Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 Clone EP17/EP30. Code M3652. Προβλεπόµενη χρήση

Transcript

1 Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 Clone EP17/EP30 Code M3652 Προβλεπόµενη χρήση Για in vitro διαγνωστική χρήση. Το Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, προορίζεται για ανοσοϊστοχηµική χρήση. Τα αντισώµατα έναντι του Cytokeratin 8/18 µπορεί να είναι χρήσιµα για την αναγνώριση όγκων επιθηλιακής προέλευσης (1). Η κλινική ερµηνεία της χρώσης ή της απουσίας χρώσης πρέπει να συµπληρώνεται µε µορφολογικές µελέτες που χρησιµοποιούν κατάλληλους µάρτυρες και πρέπει να αξιολογούνται στο πλαίσιο του κλινικού ιστορικού του ασθενούς και άλλων διαγνωστικών εξετάσεων από ειδικό παθολόγο. Συνώνυµα για το αντιγόνο Περίληψη και επεξήγηση Αντιδραστήριο που παρέχεται Keratin 8/18 (K8/18) (1), CK8/18 (2). Το Cytokeratin 8/18 (CK8/18) ανήκει στην οικογένεια των ενδιάµεσων ινιδίων, µια ποικίλη οµάδα ετεροπολυµερών πρωτεϊνών που αποτελούνται από 54 διαφορετικά γονίδια. Τα πολυπεπτίδια κυτοκερατινών (CK) διακρίνονται σε όξινες (τύπου I) και ουδέτερες-βασικές (τύπου II) υπο-οικογένειες. Τα πολυπεπτίδια τύπου Ι και ΙΙ ενώνονται και σχηµατίζουν το ώριµο τετραµερές ετεροπολυµερές. Το CK18 είναι µια κυτοκερατίνη µεγέθους 45 kda CK που ανήκει στην υπο-οικογένεια όξινου τύπου I και συνήθως ενώνεται µε την τύπου ΙΙ κυτοκερατίνη CK8, µεγέθους 54 kda. Μαζί, τα CK8/18 σχηµατίζουν µία από τις κυτοκερατίνες χαµηλού µοριακού βάρους (LMW-CK). Το CK8/18 εκφράζεται σε απλά, µη διαστρωµατωµένα επιθήλια, στα βασικά και επιφανειακά κύτταρα του µεταβατικού επιθηλίου, στα εκκριτικά κύτταρα/κύτταρα του αυλού σύνθετων επιθηλίων, στο µεσοθήλιο και ενδέχεται να είναι παρόν σε ορισµένους τύπους µεσεγχυµατικών κυττάρων (1). Σε ένα δεδοµένο κύτταρο µπορεί να εκφράζονται πολλά µέλη µιας οικογένειας κυτοκερατινών, χαρακτηρίζοντας έτσι τον τύπο του κυττάρου και την κατάσταση διαφοροποίησης (1). Σχεδόν όλα τα καρκινώµατα επιθηλιακής προέλευσης και τα µεσοθηλιώµατα εκφράζουν το CK8/18 (2) και, συνεπώς, τα αντισώµατα έναντι του CK8/18 αποτελούν χρήσιµο βοήθηµα στην ταξινόµηση των όγκων άγνωστης προέλευσης και των καρκινωµάτων χαµηλής διαφοροποίησης (1). Τα αντισώµατα έναντι του CK8/18 εµφανίζουν κυτταροπλασµατικό ή/και µεµβρανώδες πρότυπο χρώσης. Εστιακή ασθενής έκφραση µπορεί να παρατηρηθεί επίσης σε µεσεγχυµατικούς όγκους, όπως το λειοµύωµα, το ραβδοµυοσάρκωµα, το κακόηθες µελάνωµα, το νευροΐνωµα, το σάρκωµα Ewing, ο δεσµοπλαστικός στρογγυλοµικροκυτταρικός όγκος, το καρκίνωµα πλακωδών κυττάρων και το λέµφωµα (3, 4). Ανατρέξτε στις Γενικές οδηγίες για την ανοσοϊστοχηµική χρώση της Dako ή στις οδηγίες του συστήµατος ανίχνευσης των διαδικασιών IHC. Μίγµα δύο µονοκλωνικών αντισωµάτων κουνελιού που παρέχεται σε υγρή µορφή ως υπερκείµενο κυτταροκαλλιέργειας σε Tris-HCl 0,05 mol/l, νατραζίδιο 0,015 mol/l, µε ph 7,2. Το συγκεκριµένο προϊόν περιέχει σταθεροποιητική πρωτεΐνη. Κλώνος: EP17 (CK8) και EP30 (CK18). Ισότυπος: IgG κουνελιού. Συγκέντρωση lgg κουνελιού σε mg/l: βλ. ετικέτα στο φιαλίδιο. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης µεταξύ των παρτίδων µπορεί να ποικίλλει χωρίς να επηρεάζει τη βέλτιστη αραίωση. Ο τίτλος κάθε µεµονωµένης παρτίδας συγκρίνεται και ρυθµίζεται προς παρτίδα αναφοράς για να διασφαλιστεί η συνεπής απόδοση της ανοσοϊστοχηµικής χρώσης από παρτίδα σε παρτίδα. Ανοσογόνα CK8: Συνθετικό πεπτίδιο που αντιστοιχεί σε κατάλοιπα στο C-τελικό τµήµα της ανθρώπινης κυτοκερατίνης 8. CK18: Ανθρώπινη κυτοκερατίνη 18 αποµονωµένη από κύτταρα HT-29. Ειδικότητα Το CK8/18 είναι ένα κοκτέιλ δύο µονοκλωνικών αντισωµάτων. Σε στύπωµα Western κυτταρολυµάτων A431, το αντι-ck8, κλώνος EP17, αναγνωρίζει µια µείζονα ζώνη 52 kda που αντιστοιχεί στο αναµενόµενο µοριακό βάρος του CK8, ενώ το αντι-ck18, κλώνος EP30, αναγνωρίζει µια µείζονα ζώνη 45 kda που αντιστοιχεί στο αναµενόµενο µοριακό βάρος του CK18. ( ) P02831GR_001_M3652/ σελ. 1/5

2 Προφυλάξεις 1. Για επαγγελµατίες χρήστες. 2. Το παρόν προϊόν περιέχει νατραζίδιο (NaN 3), µια ιδιαίτερα τοξική χηµική ουσία σε καθαρή µορφή. Στις συγκεντρώσεις του προϊόντος, παρόλο που δεν έχει ταξινοµηθεί ως επικίνδυνο, το νατραζίδιο ενδέχεται να αντιδράσει µε τις µολύβδινες ή χάλκινες υδραυλικές σωληνώσεις και να δηµιουργήσει ιδιαίτερα εκρηκτικές εναποθέσεις µεταλλικών αζιδίων. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε µε άφθονο νερό, για να αποτρέψετε τη συσσώρευση µεταλλικών αζιδίων στις σωληνώσεις. 3. Όπως ισχύει για κάθε προϊόν βιολογικής προέλευσης, πρέπει να εφαρµόζονται οι δέουσες διαδικασίες χειρισµού. 4. Πρέπει να φοράτε κατάλληλα Μέσα ατοµικής προστασίας για να αποφύγετε την επαφή µε τα µάτια και το δέρµα. 5. Το αχρησιµοποίητο διάλυµα πρέπει να απορρίπτεται σύµφωνα µε τους τοπικούς, κρατικούς και οµοσπονδιακούς κανονισµούς. Απόθεµα, φύλαξη Φυλάσσετε σε θερµοκρασία 2-8 C. Μην το χρησιµοποιείτε µετά την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται στο φιαλίδιο. Αν τα αντιδραστήρια φυλάσσονται σε διαφορετικές συνθήκες από εκείνες που προδιαγράφονται, ο χρήστης πρέπει να επαληθεύσει τις συνθήκες. εν υπάρχουν εµφανείς ενδείξεις που να υποδεικνύουν την αστάθεια του προϊόντος αυτού. Για τον λόγο αυτό, οι θετικοί και αρνητικοί µάρτυρες πρέπει να εξετάζονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών. Αν παρατηρηθεί µη αναµενόµενη χρώση, που δεν µπορεί να ερµηνευτεί από τις διακυµάνσεις των εργαστηριακών διαδικασιών και υπάρχουν υποψίες για πρόβληµα στο αντίσωµα, επικοινωνήστε µε το Τµήµα τεχνικής υποστήριξης της Dako. Σύντοµος οδηγός Βήµα Σχόλια Μονιµοποίηση Φορµαλίνη εν ισχύει Προεπεξεργασία EnVision FLEX, High ph (Κωδικοί K8000/ K8004) 20 λεπτά HIER, 3-σε-1 µε τη χρήση PT Link και PT Link Rinse Station Αραίωση 1:50 20 λεπτά επώαση Ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης Αρνητικός µάρτυρας Οπτικοποίηση Dako Antibody Diluent (Κωδικός S0809) Negative Control, Rabbit IgG (Κωδικός X0936) EnVision FLEX, High ph (Κωδικός K8000/K8010) Αραιώστε ακριβώς πριν από τη χρήση 20 λεπτά επώαση 20 λεπτά επώαση, 2x5 λεπτά επώαση µε DAB+ Αντίχρωση EnVision FLEX Hematoxylin 5 λεπτά επώαση (Κωδικός K8008/K8018) Ιστός µάρτυρα Φυσιολογικό ήπαρ Κυτταροπλασµατική/µεµβρανώδης χρώση Αντικειµενοφόροι πλάκες FLEX IHC Microscope Slides (Κωδικός K8020) Συνιστώνται για καλύτερη προσκόλληση των τοµών στις γυάλινες αντικειµενοφόρους πλάκες. Επικάλυψη Απαιτείται µη υδατική, µόνιµη επικάλυψη Μετά τη χρώση, οι τοµές πρέπει να αφυδατωθούν, να υποστούν διαύγαση και να επικαλυφθούν χρησιµοποιώντας µέσα µόνιµης επικάλυψης. Εξοπλισµός οργάνων Autostainer Link 48 και Autostainer Plus Χρησιµοποιείτε φιαλίδια ειδικά για το όργανο (Κωδικός SK200-SK203 και Κωδικός S3425) *Ο χρήστης πρέπει πάντοτε να διαβάζει το ένθετο της συσκευασίας για λεπτοµερείς οδηγίες σχετικά µε τη διαδικασία χρώσης και το χειρισµό του προϊόντος. Προετοιµασία δείγµατος Τοµές παραφίνης: Το αντίσωµα µπορεί να χρησιµοποιηθεί για τη σήµανση τοµών εγκλεισµένου σε παραφίνη και µονιµοποιηµένου µε φορµαλίνη. Τα δείγµατα πρέπει να κόβονται σε τοµές πάχους περίπου 4 µm. Προεπεξεργασία: Οι µονιµοποιηµένες µε φορµαλίνη και εγκλεισµένες σε παραφίνη τοµές ιστών πρέπει να υποβάλλονται σε προεπεξεργασία µε θερµικώς επαγόµενη ανάκτηση επιτόπου (HIER). Τα βέλτιστα αποτελέσµατα λαµβάνονται όταν οι ιστοί υφίστανται προκατεργασία µε HIER, µε χρήση αραιωµένου EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Κωδικός K8004). Η αποπαραφίνωση, η επανυδάτωση και η ανάκτηση επιτόπου είναι δυνατόν να πραγµατοποιηθούν στο Dako PT Link (Κωδικός PT100/PT101). Ανατρέξτε στον οδηγό χρήσης του PT Link για λεπτοµέρειες. Οι παρακάτω παράµετροι πρέπει να χρησιµοποιηθούν για το PT Link: Θερµοκρασία προθέρµανσης: 65 C, θερµοκρασία και χρόνος ανάκτησης επιτόπου: 97 C για 20 (±1) λεπτά, αφήστε το να κρυώσει στους 65 C. Αφαιρέστε τη σχάρα των αντικειµενοφόρων από το δοχείο PT και αµέσως εµβαπτίστε τις αντικειµενοφόρους σε δοχείο (π.χ. PT Link Rinse Station (Κωδικός PT109)) που περιέχει αραιωµένο EnVision FLEX Wash Buffer (20x) (Κωδικός K8007) σε θερµοκρασία δωµατίου. Αφήστε τις αντικειµενοφόρους πλάκες στο Wash Buffer για 1-5 λεπτά. Οι τοµές δεν πρέπει να στεγνώνουν κατά τη διάρκεια της κατεργασίας ή κατά τη διάρκεια της παρακάτω ανοσοϊστοχηµικής διαδικασίας χρώσης. Για καλύτερη προσκόλληση των τοµών στις γυάλινες αντικειµενοφόρους πλάκες, συνιστάται η χρήση FLEX IHC Microscope Slides (κωδικός K8020). Μετά την ολοκλήρωση της διαδικασίας χρώσης, οι τοµές πρέπει να αφυδατωθούν, να υποστούν διαύγαση και να επικαλυφθούν µε χρήση µέσων µόνιµης επικάλυψης. ( ) P02831GR_001_M3652/ σελ. 2/5

3 ιαδικασία χρώσης Ερµηνεία χρώσης Αραίωση: Η συνιστώµενη αραίωση του Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP30, Κωδικός M3652, είναι 1:50. Αραιώστε το αντίσωµα σε Dako Antibody Diluent (Κωδικός S0809). Επωάστε τις προκατεργασµένες τοµές επί 20 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου. Τα παρόντα ισχύουν µόνο ως κατευθυντήριες οδηγίες. Οι βέλτιστες συνθήκες ενδέχεται να ποικίλουν ανάλογα µε το δείγµα και τη µέθοδο προετοιµασίας και πρέπει να καθορίζονται ξεχωριστά από το κάθε εργαστήριο. Αρνητικός µάρτυρας: Το συνιστώµενο αντιδραστήριο αρνητικού µάρτυρα είναι το Dako Negative Control, Rabbit IgG (Κωδικός X0936), αραιωµένο στην ίδια συγκέντρωση Ig όπως και το πρωτοταγές αντίσωµα. Η σταθερότητα του αραιωµένου αντισώµατος και του αρνητικού µάρτυρα πρέπει να προσδιορίζονται κατά την πραγµατική διαδικασία χρώσης. Σε διαφορετική περίπτωση, συνιστάται αραίωση των αντιδραστηρίων αυτών αµέσως πριν από τη χρήση. Θετικοί και αρνητικοί µάρτυρες πρέπει να εξετάζονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών. Οπτικοποίηση: Το συνιστώµενο σύστηµα οπτικοποίησης είναι το EnVision FLEX, High ph (Κωδικός K8000/K8010) µε χρήση επώασης επί 20 λεπτά σε θερµοκρασία δωµατίου. Ακολουθήστε τη διαδικασία που εσωκλείεται µε το(τα) επιλεγµένο(α) συστήµα(τα) εµφάνισης. Aυτοµατοποίηση: Το αντίσωµα είναι πλήρως κατάλληλο για ανοσοϊστοχηµική χρώση µε αυτοµατοποιηµένες πλατφόρµες, όπως το Dako Autostainer, Autostainer Plus και Autostainer Link, καθώς και το PT Link για προκατεργασία. Αντίχρωση: Το συνιστώµενο σύστηµα αντίχρωσης είναι το EnVision FLEX Hematoxylin (Κωδικοί K8008/K8018). Για βέλτιστα αποτελέσµατα, συνιστάται η χρήση µη υδατικού υλικού µόνιµης επικάλυψης. Μάρτυρες: Αρνητικοί και θετικοί µάρτυρες πρέπει να αναλύονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών και µε χρήση του ίδιου πρωτοκόλλου. Ο ιστός θετικού µάρτυρα πρέπει να περιλαµβάνει φυσιολογικό ήπαρ και οι δοµές/κύτταρα πρέπει να παρουσιάζουν τα πρότυπα αντίδρασης όπως περιγράφονται για αυτόν τον ιστό στην ενότητα "Χαρακτηριστικά απόδοσης". Το πρότυπο της κυτταρικής χρώσης είναι κυτταροπλασµατικό / µεµβρανώδες. ( ) P02831GR_001_M3652/ σελ. 3/5

4 Χαρακτηριστικά απόδοσης Φυσιολογικοί ιστοί: Τα επιθηλιακά κύτταρα εµφανίζουν µια µέτρια έως ισχυρή κυτταροπλασµατική ή/και µεµβρανώδη αντίδραση χρώσης (5). Πρέπει να σηµειωθεί ότι ενδέχεται να παρατηρηθεί χρώση των δικτυωτών κυττάρων στους λεµφοειδείς ς. Τύπος Τύπος Επινεφρίδιο 3/3 Πάγκρεας 3/3 Μυελός των οστών 0/3 Παραθυρεοειδής 3/3 Μαστός 3/3 Υπόφυση 1/3 Παρεγκεφαλίδα 0/3 Προστάτης 3/3 Κυρίως εγκέφαλος 0/3 Σιελογόνος αδένας 3/3 Τράχηλος 1/3 Σκελετικός µυς 0/3 Παχύ έντερο 3/3 έρµα 3/3 Οισοφάγος 3/3 Λεπτό έντερο 3/3 Καρδιά 0/3 Σπλήνας 3/3 Νεφρός 3/3 Στόµαχος 3/3 Ήπαρ 3/3 Όρχις 2/3 Πνεύµονας 3/3 Θύµος 3/3 Μεσοθηλιακά κύτταρα 2/3 Θυρεοειδής 3/3 Νεύρο, περιφερικό 0/3 Αµυγδαλή 3/3 Ωοθήκη 3/3 Μήτρα 1/3 Παθολογικοί ιστοί: Τα επιθηλιακά κύτταρα εµφανίζουν µια µέτρια έως ισχυρή κυτταροπλασµατική ή/και µεµβρανώδη αντίδραση χρώσης (41/56) (6). Τύπος Ηπατοκυτταρικό καρκίνωµα Καρκίνωµα εκ διαυγών κυττάρων των νεφρών Θηλωµατώδες καρκίνωµα των νεφρών Αδενοκαρκίνωµα πνεύµονα (2) Πλακώδες καρκίνωµα του πνεύµονα (1) Μικροκυτταρικό καρκίνωµα του πνεύµονα Αδενοκαρκίνωµα στοµάχου Αδενοκαρκίνωµα παγκρέατος Θηλωµατώδες καρκίνωµα θυρεοειδούς Πορογενές καρκίνωµα µαστού Λοβιακό καρκίνωµα µαστού Αδενοκαρκίνωµα προστάτη Αδενοκαρκίνωµα παχέος εντέρου Τύπος 3/3 Μελάνωµα 0/3 3/3 Αδιαφοροποίητο καρκίνωµα 1/3 3/3 Λειοµυοσάρκωµα (1) 0/1 2/2 Ραβδοµυοσάρκωµα (1) 0/1 1/1 Καρκινοειδές του εντέρου (2) 2/2 3/3 Καρκίνωµα ωοθήκης (2) 2/2 3/3 Ινωτικός ιστός (2) 0/2 3/3 Τεράτωµα - ώριµο (1) 0/1 3/3 Τεράτωµα - ανώριµο (1) 0/1 3/3 Λειοµύωµα (2) 1/2 3/3 ιάχυτο λέµφωµα από µεγάλα 0/2 Β-κύτταρα (2) 2/3 T-λέµφωµα (2) 0/2 3/3 Θυλακιώδες λέµφωµα (2) 0/2 ( ) P02831GR_001_M3652/ σελ. 4/5

5 Βιβλιογραφικές αναφορές 1. Moll R, Divo M, Langbein L. The human keratins: biology and pathology. Histochem Cell Biol 2008;129: Dabbs DJ. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia,PA: Churchill Livingstone, Adams H, Schmid P, Dirnhofer S, Tzankov A.Cytokeratin expression in hematological neoplasms: A tissue microarray study on 866 lymphoma and leukemia cases. Pathol Res Pract 2008;204: Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis (review). Semin Cancer Biol 1990; 1: Yu J. Report of Normal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP Report on file, D Yu J. Report of Cancer Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18, Clone EP17/EP Report on file, D Το Monoclonal Rabbit Anti-Human Cytokeratin 8/18 (CK8/18), Clone EP17/EP30 παράγεται από την Epitomics Inc., µε χρήση της ιδιοκτησιακής τεχνολογίας µονοκλωνικού αντισώµατος κουνελιού της Epitomics που καλύπτεται από τις ευρεσιτεχνίες υπ' αριθ. 5,675,063 και 7,402,409. Έκδοση 04/14 ( ) P02831GR_001_M3652/ σελ. 5/5