Keywords: Citrullus colocynthis, MTT, cytotoxicity, Hep2, L929. تابستان 84 دوره هشتم شماره دوم. Hakim 2005; 8(2);

Transcript

1 7 Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th 08 بررسی اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره گیاهی هندوانه ابوجهل بر ردههای سلولی Hep و L99 لیلا قاضیزاده * دکتر جلیل توکل افشاری دکتر معصومه نوروزی فاطمه واحدی حسن رخشنده دکتر علیرضا زمانی دکتر ناصر مهدوی شهری - بخش ایمونوژنتیک و کشت سلولی مرکز تحقیقات ایمونولوژی پژوهشکده بوعلی دانشگاه علوم پزشکی مشهد - گروه فیزیولوژی و فارماکولوژی دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی مشهد - گروه میکروبیولوژی و ایمونولوژی دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی همدان - گروه زیستشناسی دانشکده علوم دانشگاه فردوسی - موسسه سرمسازی رازی مشهد Title: Cytotoxicity effects of Citrullus colocynthis on Hep and L99 cell lines. Authors: Tavakkol Afshari J,(PhD); Rakhshandeh H,(Pharm D); Zamani AR,(PhD); Mahdavi Shahri N, (PhD); Ghazezadeh L,(BSc); Norozi M,(BSc); Vahedi F,(MSc). Introduction: In this study, we investigated in vitro anti-tumoral effects of whole extract from bitter melon on human caucasian larynx carcinoma cell line (Hep) and normal mouse fibroblast cell line (L99) by MTT assay. Methods: Hep and L99 cell lines were maintained in RPMI-0 culture medium. Bitter melon extract was prepared by 7% ethanol. The number of x0 cell/ml were incubated in the presence or absence of the different concentrations (00, 0,,., 0., 0.0µg/ml) of bitter melon extract into well tissue culture plates. The plant extract cytotoxicity screening was performed by using -(,-dimethyl thiazol-y)-,- diphenyl tetrazolium bromide (MTT) colorimetric assay. Inhibitory concentration at 0% (IC0) was determined by plotting of the extract concentration against the optical density (OD) at 70nm from MTT assay. Results: There was a dose dependent cytotoxicity effect on Hep cells. At the highest concentration (00µg/ml), the plant extract completely inhibited the growth of cells and these effects gradually decreased as the dose reduced. After 8 hours incubation of the Hep cells at concentration of 00 µg/ml with the extract, viability of the cells were only % in compare to the L99 control cells. IC0 for Hep cell line was 7µg/ml. The plant extract showed no effect on L99 cell viability and characteristics. Conclusion: From this study it can be suggested that whole extract from bitter melon has a dose dependent cytotoxicity effect on Hep cell line. Therefore, this compound may be used for inhibition of the growth of cancer cells such as human larynx carcinoma. Keywords: Citrullus colocynthis, MTT, cytotoxicity, Hep, L99. Hakim 00; 8(); 7-. *- نویسنده مسو ول: مشهد بخش ایمونوژنتیک و کشت سلولی مرکز تحقیقات ایمونولوژی پژوهشکده بوعلی دانشگاه علوم پزشکی مشهد. تلفن: 0-77 فاکس: Jtavakkol@yahoo.com تابستان 8 دوره هشتم شماره دوم

2 بررسی اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره گیاهی هندوانه... 8 Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th 08 چکیده: مقدمه: در این تحقیق اثر سیتوتاکسیسیتی عصارۀ الکلی گیاه هنداونه ابوجهل بصورت in vitro با استفاده از تست MTT مورد ارزیابی قرار گرفت و اثر مهار کنندگی آن برروی دو ردۀ سلولی سرطان حنجره و فیبروبلاست نرمال موشی L99 مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین تغییرات مرفولوژی ردههای سلولی در مجاورت عصاره نیز ارزیابی و ثبت گردید. روشکار: تعداد 0 cell/ml از سلولهای Hep و L99 را در پلیتهای خانه کشت سلولی به همراه و یا بدون عصارۀ گیاهی هندوانه ابوجهل کشت شد. عصارهگیری به روش سوکسله و با استفاده از حلال اتانل %70 انجام شد و با غلظتهای µg/ml) 00) 0 / 0/ 0/0 به سلولهای Hep و L99 اضافه شد. تغییرات مرفولوژی سلولها پس از الی 7 ساعت مورد ارزیابی قرار گرفتند. اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره هنداونه ابوجهل با استفاده از تست MTT در in vitro مورد سنجش قرار گرفته و درصد IC0 تعیین گردید. نتایج: نتایج بدست آمده برای رده سلولی Hep نشان میدهد که در بالاترین غلظت (00µg/ml) عصاره گیاهی رشد سلولها کاملا مهار شده اند. این اثر با کاهش غلظتهای عصاره µg/ml) 0) / 0/ 0/0 کمتر می شود. IC0 برای ردۀ سلولی 7 µg/ml Hep بدست آمد. نتایج مرفولوژی و پرولیفراسیون سلولی عصارۀ هندوانه ابوجهل بر ردۀ سلولی نرمال موشی هیچگونه تا ثیر سیتوتاکسیک را نشان نداد. L99 نتیجهگیری: این نتایج نشان میدهد که اثر سیتوتاکسیسیتی عصارۀ گیاهی هنداونه ابوجهل بر ردۀ سلولی Hep وابسته به غلظت میباشد. عصارۀ تام این گیاه ممکن است برای مهار رشد و از بین بردن برخی از سلولهای سرطانی نظیر سرطان حنجره بکار رود. گلواژگان: سیتوتوکسیسیتی هندوانه ابوجهل L99. Hep مقدمه: معالجه و درمان بیماریها با گیاهان دارویی از دیرباز معمول بوده است. گیاهان همیشه بعنوان یکی از منابع مهم دارویی بودهاند زیرا که منابع طبیعی آنها معمولا فراوان سالم و مهم میباشند. با پیشرفت علم صنعت و فناوری داروسازی کاربرد وسیع آنها در درمان بیماریها موجب بروز مشکلاتی مانند اثرات جانبی که در بعضی موارد خطرناکتر از نوع بیماری بوده میشوند (). گیاهان دارویی خواص گوناگونی منجمله خواص ضد سرطانی دارند. «هندوانه ابوجهل» و یا «خربزه روباه» که در کتب طب سنتی با نامهای «حنظل» و «مراره الصحاری» و «علقم» نام برده شده است یکی از گیاهان دارویی متعلق به خانواده (خیارها و کدوها) میباشد. این گیاه بومی ایران بوده و در نواحی جنوبی کشور و مناطقی همچون جنوب استان خراسان یافت میشود. میوه این گیاه دارای گلوکوزید قابل تبلوری با طعم بسیار تلخ به نام کولوسنتین است. این گلیکوزید به حالت متبلور و خالص به رنگ زرد میباشد. در آب به نسبت /0 حل می شود و اگر هیدرولیز گردد گلوکز و مادهای به نام کولوسنتتین میدهد. میوه این گیاه علاوه بر موارد مذکور دارای کولوسنتی لین سیترولین ماده روغنی (0-7 درصد در دانه) مواد صمغی و املاح مختلف است. ریشە آن دارای مواد آلفا-آلاترین هنتریاکونتان و چند ساپونین میباشد. میوه این گیاه دارای خاصیت مسهلی قوی با اثر قاطع است. در موارد ضعف اعمال روده فلج امعاء و احشاء آب آوردن انساج انسداد و بیماریهای کبدی و گاهی به عنوان قاعده آور بکار میرود. از - Colocynthine CIHO - Colocynthine CHIOi - Colocynthine - Citrulline - α-elatrin - Hentriacotane - Citrullus colocynthis - Inhibitory concentration at 0%-IC 0 - Human caucasian larynx carcinoma cell line-(hep) - -(,-dimethyl thiazol-y)-,-diphenyl tetrazolium btomide - dose dependent - Cucurbitaceous مجله پژوهشی حکیم

3 Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th 08 9 دکتر جلیل توکلافشاری و همکاران خواص مهم دیگر این دارو اثر ضد ویروسی میکروبی و سرطانی آن است ( و ). هدف از این تحقیق بررسی اثر مهاری عصارۀ این گیاه بر روی ردۀ سلول سرطان حنجره میباشد. همچنین به منظور بررسی اثر سیتوتاکسیسیتی عصارۀ این گیاه بر سلولهای نرمال از ردۀ سلولی فیبروبلاست موشی (L99) استفاده شد. روشکار: تهیه و آمادهسازی عصارۀ گیاه عصارهگیری مواد مو ثره موجود در میوه گیاه هندوانه ابوجهل توسط حلالهای مختلف انجام شد و به دلیل حل شدن بهتر این عصاره در الکل اتانل %70 مورد استفاده قرار گرفت. روش بکار گرفته شده عصارهگیری به روش سوکسله بود. به طور خلاصه در این روش 0 گرم پودر بدست آمده از آسیاب میوه هنداونه ابوجهل و 00 سی سی اتانل %70 مخلوط شده و سپس به وسیله دستگاه دوار تقطیر در خلا به دست آمد. این عمل در حدود ساعت به طول انجامید. بعد از عصارهگیری عمل حذف حلال با استفاده از دستگاه Rota Vapor انجام گرفت که با پمپ خلاء در فشار کم عمل تبخیر را انجام میدهد تا عصاره نسوزد. طی این عمل حلال تبخیر شده و عصاره غلیظ باقی میماند. عصاره تهیه شده با استفاده از کیسه دیالیز و PEG 0000 تغلیظ و سپس از فیلتر µm 0/ عبور داده شده و غلظت پروتي ینی عصاره توسط اسپکتروفتومتر در طول موج 80nm اندازهگیری شد و برای مطالعات بعدی مورد استفاده قرار گرفت. کشت سلولهای Hep و L99 و ارزیابی مرفولوژی سلولی ابتدا سلولهای Hep و L99 (تهیه شده از بانک سلولی انستیتو پاستور ایران تهران) را در فلاسکهای کشت سلولی سیسی Denmark) (Nunc, در محیط RPMI-0 همراه با تابستان 8 دوره هشتم شماره دوم 00IU/ml mm L-glutamine 0% FCS Gibco ).mm HEPES 00µg/ml streptomycin penicillin (BRL, Scotland و در دمای 7ºC و % CO کشت و پاساژ داده تا اینکه سلولها از لحاظ تعداد و مرفولوژی به حد مطلوب برسند (پس از - پاساژ). پس از جدا کردن سلولها از سطح فلاسک توسط تریپسین - EDTA (Gibco BRL, Scotland) شمارش و ارزیابی حیاتی سلولها با استفاده از تست trypan blue exclusion test انجام شد و تعداد 0 cell/ml را در چاهکهای پلیت خانه مخصوص کشت سلولی Denmark) ) well plate, Nunc, به همراه و یا بدون عصاره گیاهی هندوانه ابوجهل کشت دادیم. غلظتهای مورد استفاده از عصارۀ گیاهی شامل µg/ml) (00 0 / 0/ 0/0 بود که به سلولهای Hep و L99 اضافه شد. تغییرات مرفولوژی و خصوصیات عمومی سلولها پس از 8 و 7 ساعت از نظر قابلیت اتصال به سطح پلیت و میزان گرانولیتی با استفاده از میکروسکوپ نوری معکوس مورد ارزیابی قرار گرفته و با استفاده از دوربین دیجیتال ثبت گردید. تست MTT اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره هنداونه ابوجهل با استفاده از تست 7 رنگ سنجی MTT و ارزیابی کمی پرولیفراسیون سلولی در In vitro مورد سنجش قرار گرفته و درصد IC0 محاسبه گردید ( و ). MTT (Sigma-Aldrich, USA) یک نمک تترازولیوم محلول 8 در آب است و هنگامیکه این ترکیب در محیط کشت فاقد فنل رد 9 و یا بافرPBS آمادهسازی میشود ترکیب زرد رنگی ایجاد می کند. هنگامیکه رنگ آماده شده MTT به سلولهای کشت داده شده افزوده میشود حلقه MTT فقط در میتوکندری سلولهای زنده 0 توسط آنزیم هیدروژناز شکسته و به ترکیب نامحلول فورمازان تبدیل میشود. بلورهای فورمازان توسط حلالهایی نظیر DMSO و یا ایزوپروپانول اسیدی حل شده و سپس جذب نوری رنگ ارغوانی ظاهر شده که در طول موج 70nm با استفاده از ریدر الیزا اندازهگیری میشود (). در تست MTT تعداد 00 میکرولیتر از سوسپانسیون سلولی با غلظت 0 cell/ml همراه با عصاره و یا بدون آن به هر چاهک از پلیت 9 خانه مسطح کشت Denmark) (Nunc, افزوده شد بطوریکه در هر چاهک تعداد 000 cell/well موجود باشد. سپس سلولها به مدت ساعت در دمای 7ºC و % CO و رطوبت %00 انکوبه شدند. پس از اتمام انوکوباسیون محیط کشت چاهکها جمعآوری و دور ریخته شد. سپس غلظتهای عصارۀ گیاهی هنداونه ابوجهل به هر چاهک - Anchorage dependent - Granulation 7 - -(,-dimethyl thiazol-y)-,-diphenyl tetrazolium btomide 8 - Phenol red 9 - Phosphate Buffer Saline 0 - Formazan - ELISA reader - Hep- human caucasian larynx carcinoma cell line - Polyethelyen glycol Passage - Confluent

4 بررسی اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره گیاهی هندوانه... 0 Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th 08 افزوده و به مدت و 8 ساعت انکوبه شد. مقدار 0µl رنگ MTT آماده شده (غلظت (mg/ml پس از و 8 ساعت انکوباسیون به هر چاهک افزوده و به مدت - ساعت دیگر انکوبه شد (در این مدت برای جلوگیری از نور پلیتها با فویل پوشانده شدند). سپس محلول رویی از هر چاهک حذف و مقدار 00µl DMSO (دی متیل سولفواکسید فلوکا-آلمان) و µl بافر گلایسین- NaCl به هر چاهک افزوده شد و بلورهای فورمازان توسط سوسپانسیون بطور کامل حل شده و سرانجام جذب نوری چاهکها در طول موج 70nm توسط دستگاه ELISA Plate reader USA) (STAT FAX, اندازهگیری شد. درصد سلولهای زنده با استفاده از کنترل از روش فرمول زیر محاسبه گردید (7). جذب نوری سلولهای درمان شده 00 x میانگین جذب نوری سلولهای کنترل IC 0 پس از رسم منحنی با بکارگیری غلظتهای عصاره و درصد سلولهای زنده محاسبه گردید. یافتهها: نتایج مرفولوژی ردۀ سلولی Hep نشان میدهد که عصارۀ گیاهی هندوانه ابوجهل تغییرات قابل توجهی در مقایسه با سلولهای کنترل (فاقد عصارۀ گیاهی) در خصوصیات مرفولوژی سلولها ایجاد نموده است. سلولها در مجاورت عصارۀ گیاهی قابلیت وابستگی به سطح خود را از دست داده و بصورت گرد و سوسپانسیون ظاهر شدند. همچنین میزان گرانولیتی سلولها در مقایسه با کنترل افزایش داشته و از رشد سلولها نیز کاسته شد. شکل - اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره گیاهی هندوانه ابوجهل بر رده سلولی Hep و L99 در تست MTT پس از ساعت / / 0/ 0 0 0/ 0 0/ / 0 00 غلظت عصارۀ گیاه هنداونه ابوجهل µg/ml OD 70 nm Hep Cell line L99 Cell line شکل - اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره گیاهی هندوانه ابوجهل بر رده سلولی Hep و L99 در تست MTT پس از 8 ساعت / Hep Cell line L99 Cell line OD at 70 nm / 0/ 0 0 0/ 0 0/ / 0 00 غلظت عصارۀ گیاهی هنداونه ابوجهل µg/ml شکل - ارزیابی مرفولوژی سلول ردههای (A Hep و) (B). L99 سلولها در شرایط ارایه شده در بخش مواد و روشها رشد داده شده و فاقد عصارۀ گیاهی هندوانه - Inhibitory concentration at 0% - anchorage dependency - Round - Granulation مجله پژوهشی حکیم

5 Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th 08 ابوجهل میباشند دکتر جلیل توکلافشاری و همکاران (کنترل). ثبت مرفولوژی با دوربین دیجیتال میکروسکوپ معکوس نوری و با بزرگ نمایی x پس از 8 ساعت انجام شد. این تغییرات مرفولوژی وابسته به غلظت بوده و با کاهش غلظت عصاره از تغییرات مرفولوژیک کاسته میشود تا جایی که در پایینترین غلظت عصارۀ گیاهی (0/0µg/ml) سلولها از نظر اثر مرفولوژی همانند سلولهای کنترل ظاهر شده و هیچگونه تغییری در خصوصیات سلولها دیده نمیشود. این تغییرات مرفولوژی سلولی پس از 8 ساعت مشاهده شد (شکل و ). عصارۀ گیاهی هنداونه ابوجهل بر ردۀ سلولی L99 در شکل - ارزیابی مرفولوژی سلول ردههای :Hep سلولها در شرایط اراي ه شده در بخش مواد و روشها رشد داده شده و بهمراه - Dose dependent عصارۀ گیاهی هندوانه ابوجهل (A) 0µg (B) 00µg و (C) 0.µg (E).µg (D) µg و (F) 0.0µg میباشند. ثبت مرفولوژی با دوربین دیجیتال میکروسکوپ معکوس نوری و با بزرگ نمایی x پس از 8 ساعت انجام شد. تابستان 8 دوره هشتم شماره دوم

6 بررسی اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره گیاهی هندوانه... Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th 08 هیچکدام از غلظتها تغییر مرفولوژی در این سلولها ایجاد ننموده است که این یافته بیانگر عدم تا ثیر عصاره بر خصوصیات سلولهای فیبروبلاست طبیعی موشی است (شکل ). شکل - ارزیابی مرفولوژی سلول رده L99: سلولها در شرایط اراي ه شده در بخش مواد و روشها رشد داده شده و بهمراه عصارۀ گیاهی هندوانه ابوجهل 00µg میباشد. ثبت مرفولوژی با دوربین دیجیتال میکروسکوپ معکوس نوری و با بزرگ نمایی x پس از 8 ساعت انجام شد. نتایج ارزیابی سیتوتاکسیسیتی در in vitro با استفاده از تست MTT پس از و 8 ساعت در شکل و نشان داده شده است. با افزایش غلظت عصاره جذب نوری (OD) حاصل از تست MTT کاهش مییابد (جدول و ). جدول - میانگین جذب نوری (OD) در طول موج 70 نانومتر حاصل از تست MTT بصورت triplicate و برای دوبار طبق پروتکل ارایه شده در بخش مواد و روشها پس از ساعت سلول غلظت (µg/ml) صفر 00 0/9±0/7 /98±0/8 /0±0/7 /±0/9 Hep cell line L99 cell line جدول - میانگین جذب نوری (OD) در طول موج 70 نانومتر حاصل از تست MTT که بصورت triplicate و برای دوبار طبق پروتکل ارایه شده در بخش مواد و روشها پس از 8 ساعت سلول غلظت (µg/ml) صفر این یافتهها بیانگر آن است که درصد سلولهای Hep زنده در مجاورت عصارۀ گیاهی هنداونه ابوجهل کاهش داشته و همچنین از قابلیت پرولیفراسیون سلولها جلوگیری شده است. بطوریکه در غلظت 00µg/ml تنها نزدیک به % سلولها پس از 8 ساعت در مقایسه با سلولهای L99 زنده بودند. با کاهش غلظت عصاره درصد سلولهای زنده افزایش داشته است. در غلظت 0/0µg/ml در صد سلولهای زنده در مقایسه با کنترل پس از 8 ساعت تقریبا %8 بوده است. این نتایج دال بر وابسته به غلظت بودن اثر عصاره میکند. IC 0 عصارۀ هندوانه ابوجهل برای ردۀ سلولی 7µg Hep محاسبه گردید. در صد سلولهای زندۀ ردۀ سلولی L99 در مجاورت عصارۀ گیاهی هنداونه ابوجهل کاهش قابل توجهی را در مقایسه با کنترل نشان نمیدهد. در بالاترین غلظت عصارۀ گیاهی (00µg/ml) کاهش حیات سلولهای L99 کمتر از % پس از 8 ساعت بوده است. بحث: در طب سنتی چین یونان و عرب از عصاره یا آب هندوانه ابوجهل بعنوان یک داروی گیاهی مو ثر در بسیاری از بیماریها استفاده میشود (8 و 9). هندوانه ابوجهل که عضو خانواده کوکوربیتاسه میباشد بسیار تلخ و لعابدار بوده و به عنوان داروی مسهل قوی مصرف میشود. توصیە اطبا سنتی این است که چون در عین حال که مسهل قوی است خراش دهندۀ شدید نیز میباشد بنابراین حتی الامکان جز در موارد استثنایی که ناچار باشند معده و رودهها را بشدت تخلیه کنند از استعمال آن به عنوان مسهل خودداری شود (). عصارۀ حنظل یا آب هنداونە ابوجهل آنتی بیوتیک مقتدری بر ضد برخی میکروبها میباشد از جمله بر ضد سالمونلا تایفوزا کوراینه باکتریوم دیفتریا اشریشیا کولی و استافیلوکوکوس اوري وس به ترتیب ضعیفتر وکمی مو ثر است و برای مبارزه با سالمونلا پاراتایفی بسیار مو ثر میباشد (). کولوسنتین و کولوسنتتین موجود در گیاه جهت بیماریهای متعددی منجمله آسیتها سرطان هپاتیت لوسمی و تومورها استفاده شده است. مادۀ مو ثره حنظل که بعنوان ضد سرطان از آن نامبرده میشود کوکوربتاسین است. همچنین ماده د-گلوکزید - Salmonella typhosa - Diphtheriae corynebacterium - Escherichia coli - Staphylococcus aureus - Salmonella paratyphi - cucurbitacin 00 0/8 ±0/9 /9 ±0/ /8 ±0/07 /87 ±0/9 Hep cell line L99 cell line مجله پژوهشی حکیم

7 Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th 08 دکتر جلیل توکلافشاری و همکاران بتا سیتوسترول نیز به عنوان آنتی تومور در عصارۀ حنظل موجود میباشد (-). یکی از مکانیسمهای پیشنهادی آنتی تومور در عصارۀ حنظل و ب سیاری از عصارههای گی اهی مکانیسم آپوپتوزیس و یا مرگ برنامهریزی شده سلولی است. در فعال شدن مکانیسم آپوپتوزیس چند عامل مو ثر میباشد که مهمترین آنها فعال شدن آنزیم اندوني وکلي از القای P و فعال شدن آنزیم پروتي از کسپس میباشد (-8). دو نوع کوکوربتاسین B و E وجود دارد که در بین انواع کوکوربیتاسینها نوع E آن اثر آنتی توموری مو ثرتری دارد (8). در طب سنتی چین از عصارۀ حنظل برای درمان لوسمیها و تومور کبد و طحال استفاده میشود (9 و 0). در این تحقیق از عصاره تام حنظل جهت بررسی اثر مهاری بر ردۀ سلولهای سرطانی حنجره Hep استفاده شد. با توجه به اثر مهاری عصاره بر رشد سلولها و اثر سیتوتاکسیسیتی در in vitro نتایج این تحقیق میتواند تا ییدی بر این مدعی باشد که عصارۀ تام حنظل با توجه به وجود کوکوربیتاسین میتواند بر سلولهای سرطان حنجره نیز مو ثر باشد. عصارۀ حنظل بر ردۀ سلولی L99 بصورت کیفی و مرفولوژیک و همچنین در تست کمی MTT بصورت in vitro اثر سیتوتاکسیسیتی نشان نمیدهد که این یافته می تواند برای کاربرد بالینی و تحقیقات بصورت in vivo مهم باشد. بطور کلی در مهار سلولهای سرطانی ماده مورد استفاده نباید بر سلولهای طبیعی اثر مخرب داشته باشد. با توجه به اینکه ما در این تحقیق از ردۀ سلولی L99 بعنوان سلول طبیعی استفاده نمودیم عدم تا ثیر عصارۀ هنداونه ابوجهل بر این سلولها دال بر این موضوع است. باید تا کید نماییم که این یافتهها جهت بکارگیری بصورت بالینی نیز باید بصورت in vivo به اثبات برسد هر چند که طب سنتی و تجربی اثرات آن نشان داده شده است. همچنین در نتایج بدست آمده مشاهده شد که سلولها نسبت به عصاره مورد نظر خاصیت وابسته به غلظت دارند. یعنی با افزایش غلظت اثر سایتوتوکسیسیتی عصاره بیشتر قابل مشاهده است. بطوریکه در بالاترین غلظتها 0µg) و 00) اثر سیتوتاکسیستی کامل و در مقادیر پایینتر 0/µg) / و ) اثر ممانعت کنندگی بر رشد سلولها دارد. در کاربرد بالینی عصارۀ حنظل دوز پیشنهادی به مقدار تا حبه از عصاره در روز میباشد ( و ). همچنین قرصهای آماده شده از پودر این عصاره به مقدار تا 8 گرم نیز وجود دارد که برای مصرف بالینی قرص در روز پیشنهاد شده است. گزارشاتی مبنی بر مسمومیت 7 با استفاده از عصارۀ حنظل گزارش شده است که کولیت اسهال و درد شکم از علایم مسومیت میباشد ( و ). از آنجا که مطالعه بر روی اثر ضد توموری هندوانه ابوجهل مراحل اولیه را سپری مینماید لذا این تحقیق مقدمهای برای رسیدن به جنبههای کاربردی این گیاه دارویی در مهار رشد سلولهای سرطانی میباشد. آزمایشات in vivo در مدلهای حیوانات آزمایشگاهی میتواند قدم مو ثری در نزدیک شدن و تا یید این یافتهها جهت بکارگیری در موارد بالینی باشد. - D-glucoside β-sitosterol - apaptosis - caspase - cucurbitacin E - Dose dependent - - grains/day 7 - colitis - Iselt MA, Holtei.WJ, Hilgad PT. The tetrazolium dye assay for rapid in vitro assessment of cytotoxicity. Drug Res 998; 9: Romijn JC, Verkoelen CF, Schroeder FH. Application of the MTT assay to human prostate cancer cell lines in vitro: establishment of test conditions and assessment of hormonestimulated growth and drug-induced cytostatic and cytotoxic effects. Prostate 988; : Bauer RG, Wagner HT. Cucurbitacin containing crude drugs. Analysis and standardization of medicinal drugs and phytopreparations by HPLC and other chromatographic methods. J Biol Sci Res 98;: 0-9- Huang YA, De-Bruyne TB, Apers S, et al. Complementinhibiting cucurbitacin glycosides from Picria fel-terrae. J Nat Prod 998; : Duncan MD, Duncan LK. Cucurbitacin E targets منابع: - زرگری علی. گیاهان دارویی. چاپ ششم جلد دوم انتشارات دانشگاه تهران میرحیدر حسین. معارف گیاهی: کاربرد گیاهان در پیشگیری و درمان بیماریها. چاپ دوم جلد سوم تهران: دفتر نشر فرهنگ اسلامی Konoshima TA, Takaski MB, Kozuka MO, et al. Inhibitory effects of Cucurbitane triterpenoids on epstein-barr virus activation and two-stage carcinogenesis of skin tumor. Biol Pharm Bull 99; 8: Mossman T. Rapid colorimetric assay of cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assay. J Immunol Meth 98; : -. - Alley MC, Pacula-Cox CM, Hursey ML. Morphometric and colorimetric analyses of human tumor cell line growth and drug sensitivity in soft agar culture. Cancer Res 988; : 7-. تابستان 8 دوره هشتم شماره دوم

8 بررسی اثر سیتوتاکسیسیتی عصاره گیاهی هندوانه... Downloaded from hakim.hbi.ir at : IRDT on Saturday July th Zaki MM, Mahmoud SA. Biochemical activities of bacterial population in the rhizosphere and soil of Hyoscyamus muticus and Citrullus colocynthis. Ann Agri Sci 98; 9: Habs M, Jahn SA. Carcinogenic activity of condensate from coloquint seeds (Citrullus colocynthis), after chronic epicutaneous administration to mice. J Cancer Res Clin Onco 98; 08: Basalah MO, Al WM. Comparative study of some metabolites of Citrullus colocynthis and Cucumis prohetarum. J Biol Sci Res 98; : Sawaya WN, Daghir NJ. Citrullus colocynthis seeds as a potential source of protein for food and feed. J Agri Food Chem 98; : Hatam NA, Whiting DA. Lipids and sterols of Citrullus colocynthis. Int J Crude Drug Res 990; 8: Bhattacharya AN. Citrullus colocynthis seed meal as a protein supplement for Najdi sheep in Northern Saudi Arabia. Anim. Feed SciTech 990; 9: Al-Faraj S. Haemorrhagic colitis induced by Citrullus colocynthis. Ann Trop Med Paras 99; 89: 9-. proliferating endothelia. J Surg Res 997; 9: Habs M, Jahn SA. Carcinogenic activity of condensate from coloquint seeds (Citrullus colocynthis) after chronic epicutaneous administration to mice. J Cancer Res Clin Onco 98; 08: -. - Zaki MM, Mahmoud SA. Biochemical activities of bacterial population in the rhizosphere and soil of Hyoscyamus muticus and Citrullus colocynthis. Ann Agri Sci 98; 9: Hatam NA, Whiting RD. Cucurbitacin glycosides from Citrullus colocynthis. Phytochem 87; 8: Thatte U, Bagadey S, Dahanukar S. Modulation of programmed cell death by medicinal plants. Cell Mol Biol 000; : Wasfi IA. Some pharmacological studies on Citrullus colocynthis. J Herbs Spices Med Plants 99; : Goldfain D, Lavergne A, Galian A, et al. Peculiar acute toxic colitis after ingestion of colocynth: a clinicopathological study of three cases. Gut 989; 0: Nadkarni KM. Indian Plants and Drugs with their Medical Properties and Uses. Delhi: Asiatic Publishing House; 998. مجله پژوهشی حکیم