DuoFLEX Cocktail Anti-AMACR Anti-Cytokeratin HMW Anti-Cytokeratin 5/6 Ready-to-Use (Link) Κωδικός IC004. Προοριζόµενη χρήση

Transcript

1 DuoFLEX Cocktail Anti-AMACR Anti-Cytokeratin HMW Anti-Cytokeratin 5/6 Ready-to-Use (Link) Κωδικός IC004 Προοριζόµενη χρήση Συνώνυµα για το αντιγόνο Περίληψη και επεξήγηση Αντιδραστήριο που παρέχεται Για in vitro διαγνωστική χρήση. Το DuoFLEX Cocktail Polyclonal Rabbit Anti-Human AMACR Κλώνος 13H4, το Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin, High Molecular Weight, Κλώνος 34ßE12, και το Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 5/6, Κλώνος D5/16 B4 (Link), προορίζονται για ανοσοϊστοχηµική χρήση σε συνδυασµό µε τα όργανα Autostainer Link. Αυτό το µίγµα αντιγόνων χρησιµοποιείται ως διαγνωστική δοκιµή για την επιβεβαίωση του καρκινώµατος του προστάτη, της ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας του προστάτη, και των καλοήθων παρόµοιων αλλοιώσεων σε ιστούς µονιµοποιηµένους σε φορµαλίνη και έγκλειστους σε παραφίνη (1-5) αφού γίνει η πρωτογενής διάγνωση µε µορφολογική εξέταση των χρωµατισµένων αντικειµενοφόρων H&E. Η κλινική ερµηνεία της χρώσης ή της απουσίας χρώσης πρέπει να συµπληρώνεται µε µορφολογικές µελέτες που χρησιµοποιούν κατάλληλους µάρτυρες και πρέπει να αξιολογούνται στο πλαίσιο του κλινικού ιστορικού του ασθενούς και άλλων διαγνωστικών εξετάσεων από ειδικό παθολογοανατόµο. AMACR: Ρακεµάση α µέθυλακυλ συνένζυµου A, α-µέθυλακυλ-coa, P504S Cytokeratin HMW: Keratin 903 AMACR: Το µονοκλωνικό αντι- AMACR κουνελιού, Κλώνος 13H4 αναγνωρίζει ένα πρωτεϊνικό µόριο 382 αµινοξέων το οποίο έχει αναγνωριστεί µε αφαίρεση από βιβλιοθήκη cdna σε συνδυασµό µε εξέταση αδενοκαρκινώµατος του προστάτη σε µικροσυστοιχίες υψηλών δυνατοτήτων διεκπεραίωσης (6). Η ρακεµάση α-µέθυλακυλ-coa (AMACR), είναι ένα ένζυµο το οποίο συµµετέχει στη βιοσύνθεση του χολικού οξέως και στη β-οξείδωση των λιπαρών οξέων µε διακλαδιζόµενες αλυσίδες (7). Η AMACR εκφράζεται στα κύτταρα των υψηλού βαθµού προκακόηθων ενδοεπιθηλιακών προστατικών νεοπλασιών (HGPIN) και στο αδενοκαρκίνωµα του προστάτη, όµως απαντάται σε χαµηλά ή µη ανιχνεύσιµα επίπεδα στα αδενικά επιθηλιακά κύτταρα του φυσιολογικού προστάτη καθώς και σε κακοήθεις προστατικές υπερπλασίες (6,8-13). CK HMW: Οι κυτοκερατίνες Cytokeratin, High Molecular Weight, Κλώνος 34ßE12 είναι κυτταροσκελετικές πρωτεΐνες των ενδιάµεσων ινιδίων, ζωτικής σηµασίας για την ανάπτυξη και τη διαφοροποίηση των επιθηλιακών κυττάρων. Έχουν ταυτοποιηθεί περίπου είκοσι διαφορετικές κυτοκερατίνες, οι οποίες ταξινοµήθηκαν και απαριθµήθηκαν σύµφωνα µε τα µοριακά βάρη και τα ισοηλεκτρικά τους σηµεία (14). Γενικά, οι περισσότερες κυτοκερατίνες χαµηλού µοριακού βάρους (40-54 kda) κατανέµονται στο µη πλακώδες επιθήλιο και έχουν, στον κατάλογο του Moll, τους αριθµούς 7-8 ή/και (15). Οι υψηλού µοριακού βάρους κυτοκερατίνες (48-67 kda) απαντούν στο πλακώδες επιθήλιο και στον κατάλογο του Moll έχουν τους αριθµούς 1-6 ή/και 9-16 (15). Cytokeratin 5/6: Η Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 5/6, Κλώνος D5/16 B4 είναι µια υψηλού µοριακού βάρους, κυτοκερατίνη αλκαλικού τύπου, µε µοριακή µάζα 58 kda, που εκφράζεται στη βασική, στην ενδιάµεση και στην επιφανειακή κυτταρική στιβάδα των πολύστιβων επιθηλίων καθώς και στα µεταβατικά επιθήλια, στα σύνθετα επιθήλια, και στα κύτταρα µεσοθηλιώµατος και στο µεσοθηλίωµα. Η CK 5 δεν έχει, µε λίγες εξαιρέσεις, βρεθεί σε απλά επιθήλια και σε µη επιθηλιακά κύτταρα. Η CK 6 είναι επίσης υψηλού µοριακού βάρους, αλκαλικού τύπου κυτοκερατίνη, µε µοριακή µάζα 56 kda, που εκφράζεται σε πολλαπλασιαζόµενα επιθήλια συχνά σε ζεύγη µε τη CK 16 (48 kda) (16,17). Ανατρέξτε στις Γενικές οδηγίες για την ανοσοϊστοχηµική χρώση της Dako ή στις οδηγίες του συστήµατος ανίχνευσης των διαδικασιών IHC για: 1) την Αρχή της ιαδικασίας, 2) τα Υλικά που Απαιτούνται, Αλλά δεν Παρέχονται, 3) την Αποθήκευση, 4) την Προετοιµασία ειγµάτων, 5) τη ιαδικασία Χρώσης, 6) τον Ποιοτικό Έλεγχο, 7) την Αντιµετώπιση Προβληµάτων, 8) την Ερµηνεία της Χρώσης, 9) τους Γενικούς Περιορισµούς. Έτοιµο προς χρήση µίγµα µονοκλωνικού αντισώµατος κουνελιού και µονοκλωνικού αντισώµατος ποντικιού που παρέχεται σε υγρή µορφή σε ρυθµιστικό διάλυµα που περιέχει σταθεροποιητική πρωτεΐνη και NaN 3 0,015 mol/l. Monoclonal Rabbit Anti-Human AMACR, Κλώνος 13H4, Ισότυπος: IgG1, kappa Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin, High Molecular Weight, Κλώνος 34ßE12, Ισότυπος: IgG1, kappa Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 5/6, Κλώνος D5/16 B4, Ισότυπος: IgG1, kappa Ανοσογόνο AMACR: Ανασυνδυασµένη P504S πλήρους µήκους (6) CK HMW: διαλυτοποιηµένο εκχύλισµα ανοσογόνου κερατίνης από ανθρώπινη κεράτινη στοιβάδα Cytokeratin 5/6: Αποµονωµένη κυτοκερατίνη 5 Ειδικότητα Η ειδικότητα του µονοκλωνικού αντι-amacr κουνελιού έχει αξιολογηθεί µε ανοσοκυτταροχηµεία και ανάλυση στυπωµάτων Western. Το αντι-amacr δέσµευσε θετικά κύτταρα HEK293 µονιµοποιηµένα µε φορµαλίνη που υπερεκφράζουν την αντι-amacr, όµως το συγκεκριµένο αντίσωµα παρέµεινε αδρανές σε κύτταρα που είχαν επιµολυνθεί µε κενό πλασµίδιο. Σε στυπώµατα Western κυτταρολυµάτων που προέρχονται από δείγµατα πρωτογενών προστατικών καρκινωµάτων, το µονοκλωνικό αντι- AMACR κουνελιού αναγνώρισε µια πρωτεΐνη 54 kda η οποία προσιδιάζει µε το αναµενόµενο µοριακό βάρος της AMACR (9). ( ) GR_001 σελ. 1/6

2 Έχει διαπιστωθεί ότι το Anti-CK HMW, 34βE12 αντιδρά µε πρωτεΐνες 66, 57, 51 και 49 kd (1) που αντιστοιχούν στις κυτοκερατίνες 1, 5, 10 και 14 του καταλόγου του Moll (14, 15, 18). Οι Shah et al. (19) υπέδειξαν την κλινική χρησιµότητα του anti-ck HMW, 34βE12 ως υποβοηθητικό µέσο διαφορικής διάγνωσης των νόσων του Paget και του Bowen (καρκίνωµα in situ) από το επιφανειακά επεκτεινόµενο µελάνωµα που οµοιάζει µε τη νόσο του Paget. Η θετικότητα του Anti-CK HMW, 34βE12 αναφέρθηκε για τη νόσο του Paget στον µαστό (5/5) και τη νόσο του Bowen (10/10), αν και χρωµατίστηκε το 25% (1/4) της νόσου του Paget στο αιδοίο και 0/6 από τα επιφανειακά επεκτεινόµενα µελανώµατα που οµοιάζουν µε νόσο του Paget (19). Για Anti-Cytokeratin 5/6, Κλώνος D5/16 B4, σε στυπώµατα Western κυτοσκελετικών προετοιµασιών της επιδερµίδας και µη κερατοποιηµένου επιθηλίου, το αντίσωµα επισηµαίνει την κυτοκερατίνη 5. Επίσης επισηµαίνει την κυτοκερατίνη 6 και έχει ασθενή σήµανση στην κυτοκερατίνη 4. Καµία διασταυρούµενη αντίδραση µε τις κυτοκερατίνες 1, 7, 8, 10, 13/14, 18 και 19 δεν έχει βρεθεί. Προφυλάξεις 1. Για επαγγελµατίες χρήστες. 2. Το προϊόν αυτό περιέχει νατραζίδιο (NaN 3), µια ιδιαίτερα τοξική χηµική ουσία σε καθαρή µορφή. Στις συγκεντρώσεις προϊόντος, παρόλο που δεν έχει ταξινοµηθεί ως επικίνδυνο, το νατραζίδιο ενδέχεται να αντιδράσει µε τις µολύβδινες ή χάλκινες υδραυλικές σωληνώσεις και να δηµιουργήσει ιδιαίτερα εκρηκτικές εναποθέσεις µεταλλικών αζιδίων. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε µε άφθονο νερό για να αποτρέψετε τη συσσώρευση µεταλλικών αζιδίων στις σωληνώσεις. 3. Όπως ισχύει για κάθε προϊόν βιολογικής προέλευσης, πρέπει να εφαρµόζονται οι δέουσες διαδικασίες χειρισµού. 4. Πρέπει να φοράτε κατάλληλο εξοπλισµό ατοµικής προστασίας για να αποφύγετε την επαφή µε τα µάτια και το δέρµα. 5. Όσο διάλυµα δεν χρησιµοποιηθεί πρέπει να απορρίπτεται σύµφωνα µε τους τοπικούς, κρατικούς και οµοσπονδιακούς κανονισµούς. Αποθήκευση Προετοιµασία δειγµάτων καθώς και υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται ιαδικασία χρώσης καθώς και υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται Αποθηκεύστε σε θερµοκρασία 2 8 C. Μην το χρησιµοποιείτε µετά την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται στο φιαλίδιο. Αν τα αντιδραστήρια φυλάσσονται σε διαφορετικές συνθήκες από εκείνες που προδιαγράφονται, ο χρήστης πρέπει να επαληθεύσει τις συνθήκες. εν υπάρχουν ορατά σηµάδια που να υποδεικνύουν έλλειψη σταθερότητας του προϊόντος αυτού. Για τον λόγο αυτό, θετικοί και αρνητικοί µάρτυρες πρέπει να εξετάζονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών. Εάν παρατηρηθεί µη αναµενόµενη χρώση, που δεν µπορεί να εξηγηθεί από τις διακυµάνσεις των εργαστηριακών διαδικασιών και υπάρχουν υποψίες για πρόβληµα στο αντίσωµα, επικοινωνήστε µε το Τµήµα Τεχνικής Υποστήριξης της Dako. Το µίγµα αντισωµάτων µπορεί να χρησιµοποιηθεί για τη σήµανση τοµών ιστού µονιµοποιηµένου µε φορµαλίνη και εγκλεισµένου σε παραφίνη. Τα δείγµατα των ιστών πρέπει να κόβονται σε τοµές πάχους περίπου 4 µm. Απαιτείται προκατεργασία µε θερµική ανάκτηση του επιτόπου (HIER). Τα βέλτιστα αποτελέσµατα επιτυγχάνονται όταν ο ιστός υφίσταται προκατεργασία µε EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Κωδικός K8004). Αποπαραφινωµένες τοµές: Προτείνεται προκατεργασία των αποπαραφινωµένων µονιµοποιηµένων µε φορµαλίνη και εγκλεισµένων σε παραφίνη τοµών ιστών µε τη χρήση Dako PT Link (Κωδικός PT100/PT101). Για λεπτοµέρειες, ανατρέξτε στον οδηγό χρήσης του PT Link. Ακολουθήστε τη διαδικασία προκατεργασίας που περιγράφεται στο ένθετο συσκευασίας του EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Κωδικός K8004). Οι παρακάτω παράµετροι πρέπει να χρησιµοποιηθούν για το PT Link: Θερµοκρασία προθέρµανσης: 65 C, θερµική ανάκτηση επιτόπου και χρόνοι: 97 C για 20 (±1) λεπτά, αφήστε το να κρυώσει στους 65 C. Αφαιρέστε τη σχάρα των αντικειµενοφόρων Autostainer µε τις αντικειµενοφόρους από το δοχείο PT Link και αµέσως βυθίστε τις αντικειµενοφόρους σε δοχείο (π.χ. PT Link Rinse Station, Κωδικός PT109) που περιέχει αραιωµένο σε θερµοκρασία δωµατίου EnVision FLEX Wash Buffer (20x), (Κωδικός K8007). Αφήστε τις αντικειµενοφόρους στο Wash Buffer για 1 5 λεπτά. Τοµές εγκλεισµένες σε παραφίνη: Η χρήση υδατικού υλικού επικάλυψης (Dako Faramount Κωδικός S3025) είναι η προτιµώµενη µέθοδος κάλυψης. Ως εναλλακτική προετοιµασία δείγµατος, τόσο η αποπαραφινωµένη ανάκτηση όσο και η ανάκτηση επιτόπου µπορούν να πραγµατοποιηθούν στο PT Link µε τη χρήση τροποποιηµένης διαδικασίας. Ανατρέξατε στον οδηγό χρήσης του PT Link για οδηγίες. Μετά την ολοκλήρωση της διαδικασίας χρώσης, οι τοµές πρέπει να στεγνώσουν στον αέρα στους 60 C, να εµβαπτιστούν σε ξυλένιο και να επικαλυφθούν χρησιµοποιώντας µέσα µόνιµης επικάλυψης. Οι αλκοόλες πρέπει να αποφεύγονται µε τα µέσα µόνιµης επικάλυψης, καθώς ενδέχεται να ελαττώσουν την αντιδραστικότητα του ερυθρού χρωµογόνου. Πριν επικαλυφθούν, οι τοµές ιστού δεν πρέπει να στεγνώνουν κατά τη διάρκεια της προκατεργασίας ή κατά τη διάρκεια των παρακάτω ανοσοϊστοχηµικών διαδικασιών χρώσης. Για καλύτερη προσκόλληση των τοµών ιστού στις υάλινες αντικειµενοφόρους πλάκες, συνιστάται η χρήση Dako FLEX IHC Microscope Slides (κωδικός K8020). Το συνιστώµενο σύστηµα εποπτικής παρουσίασης είναι το EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link) (Κωδικός SK110). Τα στάδια της χρώσης και οι χρόνοι επώασης έχουν προγραµµατιστεί εκ των προτέρων στο λογισµικό του συστήµατος χρώσης Autostainer Link. Για λεπτοµερείς οδηγίες σχετικά µε την τοποθέτηση των αντικειµενοφόρων πλακών και των αντιδραστηρίων, ανατρέξτε στον κατάλληλο Οδηγό χρήσης του αυτοµατοποιηµένου συστήµατος χρώσης Link της Dako. Εάν τα πρωτόκολλα δεν είναι διαθέσιµα στην πλατφόρµα Autostainer που χρησιµοποιείτε, παρακαλούµε να επικοινωνήσετε µε την Τεχνική Υποστήριξη της Dako. Όλα τα βήµατα επώασης πρέπει να πραγµατοποιούνται σε θερµοκρασία δωµατίου. Οι βέλτιστες συνθήκες ενδέχεται να ποικίλλουν ανάλογα µε το δείγµα και τη µέθοδο προετοιµασίας και πρέπει να καθορίζονται ξεχωριστά από κάθε εργαστήριο. Εάν ο εξετάζων παθολόγος επιθυµεί διαφορετική ένταση χρώσης, µπορείτε να επικοινωνήσετε µε έναν ειδικό εφαρµογών της Dako / ειδικό της τεχνικής υπηρεσίας για τον επαναπρογραµµατισµό του πρωτοκόλλου. Ελέγξτε ότι η απόδοση του τροποποιηµένου πρωτοκόλλου εξακολουθεί να ισχύει, αξιολογώντας ότι το πρότυπο χρώσης είναι πανοµοιότυπο µε το πρότυπο χρώσης που περιγράφεται στην ενότητα «Χαρακτηριστικά απόδοσης». ( ) GR_001 σελ. 2/6

3 Η αντίχρωση σε αιµατοξυλίνη συνιστάται µε χρήση EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (Κωδικός K8008). Συνιστάται µη υδατικό µέσο µόνιµης επικάλυψης. Για µόνιµη επικάλυψη οι αντικειµενοφόροι πρέπει να στεγνώσουν στον αέρα στους 60 C για 1 ώρα και στη συνέχεια να εµβαπτιστούν σε ξυλένιο για 5 λεπτά. Οι αλκοόλες πρέπει να αποφεύγονται µε τα µέσα µόνιµης επικάλυψης, καθώς ενδέχεται να ελαττώσουν την αντιδραστικότητα του ερυθρού χρωµογόνου. Αρνητικοί και θετικοί µάρτυρες πρέπει να αναλύονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών χρησιµοποιώντας το ίδιο πρωτόκολλο. Ο ιστός θετικού µάρτυρα πρέπει να περιλαµβάνει τον προστάτη (φυσιολογικό ή µε υπερπλασία) και τις δοµές/κύτταρα που πρέπει να εµφανίζουν τα πρότυπα αντίδρασης όπως περιγράφονται για το συγκεκριµένο ιστό στα Χαρακτηριστικά απόδοσης σε όλα τα θετικά δείγµατα του. Ερµηνεία χρώσης Χαρακτηριστικά απόδοσης Τα κύτταρα καρκινώµατος που επιεπισηµαίνονται από το αντίσωµα Anti-AMACR εµφανίζουν ερυθρή κοκκιώδη κυτταροπλασµατική χρώση. Τα κύτταρα που επισηµαίνονται από το αντίσωµα Anti-Cytokeratin High Molecular weight εκφράζουν καφέ κυτταροπλασµατική χρώση. Τα κύτταρα που επισηµαίνονται από το αντίσωµα Anti-Cytokeratin 5/6 εκφράζουν καφέ κυτταροπλασµατική χρώση. Φυσιολογικοί ιστοί: Anti-AMACR: Τύπος ιστού Στοιχεία ιστών µε θετική χρώση (# εξετάστηκε) (8,9,12) Νεφρός (12) 8 12/12 επιθηλιακά κύτταρα των σωληναρίων Ήπαρ (15) 8 15/15 ηπατοκύτταρα Πνεύµονας (12) 8 12/12 επιθηλιακά κύτταρα των βρόγχων Χοληδόχος κύστη (10) 8 10/10 επιθηλιακά κύτταρα Κόλον (20) 9 20/20 επιφανειακό επιθήλιο παχέος εντέρου, εστιασµένο και κοιλωτικό Υπερπλαστικό παχύ έντερο (28) 12 1/28 Προστάτης, καλοήθης (194) 9 23/194 Επινεφρίδιο (12) 8 0/12 Ουροδόχος κύστη (7) 8 0/7 Εγκέφαλος (5) 8 0/5 Μαστός (12) 8 0/12 Ενδοµήτριο (12) 8 0/12 Καρδιά (5) 8 0/5 Λεµφαδένας (7) 8 0/7 Πάγκρεας (15) 8 0/15 Προστάτης (19) 8 0/19 Ωοθήκη (12) 8 0/12 Λεπτό έντερο (18) 8 0/18 Σιελογόνος αδένας (7) 8 0/7 έρµα (7) 8 0/7 Σπλήνα (12) 8 0/12 Στόµαχος (13) 8 0/13 Θυρεοειδής (5) 8 0/5 Όρχεις (5) 8 0/5 Το Anti-CK HMW, 34βE12 αντιδρά µε τους φυσιολογικούς επιθηλιακούς ιστούς, στους οποίους συµπεριλαµβάνονται: το πλακώδες επιθήλιο και οι ιδρωταδενικοί πόροι στο δέρµα, (18) όλες οι επιθηλιακές στιβάδες συµπεριλαµβανοµένων του κοιλώδους και του βασικού επιθηλίου καθώς και των κυττάρων των πόρων στον µαστό (20), ορισµένα πνευµονοκύτταρα, το µεσοθήλιο και το βρογχικό επιθήλιο του πνεύµονα, τα επιθήλια των συλλεκτικών πόρων στον νεφρό και των κυττάρων των πόρων στο πάγκρεας, των χοληφόρων πόρων στο ήπαρ, καθώς και το µεσοθήλιο και ένα µέρος του επιθηλίου (κύτταρα που εντοπίζονται κυρίως προς τη βάση) της γαστρεντερικής οδού (18). Με το αντι-ck HMW, 34βE12 δεν σηµαίνονται τα ηπατοκύτταρα, τα παγκρεατικά κυψελοειδή κύτταρα, τα εγγύς νεφρικά σωληνάρια και οι µη επιθηλιακοί φυσιολογικοί ιστοί (18). Το αντι-ck HMW, 34βE12 χρωµάτισε τους µαστικούς αδένες, τα πλακώδη επιθήλια του τραχήλου, τον προστάτη αδένα, τον εκφορητικό πόρο του γλωσσικού σιαλογόνου αδένα, τα πλακώδη επιθήλια του δέρµατος, τα δικτυωτά κύτταρα και τα σωµάτια του Hassall στον θύµο, καθώς και το πλακώδες επιθήλιο της αµυγδαλής. Καµία χρώση δεν παρατηρήθηκε στα επινεφρίδια, στον µυελό των οστών, στον εγκέφαλο ή στην παρεγκεφαλίδα, στο κόλον, στην καρδιά, στον νεφρό, στο ήπαρ, στον πνεύµονα, στα µεσοθηλιακά κύτταρα, στην ωοθήκη, στο πάγκρεας, στον παραθυρεοειδή, στο περικάρδιο, στα περιφερειακά νεύρα, στην υπόφυση, στον σκελετικό µυ, στο λεπτό έντερο, στον σπλήνα, στον στόµαχο, στους όρχεις, στον θυρεοειδή, ή στη µήτρα. Το αντίσωµα Cytokeratin 5/6 επισηµαίνει τα πολύστιβα πλακώδη επιθήλια. Σε σύνθετα επιθήλια, τα βασικά κύτταρα στις περισσότερες περιπτώσεις εκφράζουν την CK 5. Απλά επιθήλια και µη επιθηλιακά κύτταρα γενικώς δεν επισηµαίνονται από το αντίσωµα. ( ) GR_001 σελ. 3/6

4 Παθολογικοί Ιστοί: Το αντι-amacr ήταν ανοσοδραστικό µε την πλειοψηφία των προστατικών καρκινωµάτων που εξετάστηκαν (8-13). 0/25 Τύπος ιστού (Πλήθος που εξετάστηκε) Όγκοι µε θετική χρώση Αδενοκαρκίνωµα προστάτη (18) 8 17/18 Ηπατοκυτταρικό καρκίνωµα (21) 8 17/21 Καρκίνωµα νεφρού (24) 8 18/24 Καρκίνωµα µεταβατικών κυττάρων ουροδόχου κύστης (29) 8 9/29 Αδενοκαρκίνωµα στοµάχου (15) 8 4/15 Αδενοκαρκίνωµα µαστού (61) 8 9/61 Χολαγγειοκαρκίνωµα χοληφόρου πόρου (14) 8 2/14 Αδενοκαρκίνωµα του πνεύµονα (23) 8 3/23 Νευροενδοκρινές καρκίνωµα, ΓΕ, πνεύµονας και ήπαρ (9) 8 1/9 Επιθηλιακό σάρκωµα µαλακού ιστού (12) 8 1/12 Αδενοκαρκίνωµα ωοθήκης (27) 8 2/27 Αδενοκαρκίνωµα παγκρέατος (13) 8 1/13 Όγκος φλοιού επινεφριδίου (20) 8 1/20 Όγκοι σιελογόνων αδένων (28) 8 1/28 Καρκίνωµα του παχέος εντέρου (176) /176 Καλά διαφοροποιηµένα (58) 12 45/58 Μετρίως διαφοροποιηµένα (88) 12 66/88 Ανεπαρκώς διαφοροποιηµένα (30) 12 11/30 Όγκοι βλαστικών κυττάρων (14) 8 0/14 Καρκινοειδής όγκοι, πνεύµονες και ΓΕ (10) 8 0/10 Μικροκυτταρικό καρκίνωµα, πνεύµονες και δέρµα (15) 8 0/15 Μεσοθηλίωµα υπεζωκότος (16) 8 0/16 Αδιαφοροποίητο καρκίνωµα (27) 8 0/27 Μελάνωµα (20) 8 0/20 Καρκίνωµα πλακωδών κυττάρων, δέρµα και βλεννογόνος (25) 8 Καρκίνωµα βασικών κυττάρων του δέρµατος (20) 8 0/20 Αρθρικό σάρκωµα (6) 8 0/6 Όγκοι του θυρεοειδούς (54) 8 0/54 Θύµωµα (8) 8 0/8 Καρκίνωµα ενδοµητρίου (10) 8 0/10 Θετική χρώση του αντι-ck HMW, 34βE12 έχει αναφερθεί για τα καρκινώµατα από πλακώδη κύτταρα και από µεταβατικά κύτταρα ή κύτταρα των πόρων, µεταξύ των οποίων: καρκίνωµα εκ πλακωδών κυττάρων του δέρµατος, του πνεύµονα και του ρινοφάρυγγα, καρκίνωµα των πόρων του µαστού, του παγκρέατος, του χοληφόρου πόρου και του σιαλογόνου αδένα, όπως επίσης και καρκινώµατα των µεταβατικών κυττάρων της ουροδόχου κύστεως και του ρινοφάρυγγα καθώς και θυµώµατα (21,22). Το αντι-ck HMW, 34βE12 χρωµάτισε τα επιθηλιακά µεσοθηλιώµατα, αλλά δεν αντέδρασε µε τα σαρκωµατοειδή ή δεσµοπλαστικά µεσοθηλιώµατα (23). Οι αρνητικοί στο αντι-ck HMW, 34βE12 όγκοι του επιθηλίου είναι είτε κυψελοειδούς τύπου αδενώµατα (π.χ. της υπόφυσης) είτε αδενοκαρκινώµατα του απλού επιθηλίου (π.χ. καρκινώµατα του ενδοµητρίου, ρινικά και ηπατοκυτταρικά καρκινώµατα) ή νευροενδοκρινείς όγκοι (18,22,24). Εποµένως, το αντι- CK HMW, 34βE12 µπορεί να χρησιµοποιηθεί ως βοήθηµα στην ταξινόµηση των υποοµάδων καρκινωµάτων (22). Έχει επίσης προταθεί ότι το αντι-ck HMW, 34βE12 είναι χρήσιµο στη διαφορική διάγνωση των µικρών κυψελοειδών αλλοιώσεων του προστάτη αδένα (20). Η διαγνωστική του αξία ίσως να βρίσκεται στην ταυτοποίηση των βασικών κυττάρων. Οι O Malley et al. (25) παρατήρησαν θετική χρώση των βασικών κυττάρων σε 47 δείγµατα καλοηθών προστατικών αλλοιώσεων συµπεριλαµβανοµένης της άτυπης αδενωµατώδους υπερπλασίας (26), της υπερπλασίας βασικών κυττάρων (21), της ατροφίας (20), της µετα-σκληρωτικής υπερπλασίας (19) και ινοεπιθηλιακού οζιδίου (14), ενώ παράλληλα 21 περιπτώσεις µικρών κυψελοειδών αδενοκαρκινωµάτων δεν εµφάνισαν καµία αντίδραση. Τονίστηκε ιδιαίτερα ότι η απώλεια της βασικής κυτταρικής στιβάδας δεν είναι οµοιόµορφη σε όλα τα προστατικά αδενοκαρκινώµατα. Απώλεια των βασικών κυττάρων παρατηρείται µόνο στα µικρά κυψελοειδή αδενοκαρκινώµατα. Προτάθηκε ότι η πλήρης απουσία χρώσης των προστατικών αλλοιώσεων µε το αντι-ck HMW, 34βE12 πρέπει να θεωρείται αρκετά ενδεικτική, χωρίς όµως να αποτελεί διάγνωση της κακοήθειας. Το αντίσωµα Cytokeratin 5/6 επεσήµανε 56/61 (92%) των επιθηλιοειδών µεσοθηλιωµάτων υπεζωκότος ενώ σηµάνθηκαν 9/63 (14%) των µεταστατικών αδενοκαρκινωµάτων. Επίσης σηµάνθηκε το αντιδραστικό µεσοθήλιο (27). Σε µια άλλη µελέτη (28), και τα 23 µεσοθηλιώµατα µε επιθηλιοειδή ή κυψελοειδή διαφοροποίηση σηµάνθηκαν ισχυρώς από το αντίσωµα, ενώ η σήµανση στις σαρκωµατοειδείς περιοχές των όγκων µε µεικτή µορφολογία ήταν ασθενής ή απούσα. Μια περίπτωση σαρκωµατοειδούς µεσοθηλιώµατος έδωσε διφορούµενη αντίδραση, ενώ τα µεσοθηλιώµατα δεσµοπλαστικού ή σαρκωµατοειδούς τύπου ήταν αρνητικά. Από 27 δευτερεύοντα αδενοκαρκινώµατα του υπεζώκοτα, 22 ήταν αρνητικά, 4 ασθενή ή διφορούµενα, και 1 εστιασµένα θετικό. Υψηλά επίπεδα θετικότητας σε κυτοκερατίνη 5/6 σε υπερπλασία πόρων του συνήθους τύπου, και αρνητική χρώση στις περισσότερες περιπτώσεις άτυπης υπερπλασίας πόρων και καρκινώµατος in situ πόρων, έχουν διαπιστωθεί µε το αντίσωµα (29). ( ) GR_001 σελ. 4/6

5 Βιβλιογραφία 1. Du J, Pei F, Zheng J, Wang K: [P504S and 34betaE12 dual-staining of immunohistochemistry in the diagnosis of prostate cancer], Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi 2005, 34: Varma M, Morgan M, Amin MB, Wozniak S, Jasani B: High molecular weight cytokeratin antibody (clone 34betaE12): a sensitive marker for differentiation of high-grade invasive urothelial carcinoma from prostate cancer, Histopathology 2003, 42: Martens MB, Keller JH: Routine immunohistochemical staining for high-molecular weight cytokeratin 34-beta and alpha-methylacyl CoA racemase (P504S) in postirradiation prostate biopsies, Mod Pathol 2006, 19: Abrahams NA, Ormsby AH, Brainard J: Validation of cytokeratin 5/6 as an effective substitute for keratin 903 in the differentiation of benign from malignant glands in prostate needle biopsies, Histopathology 2002, 41: Abrahams NA, Bostwick DG, Ormsby AH, Qian J, Brainard JA: Distinguishing atrophy and high-grade prostatic intraepithelial neoplasia from prostatic adenocarcinoma with and without previous adjuvant hormone therapy with the aid of cytokeratin 5/6, Am J Clin Pathol 2003, 120: Xu J, Stolk JA, Zhang X, Silva SJ, Houghton RL, Matsumura M, Vedvick TS, Leslie KB, Badaro R, Reed SG. Identification of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and microarray. Canc Res. 2000; 60: Ferdinandusse S, Denis S, Ijst L, Dacremont G, Waterham HR, Wanders JA. Subcellular localization and physiological role of α-methylacyl-coa racemase. Journal of Lipid Research. 2000; 41: Jiang Z, Fanger GR, Woda BA, Banner BF, Algate P, Dresser K, Xu J, Chu PG. Expression of α-methylacyl- CoA racemase (P504S) in various malignant neoplasms and normal tissues: A study of 761 cases. Human Pathology. 2003; 34(8): Jiang Z, Woda BA, Rock KL, Xu Y, Savas L, Khan A, Pihan G, Cai F, Babcook JS, Rathanaswami P, Reed SG, Xu J, Fanger GR. P504S: a new molecular marker for the detection of prostate carcinoma. Am J Surg Pathol. 2001; 25(11): Jiang Z, Wu C, Woda BA, Dresser K, Xu J, Fanger GR, Yang XJ. P504S/α-methylacyl-CoA racemase: a useful marker for diagnosis of small foci of prostatic carcinoma on needle biopsy. Am J Surg Path. 2002; 26(9): Yang XJ, Wu C, Woda BA, Dresser K, Tretiakova M, Fanger GR, Jiang Z. Expression of α-methylacyl-coa racemase (P504S) in atypical adenomatous hyperplasia of the prostate. Am J Surg Path. 2002; 26(7): Jiang Z, Fanger GR, Banner BF, Woda BA, Algate P, Dresser K, Xu J, Reed SG, Rock KL, Chu PG. A dietary enzyme: alpha-methylacyl-coa racemase/p504s is overexpressed in colon carcinoma. Cancer Detect Prev. 2003;27(6): Beach R, Gown AM, de Peralta-Venturina MN, Folpe AL, Yaziji H, Salles PG, Grignon DJ, Fanger GR, Amin MG. P504S immunohistochemical detection in 405 prostatic specimens including gauge needle biopsies. Am J Surg Pathol. 2002; 26(12): Moll R, Franke WW, Schiller DL. The catalog of human cytokeratins: Patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982; 31: Miettinen M. Keratin immunohistochemistry: update of applications and pitfalls. Pathol Ann 1993; 28: Moll R, Franke WW, Schiller DL. The catalog of human cytokeratins: Patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31: Moll R, Löwe A, Laufer J, Franke WW. Cytokeratin 20 in human carcinomas. A new histodiagnostic marker detected by monoclonal antibodies. Am J Pathol 1992; 140: Gown AM, Vogel AM. Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins II. Distribution of filaments in normal human tissues. Amer J Pathol 1984; 114: Shah KD, Tabibzadeh SS, Gerger MA. Immunohistochemical distinction of Paget s Disease from Bowen s Disease and superficial spreading melanoma with the use of monoclonal cytokeratin antibodies. Amer J Clin Pathol 1987; 88: Varma M, Amin MB, Linden MD, Zarbo RJ. Discriminant staining pattern of small glandular and preneoplastic lesions of the prostate using high molecular weight cytokeratin antibody A study of 301 consecutive needle biopsies. Mod Pathol 1997; 10:93A 21. Bacchi CA, Zarbo RJ, Jiang JJ, Gown AM. Do glioma cells express cytokeratin? Appl Immunohistochem 1995; 3: Dairkee SH, Puett L, Hackett AJ. Expression of basal and luminal epithelium-specific keratins in normal, benign and malignant breast tissue. J Nat Can Inst 1988; 80: Bolen JW, Hammar SP, McNutt MA. Reactive and neoplastic serosal tissue: a light-microscopic, ultrastructural, and immunocytochemical study. Amer J Surg Pathol 1986; 10: Hurlimann J, Gardiol D. Immunohistochemistry in the differential diagnosis of liver carcinomas. Amer J Surg Pathol 1991; 15: O Malley FP, Grignon DJ, Shum DT. Usefulness of immunoperoxidase staining with high-molecular-weight cytokeratin in the differential diagnosis of small-acinar lesions of the prostate gland. Virch Arch Pathol Anat 1990; 417: Brown DC, Theaker JM, Banks PM, Gatter KC, Mason DY. Cytokeratin expression in smooth muscle and smooth muscle tumors. Histopathol 1987; 11:477 ( ) GR_001 σελ. 5/6

6 Έκδοση 03/09 ( ) GR_001 σελ. 6/6