλάσσονται στους 2-8 C, σε σφραγισμένη σακούλα που περιέχει αποξηραντικό παράγοντα, μέχρι την ημερομηνία λήξης. Μετά την ανασύσταση, οι βαθμονομητές και οι οροί ελέγχου παραμένουν σταθεροί για μία εβδομάδα σε θερμοκρασία 2 έως 8 C. Για μεγαλύτερες περιόδους φύλαξης, πρέπει να σχηματίζονται κλάσματα/δόσεις μιας χρήσης και να διατηρούνται στους 20 C. Αποφύγετε τους επανειλημμένους κύκλους απόψυξης-κατάψυξης. Το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης είναι σταθερό σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την ημερομηνία λήξης. Φρέσκο, παρασκευασμένο διάλυμα πλύσης εργασίας θα πρέπει να χρησιμοποιείται την ίδια ημέρα. Μετά την πρώτη χρήση του, το σύζευγμα παραμένει σταθερό έως την ημερομηνία λήξης, εφόσον διατηρείται στο αρχικό, ερμητικά κλειστό φιαλίδιο σε θερμοκρασία 2 έως 8 C.. Τυχόν μεταβολές της φυσικής εμφάνισης των αντιδραστηρίων του κιτ ενδέχεται να υποδηλώνουν αστάθεια ή αλλοίωση IX. ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Ο ορός πρέπει να φυλάσσεται στους 2-8 C. Εάν η εξέταση δεν πραγματοποιηθεί εντός 24 ωρών, συνιστάται η φύλαξη σε κλάσματα/δόσεις μιας χρήσης στους -20 C. Αποφεύγετε τους επακόλουθους κύκλους κατάψυξης-απόψυξης. Φέρετε όλα τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση. Συνιστάται η ανάμειξη των δειγμάτων σε συσκευή στροβιλισμού πριν από τη χρήση. Μην χρησιμοποιείτε δείγματα που έχουν υποστεί αιμόλυση. X. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ A. Σημειώσεις σχετικά με το χειρισμό Μη χρησιμοποιείτε το κιτ ή τα συστατικά μετά την ημερομηνία λήξης. Μην αναμειγνύετε υλικά από διαφορετικές παρτίδες κιτ. Φέρετε όλα τα αντιδραστήρια σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση. Αναμείξτε καλά όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα με απαλή ανακίνηση ή ανάδευση. Εκτελέστε εις διπλούν ανάληψη των βαθμονομητών, των ορών ελέγχου και των δειγμάτων. Συνιστάται κάθετη ευθυγράμμιση. Χρησιμοποιήστε ένα καθαρό, πλαστικό δοχείο για να ετοιμάσετε το διάλυμα πλύσης. Χρησιμοποιείτε ένα καθαρό αναλώσιμο ρύγχος πιπέτας για την προσθήκη κάθε διαφορετικού αντιδραστηρίου και δείγματος προκειμένου να αποφύγετε την επιμόλυνσ. Για τη διανομή του χρωμογόνου διαλύματος και του ανασχετικού διαλύματος αποφύγετε πιπέτες με μεταλλικά μέρη. Για τη διανομή του αποκαλυπτικού διαλύματος και του ανασχετικού διαλύματος αποφύγετε πιπέτες με μεταλλικά μέρη. Η ακρίβεια βελτιώνεται με χρήση πιπετών υψηλής ακρίβειας ή αυτοματοποιημένου εξοπλισμού διανομής με πιπέτες. Τηρείτε τους χρόνους επώασης. Για να αποφύγετε τη μετατόπιση, ο χρόνος μεταξύ της διανομής με πιπέτα του πρώτου βαθμονομητή και του τελευταίου δείγματος δεν πρέπει να είναι μεγαλύτερος από 30 λεπτά. Προετοιμάστε μια καμπύλη βαθμονόμησης για κάθε ανάλυση και μη χρησιμοποιείτε δεδομένα από προηγούμενες αναλύσεις. Διανείμετε το χρωμογόνο διάλυμα εντός 15 λεπτών μετά την πλύση της πλάκας μικροτιτλοδότησης. Κατά τη διάρκεια της επώασης με το χρωμογόνο διάλυμα αποφύγετε απευθείας έκθεση στον ήλιο της πλάκας μικροτιτλοδότησης.

9 B. Διαδικασία 1. Επιλέξτε τον απαιτούμενο αριθμό υποδοχών για την εκτέλεση. Οι αχρησιμοποίητες υποδοχές θα πρέπει να ξανασφραγίζονται στη σακούλα που περιέχει αποξηραντική ουσία και να φυλάσσονται 2-8 C. 2. Ασφαλίστε τις υποδοχές στη διάταξη συγκράτησης. 3. Διανείμετε με πιπέτα µl από κάθε βαθμονομητή, ορό ελέγχου και δείγμα στις κατάλληλες υποδοχές. 4. Διανείμετε με πιπέτα µl συζεύγματος αντι-ins μέσα σε όλες τις υποδοχές. 5. Επωάστε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου 6. Αναρροφήστε το υγρό από κάθε υποδοχή. 7. Πλύνετε την πλάκα 3 φορές: διανέμοντας 0,4 ml διαλύματος πλύσης σε κάθε υποδοχή. αναρροφώντας το περιεχόμενο κάθε υποδοχής 8. Διανείμετε με πιπέτα 100 µl χρωμογόνου διαλύματος σε κάθε υποδοχή εντός 15 λεπτών μετά το στάδιο πλύσης. 9. Επωάστε την πλάκα μικροτιτλοδότησης για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. 10. Διανείμετε με πιπέτα 100 µl ανασχετικού αντιδραστηρίου σε κάθε υποδοχή. 11. Κάντε ανάγνωση των απορροφήσεων στα 4 nm (φίλτρο αναφοράς 630 nm ή 6 nm) εντός 1 ώρας και υπολογίστε τα αποτελέσματα όπως περιγράφεται στην ενότητα XI. XI. ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 1. Κάντε ανάγνωση της πλάκας στα 4 nm έναντι ενός φίλτρου αναφοράς που ρυθμίζεται στα 6 nm (ή τα 630 nm). 2. Υπολογίστε τη μέση τιμή των διπλών προσδιορισμών. 3. Σε ημιλογαριθμικό ή γραμμικό χαρτί γραφημάτων, παραστήστε γραφικά τις τιμές OD (τεταγμένη) για κάθε βαθμονομητή έναντι της αντίστοιχης συγκέντρωσης της INS (τετμημένη) και σχεδιάστε μια καμπύλη βαθμονόμησης μέσω των σημείων του βαθμονομητή, συνδέοντας με ευθείες γραμμές τα αποτυπωμένα σημεία. 4. Διαβάστε τη συγκέντρωση για κάθε ορό ελέγχου και δείγμα με αναγωγή στην καμπύλη βαθμονόμησης. 5. Αναγωγή δεδομένων με τη βοήθεια ηλεκτρονικού υπολογιστή θα απλοποιήσει αυτούς τους υπολογισμούς. Εάν χρησιμοποιείται αυτόματη επεξεργασία αποτελεσμάτων, συνιστάται προσαρμογή καμπύλης λογιστικής συνάρτησης 4 παραμέτρων. XII. ΤΥΠΙΚΑ ΔΕΔΟΜΕΝΑ Τα ακόλουθα δεδομένα προορίζονται μόνο ως παράδειγμα και δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται ποτέ αντί της καμπύλης βαθμονόμησης πραγματικού χρόνου. Βαθμονομητής INS-EASIA 0 μiu/ml 5.1μIU/ml 13.8 μiu/ml 44.4 μiu/ml 128 μiu/ml 2 μiu/ml Μονάδες OD Πολυχρωματικό μοντέλο XIII. ΑΠΟΔΟΣΗ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ A. Όριο ανίχνευσης Μετρήθηκαν είκοσι μηδενικοί βαθμονομητές μαζί με ένα σύνολο άλλων βαθμονομητών. Το όριο ανίχνευσης, οριζόμενο ως η φαινομενική συγκέντρωση δύο τυπικών αποκλίσεων πάνω από τις μέσες μετρήσεις OD σε μηδενική δέσμευση, ήταν 0,17 μiu/ml. Γ. Ακρίβεια ΓΙΑ ΤΟΝ ΙΔΙΟ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ Ορός N <X> ± Τ.Α. (μiuml) A B ± ± 1.9 Σ.Δ Τ.Α.: Τυπική απόκλιση, Σ.Δ.: Συντελεστής διακύμανσης Δ. Ορθότητα Ορός Δείγμα ΜΕΤΑΞΥ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΩΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΩΝ Ορός N <X> ± Τ.Α. (μiuml) A B ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΑΝΑΚΤΗΣΗΣ Προστεθείσα INS Ανακτηθείσα INS ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΑΡΑΙΩΣΗΣ Δείγμα Αραίωση Θεωρητική συγκέντρωση Ορός 1 Ορός 2 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/ Τα δείγματα αραιώθηκαν με μηδενικό βαθμονομητή ± ± 3.1 Ανάκτηση Μετρηθείσα συγκέντρωση Σ.Δ E. Μεσοδιάστημα μεταξύ της διανομής τελευταίου βαθμονομητή και δείγματος Όπως φαίνεται στη συνέχεια, τα αποτελέσματα του προσδιορισμού παραμένουν αξιόπιστα ακόμα και όταν διανέμεται ένα δείγμα 30 λεπτά μετά την προσθήκη των βαθμονομητών στα επιστρωμένα σωληνάρια T0 10 λεπτά 20 λεπτά 30 λεπτά B. Ειδικότητα Ορμόνες διασταυρούμενης αντίδρασης προστέθηκαν σε ένα βαθμονομητή υψηλής τιμής (100 μiu/ml ή 4 ng/ml). Μετρήθηκε η φαινομενική απόκριση της INS. Όπως φαίνεται πιο κάτω, ινσουλίνες ζώων (εκτός της ινσουλίνης του αρουραίου) εμφανίζουν διασταυρούμενη αντίδραση ενώ ανθρώπινες, χοίρειες και βόειες προϊνσουλίνες δεν παρουσιάζουν διασταυρούμενη αντίδραση. ΣΤ. C I C II Φαινόμενο αγκίστρου (hook) Δείγμα που εμβολιάστηκε με INS έως μiu/ml δίνει υψηλότερες μετρήσεις οπτικής πυκνότητας (OD) από το σημείο του τελευταίου βαθμονομητή. Προστεθείσα αναλυόμενη ουσία σε ορό υψηλής τιμής Χοίρειος ινσουλίνη 8 ng/ml Βόειος ινσουλίνη 8 ng/ml Ιινσουλίνη σκύλου 16 ng/ml Ιινσουλίνη κουνελιού 16 ng/ml Ιινσουλίνη αρουραίου 16 ng/ml Ανθρώπινη προϊνσουλίνη 32ng/ml Χοίρειος προΐϊνσουλίνη 16 ng/ml Βόειος προϊνσουλίνη 16 ng/ml Θεωρητικές τιμές INS (ng/ml) Παρατηρηθείσες τιμές INS (ng/ml) Διασταυρούμενη αντίδραση > 100 > XIV. ΕΣΩΤΕΡΙΚΟΣ ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ Εάν τα αποτελέσματα που λαμβάνονται για τον ορό ελέγχου 1 ή/και τον ορό ελέγχου 2 δε βρίσκονται εντός του πεδίου τιμών που καθορίζεται στην ετικέτα του φιαλιδίου, τα αποτελέσματα δεν είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν, εκτός εάν έχει δοθεί ικανοποιητική εξήγηση για την ασυμφωνία. Εάν είναι επιθυμητό, κάθε εργαστήριο μπορεί να δημιουργήσει τα δικά του μείγματα δειγμάτων ελέγχου (pools), τα οποία πρέπει να διατηρούνται κατεψυγμένα σε κλάσματα/δόσεις μιας χρήσης. Τα κριτήρια αποδοχής για τη διαφορά μεταξύ των διπλών αποτελεσμάτων των δειγμάτων θα πρέπει να βασίζονται σε ορθές εργαστηριακές πρακτικές.

10 Συνιστάται οι οροί ελέγχου να υποβάλλονται σε προσδιορισμό τακτικά ως άγνωστα δείγματα για να μετράται η μεταβλητότητα του προσδιορισμού. Η απόδοση του προσδιορισμού πρέπει να παρακολουθείται με διαγράμματα ποιοτικού ελέγχου των ορών ελέγχου. Είναι καλό το να ελέγχετε οπτικά την προσαρμογή της καμπύλης που επιλέχθηκε από τον υπολογιστή. XVIII. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ ΒΑΘΜΟΝΟΜΗΤΕΣ (µl) ΔΕΙΓΜΑ(ΤΑ) ΟΡΟΙ ΕΛΕΓΧΟΥ (µl) XV. ΤΙΜΕΣ ΑΝΑΦΟΡΑΣ Το πεδίο τιμών των επιπέδων της ινσουλίνης σε 29 υποκείμενα με φυσιολογικές εξετάσεις ανοχής σε γλυκόζη ληφθείσα από το στόμα βασίζεται στα ποσοστά επί τοις εκατό από 2,5 έως 97,5 του συνόλου των δεδομένων Οι τιμές αυτές παρέχονται μόνον ως οδηγός. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθιερώσει το δικό του πεδίο φυσιολογικών τιμών. XVI. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Ασφαλείας Μόνο για διαγνωστική χρήση in vitro. Τα συστατικά ανθρώπινου αίματος που περιλαμβάνονται στο κιτ αυτό έχουν ελεγχθεί με μεθόδους εγκεκριμένες στην Ευρώπη ή/και από τον FDA και έχει διαπιστωθεί ότι είναι αρνητικά ως προς την παρουσία HBsAg, αντι-hcv, αντι- HIV-1 και 2. Καμία γνωστή μέθοδος δεν είναι δυνατό να παρέχει πλήρη διασφάλιση ότι παράγωγα του ανθρώπινου αίματος δε θα μεταδώσουν ηπατίτιδα, AIDS ή άλλες λοιμώξεις. Επομένως, ο χειρισμός αντιδραστηρίων, δειγμάτων ορού ή πλάσματος θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις τοπικές διαδικασίες περί ασφάλειας. Όλα τα ζωικά προϊόντα και παράγωγα έχουν συλλεχθεί από υγιή ζώα. Τα βόεια συστατικά προέρχονται από χώρες όπου δεν έχει αναφερθεί BSE. Παρ' όλ' αυτά, συστατικά που περιέχουν ζωικές ουσίες θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως δυνητικώς μολυσματικά. Αποφύγετε κάθε επαφή με το δέρμα με όλα τα αντιδραστήρια. Το ανασχετικό διάλυμα περιέχει HCl. Σε περίπτωση επαφής, πλύνετε σχολαστικά με νερό. Μην καπνίζετε, μην πίνετε, μην τρώτε και μη χρησιμοποιείτε καλλυντικά στο χώρο εργασίας. Μην διανέμετε με πιπέτα χρησιμοποιώντας το στόμα σας. Χρησιμοποιείτε προστατευτικό ρουχισμό και γάντια μιας χρήσης. XVII. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ Βαθμονομητές (0-5) Δείγματα, οροί ελέγχου Σύζευγμα αντι-ins-hrp - Επωάστε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Αναρροφήστε το περιεχόμενο κάθε υποδοχής. Πλύνετε 3 φορές με 400 ml διαλύματος πλύσης και αναρροφήστε. - Αποκαλυπτικό διάλυμα Επωάστε για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Ανασχετικό διάλυμα 100 Κάντε ανάγνωση σε συσκευή ανάγνωσης πλακών μικροτιτλοδότησης και καταγράψτε την απορρόφηση κάθε υποδοχής στα 4 nm (έναντι 630 ή 6 nm) Αρ. καταλόγου DIAsource: KAP1251 Αριθμός P.I.: /el 100 Αρ. αναθεώρησης: 0908/1 Ημερομηνία αναθεώρησης: FLIER, J.S., KAHN, C.R. and ROTH, J. (1979). Receptors, antireceptor antibodies and mechanisms of insulin resistance. N. Engl. J. Med., 300; 8: FRIER, B.M., ASHBY, J.P., NAIRN, I.M. and BAIRS, J.D. (1981). Plasma insulin, C-peptide and glucagon concentrations in patients with insulin-dependent diabetes treated with chlorpropamide. Diab. Metab., 7;1: JUDZEWITSCH, R.G., PFEIFER, M.A., BEST, J.D., BEARD, J.C., HALTER, J.B. and PORTE D.Jr. (1982). Chronic chlorpropamide therapy of non-insulin-dependent diabetes augments basal and stimulated insulin secretion by increasing islet sensitivity to glucose. J.Clin. End. and Metab., 55;2: KOSAKA, K., HAGURA, R. and KUZUYA, T. ( 1977). Insulin responses in equivocal and definite dlabetes, with special reference to subjects who had mild glucose intolerance but later developed definite diabetes. Diabetes, 26;10: STARR, J.I., MAKO, M.E., JUHN, D. and RUBENSTEIN, A.H. (1978). Measurement of serum proinsulin-like material : cross-reactivity of porcine and human proinsulin in the insulin radioimmunoassay. J. Lab. Clin. Med., 91;4: TEMPLE, R.C., CARRINGTON, C.A., LUZIO, S.D., OWENS, D.R., SCHNEIDER, A.E., SOBEY, W.J., HALES, C.N. ( 1989). Insulin deficiency in non-insulin-dependent diabetes. The Lancet, Feb.11: TEMPLE, R.C., CLARK, P.M., NAGI, D.K., SCHNEIDER, A.E., YUDKIN, J.S., HALES, C.N. ( 1990). Clin. Endocrin., 32: TEMPLE, R.C., CLARK, P.M., HALES, C.N. (1992). Measurement of insulin secretion in type 2 diabetes : problems and pitfalls. Diabetic medicine, 9:3-512.

11 P.I. Number : Revision nr Used symbols Symboles utilisés WASH SOLN CONC CAL 0 CAL N CONTROL N Ag 125I Ab 125I Ag 125I CONC Ab 125I CONC INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR SOLN ELU SOLN GEL PRE SOLN NEUTR SOLN TRACEUR BUF Ab HRP Ag HRP Ab HRP CONC Ag HRP CONC CONJ BUF CHROM TMB CONC CHROM TMB SUB BUF STOP SOLN INC SER BUF Ab AP SUB PNPP BIOT CONJ CONC AVID HRP CONC ASS BUF Ab BIOT Ab SAV HRP CONC NSB 2nd Ab ACID BUF Consult instructions for use Consulter les instructions d utilisation Storage temperature Température de conservation Use by Utiliser jusque Batch code Numéro de lot Catalogue number Référence de catalogue Control Contrôle In vitro diagnostic medical device Dispositif médical de diagnostic in vitro Manufacturer Fabricant Contains sufficient for <n> tests Contenu suffisant pour <n> tests Wash solution concentrated Solution de lavage concentrée Zero calibrator Calibrateur zéro Calibrator # Calibrateur # Control # Contrôle # Tracer Traceur Tracer Traceur Tracer concentrated Traceur concentré Tracer concentrated Traceur concentré Tubes Tubes Incubation buffer Tampon d'incubation Acetonitrile Acétonitrile Serum Sérum Specimen diluent Diluant du spécimen Dilution buffer Tampon de dilution Antiserum Antisérum Immunoadsorbent Immunoadsorbant Calibrator diluent Diluant de calibrateur Reconstitution solution Solution de reconstitution Polyethylene glycol Glycol Polyéthylène Extraction solution Solution d extraction Elution solution Solution d elution Bond Elut Silica cartridges Cartouches Bond Elut Silica Pre-treatment solution Solution de pré-traitement Neutralization solution Solution de neutralisation Tracer buffer Tampon traceur Microtiterplate Microplaque de titration HRP Conjugate HRP Conjugué HRP Conjugate HRP Conjugué HRP Conjugate concentrate HRP Conjugué concentré HRP Conjugate concentrate HRP Conjugué concentré Conjugate buffer Tampon conjugué Chromogenic TMB concentrate Chromogène TMB concentré Chromogenic TMB solution Solution chromogène TMB Substrate buffer Tampon substrat Stop solution Solution d arrêt Incubation serum Sérum d'incubation Buffer Tampon AP Conjugate AP Conjugué Substrate PNPP Tampon PNPP Biotin conjugate concentrate Biotine conjugué concentré Avidine HRP concentrate Avidine HRP concentré Assay buffer Tampon de test Biotin conjugate Biotine conjugué Specific Antibody Anticorps spécifique Streptavidin HRP concentrate Concentré streptavidine HRP Non-specific binding Liant non spécifique 2nd Antibody Second anticorps Acidification Buffer Tampon d'acidification

12 P.I. Number : Revision nr Επεξήγηση συμβόλων Anvendte symboler WASH SOLN CONC CAL 0 CAL N CONTROL N Ag 125I Ab 125I Ag 125I CONC Ab 125I CONC INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR SOLN ELU SOLN GEL PRE SOLN NEUTR SOLN TRACEUR BUF Ab HRP Ag HRP Ab HRP CONC Ag HRP CONC CONJ BUF CHROM TMB CONC CHROM TMB SUB BUF STOP SOLN INC SER BUF Ab AP SUB PNPP BIOT CONJ CONC AVID HRP CONC ASS BUF Ab Ab BIOT SAV HRP CONC NSB 2nd Ab ACID BUF Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης Læs brugsvejledningen Θερμοκρασία αποθήκευσης Opbevaringstemperatur Ημερομηνία λήξης Anvend inden Αριθμός παρτίδας Batchkode Αριθμός καταλόγου Katalognummer Πρότυπο ελέγχου Kontrol In Vitro Διαγνωστικό Ιατροτεχνολιγικό προιόν Medicinsk udstyr til in vitro-diagnosticering Κατασκευαστής Fabrikant Περιεχόμενο επαρκές για «ν» εξετάσεις Indeholder nok til <n> test Συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης Koncentreret vaskeopløsning Μηδενικός βαθμονομητής Nul-kalibrator Βαθμονομητής # Kalibrator nr. Ορός ελέγχου # Kontrol nr. Ιχνηθέτης Markør Ιχνηθέτης Markør Χρωμογόνος Ιχνηθέτης Koncentreret markør Χρωμογόνος Ιχνηθέτης Koncentreret markør Σωληνάρια Tuber Ρυθμιστικό διάλυμα επώασης Inkubationsbuffer Ακετονιτρίλιο Acetonitril Ορός Serum Διάλυμα αραίωσης δειγμάτων Prøvediluent Ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης Fortyndingsbuffer Αντιορός Antiserum Ανοσοπροσροφητικό Immonoadsorbent Αραιωτικό βαθμονομητών Kalibratordiluent Διάλυμα ανασύστασης Rekonstitueringsopløsning Πολυαιθυλενογλυκόλη Polyetylenglykol Διάλυμα εκχύλισης Ekstraktionsopløsning Διάλυμα έκλουσης Elueringsopløsning Φύσιγγες πυριτίου Bond Elut Patroner med bindingselueringssilica Διάλυμα προεπεξεργασίας Forbehandlingsopløsning Διάλυμα εξουδετέρωσης Neutraliseringsopløsning Ρυθμιστικό διάλυμα Markørbuffer Πλάκα μικροτιτλοδότησης Mikrotiterplade HRP Σύζευγμα HRP-konjugat HRP Σύζευγμα HRP-konjugat Χρωμογόνος HRP Σύζευγμα HRP-konjugat-koncentreret Χρωμογόνος HRP Σύζευγμα HRP-konjugat-koncentreret Ρυθμιστικό διάλυμα συζεύγματος Konjugatbuffer Χρωμογόνος TMB Kromogen TMB-koncentreret Διάλυμα χρωμογόνου ΤΜΒ Kromogen TMB-opløsning Ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος Substratbuffer Ανασχετικό αντιδραστήριο Stopopløsning Ορός επώασης Inkubationsserum Ρυθμιστικό διάλυμα Buffer AP Σύζευγμα AP-konjugat PNPP υποστρώματος Substrat PNPP Συμπυκνωμένο αντιδραστήριο συζευγμένο με βιοτίνη Biotin konjugat koncentrat Συμπυκνωμένο διάλυμα αβιδίνης-hrp Avidin HRP koncentrat Ρυθμιστικό διάλυμα προσδιορισμού Prøvebuffer αντιδραστήριο συζευγμένο με βιοτίνη Biotin konjugat Ειδικό Αντίσωμα - Συμπυκνωμένη στρεπταβιδίνη συνεξευγμένη με HRP - μη-ειδική δέσμευση - 2ο Αντίσωμα - Ρυθμιστικό Διάλυμα όξινο -