DuoFLEX Cocktail Anti-S100 Anti-Tyrosinase Anti-Melan-A Έτοιµο για χρήση (Link) Κωδικός IC001. Προοριζόµενη χρήση

Transcript

1 DuoFLEX Cocktail Anti-S100 Anti-Tyrosinase Anti-Melan-A Έτοιµο για χρήση (Link) Κωδικός IC001 Προοριζόµενη χρήση Συνώνυµα για το αντιγόνο Περίληψη και επεξήγηση Αντιδραστήριο που παρέχεται Για in vitro διαγνωστική χρήση. Το DuoFLEX Cocktail Polyclonal Rabbit Anti-S100, το Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A, Κλώνος A103, και το Monoclonal Mouse Anti-Human Tyrosinase, Κλώνος T311, (Link), προορίζονται για ανοσοϊστοχηµική χρήση σε συνδυασµό µε τα όργανα Autostainer Link. Το Polyclonal Rabbit Anti-S100 επισηµαίνει κύτταρα που εκφράζουν τα αντιγόνα S100 και είναι χρήσιµο στην αναγνώριση των S100 θετικών νεοπλασµάτων, όπως το κακόηθες µελάνωµα (1,2), η ιστιοκυττάρωση του Langerhans (3), το χονδροβλάστωµα (4), και το σβάννωµα (5). Μια σειρά αντισωµάτων που περιλαµβάνουν το πολυκλωνικό αντίσωµα Anti-S100, Κωδικός Z0311, εφαρµόσθηκε από τη ιεθνή Οµάδα Μελέτης του Λεµφώµατος για την ταξινόµηση όγκων µε πιθανολογούµενη προέλευση από ιστιοκυτταρικούς/δενδριτικούς κυτταρικούς τύπους (6). Το Monoclonal Mouse Anti-Human Tyrosinase, Κλώνος T311 είναι χρήσιµο για την αναγνώριση των µελανοκυτταρικών αλλοιώσεων και των µελανωµάτων. Το Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A, Κλώνος A103 είναι χρήσιµο για την αναγνώριση µελανοκυτταρικών αλλοιώσεων (7,8) και είναι δυνατόν να εφαρµοσθεί και ως χρήσιµος δείκτης αγγειοµυολιπωµάτων(9). Η κλινική ερµηνεία της χρώσης ή της απουσίας χρώσης πρέπει να συµπληρώνεται µε µορφολογικές µελέτες που χρησιµοποιούν κατάλληλους µάρτυρες και πρέπει να αξιολογούνται στο πλαίσιο του κλινικού ιστορικού του ασθενούς και άλλων διαγνωστικών εξετάσεων από ειδικό παθολόγο. Melan A MART-1, Tyrosinase: T311, EC S100: Είναι µια πολυγονιδιακή οικογένεια πρωτεϊνών χαµηλού µοριακού βάρους (MW µεταξύ και ), οι οποίες δεσµεύουν Ca 2+. Η οικογένεια περιλαµβάνει 19 µέλη, τα οποία εκφράζονται διαφορικά σε πλήθος κυτταρικών τύπων. Έτσι, η S100B (πρώην S100β) εκφράζεται περισσότερο στα κύτταρα της γλοίας του κεντρικού και περιφερικού νευρικού συστήµατος, στα µελανοκύτταρα, στα χονδροκύτταρα και στα λιποκύτταρα, ενώ η S100A1 (πρώην S100A/S100α) στα κύτταρα του µυοκαρδίου, στις σκελετικές µυϊκές ίνες βραδείας σύσπασης, στα επιθηλιακά κύτταρα των σιαλογόνων και στα νεφρικά κύτταρα. Επιπροσθέτως, η S100B απαντά σε καρκινωµατώδη κύτταρα και σε υποπληθυσµούς νευρώνων, ενώ η S100A1 έχει εντοπισθεί και σε νευρώνες του ιπποκάµπου. Η S100A6 εκφράζεται από τις ινοβλάστες και τις λείες και καρδιακές µυϊκές ίνες (5). Μέλη της οικογένειας S100 συµµετέχουν στην εξαρτώµενη από το Ca 2+ ρύθµιση διαφόρων ενδοκυτταρικών διεργασιών, όπως η φωσφορυλίωση πρωτεϊνών, ο πολλαπλασιασµός των κυττάρων (που συµπεριλαµβάνει το νεοπλασµατικό µετασχηµατισµό) και η διαφοροποίηση (10). Tyrosinase: Είναι ένα γλυκοένζυµο χαλκού που συµµετέχει στην παραγωγή χρωστικών µελανίνης, µεταξύ των οποίων h ευµελανίνη και η φαιοµελανίνη (11,12). Στη διαδικασία αυτή, η τυροσινάση καταλύει την υδροξυλίωση της L-τυροσίνης σε L-dopa και την οξείδωση της L-dopa σε L-ντοπακινόνη (11,12). Ως δείκτης µελανοκυτταρικής γενεαλογίας, η τυροσινάση εντοπίζεται στα µελανοκύτταρα που βρίσκονται στη συµβολή δέρµατος/επιδερµίδας σε φυσιολογικό δέρµα αλλά δεν ανιχνεύεται σε άλλα φυσιολογικά κύτταρα (13). Χρωµατισµένα τµήµατα του οφθαλµού, όπως ο χοριοειδής χιτώνας και η ίριδα, περιέχουν επίσης µελανοκύτταρα. Έκφραση της τυροσινάσης απαντάται επίσης σε µελανοκυτταρικές αλλοιώσεις, µεταξύ των οποίων οι καλοήθεις σπίλοι και η πλειοψηφία των πρωτογενών και µεταστατικών κακοήθων µελανωµάτων και όχι σε µη µελανοκυτταρικούς τύπους όγκων (13, 14, 15). Επιπλέον, η τυροσινάση µπορεί να αναγνωριστεί από αυτόλογα κυτταροτοξικά Τ κύτταρα από ασθενείς µε µελάνωµα, και εποµένως τα πεπτίδια της τυροσινάσης χρησιµεύουν στα εµβόλια κατά του µελανώµατος (16,17). Melan-A: Αποµονώνεται ως ειδικό αντιγόνο µελανώµατος και είναι µια διαµεµβρανική πρωτεΐνη 118 αµινοξέων, µε ασαφή λειτουργία (7). Το γονίδιο Melan-A κλωνοποιήθηκε από µια κυτταρική σειρά ανθρώπινου µελανώµατος και η έκφρασή του σε µελανώµατα αναγνωρίζεται από αυτόλογα κυτταροτοξικά λεµφοτ κύτταρα (19). Η πρωτεΐνη Melan-A εκφράζεται στο δέρµα, τον αµφιβληστροειδή και την πλειονότητα των µελανοκυττάρων και µελανωµάτων σε καλλιέργεια, ενώ πλήθος άλλων ιστών και νεοπλασµάτων που µελετήθηκαν δεν την εκφράζουν (7, 18, 19). Εντούτοις, η Melan-A εκφράζεται στα αγγειοµυολιπώµατα (9). Παράλληλα µε τη Melan-A, έχουν ανιχνευθεί άλλα επτά αντιγόνα µελανώµατος: MAGE-1, MAGE-3, τυροσινάση, gp100, gp75, BAGE-1 και GAGE-1, τα οποία αναγνωρίζονται όλα από αυτόλογα κυτταροτοξικά λεµφοτ κύτταρα (7). Ανατρέξτε στις Γενικές οδηγίες για την ανοσοϊστοχηµική χρώση της Dako ή στις οδηγίες του συστήµατος ανίχνευσης των διαδικασιών IHC για: 1) την Αρχή της ιαδικασίας, 2) τα Υλικά που Απαιτούνται, Αλλά δεν Παρέχονται, 3) την Αποθήκευση, 4) την Προετοιµασία ειγµάτων, 5) τη ιαδικασία Χρώσης, 6) τον Ποιοτικό Έλεγχο, 7) την Αντιµετώπιση Προβληµάτων, 8) την Ερµηνεία της Χρώσης, 9) τους Γενικούς Περιορισµούς. Έτοιµο προς χρήση µίγµα πολυκλωνικού αντισώµατος κουνελιού και µονοκλωνικού αντισώµατος ποντικού που παρέχεται σε υγρή µορφή σε ρυθµιστικό διάλυµα που περιέχει σταθεροποιητική πρωτεΐνη και νατραζίδιο 0,015 mol/l. Polyclonal Rabbit Anti-S100 Monoclonal Mouse Anti-Human Tyrosinase, Κλώνος T311, Ισότυπος: IgG2a, kappa Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A, Κλώνος A103, Ισότυπος: IgG1, kappa ( ) GR_001 σελ. 1/5

2 Ανοσογόνο S100: S100 αποµονωµένη από εγκέφαλο αγελάδος Tyrosinase: Ανασυνδυασµένη και καθαρισµένη, µη γλυκοζυλιωµένη πρωτεΐνη τυροσινάσης που αποτελείται από 452 από τα 511 αµινοξέα της ώριµης ανθρώπινης πρωτεΐνης της τυροσινάσης (11). Melan-A: Ανασυνδυασµένη πρωτεΐνη, εκφραζόµενη σε E. coli και που αντιστοιχεί στη Melan-A (7). Ειδικότητα Το αντίσωµα S100 έχει απορροφηθεί σε στερεή φάση µε πρωτεΐνες ανθρώπινου πλάσµατος και ορού αγελάδος. Σε στύπωµα Western κεκαθαρµένων ανασυνδυασµένων ανθρώπινων πρωτεϊνών S100, το αντίσωµα επισηµαίνει ισχυρά την S100B, ασθενώς την S100A1 και πολύ ασθενώς την S100A6. εν παρατηρήθηκε αντίδραση µε τις υπόλοιπες πρωτεΐνες S100 που ελέγχθηκαν: S100A2, S100A3 και S100A4 (20). Σε έµµεση ELISA, το αντίσωµα δεν αντιδρά µε το ανθρώπινο πλάσµα και µε τον ορό αγελάδας. Όπως αποδεικνύεται ανοσοϊστοχηµικώς σε τοµές ιστού µονιµοποιηµένου σε φορµαλίνη και εγκλεισµένου σε παραφίνη, το αντίσωµα εµφανίζει διασταυρούµενη αντίδραση µε την αντίστοιχη πρωτεΐνη S100 ανθρώπου, γάτας, αλόγου, ποντικού, αρουραίου και χοίρου. Για την Anti-Tyrosinase, χρησιµοποιήθηκαν για την ανοσοστύπωση L κύτταρα µεταµολυσµένα µε γονίδιο τυροσινάσης και σε τέσσερις κυτταρικές σειρές που εκφράζουν mrna τυροσινάσης: SK-MEL-13, SK-MEL-19, SK-MEL-30 και SK-MEL-37 (11). Όπως και σε προηγούµενες αναφορές, µια οµάδα πρωτεϊνών µεταξύ kda αναγνωρίστηκε από τον κλώνο T311 σε ανοσοστυπώµατα και των πέντε κυτταρικών σειρών (11). Χρωµατίστηκε µια επιπλέον ζώνη 55 kda σε στυπώµατα από κυτταρικές σειρές που είναι ισχυρά δραστικές (SK- MEL-19) (1). Ακόµα, τα ανοσοστυπώµατα των µη µεταµολυσµένων L κυττάρων και τρεις κυτταρικές σειρές που δεν εκφράζουν mrna τυροσινάσης (MZ2-MEL3.1, SK-MEL-187 και MZ2-MEL2.2) ήταν αρνητικά µε τον κλώνο T311(11). Τα Lκύτταρα που µεταµολύνθηκαν µε την πρωτεΐνη 1, TRP-1(gp75), που σχετίζεται µε την τυροσινάση επίσης δεν αντέδρασαν µε τον κλώνο T311 σε ανοσοφωσφορίζουσες και ανοσοστυπωτικές δοκιµασίες, δείχνοντας ότι το αντίσωµα αυτό δεν έχει διασταυρούµενη αντίδραση µε την πρωτεΐνη που σχετίζεται µε το µελανόσωµα TRP-1(gp75) (11). Το αντίσωµα επισηµαίνει ένα ζεύγος πρωτεϊνών kda σε στύπωµα Western µε κυτταρολύµατα από κυτταρικές σειρές θετικές για το mrna της Melan-A, ενώ δεν ανιχνεύεται σήµανση σε κυτταρικές σειρές αρνητικές για το mrna της Melan-A (7). Σε ανοσοκατακρηµνίσµατα από τις θετικές για τη Melan-A κυτταρικές σειρές SK-MEL-13 και SK-MEL-19, το αντίσωµα επισηµαίνει ένα ζεύγος πρωτεϊνών kda που αντιστοιχούν στη Melan-A, ενώ δεν ανιχνεύεται κατακρήµνιση σε κυτταρικές σειρές µελανώµατος αρνητικού για το mrna της Melan-A (7). Προφυλάξεις 1. Για επαγγελµατίες χρήστες. 2. Το προϊόν αυτό περιέχει νατραζίδιο (NaN 3), µια ιδιαίτερα τοξική χηµική ουσία σε καθαρή µορφή. Στις συγκεντρώσεις προϊόντος, παρόλο που δεν έχει ταξινοµηθεί ως επικίνδυνο, το νατραζίδιο ενδέχεται να αντιδράσει µε τις µολύβδινες ή χάλκινες υδραυλικές σωληνώσεις και να δηµιουργήσει ιδιαίτερα εκρηκτικές εναποθέσεις µεταλλικών αζιδίων. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε µε άφθονο νερό για να αποτρέψετε τη συσσώρευση µεταλλικών αζιδίων στις σωληνώσεις. 3. Όπως ισχύει για κάθε προϊόν βιολογικής προέλευσης, πρέπει να εφαρµόζονται οι δέουσες διαδικασίες χειρισµού. 4. Πρέπει να φοράτε κατάλληλο εξοπλισµό ατοµικής προστασίας για να αποφύγετε την επαφή µε τα µάτια και το δέρµα. 5. Όσο διάλυµα δεν χρησιµοποιηθεί πρέπει να απορρίπτεται σύµφωνα µε τους τοπικούς, κρατικούς και οµοσπονδιακούς κανονισµούς. Αποθήκευση Προετοιµασία δειγµάτων καθώς και υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται Αποθηκεύστε σε θερµοκρασία 2 8 C. Μην το χρησιµοποιείτε µετά την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται στο φιαλίδιο. Αν τα αντιδραστήρια φυλάσσονται σε διαφορετικές συνθήκες από εκείνες που προδιαγράφονται, ο χρήστης πρέπει να επαληθεύσει τις συνθήκες. εν υπάρχουν ορατά σηµάδια που να υποδεικνύουν έλλειψη σταθερότητας του προϊόντος αυτού. Για τον λόγο αυτό, θετικοί και αρνητικοί µάρτυρες πρέπει να εξετάζονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών. Εάν παρατηρηθεί µη αναµενόµενη χρώση, που δεν µπορεί να εξηγηθεί από τις διακυµάνσεις των εργαστηριακών διαδικασιών και υπάρχουν υποψίες για πρόβληµα στο αντίσωµα, επικοινωνήστε µε το Τµήµα Τεχνικής Υποστήριξης της Dako. Το µίγµα αντισωµάτων µπορεί να χρησιµοποιηθεί για τη σήµανση τοµών ιστού µονιµοποιηµένου µε φορµαλίνη και εγκλεισµένου σε παραφίνη. Τα δείγµατα των ιστών πρέπει να κόβονται σε τοµές πάχους περίπου 4 µm. Απαιτείται προκατεργασία µε θερµική ανάκτηση του επιτόπου (HIER). Τα βέλτιστα αποτελέσµατα επιτυγχάνονται όταν ο ιστός υφίσταται προκατεργασία µε EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Κωδικός K8004). Αποπαραφινωµένες τοµές: Προτείνεται προκατεργασία των αποπαραφινωµένων µονιµοποιηµένων µε φορµαλίνη και εγκλεισµένων σε παραφίνη τοµών ιστών µε τη χρήση Dako PT Link (Κωδικός PT100/PT101). Για λεπτοµέρειες, ανατρέξτε στον οδηγό χρήσης του PT Link. Ακολουθήστε τη διαδικασία προκατεργασίας που περιγράφεται στο ένθετο συσκευασίας του EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Κωδικός K8004). Οι παρακάτω παράµετροι πρέπει να χρησιµοποιηθούν για το PT Link: Θερµοκρασία προθέρµανσης: 65 C, θερµική ανάκτηση επιτόπου και χρόνοι: 97 C για 20 (±1) λεπτά, αφήστε το να κρυώσει στους 65 C. Αφαιρέστε τη σχάρα των αντικειµενοφόρων Autostainer µε τις αντικειµενοφόρους από το δοχείο PT Link και αµέσως βυθίστε τις αντικειµενοφόρους σε δοχείο (π.χ. PT Link Rinse Station, Κωδικός PT109) που περιέχει αραιωµένο σε θερµοκρασία δωµατίου EnVision FLEX Wash Buffer (20x), (Κωδικός K8007). Αφήστε τις αντικειµενοφόρους στο Wash Buffer για 1 5 λεπτά. ( ) GR_001 σελ. 2/5

3 Τοµές εγκλεισµένες σε παραφίνη: Η χρήση υδατικού υλικού επικάλυψης (Dako Faramount Κωδικός S3025) είναι η προτιµώµενη µέθοδος κάλυψης. Ως εναλλακτική προετοιµασία δείγµατος, τόσο η αποπαραφινωµένη ανάκτηση όσο και η ανάκτηση επιτόπου µπορούν να πραγµατοποιηθούν στο PT Link µε τη χρήση τροποποιηµένης διαδικασίας. Ανατρέξατε στον οδηγό χρήσης του PT Link για οδηγίες. Μετά την ολοκλήρωση της διαδικασίας χρώσης, οι τοµές πρέπει να στεγνώσουν στον αέρα στους 60 C για 1 ώρα, να εµβαπτιστούν σε ξυλένιο και να επικαλυφθούν χρησιµοποιώντας µέσα µόνιµης επικάλυψης. Οι αλκοόλες πρέπει να αποφεύγονται µε τα µέσα µόνιµης επικάλυψης, καθώς ενδέχεται να ελαττώσουν την αντιδραστικότητα του ερυθρού χρωµογόνου. Πριν επικαλυφθούν, οι τοµές ιστού δεν πρέπει να στεγνώνουν κατά τη διάρκεια της προκατεργασίας ή κατά τη διάρκεια των παρακάτω ανοσοϊστοχηµικών διαδικασιών χρώσης. Για καλύτερη προσκόλληση των τοµών ιστού στις υάλινες αντικειµενοφόρους πλάκες, συνιστάται η χρήση Dako FLEX IHC Microscope Slides (κωδικός K8020). ιαδικασία χρώσης καθώς και υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται Ερµηνεία χρώσης Χαρακτηριστικά απόδοσης Το συνιστώµενο σύστηµα εποπτικής παρουσίασης είναι το EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link) (Κωδικός SK110). Τα στάδια της χρώσης και οι χρόνοι επώασης έχουν προγραµµατιστεί εκ των προτέρων στο λογισµικό του συστήµατος χρώσης Autostainer Link. Για λεπτοµερείς οδηγίες σχετικά µε την τοποθέτηση των αντικειµενοφόρων πλακών και των αντιδραστηρίων, ανατρέξτε στον κατάλληλο Οδηγό χρήσης του Autostainer Link. Εάν τα πρωτόκολλα δεν είναι διαθέσιµα στην πλατφόρµα Autostainer που χρησιµοποιείτε, παρακαλούµε να επικοινωνήσετε µε την Τεχνική Υποστήριξη της Dako. Όλα τα βήµατα επώασης πρέπει να πραγµατοποιούνται σε θερµοκρασία δωµατίου. Οι βέλτιστες συνθήκες ενδέχεται να ποικίλλουν ανάλογα µε το δείγµα και τη µέθοδο προετοιµασίας και πρέπει να καθορίζονται ξεχωριστά από κάθε εργαστήριο. Εάν ο εξετάζων παθολόγος επιθυµεί διαφορετική ένταση χρώσης, µπορείτε να επικοινωνήσετε µε έναν ειδικό εφαρµογών της Dako / ειδικό της τεχνικής υπηρεσίας για τον επαναπρογραµµατισµό του πρωτοκόλλου. Ελέγξτε ότι η απόδοση του τροποποιηµένου πρωτοκόλλου εξακολουθεί να ισχύει, αξιολογώντας ότι το πρότυπο χρώσης είναι πανοµοιότυπο µε το πρότυπο χρώσης που περιγράφεται στην ενότητα «Χαρακτηριστικά απόδοσης». Η αντίχρωση σε αιµατοξυλίνη συνιστάται µε χρήση EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (Κωδικός K8008). Συνιστάται µη υδατικό µέσο µόνιµης επικάλυψης. Για µόνιµη επικάλυψη οι αντικειµενοφόροι πρέπει να στεγνώσουν στον αέρα στους 60 C για 1 ώρα και στη συνέχεια να εµβαπτιστούν σε ξυλένιο για 5 λεπτά. Οι αλκοόλες πρέπει να αποφεύγονται µε τα µέσα µόνιµης επικάλυψης, καθώς ενδέχεται να ελαττώσουν την αντιδραστικότητα του ερυθρού χρωµογόνου. Αρνητικοί και θετικοί µάρτυρες πρέπει να αναλύονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών χρησιµοποιώντας το ίδιο πρωτόκολλο. Ο ιστός θετικού µάρτυρα πρέπει να περιλαµβάνει τη σκωληκοειδή απόφυση, το παχύ έντερο, το δέρµα και τις δοµές/κύτταρα που πρέπει να παρουσιάζουν τα πρότυπα αντίδρασης όπως περιγράφονται για αυτούς τους ιστούς σε όλα τα θετικά δείγµατα στην ενότητα Χαρακτηριστικά απόδοσης. Τα κύτταρα που σηµαίνονται από το αντίσωµα Anti-S100 εµφανίζουν ερυθρή πυρηνική και κυτταροπλασµατική χρώση. Τα κύτταρα που σηµαίνονται από το αντίσωµα Anti-Tyrosinase εµφανίζουν καφέ κυτταροπλασµατική ή/και περιπυρηνική χρώση. Τα κύτταρα που επισηµαίνονται από το αντίσωµα Anti-Melan-A εκφράζουν καφέ κυτταροπλασµατική χρώση. Φυσιολογικοί ιστοί: Θετική σήµανση µε το αντίσωµα Anti-S100 παρατηρείται σε ορισµένα κύτταρα του Langerhans και µελανοκύτταρα του δέρµατος, συµπλεκόµενα δικτυοκύτταρα των λεµφαδένων, δικτυωτά επιθηλιακά κύτταρα του µυελού του θύµου, χονδροκύτταρα των χόνδρων, λιποκύτταρα σε ορισµένες βιοψίες, αλλά όχι σε άλλες, µυοεπιθηλιακά κύτταρα των σιαλογόνων αδένων και του µαστού, θυλακιοακτινωτά κύτταρα της υπόφυσης και κύτταρα του Schwann και της νευρογλοίας στον νευρικό ιστό. Ασθενής σήµανση παρατηρείται στα επιθηλιακά κύτταρα του µαστού και των ιδρωτοποιών αδένων. Αρνητική αντίδραση µε το αντίσωµα παρατηρείται στα φυσιολογικά ηπατοκύτταρα, στο επιθήλιο των χοληφόρων πόρων και της χοληδόχου κύστεως, στον οισοφάγο, στον στόµαχο, στα επιθήλια του λεπτού και του παχέος εντέρου, του νεφρού, καθώς και στα κύτταρα του ουροθηλίου και του ενδοθηλίου (21). Στο κόλον, τα δορυφορικά κύτταρα των περιφερικών νεύρων στο πλέγµα του Auerbach εµφανίζουν ισχυρή πυρηνική και κυτταροπλασµατική αντίδραση χρώσης, ενώ τα λιποκύτταρα και τα γαγγλιακά του πλέγµατος του Auerbach εµφανίζουν ασθενή έως ήπια πυρηνική και κυτταροπλασµατική αντίδραση χρώσης. Ο κλώνος αντι-τυροσινάσης T311 εξετάστηκε µε µια σειρά 33 φυσιολογικών ιστών µε χρήση ανοσοϊστοχηµείας και µόνο το δέρµα ήταν θετικό (13). Σε φυσιολογικό δέρµα, τα µελανοκύτταρα ήταν ανοσοδραστικά, ενώ τα βασικά κερατινοκύτταρα του δέρµατος παρέµειναν αρνητικά (11,13). Το αντίσωµα Anti-Melan-A, Κλώνος A103, επισηµαίνει το δέρµα, ενώ δεν επισηµαίνει τους παρακάτω ιστούς: στόµαχο, κόλον, πνεύµονα, ήπαρ, σπλήνα, νεφρό, όρχι, ουροδόχο κύστη, µαστό, ωοθήκη, λείες µυϊκές ίνες και λιπώδη ιστό (7,9). Έχει αναφερθεί ότι τα κύτταρα που παράγουν στεροειδή στον φλοιό των επινεφριδίων, στην ωοθήκη και στον όρχι σηµαίνονται από το αντίσωµα (8). Παθολογικοί ιστοί: Το αντίσωµα Anti-S100 σήµανε, ανάµεσα στα κακοήθη µελανώµατα, 31/31 (100%) συνήθη δερµατικά, 23/24 (96%) µεταστατικά, συµπεριλαµβανοµένων 10 αµελανωτικών, 6/6 δεσµοπλαστικά, και 1/1 µυξοειδές. Υπήρξε οµοιογενής σήµανση σε και τις περιπτώσεις, σε 30 καλοήθεις και 15 δυσπλαστικούς σπίλους (1). Σε µια άλλη µελέτη πρωτοπαθών κακοήθων δερµατικών µελανωµάτων (2), 67/67 ήταν θετικά µε το αντίσωµα, µεταξύ των οποίων και 5/5 όγκοι ατρακτοειδών κυττάρων και δεσµοπλαστικοί όγκοι. Σε 27 περιπτώσεις ιστιοκυττάρωσης του Langerhans, ποσοστό 88,5% σηµάνθηκαν από το αντίσωµα, τόσο σε εντοπισµένη όσο και σε διάσπαρτη νόσο (3). Από τα 30 χονδροβλαστώµατα που εξετάσθηκαν, ισχυρή σήµανση των χονδροβλαστών µε το αντίσωµα παρατηρήθηκε σε όλα (4). Από τα συνήθη καλοήθη σβαννώµατα, 12/12 ήταν θετικά µε το αντίσωµα, όπως ήταν και 2/4 κακοήθη σβαννώµατα. Από τα νευροϊνώµατα, 6/6 εµφάνισαν ασθενή έκφραση της S100, εκτός από ορισµένα µεµονωµένα κύτταρα και ορισµένες προεκβολές δίκην χελιού, που ήταν διακριτά θετικές (5). Σηµειωτέον ότι η S100 εκφράζεται σε 15 από 133 πρωτοπαθή µη µελανινοκυτταρικά δερµατικά ( ) GR_001 σελ. 3/5

4 νεοπλάσµατα, δηλαδή 7/16 εξωκρινή καρκινώµατα, 2/8 µεταστατικά καρκινώµατα των σπλάγχνων, 2/2 κακοήθη σβαννώµατα και 4/5 λειοµυοσαρκώµατα (2). Από τα πρωτοπαθή αδενοκαρκινώµατα, το αντίσωµα επεσήµανε 24/25 (84%) ωοθήκης, 12/15 (80%) σιαλογόνου αδένα, 28/36 (78%) ενδοµητρίου, 15/23 (65%) νεφρού, 12/20 (60%) µαστού, 7/28 (25%) παχέος εντέρου (κόλον και ορθό), 2/10 (20%) στοµάχου και 2/27 (7%) πνεύµονος. Στην εν λόγω µελέτη, τα αδενοκαρκινώµατα οισοφάγου, χοληδόχου κύστεως, παγκρέατος και προστάτου ήταν όλα αρνητικά. Τα περισσότερα πρωτοπαθή νεοπλάσµατα που εξέφραζαν την S100 ήταν επίσης θετικά για την εν λόγω πρωτεΐνη σε µεταστατικές εστίες (22). Από τα ραβδοµυοσαρκώµατα, 7/60 (12%) σηµάνθηκαν από το αντίσωµα. Οι όγκοι θετικοί για την S100 ήταν επίσης θετικοί για τη βιµεντίνη και για τη δεσµίνη (23). Το αντίσωµα Anti-Tyrosinase, Κλώνος T311 δοκιµάστηκε σε καλοήθεις και κακοήθεις µελανοκυτταρικές αλλοιώσεις και βρέθηκε να επισηµαίνει το µεγαλύτερο µέρος των καλοηθών σπίλων και µελανωµάτων που ελέγχθηκαν. Παρατηρήθηκε χαµηλή ανοσοδραστικότητα τυροσινάσης σε µελανώµατα κυττάρων δεσµοπλαστικού και ατρακτοειδούς τύπου (11, 13, 14, 15). Η ειδικότητα της αντι-τυροσινάσης για τις µελανοκυτταρικές αλλοιώσεις έχει διαπιστωθεί µε την ανοσοχρώση πάνω από 70 διαφορετικών τύπων µη µελανοκυτταρικών όγκων που δεν έχουν δείξει καµία ανοσοδραστικότητα, υποδεικνύοντας ότι η έκφραση της τυροσινάσης περιορίζεται στα κύτταρα µε µελανοκυτταρική γενεαλογία (13). Σε µεταστατικά µελανώµατα, το αντίσωµα Anti-Melan-A, Κλώνος A103 επεσήµανε 16/21 περιπτώσεις, εµφανίζοντας οµοιογενή θετική κυτταροπλασµατική χρώση σε ποσοστό >80-90% των κυττάρων του µελανώµατος, εκτός από µία περίπτωση όπου εκδηλώθηκε εστιακή χρώση (7). Σε µια άλλη µελέτη 10 καλοηθών µελανινοκυτταρικών σπίλων, 10 πρωτοπαθών µελανωµάτων και 75 µεταστατικών µελανωµάτων, το αντίσωµα επεσήµανε 10/10 καλοήθεις µελανοκυτταρικούς σπίλους, 7/10 πρωτοπαθή µελανώµατα και 61/75 µεταστατικά µελανώµατα (8). Από 111 καρκινώµατα, κυρίως αδενοκαρκινώµατα και καρκινώµατα εκ πλακωδών κυττάρων, 40 όγκους γεννητικών κυττάρων και 33 ποικίλους επιθηλιοειδείς µη µελανοκυτταρικούς όγκους, ουδεµία σήµανση παρατηρήθηκε µε το αντίσωµα. Το αντίσωµα επεσήµανε 5/5 αδενώµατα του φλοιού των επινεφριδίων, 16/16 πρωτοπαθή και 13/13 µεταστατικά καρκινώµατα του φλοιού των επινεφριδίων, καθώς και 4/4 όγκους κυττάρων του Leydig του όρχεως και 3/4 όγκους κυττάρων Sertoli-Leydig της ωοθήκης. Σε µια άλλη µελέτη 316 περιστατικών, µεταξύ των οποίων 21 όγκοι του φλοιού των επινεφριδίων, 16 καρκινώµατα µεταστατικά στο επινεφρίδια, 10 φαιοχρωµοκυττώµατα και 269 εξωεπινεφριδιακά καρκινώµατα, το αντίσωµα πεσήµανε 14/14 αδενώµατα του φλοιού των επινεφριδίων, 7/7 καρκινώµατα του φλοιού των επινεφριδίων, 0/16 καρκινώµατα µεταστατικά στο επινεφρίδια και 0/10 φαιοχρωµοκυττώµατα. Από τα 269 εξωεπινεφριδιακά καρκινώµατα σηµάνθηκε µόνον ένα ορώδες καρκίνωµα της ωοθήκης. Σε µια µελέτη 18 περιπτώσεων αγγειοµυολιπώµατος, το αντίσωµαεπεσήµανε και τους 18 όγκους (9). Σε µια άλλη αναφορά, τρία στα τρία αγγειοµυολιπώµατα που ελέγχθηκαν είχαν σηµανθεί από το αντίσωµα (8). Βιβλιογραφία 1. Orchard GE. Comparison of immunohistochemical labelling of melanocyte differentiation antibodies melan- A, tyrosinase and HMB 45 with NKIC3 and S100 protein in the evaluation of benign naevi and malignant melanoma. Histochem J 2000; 32: Wick MR, Swanson PE, Rocamora A. Recognition of malignant melanoma by monoclonal antibody HMB- 45. An immunohistochemical study of 200 paraffin-embedded cutaneous tumors. J Cutan Pathol 1988; 15: Ye F, Huang S-W, Dong H-J. Histiocytosis X. S-100 protein, peanut agglutinin, and transmission electron microscopy study. Am J Clin Pathol 1990; 94: Edel G, Ueda Y, Nakanishi J, Brinker KH, Roessner A, Blasius S, et al. Chondroblastoma in bone. A clinical, radiological, light and immunohistochemical study. Virchows Arch A Pathol Anat 1992; 421: Gould VE, Moll R, Moll I, Lee I, Schwechheimer K, Franke WW. The intermediate filament complement of the spectrum of nerve sheath neoplasms. Lab Invest 1986; 55: Pileri SA, Grogan TM, Harris NL, Banks P, Campo E, Chan JKC, et al. (review). Tumours of histiocytes and accessory dendritic cells: an immunohistochemical approach to classification from the International Lymphoma Study Group based on 61 cases. Histopathology 2002; 41: Chen Y-T, Stockert E, Jungbluth A, Tsang S, Coplan KA, Scanlan MJ, et al. Serological analysis of Melan-A (MART-1), a melanocyte-specific protein homogeneously expressed in human melanomas. Proc Natl Acad Sci 1996;93: Jungbluth AA, Busam KJ, Gerald WL, Stockert E, Coplan KA, Iversen K, et al. An anti-melan-a monoclonal antibody for the detection of malignant melanoma in paraffin-embedded tissues. Am J Surg Pathol 1998;22: Jungbluth AA, Iversen K, Coplan K, Williamson B, Chen Y-T, Stockert T, et al. Expression of melanocyteassociated markers gp-100 and Melan-A/MART-1 in angiomyolipomas. Virchows Arch 1999;434: Donato R. Functional roles of S100 proteins, calcium-binding proteins of the EF-hand type (review). Biochim Biophys Acta 1999; 1450: Chen YT, Stockert E, Tsang S, Coplan KA, Old LJ. Immunophenotyping of melanomas for tyrosinase: implications for vaccine development. Proc Natl Acad Sci USA 1995;92(18): Garcia-Borron JC, Solano F. Molecular anatomy of tyrosinase and its related proteins: beyond the histidinebound metal catalytic center. Pigment Cell Res 2002; 15(3): Jungbluth AA, Iversen K, Coplan K, Kolb D, Stockert E, Chen YT, Old LJ, Busam K. T311-an antityrosinase monoclonal antibody for the detection of melanocytic lesions in paraffin embedded tissues. Pathol Res Pract 2000; 196(4): Clarkson KS, Sturdgess IC, Molyneux AJ. The usefulness of tyrosinase in the immunohistochemical assessment of melanocytic lesions: a comparison of the novel T311 antibody (anti-tyrosinase) with S-100, HMB45, and A103 (anti-melan-a). J Clin Pathol 2001;54(3): ( ) GR_001 σελ. 4/5

5 15. Hofbauer GF, Kamarashev J, Geertsen R, Boni R, Dummer R. Tyrosinase immunoreactivity in formalinfixed, paraffin-embedded primary and metastatic melanoma: frequency and distribution. J Cutan Pathol 1998; 25(4): Slingluff CL Jr, Petroni GR, Yamshchikov GV, Barnd DL, Eastham S, Galavotti H, Patterson JW, Deacon DH, Hibbitts S, Teates D, Neese PY, Grosh WW, Chianese-Bullock KA, Woodson EM, Wiernasz CJ, Merrill P, Gibson J, Ross M, Engelhard VH. Clinical and immunologic results of a randomized phase II trial of vaccination using four melanoma peptides either administered in granulocyte-macrophage colonystimulating factor in adjuvant or pulsed on dendritic cells. J Clin Oncol 2003; 21(21): Zajac P, Oertli D, Marti W, Adamina M, Bolli M, Guller U, Noppen C, Padovan E, Schultz-Thater E, Heberer M, Spagnoli G. Phase I/II clinical trial of a nonreplicative vaccinia virus expressing multiple HLA-A0201-restricted tumor-associated epitopes and costimulatory molecules in metastatic melanoma patients. Hum Gene Ther 2003; 14(16): Coulie PG, Brichard V, Van Pel A, Wölfel T, Schneider J, Traversari C, et al. A new gene coding for a differentiation antigen recognized by autologous cytolytic T lymphocytes on HLA-A2 melanomas. J Exp Med 1994;180: Kawakami Y, Eliyahu S, Delgado CH, Robbins PF, Rivoltini L, Topalian SL, et al. Cloning of the gene coding for a shared human melanoma antigen recognized by autologous T cells infiltrating into tumor. Proc Natl Acad Sci 1994;91: Ilg EC, Schäfer BW, Heizmann CW. Expression pattern of S100 calcium-binding proteins in human tumors. Int J Cancer 1996; 68: Vanstapel M-J, Gatter KC, de Wolf-Peeters C, Mason DY, Desmet VD. New sites of human S-100 immunoreactivity detected with monoclonal antibodies. Am J Clin Pathol 1986;85: Herrera GA, Turbat-Herrera EA, Lott RL. S-100 protein expression by primary and metastatic adenocarcinomas. Am J Clin Pathol 1988;89: Coindre J-M, de Mascarel A, Trojani M, de Mascarel I, Pages A. Immunohistochemical study of rhabdomyosarcoma. Unexpected staining with S100 protein and cytokeratin. J Pathol 1988; 155: Έκδοση 03/09 ( ) GR_001 σελ. 5/5