Molecular Characterization of Mycobacterium Strains Isolated from Children with BCG Induced Lymphadenitis

Transcript

1 Research on Medicine The Quarterly journal of School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences Original Article Vol.39; No.1; 2015 Molecular Characterization of Mycobacterium Strains Isolated from Children with BCG Induced Lymphadenitis Fatemeh Shahi 1, Fatemeh Fallah 1, Hossein Goudarzi 1, Maryam Baniasad 2, Bahman Pourabbas 3, Alireza Mohammadzade 4, Farahnoosh Doustdar 1, * Abstract 1. Department of Microbiology,School of medicine, Shahid Beheshti University of Medical sciences, Tehran, Iran. 2. School of Pharmacy, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran. 3. Professor Alborzi Clinical Microbiology Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran 4. Department of Microbiology,School of medicine, Gonabad University of Medical sciences, Gonabad, Iran (Received: 2015/4/29 Accept: 2016/9/30) Backgroundm: In Iran vaccination with Bacillus Calmette-Guérin (BCG) is performed on all newborns within the first days of life for prevention of tuberculosis. It is a live attenuated vaccine and produced from genetically different vaccine strains of Mycobacterium bovis. This vaccine is safe but local adverse reactions such as administration site abscess and lymphadenitis occur in some healthy children vaccinated with this vaccine as the most common side effect of BCG vaccination. Disseminated BCG infections are very rare in immunocompetent children but lymphadenitis is very common in Iran and other countries. It is indicated that the vaccine strain and it s genetically variations are correlated with these side effects. Therefore, in this study we aimed to analyze the genetic characterizations of vaccine strains used in Iran. Materials and Methods: Thirty infants showing lymphadenitis induced by BCG vaccination were chosen for this study. After aspiration from the lesions, they were subjected to acid fast staining and culture on Lowenstein Jensen medium. Subsequently, DNA was extracted from samples using Phenol chloroform method. The genus of the isolates was characterized by primer for 16sRNA gene. Then using RD1, RD14 and DU1 primers and in the next step RD9, RD4Deleted, RD4Present and RD1Deleted primers the species and strains of the isolates were characterized. Results: Performing 16sRNA PCR, all 30 samples of acid fast bacilli were confirmed as Mycobacterium genus. Then using RD1, RD14, DU1, RD9, RD4 Deleted, RD4 Present and RD1 Deleted primers all isolates were detected as Mycobacterium bovis BCG strain Pasteur. Conclusion: In this study all of the strains isolated from the patients were detected as Mycobacterium bovis BCG strain Pasteur. Therefore, the other possible factors causing BCG complications including BCG overdose, faulty intradermal technique, and disturbance of cellular immunity should be considered as the other risk factors of causing lesions. Keywords: Mycobacterium bovis, BCG vaccine, Lymphadenitis, Tuberculosis, Infants. Corresponding author: Farahnoosh Doustdar, Department of Microbiology,School of medicine, Shahid Beheshti University of Medical sciences, Tehran, Iran. f_doustdar@yahoo.com Research in Medicine 2015; Vol.39; No.1; 30-35

2 ی هش ژپو مقاهل 35 ات 30 حات صف شماره دور 39 لنفاوی ترشحات از شده جدا مایکوباکتریومهای سویه مولکولی بررسی BCG واکسن با واکسیناسیون از ناشی لنفادنیت به مبتال کودکان دوستدار ۱ * فرحنوش 4 زاده محمد علیرضا 3 پورعباس بهمن ۲ اسد بنی مریم ۱ گودرزی حسین ۱ فالح فاطمه ۱ شاهی فاطمه چكيده ایران. تهران بهشتی شهید پزشکی علوم دانشگاه پزشکی دانشکده میکروبیولوژی ۱ گروه ایران. شیراز شیراز پزشکی علوم دانشگاه داروسازی دانشکده ۲ ایران. شیراز شیراز پزشکی علوم دانشگاه البرزی استاد بالینی شناسی میکروب تحقیقات مرکز 3 ایران. گناباد گناباد پزشکی علوم دانشگاه پزشکی دانشکده میکروبیولوژی گروه /7/8 مقاله: پذیرش تاریخ 1394/2/9 مقاله: دریافت تاریخ واکسن) ميشود. انجام تولد بدو در سل بيماري از پيشگيري براي نوزادان در ژ( ث گرین)ب و کلمت باسیل با واکسيناسيون ایران در هدف: و سابقه دنبال به اما است ایمن واکسن این میشود. تهیه بوویس مایکوباکتریوم مختلف ژنتیکی سویههای از که است شده ضعیف زنده واکسن یک ژ( ث ب میشود. مشاهده سالم کودکان از بعضی در واکسن عوارض شایعترین عنوان به لنفادنیت و تزریق محل در آبسه مانند موضعی واکنشهای واکسیناسیون در زيادي نسبت به شيوع با کشورها سایر و ايران در لنفادنيت ولی میشود دیده ندرت به سالم ایمنی سیستم با کودکان در سیستمیک و شدید عوارض است ارتباط در آن ژنتيکي تغيير و واکسن سويه نوع با عوارض اين ميزان که داده نشان تحقيقات ازآنجاکه ميشود. ديده نيز سالم ايمني سيستم با کودکان شدند. بررسی باکتری سویه و گونه لحاظ از لنفادنيت به مبتال کودکان از شده جدا مايکوباکتريوم سويههاي تحقيق اين در مراحل ضايعات از ترشحات آسپیراسیون از پس شدند. انتخاب تحقیق این برای ژ( ث )ب واکسن از ناشی لنفادنیت باعالئم نوزاد 30 بررسی: روش زا استفاده وبا انجام کلروفرم فنل روش به ها نمونه از DNA استخراج سپس شد. انجام جانسون اشتاین لوون محیط روی کشت و اسیدفست رنگآمیزی پرایمرهای از بعد مرحله در و RD1 و DU1,RD14 پرایمرهای از ها باکتری سویه و گونه تعیین برای شد. مشخص باکتری جنس 16sRNA ژن PCR شد. استفاده RD1Deleted و RD4Present RD4Deleted RD9 16sRNA ژن PCR روش از استفاده با بودند شده جدا BCG واکسن از ناشی لنفادنیت به مبتال کودکان از که اسیدفست باسیل نمونه 30 تمامی یافتهها: RD1Deleted و RD4Present RD1 Deleted,RD9,RD14,DU1,RD4 ژنهای PCR از استفاده با شدند.سپس شناخته مایکوباکتریوم جنس عنوان به شدند. شناسایی پاستور سویه (BCG) بوویس مایکوباکتریوم عنوان به نمونه 30 تمامی بوویس مایکوباکتریوم عنوان به مطالعه این در کودکان لنفادنیت از شده جدا مایکوباکتریومهای نمونههای از درصد 100 اینکه به توجه با نتیجهگیری: بیشتر ژ( ث )ب واکسن با واکسیناسیون دنبال به کودکان در لنفادنیت ایجاد که کرد گیری نتیجه اینگونه شدند میتوان شناخته پاستور سویه ژ( ث )ب ا. واکسن به نسبت کودکان این ایمنی سیستم التهابی پاسخهای و تزریق روش مصرفی واکسن مقدار جمله از دیگر عوامل از ناشی نوزادان. لنفادنیت BCG واکسن بوویس مایکوباکتریوم سل بیماری کلیدی: واژگان مقدمه ویژه به جهانی عمومی بهداشت بزرگ مشکل یک عنوان به سل است. باقیمانده سوم جهان درکشورهای ومیرباالیی بامرگ که است مننگوانسفالیت درکودکان آن عوارض مهمترین اساسی فاکتورهای از یکی ژ ث ب واکسن با واکسیناسیون است.) 1 ( همراه شده ضعیف زنده واکسن یک ژ ث ب واکسن است.) 2 ( بیماری این کنترل در سازمان است.) 3 ( آمده دست به بوویس ازمایکوباکتریوم سویه ازیک که است درکشورهای را ژ ث ب واکسیناسیون یونیسف وسازمان جهانی بهداشت است.) 4 ( کرده توصیه عفونت درصد یک بیشتراز باشیوع توسعه درحال حال در کشورهای دیگر و ایران در واکسن این با نوزادان تمام واکسیناسیون ایران. تهران بهشتی شهید پزشکی علوم دانشگاه پزشکی دانشکده میکروبیولوژی گروه دوستدار فرحنوش مسئول: نویسنده f_doustdar@yahoo.com ایمیل: Research in Medicine 2015; Vol.39; No.1; 30-35

3 بررسی مولکولی سویه مایکوباکتریومهای جدا شده / 32 توسعه یک روش استاندارد است و تمامی نوزادان این واکسن را در روز اول یا دوم بدو تولد دریافت می کنند )5(. این واکسن به طور کلی ایمن در نظر گرفته می شود اما عوارض نادر ممکن است در حدود 1.9 درصد از موارد رخ دهد. این عوارض شامل لنفادنوپاتی ناحیه ای آبسه زیرجلدی استئومیلیت اگزمای واکسیناسیون اسکار هایپرتروفیک و تشکیل کلوئید است که اغلب خودمحدودشونده هستند و نیازی به درمان ندارند. از سوی دیگر بیماری منتشر ب ث ژ عمدتا در کودکان مبتالبه بیماری نقص ایمنی شدید (SCID) بیماری گرانولوماتوز مزمن (CGD) وبزرگساالن مبتال به ایدز دیده می شود.) 5 ( لنفادنیت حدود 98 درصد این عوارض رابه خوداختصاص داده است. دو نوع ازلنفادنیت وجوددارد لنفادنیت ساده و لنفادنیت غیرچرکی که معموالبعدازچندهفته خودبه خود بهبود می یابد.لنفادنیت مرتبط باواکسیناسیون بابزرگ شدن غددلنفاوی ناحیهای بدون هیچ دلیلی برای لنفادنوپاتی مشخص میشود. عدم وجودتب حساسیت به فشار ولمس و دیگرعالئم سیستمیک آن راازآدنیت چرکی متمایزمیکند. تمایزآن ازلنفادنیت سلی ممکن است سخت باشداما مواردسل جداشده ازغددلنفاوی زیربغل نادراست.) 1 ( درنوزادان اثرحفاظتی واکسن بین حدود 52 تا 100 درصد برای جلوگیری ازمننژیت سلی وسالرزنیو 2 درصد تا 80 درصدبرای جلوگیری ازسل ریوی تخمین زده شده است. دالیل بسیاری برای تغییراثرواکسن وجودداردازجمله کیفیت واکسن سویه واکسن ژنتیک میزبان تغذیه وقرارگرفتن واکسن درمجاورت نورماوراء بنفش.) 7 و 6( به دلیل اینکه ب ث ژ باید هر چند هفته کشت مجدد شود و شرایط کشت استاندارد شده نیستند زیرسویههای متفاوتی ازآن به وجود آمدهاند. روشهای کنترل ارائه شده ازسوی سازمان بهداشت جهانی برای تشخیص ب ث ژ واکسن شامل انجام رنگ آمیزی اسید فست که فقط وجود مایکوباکتریوم را اثبات می کند است. این روش نمی تواند زیرسویههای ب ث ژ را از همدیگر و از سایر اعضای کمپلکس مایکوباکتریوم متمایز کند. بنابراین استفاده از تکنیکهایی که از اسید نوکلئیک استفاده میکنند به عنوان یک روش جایگزین معرفی شده است. این تکنیکها باید ارزان اختصاصی سریع و قابل تکثیر باشند.) 8 ( روشهای مولکولی که برای شناسایی مایکوباکتریومها هستند به طور عمده بر اساسMultiplex PCR PCR یا VNTR-typing هستند.در پاساژهای مکرر BCG توسط کالمت و گرین ناحیه RD1 از DNA گونه بیماریزای مایکوباکتریوم بوویس حذف شد که باعث به وجود آمدن سویه تضعیف شده BCG شد. به دنبال ان ناحیه RD14 نیز از سویه Pasture1173p2 BCG حذف شد) 9 (. مضاعف شدگی DU1 فقط در سویه پاستور وجود دارد و می توان از این خصوصیات برای تشخیص آن استفاده کرد) 8 (. بنابراین هدف این مطالعه شناسایی مایکوباکتریومهای جدا شده از کودکان مبتال به لنفادنیت با روش PCR و RD14 RD1 و با استفاده از پرایمرهای نواحی DU1 Multiplex PCR است. مواد و روش کار با توجه به سختی و محدودیتهای موجود در زمینه تهیه نمونه برای انجام این تحقیق از نمونه ترشحات لنفاوي ۳۲ کودک مبتال به لنفادنیت ناشی از واکسن ب ث ژ که طی سال 1390 به مراکز بهداشتی درمانی شیراز مراجعه کرده بودند استفاده شد. پس از تشخیص لنفادنیت ناشی از واکسن ب ث ژ در این کودکان از سوی پزشک متخصص نمونهگیری به روش آسپیراسیون با سرنگ استریل از ترشحات لنفاوي انجام شد و نمونهها در کنار یخ برای کشت به آزمایشگاه انتقال داده شدند. نمونهگیری از این کودکان برای تشخیص و درمان بیماری انجام گرفته بود بنابراین برای تهیه نمونه این تحقیق تماس مستقیم با بیمار وجود نداشت. مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سویه H37Rv و مایکوباکتریوم بوویس )ب ث ژ( سویه پاستور 1173P2 به عنوان سویه استاندارد استفاده شدند. مراحل کشت و رنگآمیزی و استخراج DNA مراحل رنگ آمیزی ذیل نلسون روی الم از ترشحات انجام و نمونهها روی محیط لوون اشتاین- جانسون )7245A) AcumediaCode No. کشت داده شدند و به مدت چهار تا هشت هفته در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد انکوبه شدند.پس از مشاهده کلونی استخراج DNA با روش فنل کلروفرم انجام شد. به این ترتیب که ابتدا کلنیها در لوله فالکون حاوی بیدهای شیشهای سوسپانسیون شدند سپس لیزوزیم (25 mg; Roche, Germany) (RNase A(50 μg; Roche, Germany و Germany) 1.5 mg of proteinase K (Roche, به باکتریها اضافه شدند و نمونهها به مدت 16 ساعت در 45 درجه سانتیگراد نگهداری شدند. در مرحله بعد مخلوط فنل- کلروفرم وایزو آمیل الکل با نسبت حجم )25/24/1( و به مدت دو ساعت در دمای محیط نگهداری شدند. سپس محلول رویی جدا شدد و این بار مخلوط کلروفرم- ایزو آمیل الکل به حجم )24/1( به نمونه ها اضافه و نمونهها سانتریفیوژ شدند. نمونههای DNA با اضافه کردن سدیم استات 3 موالر و ایزوپروپانل رسوب داده شدند و سپس با اتانل 70 درصد شسته شده و پس از خشک شدن در بافر مناسب محلول شدند.) 10 ( PCR PCR در حجم ۲۵ انجام μl شد که شامل (Ampliqon) 10 از pmol Mastermix هر کدام از پرایمرهای Revers و Forward و ۱ μl از DNA الگومی شد. و :RD14 DU1 RD1 مایکوباکتریال 16srRNA نواحی PCR پرایمرهای مورد استفاده در جدول شماره یک آمده است. برنامه دمایی واکنشها یک چرخه ۹۴ C به مدت چهار دقیقه ۳۰ چرخه ۹۴ C به مدت ۳۰ ثانیه ۵۵ C برای DU1,RD14,RD1 و ۶۳ برای C 16srRNA به مدت ۳۰ ثانیه یک چرخه ۷۲ C به مدت 30 ثانیه وC72 به مدت پنج دقیقه اعمال شد و محصوالت PCR با استفاده از اگاروز 1/5 درصد بررسی شدند. نمونههایی که با پرایمرهای ذکر شده مورد تایید قرار نگرفتند با پرایمرهای جدول دو بررسی شدند. :RD1Deleted و RD9 RD4Deleted RD4Present نواحی PCR پرایمرهای مورد استفاده در جدول دو آمده است.برنامه دمایی واکنشها یک چرخه 94 C به مدت چهار 4 دقیقه 30 چرخه 94 Cبه مدت 30 ثانیه 59 C به مدت 30 ثانیه یک چرخه 72 C به مدت 30 ثانیه و 72 C به مدت پنج دقیقه اعمال شد و محصوالت PCR با استفاده از اگاروز 1.5 درصد بررسی شدند. شکل ۱. الگوی ساده تکاملی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس که وجود یا عدم وجود نواحی RD را در گونههای مختلف نشان می دهد.) 11 ( پس از انجام PCR برای ناحیه DU1 و RD1Deleted تعیین توالی این نواحی از سوی شرکت Macrogene کره جنوبی انجام شد و توالیها با نرم افزار Chromas آنالیز شد. نتایج: از مجموع ۳0 نمونه ۱0 نمونه مربوط به نوزادان دختر ) ۳3/3 درصد( و ۲۰ نمونه دور 39 شماره صف حات 30 ات 35

4 همکاران و دوستدار فرحنوش / 33 گونه و سویه حد در لنفادنیت های نمونه از شده جدا های مایکوباکتریوم تشخیص برای استفاده مورد پرایمرهای 1. شماره جدول Target and primer name Primer sequence (5 3) Product lengths (bp) Reference RD 1 ET1 ET2 ET3 RD14 RD14 L RD14 R DU1 DU1 F DU1 R Mycobacterial 16S rrna Genus Control F Genus Control R Target and primer name RD9 present RD9 Present F RD9 Present R RD1 deleted RD1 Deleted F RD1 Deleted R RD4 present RD4 Common F RD4 Deleted R AAGCGGTTGCCGCCGACCGACC CTGGCTATATTCCTGGGCCCGG GAGGCGATCTGGCGGTTTGGGG CAGGGTTGAAGGAATGCGTGTC CTGGTACACCTGGGGAATCTGG ACGGTCGGTGTCGTCTAAGT AGAACTGCAGGGGTGGTACA CAACGCGAAGAACCTTACCT TGCACACAGGCCACAAGGGA ۱۹۶ _ ۴۰۰ ۷۸ (8) (8) (10) پاستور سویه BCG عنوان به لنفادنیت های نمونه از شده جدا مایکوباکتریومهای تایید در استفاده مورد پرایمرهای 2. شماره جدول Primer sequence (5 3) TTTCGAGCCGTAAATTACTGTG GAGCATTCTCGCTCCGAAT GGATTTGACGTCGTGCTTCT TTCAACGGGTTACTGCGAAT AGAAGCGCAACACTCTTGGA CATGCGCCCTATTTGATCTC Product lengths (bp) ۵۱ ۲۲۶ ۵۵ Reference RD4 deleted RD4 Common F RD4 Deleted R AGAAGCGCAACACTCTTGGA TTGCTGAAAAATGGCTATTGA ۹۴ به مراجعه زمان در بیماران سن بودند. پسر) ۶6/6 درصد( نوزادان به مربوط سنیدو محدوده در بیماران تعداد بیشترین که بود ماه 24 تا دو بین پزشک نفر 5/10(.20 معیار: وانحراف 6/54 سنی: میانگین با ( بودند ماه هفت تا بودند. دیگر بالینی عالمت فاقد و لنفادنیت به مبتال فقط بیماران ) ۶6/6 درصد(از تنگی اسپلینومگالی هپاتومگالی سرفه تب مانند عالئمی دارای بیماران سایر به بیماران عالمت بودند.بیشترین ریوی آبسه و پوستی راش آسیت نفس ) ۹/۳۷۵ درصد( هپاتومگالی و ) ۹/۳۷۵ درصد( تب ) ۱۵/۶۲۵ درصد( سرفه ترتیب عالئم با ژیوزیس ث ب منتشر بیماری به کودکان از ) ۶/66 درصد( نفر دو بود. آنها فوت به که شدند مبتال پوستی راش و آسیت اسپلینومگالی هپاتومگالی این از مجموع در بودند. ایمنی سیستم نقص دارای کودک دو این شدکه منجر شد. جدا فست اسید باسیل نمونه ۳۰ بیماران لنفادنیت ترشحات از که فستی اسید باسیل از ۳۰ نمونه ) ۱۰۰ درصد( مورد ۳۰ شناخته مایکوباکتریوم جنس عنوان به 16srRNA ژن از شدندبااستفاده جداسازی نمونهها شدند.تمامی بررسی یک شماره جدول پرایمرهای با نمونهها شدند.این و ۱۳ ( ۸ شماره )نمونههای نمونه) ۶/۶۶ درصد( دو بودند. RD14 ناحیه فاقد فاقد ۱۳ ۲۸ و ۳۳ ( شماره )نمونههای ) ۱۰ درصد( نمونه ۳ RD1 ناحیه فاقد عنوان به پرایمرها این با نمونه ۲۵ کلی طور به بنابراین بودند. DU1 ناحیه پرایمرهای از استفاده با مانده باقی نمونه پنج شدند. تایید پاستور سویه BCG و RD9 پرایمر از بااستفاده بررسی در نمونهها این شدند. ۲ بررسی جدول و RD4Deleted پرایمرهای از استفاده با و ندادند نشان باندی RD4Present عنوان به و دادند تشکیل را 226bp و 94bp باندهای ترتیب به RD1Deleted و RD1 ناحیه توالی تعیین نتایج همچنین شدند. تایید پاستور سویه BCG بوویس مایکوباکتریوم با NCBI در بالست از پس ها نمونه از شده جدا DU1 داشت. مطابقت 1173p2 پاستور سویه 35 ات 30 حات صف شماره دور 39

5 34 / شده جدا مایکوباکتریومهای سویه مولکولی بررسی بحث زا سویهای از که هستند زندهای واکسنهای BCG واکسنهای گرین و کالمت سوی از بار نخستین که شدهاند گرفته بوویس مایکوباکتریوم سال در بار نخستین واکسن این شدند. فعال غیر فرانسه پاستور انیستیتو در عنوان با BCG واکسن جانبی عوارض شد.) 5 ( استفاده انسان برای ۱۹۲۱ ندرت به منتشر است.عوارض منتشر و موضعی عوارض شامل BCG بیماری نقایص با کودکان در بیشتر و میشود دیده سالم ایمنی سیستم با کودکان در ایمنی سیستم با کودکان در موضعی عوارض ولی میشود دیده ایمنی موضعی عوارض فراوانترین میشود. دیده باالیی نسبتا درصد با نیز سالم از ناشی لنفادنیت شیوع است.) 12 ( موضعی آبسههای و لنفادنیت شامل استفاده مورد نژاد واکسن ژنتیکی تغییر مانند فاکتورهای به BCG واکسن زنده باسیل نسبت واکسن زیرسویههای ویروالنس ماندن باقی واکسن در اشعه برابر در واکسن گرفتن قرار واکسن نهایی محصول در مرده به افزایش با نوزادی دوره در واکسن )تزریق واکسیناسیون سن واکسن دوز واکسن به فرد ایمونولوژیک پاسخ است(و مرتبط لنفادنیت با ابتال احتمال پوستی داخل صورت به را واکسن که افرادی مهارت حتی دارد. بستگی شود. محسوب مهم خطر فاکتور یک عنوان به میتواند نیز کنند می تزریق نشان که نیست موجود مدرکی WHO گزارشهای اساس بر 13( ) 14 و ولی دهد می نشان را مختلفی آثار واکسن تهیه مختلف روشهای دهد واکسن تهیه روشهای با ارتباط در واکسن از ناشی جانبی واکنشهای بروز از استفاده از بعد عوارض افزایش تحقیقها از بعضی در همچنین است. بوده از بعد اتریش در است.) 15 ( گرفته قرار توجه مورد جدید نژاد حاوی واکسن از لنفادنیت بخصوص واکسن از ناشی عوارض افزایش دنبال به ۱۹۹۰ سال در شد.) 4 ( متوقف پاستور سویه واکسن از استفاده درصد ۷/۵ به ۰/۳ درصد سویه به Japanese سویه از واکسن سویه تغییر از بعد ۱۹۹۰ سال در مالزی شد.) 16 ( مشاهده نوزادان در BCG لنفادنیت اپیدمی یک Pasteur دارد. سل از پیشگیری در متفاوتی کارایی دارای BCG با واکسیناسیون سویههای بین تفاوت از ناشی تفاوتها این از بعضی که میرسد نظر به مکزیک در نوزادان موضوع این بررسی برای درواکسنهاست. موجود BCG-Brazil[BBCG], BCG-Denmark مختلف نژاد سه از یکی با از بعد سال یک شدند. واکسینه [DBCG], or BCG-Japan [JBCG] به پاسخ لحاظ از نوزادان این محیطی خون منوسیتهای واکسیناسیون و BBCG با که کودکانی شد. بررسی توبرکلوزیس مایکوباکتریوم پروتئینهای ایمنی پاسخ با ارتباط در باالتری سایتوکاینی پاسخ بودند شده واکسینه DBCG سایتوکاینی پاسخ JBCG با واکسینه نوزادان که حالی در دادند نشان adaptive BCG مختلف نژادهای بنابراین کرد. القا را التهابی پیش پاسخهای با با مرتبط و واکسن کارایی روی که کنند القا را متفاوتی ایمنی مسیرهای میتوانند استفاده مورد BCG زیرسویههای همه باشد.) 17 ( موثر آن جانبی عوارض میزان ژنی شده حذف نواحی در اما گرفتهاند منشا مشترک منبع یک از بررسیهای متفاوتند. یکدیگر با حفاظتی آثار و زایی ایمنی ژن آنتی بیان شامل متفاوتی ژنتیکی تفاوتهای که داد نشان BCG واکسنهای ژنومیک واکسن نژادهای بین ژنی حذف و تکرار نوکلئوتیدی تک مورفیسمهای پلی دارد.) 18 ( وجود ناشی لنفادنیت و انجام نوزادی دوران در BCG واکسیناسیون انجام ایران در واکسن از نژادی میشود.) 1 ( دیده زیادی فراوانی با ایران در واکسن از BCG Pasteur بوویس مایکوباکتریوم سویه میشود استفاده ایران در که بررسی برای همکاران و فالح توسط ایران در که است.درتحقیقی 1173P2 در ایران در استفاده پاستورمورد سویه BCG واکسن ژنی مورفیسم پلی سویهها تمامی که شد مشخص شد انجام تزریق از قبل و تولید مرحله VNTR- پروفایل و بودند RD14 و RD1 ناحیه فاقد و DU1 ناحیه دارای واکسن سویه در و بود 1173p2 پاستور سویه BCG با مطابق آن Typing نشد.) 9 ( مشاهده ژنتیکی تغییر روش با مایکوباکتریوم نمونه ۳۰ تعداد بیمار ۳۲ مجموع از حاضر تحقیق در اب نمونهها این شدند.سپس جدا لنفادنیت نمونههای از کشت و رنگآمیزی تایید برای PCR تکنیک و RD1 RD14 and DU1 پرایمر سه از استفاده ) ۸۶/۶۶ درصد( مورد ۲۶ که شدند بررسی هستند پاستور سویه ژ ث ب اینکه سوی ایراناز در که تحقیقی شدند.در تایید پاستور سویه عنوان به آنها از ۱۵ از شد انجام لنفادنیت به مبتال کودک ۲۱ روی همکاران و زاده منجم BCG ) ۸۰ درصد( مورد ۱۲ نمونهها از شده جدا فست اسید باسیل مورد دارد.) 5 ( همخوانی تحقیق این نتایج با شدکه شناسایی نمونه ) ۱۶/۶۶ درصد( ۵ مورد در حاضر تحقیق در اینکه توجه با همچنین نتیجهگیری میتوان شد مشاهده DU1 و RD1 باندهای حضور عدم از پس یا تزریق تا تولید بین فاصله در تغییرات این است ممکن که کرد اینکه به توجه با نهایت باشد.در شده ایجاد سویهها این در واکسن تزریق کودکان لنفادنیت از شده جدا مایکوباکتریومهای نمونههای از ۱۰۰ درصد شناخته پاستور سویه BCG بوویس مایکوباکتریوم عنوان به مطالعه این در به کودکان در لنفادنیت ایجاد که کرد نتیجهگیری اینگونه میتوان شدند جمله از دیگر عوامل از ناشی بیشتر BCG واکسن با واکسیناسیون دنبال این ایمنی سیستم التهابی پاسخهای و تزریق روش مصرفی واکسن مقدار سویه ژنتیکی تغییر با را آن توان می کمتر و است واکسن به نسبت کودکان دانست. مرتبط واکسن در موجود باکتری منابع 1. Behjati M, Ayatollahi J. Post BCG lymphadenitis in vaccinated infants in Yazd, Iran. Iranian Journal of Pediatrics. 2008;18(4): Hematyar M, Chohdari A. Prevalence of BCG adenitis in infants vaccinated at birth. J Qazvin Univ. 2006;9: Zeid AFA, Dahabreh MM. Bacille Calmette-Guerin Lymphadenitis: A Single Center Experience. JOURNAL OF THE ROYAL MEDICAL SERVICES. 2010;17(4): Word I. Surgical Management of BCG Vaccine-Induced Regional Lymph Nodes Adverse Effects. Annals of Pediatric Surgery. 2009;5(3): Monajemzadeh M, Shahsiah R, Zarei A, Alamooti AA, Mahjoub F, Mamishi S, et al. Frequency of bacille calmette-guerin (bcg) and mycobacterium tuberculosis in tissue biopsy specimens of children vaccinated with bcg. American journal of clinical pathology. 2010;133(1): Jeena PM, Chhagan MK, Topley J, Coovadia HM. Safety of the intradermal Copenhagen 1331 BCG vaccine in neonates in Durban, South Africa. Bulletin of the World Health Organization. 2001;79(4): Wu B, Huang C, Garcia L, de Leon AP, Osornio JS, Bobadilla-del- Valle M, et al. Unique gene expression profiles in infants vaccinated with different strains of Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guerin. Infection and immunity. 2007;75(7): Markey K, Ho MM, Choudhury B, Seki M, Ju L, Castello-Branco LR, et al. Report of an international collaborative study to evaluate the suitability of multiplex PCR as an identity assay for different sub-strains of BCG vaccine. Vaccine. 2010;28(43): FallahF, Goudarzi H, Doustdar F, Zahraei S, Mohammadzadeh A. Gene polymorphism of BCG vaccine strain using in Iran. The Horizon of Medical Sciences. 2013;19(1): ات 30 حات صف شماره دور 39

6 / 35 فرحنوش دوستدار و همکاران 10. Warren R, de Kock M, Engelke E, et al. Safe Mycobacterium tuberculosis DNA Extraction Method That Does Not Compromise Integrity. Journal of Clinical Microbiology. 2006;44(1): Pinsky BA, Banaei N. Multiplex real-time PCR assay for rapid identification of Mycobacterium tuberculosis complex members to the species level. Journal of clinical microbiology. 2008;46(7): Bolger T, O Connell M, Menon A, Butler K. Complications associated with the bacille Calmette-Guérin vaccination in Ireland. Archives of disease in childhood. 2006;91(7): Brosch R, Gordon SV, Garnier T, Eiglmeier K, Frigui W, Valenti P, et al. Genome plasticityof BCG and impact on vaccine efficacy. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2007;104(13): Shann F. Editorial Commentary: Different Strains of Bacillus Calmette- Guérin Vaccine Have Very Different Effects on Tuberculosis and on Unrelated Infections.Clin Infect Dis. 2015;61(6): Hengster P, Schnapka J, Fille M, Menardi G. Occurrence of suppurative lymphadenitis after a change of BCG vaccine. Archives of disease in childhood. 1992;67(7): Hooi LN1, Athiyah SO.An outbreak of BCG related lymphadenitis in Malaysian infants.med J Malaysia. 1994;49(4): Ritz N1, Dutta B, Donath S, et al.the influence of bacille Calmette- Guerin vaccine strain on the immune response against tuberculosis: a randomized trial.am J Respir Crit Care Med. 2012;185(2): Akhtar P, Singh S, Bifani P, Kaur S, Srivastava BS, Srivastava R. Variable-number tandem repeat 3690 polymorphism in Indian clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis and itsinfluence on transcription. Journal of medical microbiology. 2009;58(6): دور 39 شماره صف حات 30 ات 35