Iranian Journal of Medical Microbiology

Transcript

1 Original Article Iranian Journal of Medical Microbiology Iran J Med Microbiol: Volume 11, Number 2 (May - June) Journal homepage: Farname Inc. Isolation of lytic phages against pathogenic E.coli isolated from diabtic ulcers Leyla Zare 1, Mohammad Shenagari 1,2, Mohammadali Khan Mirzaei 3, Ali Mojtahedi 1,2 1. Department of Microbiology, Faculty of Medicine, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran 2. Cellular and Molecular Research Center, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran 3. Department of Microbiology and Immunology, McGill University, Montréal, Quebec, Canada Article Information Article history: Received: 2017/05/08 Accepted: 2017/05/30 Available online: 2017/06/07 Article Subject: Medical Virology IJMM 2017; 11(2): Corresponding author: Dr. Mohammad Shenagari Department of Microbiology, Faculty of Medicine, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran Tel: Shenagari@gmail.com Abstract Background and Aims: In the present study, we have tried to isolate an effective lytic bacteriophages on drug-resistant Escherichia coli isolated from diabetic ulcer wounds. Materials and Methods: Two E.coli strains were isolated by using standard methods from patients in Razi Hospital of Rasht. Waste water of the same hospital was used as a source for isolation of lytic bacteriophages. Agar layer method was used to isolate and plaque finding. Determination of host range of isolated phages was performed using five standard reference collection of E. coli. Finally, Transmission electron microscopy was used for morphological analysis of the isolated bacteriophages. Morphotype and family of isolated phages were determined based on Bradley recommendation and final version of International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) report, respectively. Results: The results showed that the isolated bacteria were highly resistant to the antibiotics tested. Based on morphological characteristics, the separated virus belongs to siphoviridae family. Based on Bradley classification, isolated phage against strains of E.coli belongs to the morphotype B1. Conclusions: The isolated bacteriophage from waste water efficiently lysed the multiresistant strains of E. coli. Therefore, bacteriophages could potentially be used as an alternative for antibiotics for treating infections by multiresistant E. coli. KeyWords: Bacteriophage, Antibiotic Resistance, Escherichia coli, Diabetes, Wound infection Copyright 2017 Iranian Journal of Medical Microbiology. All rights reserved. How to cite this article: Zare L, Shenagari M, Khan Mirzaei MA, Mojtahedi A. Isolation of lytic phages against pathogenic E.coli isolated from diabtic ulcers. Iran J Med Microbiol. 2017; 11 (2): Īrān. Majallah-i mīkrub/shināsī-i pizishkī-i مجله میکرب شناسی پزشکی ایران 34

2 Farname Inc. مجله میکربشناسی پزشکی ایران سال 11 شماره 2 خرداد تیر 1396 Journal homepage: مقاله پژهشی جداسی باکتریفاژ الیتیک مؤثر بر سیههای زخم بیماران دیابتی بیماریزای اشریشیا کلی جداشده عفنت اطالعات مقاله تاریخچه مقاله یافت: 1396/02/18 پذیرش: 1396/03/09 انتشار مضع: یرس شناسی پزشکی لیال زارع 1 محمد شناگری 1 2 محمدعلی خان میرزایی 3 علی مجتهدی 1 2 گره میکربیلژی دانشکده پزشکی دانشگاه علم پزشکی گیالن رشت ایران مرکز تحقیقات سللی ملکلی دانشگاه علم پزشکی گیالن رشت ایران گره میکربیلژی ایمنلژی دانشگاه مک گیل منترال کبک کانادا آنالین: 1396/03/17 IJMM 1396; 11(2): نیسنده مسئل: دکتر محمد شناگری گره میکربیلژی پزشکی دانشکده پزشکی دانشگاه علم پزشکی گیالن رشت ایران تلفن: چکیده زمینه اهداف: این مطالعه باکتریفاژ لیتیک مؤثر بیماران مبتال دیابت نع د جداسی گردید. ماد رش کار: اشریشیا کلی جداسی شده با رشه یا بر اشریشیا کلی مقام مان جداشده نمنه زخم د نمنه مختلف زخم بیماران بستری بیمارستان ری رشت گرفته شد سیههای استاندارد شناسایی شدند. نمنهبرداری فاضالب همان بیمارستان برای جداسی فاژ لیتیک انجام شد. رش آگار دالیه برای جداسی مشاهده پالک استفاده گردید. برای تعیین اکنش کراسینگ فاژ ری سیههای باکتری جداسی شده 5 سیه استاندارد اشریشیا کلی انجام گردید. نهایت برای تأیید بررسی مرفلژیکی میکرسکپ الکترنی گذاره استفاده شد. مرفتیپ خاناده فاژ جداشده بر اساس طبقهبندی Bradley نسخه نهایی گزارش (ICTV) International Committee on Taxonomy of Viruses ترتیب مشخص گردید. یافتهها: نتایج نشان داد که باکتریهای جداشده مقامت باالیی برابر آنتیبیتیکهای استفادهشده دارند. بر مبنای خصصیت مرفلژیک یرس جداشده متعلق خاناده siphoviridae بد. بر مبنای طبقهبندی Bradley فاژ جداشده برعلیه سیههای اشریشیا کلی متعلق مرفتایپ B1 بد. نتیجهگیری: فاژ جداشده این مطالعه میتاند طر مؤثر سیههای اشریشیا کلی بیماریزا جداشده زخم بیماران دیابتی را لیز کنند. نتیجه شاید بتان عنان یک عامل مانی مؤثر برابر عفنتهای مقام مان مربط این باکتری داخل بدن مطالعات آینده استفاده شد. کلمات کلیدی: باکتریفاژ مقامت آنتیبیتیکی اشریشیاکلی دیابت عفنت زخم پست الکترنیک: کپیرایت : حق چاپ نشر استفاده علمی این مقاله برای مجله میکربشناسی پزشکی ایران محفظ است. Shenagari@gmail.com مقدمه اشریشیا کلی یک باسیل گرم منفی بیهی اختیاری تخمیرکننده اکسید منفی اغلب بین خاناده انترباکتریاسه است )1(. بیمارستانها اشریشیا کلی شایعترین عامل سپتی سمی باکتریهای اقع بده منفی گرم شایعترین ارگانیسمی است که کشت خن دست میآید )2(. دلیل مصرف بیشحد خدسرانه آنتیبیتیکها مقامته یا داریی چندگانه این ارگانیسمها افزایشیافته مشکل اصلی مان عفنتهای ناشی اشریشیا کلی مقام بدن این باکتری نسبت زیادی تعداد آنتیبیتیکهای )3(. میباشد رایج اشریشیاکلی میتاند عفنتهای زخم یژه ناحیه شکم جدا گردد. پریتنیت خصص پس پارگی آپاندیس معده اندکاردیت سمی سپتی آپاندیسیت نیز عفنت مشاهدهشده پس است. زایمان باکتریمی باکتریمی سپتی سمی معمأل ثانیه بده مبتالیان سرطان یا بیماریهای بدخیم دنبال عفنتهای صفرای یا ردهای ااری تناسلی یا پس دستکاری عفنتهای میشد. ایجاد شایع اشریشیاکلی 35

3 زارع همکاران جدا سی باکتریفاژ الیتیک مثر بر اشریشیا کلی مرتبط با بافته یا (Skin and Soft Tissue Infection) سطحی میتان عفنت پست بافت نرم عفنت زخم جراحیهای مستعد آلدگی Surgery( )Contaminated گانگرن فرنیر gangrene( )Fournier بیماران مرد دیابتی عفنت استخان مزمن بیماران دیابتی اشاره کرد )4 5(. زخم پای دیابتی یکی عارض شایع بیماران دیابتی میباشد. 2 1 نع هماکنن گزارشها حاکی ابتال 4-5 میلین ایرانی دیابت میباشند متأسفانه صد افراد مبتالصرت فزایندهای ر افزایش است )6(. احتمال ابتال عفنتهای بافت نرم عفنت استخان بیماران مبتال دیابت 10 برابر افراد دیگر میباشد. عفنت زخم پای دیابتی سیله اشریشیا کلی مقام چند دار مکررا مطالعات مختلف گزارششده است )7(. سالهای اخیر افزایش نرخ حضر ژنهای دخیل اعطای مقامت قبیل bla CTX-M سیههای bla TEM بیماریزای اشریشیا کلی متعددی ایران گزارششده است )8(. بردن مطالعات فاژ مانی استفاده فاژها با اهداف مانی برای بین عفنتهای است. باکتریفاژها باکتریایی عامل عنان مانی برابر برخی باکتریها قبل کشف آنتیبیتیکها استفاده آنتیبیتیکها میشدند. ظهر همچنین باکتریهای همزمان افزایش پاتژن بیماران مقام دارای نقص سیستم ایمنی پزشکی من را مان عفنتهای میکربی با چالش جدی ماجه کرده است. این نگرانی که بشر حال رد دباره دران قبل آنتیبیتیکهاست بسیار حقیقت نزدیک شده است تسعه رشه یا یکی گردیده الیتهای تا است. مهم قبل پزشکی کشف جایگزین علیه عفنتها من بیتکنلژی استفاده گسترده مبدل آنتیبیتیکها پیشگیری یا مان عفنتهای باکتریایی تسط باکتریفاژها با الیه بالینی مطالعات اگرچه بد. شده محرز باکتریفاژها ایاالتمتحده آمریکا ارپای غربی قیا پیگیری نشدند اتحاد جماهیر شری سابق ارپای شرقی استفاده فاژها ادامه یافت. نتایج حاصل این مطالعات طر گستردهای مجالت لهستان( غیر منتشر انگلیسی شدند علمی غرب نبدند )9(. جمله طر ( هب بنابراین عمده راحتی رسیه دسترس گرجستان جامعه طبقهبندی یرسهای باکتریایی بر اساس چندین فاکتر ساختارهای مرد میزبان محری ترجیح دم مانند مرفلژی پشش یا یرس صرت نع میگیرد ژنم یژگیهای فاکترهای باشد. گرهه یا اکثر نکلئیک طبقهبندی حای فاژها اسید هستند. مرفلژی میتاند ژنم فاژ DNA کلیدیترین RNA یا DNA کچکی فاژها با د DNA RNA رشتهای هستند حالیکه تک رشته RNA د رشته تک رشته جد دارند. بر اساس مرفلژی گرهه یا کمی فاژها جد دارند: فاژهای رشتهای فاژهای بیستجهی بدن دم فاژهای دمدار حتی چندین فاژ با پشش حای لیپید. این گرهها طبیعت باکتریفاژها میکند. را حال تبدیل حاضر بزرگترین 5500 میکرسکپ الکترنی بررسیشدهاند )11(. گره یرس با تجه آمار مبتالیان دیابت ایران یرسی باکتریایی یکس با پیدایش سیههای مقام چند دار ما را بر آن داشت تا این مطالعه همگام با مطالعات جهانی جداسی مؤثر بر اشریشیاکلی جداشده مان مقام باکتریفاژ بیماران مبتال دیابت ایران را مدنظر قرار دهیم. ماد رشها پای با نمنه این مطالعه تجربی سال 1395 انجام رسیده است. جمعآری جداسی باکتریها برای دیابتی جداسی بیمار د لیتیک زخم نمنهه یا اشریشیا کلی اگزدای زخم مبتال دیابت نع د گردید. استفاده نمنهگیری طل انجام طرح بیمارستان ری رشت انجام گرفت. نمنهگیری زخم تسط سآب استریل صرت گرفت که کشت تهیهشده مستقیم انکباتر محیط جه 37 غنی کشت سلسیس انجام شد. مدت پلیت 24 های ساعت گرماگذاری شدند. برای جداسی باکتری کلنیهای رشد یافته رنگآمیزی گرم تسته یا شده رش تست حساسیت آنتیبیتیکی بیشیمیایی استفاده گردید. تست آنتی بیگرام طبق دسترالعمل استاندارد انتشار دیسک برای باکتریهای مشخص CLSI جداسی با استفاده مقامت کردن داریی انجام گرفت )12(. حساسیت آنتیبیتیکی سیهها نسبت آنتیبیتیکهای آمکسی سیلین )AMX ( )AZM( داکسی سفالکسین سیکلین )CN( نالیدیکسیک آزیترمایسین )NA( اسید )D( تتراسایکلین )TE( )CP( جنتامایسین )GM( سیپرفلکساسین کانامایسین )K( ارزیابی شد. این.)10( 36

4 مجله میکرب شناسی پزشکی ایران سال 11 شماره 2 خرداد تیر 1396 مطالعه باکتریهای مقام حداقل چهار دار عنان باکتری گرم منفی مقام چند دار Gram-( Multi-Drug Resistant )Negative Bacterium جداسی باکتریفاژ ها جداسی برای نظر گرفته شد. فاضالب فاژ بیمارستانی نمنهبرداری شد. برای غنیسی تعداد فاژهای احتمالی مجد فاضالب 50 محیط کشت مایع LB 100 نمنه فاضالب با ml ml 37 باکتریهای مخلط استریل ارلن یک مردنظر میزبان داخل آن تلقیح شد. سپس ارلن گرمخانه شیکر دار دمای جه گرماگذاری چرخش برای شد. در 100 جداسی فاژ 24 مدت دقیقه 50 مخلط ml ساعت داخل ارلن مدت 15 دقیقه سانتریفیژ گردید. پساین مدت مایع میلیلیتری 10 سرنگ مستقیما را ریی بعد ریخته سسپانسین حاصل را با فیلتر 0/45 نانمتر داخل یک لله فالکن ته فیلتر گردید. ری این سسپانسین گردید. هرکدام رقته یا میکرلیتر برداشته با Serial dilution ml شماره مقدار 100 2/5 محیط سافت آگار ذبشده )حدد 50 جه( 200 میکرلیتر باکتری الیه بن ماری مخلط میکنیم ری پلیت نرمال اگار ریخته با چرخاندن پخش شد. سپس 37 جه مدت 24 ساعت انک گردید. خالصسی باکتریفاژ اغلب مارد با تجه استفاده مخزن فاضالب برای جداسی امکان حضر بیش یک نع فاژ پلیت جداسی جد دارد که این فاژها پالکهایی با اشکال اندهه یا مختلف ایجاد میکنند. پالک لیتیک با سر سمپلر استریل برداشتهشده 500 میکرلیتر محیط LB داخل میکرتیب 1/5 میلیلیتری ریخته شد. این میکرتیب دمای اتاق مدت 15 دقیقه باقی ماند سپس رقت سریالی تهیه شد. خاطر اطمینان حضر یک نع فاژ با یا چند نع فاژ جداگانه طر پالکها این خالصسی گردیدند. هر میکرتیب 100 میکرلیتر برداشته 200 مخلط ساعت میکرلیتر گردید باکتری الیه پلیت 2/5 ml آگار ریخته شد LB سافت محیط مدت آگار 24 جه 37 ایجادشده مشاهده گردند. سلسیس انک گردید تا پالکه یا ذخیرهسی منظر ذخیرهسی فاژهای جداسی شده استک فاژ که براث بد 500 میکرلیتر برداشته شد با 500 میکرلیتر گلیسرل استریل میکرتیب مخلط گردید تکان داده شد تا ایجاد د ف ممانعت گردد. ذخیرهسی فاژ ها 70- جه انجام شد. تعیین تیتر منظر تعیین تیتر فاژ های خاص سی شده (purified رش محاس Phages) PFU/mL استفاده شد. برای این منظر باکتری مردنظر صرت چمنی کشت شد. فاژ خالصسی شده تعداد 10 رقت تا LB محیط براث تهیهشده هر پلیت اضافه گردید. پس انکباسین پلیت های هر رقت مدت یکشب 37 جه سلسیس پالکه یا هر رقت طر دقیق بررسی شد پالکها تا حد امکان شمارش گردید. آخرین رقت که آن تعداد پالک مشاهده شد. مبنای محاس احد ایجادکننده پالک نظر گرفته شد فرمل زیر محاس گردید. مشاهده ساختمان فاژ با میکرسکپ الکترنی منظر بررسی مرفلژیک تصایر میکرسکپ الکترنی گذاره فاژ تهیه شد. جهت مشاهده ساختمان فاژ رنگآمیزی منفی استفاده شد. ابتدا گرید های مسی سیله محلل فرم ار کلرفرم یا دی اتیلن کلراید پشش داده شد. سپس یک قطره نمنه ری آن قرار داده شد. بعد خشک شدن با کاغذ صافی اضافه نمنه گرفته شد. سپس یک قطره رنگ فسفتنگستیک اسید )0/01 صد 7/2-7/4 )ph اضافه گردید پس خشک شدن با میکرسکپ الکترنی TEM (Germany Leo 906E, Zeiss) مشاهده شد. 37

5 زارع همکاران جدا سی باکتریفاژ الیتیک مثر بر اشریشیا کلی )TEM( تعیین هیت فاژهای جداسی شده آخرین طبقهبندی یرسها کمیته گزارش انتشار یرایش )Virus Taxonomy: 2015 Release( بینالمللی برای مشخص کردن خاناده احتمالی یرس جداسی شده استفاده شد )13(. همچنین طبقهبندی رفرانس Bradley برای تعیین مرفتایپ یرسی استفاده گردید )14(. اثر تعیین طیف میزبانی فاژ جداسی شده برای انتخاب فاژ مناسب برای فاژ تراپی باید مشخص گردد که کدام فاژ محدده میزبانی گستردهتری دارد. برای این منظر فاژ اختصاصی استاندارد شامل جداسی سیههای شده شماره 5 علیه 1 سیه انسانی مرجع )RM74A( شماره 10 )FN33( شماره )RM33B( 53 شماره 72 )ANI( شماره 24 بررسی نیز )P68( شد )15(. کشت آگار دالیه استفاده شد. یافتهها مشاهده پالکه یا نمنهه یا فاضالب اکنش برای فاژ خالصسی شده گرفتهشده حای کراسینگ چندین فاژ رش علیه باکتریها بد که میان آنها فاژی که پالک شفافتری داشت عنان شد. ایجادشده فاژ نامگذاری برای اختصاصی این فاژ با عنان تسط فاژ جداسی سیه باکتری PhEIR1 شده خالصسی انجام شد. انتخاب پالکه یا علیه اشریشیا کلی ایزله شده بیماران دیابتی نع د شکل شماره 1 مشاهده میشد. شکل 1: پالکه یا PFU/mL ایجادشده تسط فاژ PhEIR1 نتایج تعیین تیتر فاژ جداسی شده محاس تعیین تیتر فاژهای نشان داد که تیتر یرس شده بر مبنای فرمل محاسشده دستآمده خالصسی 36.1 x 10 8 بد. با استفاده غنیسی مشاهده ذرات فاژی با میکرسکپ الکترنی گذاره شکل تعیین هیت فاژ تصیر 2 تهیهشده میکرسکپ الکترنی گذاره را نشان یرس اجد سر برمیآید تصیر فاژ میدهد. بیستجهی PhEIR1 همانطر منظم تسط که انده تقریبی 60 نانمتر میباشد. این فاژ اجد دم طیل غیر انقباضی میباشد راسته جداشده نمنهه یا این که این یژگی خصایص خاناده Siphoviridae Caudovirales برعلیه سیههای میباشد. بر مبنای طبقهبندی زخم متعلق مرفتایپ تقسیمبندی Bradley بیماریزای اشریشیا کلی جداشده قیدشده B1 است فاژ میباشند. همانطر که مرفتایپ شامل B1 باکتریفاژهای با سر بیستجهی منظم دم غیر انقباضی طیل میباشند. شکل 2: فاژ PhEIR1 مشاهدهشده با میکرسکپ الکترنی نتایج تعیین طیف میزبانی جدل گردیده است. طیف میزبانی فاژ نتایج 1 PhEIR1 PhEIR1 مشخص مجمع قا لیز 6 باکتری مجمع 7 باکتری استفادهشده بد. اثرگذاری این فاژ بر ری هر د ایزله باکتری جداشده بیماران با زخم پای دیابتی مشخص گردید. هفت نسبت که E.coli M2 سیه آنتیبیتیک بد مقام نسبت 6 فاژ حساس بد که ارتباط نداشتن مکانیسم مقامت آنتیبیتیک مقامت فاژها را نشان میدهد. جدل زیر نتایج کراسینگ فاژ ها با پنج سیههای استاندارد مقایسه شده است. 38

6 مجله میکرب شناسی پزشکی ایران سال 11 شماره 2 خرداد تیر 1396 جدل 1: اکنش تعیین طیف میزبانی فاژ PhEIR1 علیه E.coli های جداسی شده سیههای مرجع استاندارد E.coli M1 E.coli M2 E.coli (RM74A) E.coli (ANI) E.coli (FN33) E.coli (RM33B) E.coli (P68) PhEIR بحث عصر آنتیبیتیکها خالصه مقاله یک با "پنیسیلین عنان یک عامل شیمیمانی" تسط عنان با Chain همکارانش 1940 آغ شد. آن زمان آنتیبیتیکها جان میلینها انسان را نجات دادند که بیشتر هر داری دیگری تاریخ بشریت بده است همین دلیل تسط بسیاری افراد آنتیبیتیکها عنان داری جادیی اسم برده میشند )16(. بااینحال باکتریایی همچنین شبکه تلید دلیل ایمنی ظهر آنتیبیتیکها مقامت آنتیبیتیکهای بسیار جدید مقابل شکننده طرکلی عفنتهای است. شده کاهشیافته است فقط د آنتیبیتیک سال 1998 تا 2003 تسط FDA جدیدی عمل مکانیسم که است شده تائید داشتهاند. داشتن مکانیسم عمل جدید برای یک آنتیبیتیک یک مالحظه حیاتی نبرد علیه مقامت آنتیبیتیکی است )17(. قرن بیست باکتریها مقامت یکم اکثر نسبت آنتیبیتیکهای دسترس عنان مشکلی جدی مان عفنتهای باکتریایی شده مبدل مرگمیر است. است. ناشی فاژهای لیتیک بگشت باکتریهای این عصر پاتژن که نظر قبل عامل فعالیت آنتیبیتیکها نگرانیهای ضد جدی باکتریایی قابلتجهی دارند مشا آنتیبیتیکها هستند. بااینحال فاژهای مانی دارند. انسانها حداقل فاژها نظر حیانات مان مزایایی تئری عفنتهای آزمایشگاهی خیلی نسبت مقام کارآمدتر آنتیبیتیکها آنتیبیتیک مؤثرتر آنتیبیتیکها گزارششدهاند. عاله بر استفاده برای بین بردن باکتریها فاژها یژگی میزبانی معینی دارند که میتانند برای شناسایی تایپینگ عفنتهای باکتریایی مرد رهبرداری قرار گیرد. طر مثال شرکت میکرفاژ اخیرا تأییدیه برای فاژ عفنت که خن کشت تست را برای FDA تشخیص استافیلککس ارئس مقام متی سیلین استفاده میکند را یافت کرده است )18(. عاله بر مفید بدن عنان تشخیص محصالت این عممی که فاژتراپی برای مؤثر زمینه میتانند نی تشخیص سریع اهداف باکتریایی تعیین حساسیت آنها فاژهای اختصاصی را دارند آماده کنند )19(. فاژتراپی نتایج گزارشی 1987 سال عفنتهای باکتریایی چرک دار چاپ رسید که 550 بیمار را طی سالهای 1981 تا 1986 با مصرف خراکی فاژ بررسی کرده بد )20(. 92 عفنتهای که پژهش این بیماران صد شامل آنها استافیلککس ارئس باکتریهای گرم منفی نظیر گنهه یا کلبسیال اشریشیا پرتئس سدمناس مقام آنتیبیتیک نتیجه فاژتراپی بدند 1982 فاژتراپی عفنت آنتیبیتیک با مقایسه سالها همان گرفتند. مثبت تجربی E.coli O18:K1:H7 مشها که مشهایی )21(. شد بررسی دزهای کشنده باکتری را صرت داخل عضالنی یا داخل مغزی یافت کرده بدند یک دز داخل عضالنی فاژ بسیار مؤثرتر مکرر های دز تتراسایکلین سیلین آمپی یا کلرامفنیکل تری متپریم اضافه سلفامتکسل بد. اثر فاژ حداقل انده دزهای مکرر داخل عضالنی استرپتمایسین مؤثر بد. سال 2010 پژهشی برای بررسی حساسیت آنتیبیتیکی E.coli جداسی شده زخمه یا سیه 113 بررسیشده های پستی عفنی انجام شد )22(. اکثر زخمه یا جداشده دار چرک پستی بدند که 77 صد آنها تنهایی عامل عفنت بدند اما 23 با همراه بقیه صد استافیلککس اپیمیدیس گنهه یا باکتریهای استافیلککس ارئس پرتئس سدمناس آئرژینزا حضر داشتند. اکثر سیهها آنتیبیتیک آمیکاسین سیلین آمپی سیهها صد 7 فقط لی بدند حساس حساسیت نشان دادند. بیش 50 صد سیهها ایمی پنم صد سفالسپرین های نسل چهارم حساس بدند. سال 2013 مان مرکبی با استفاده فاژ الیتیک آنتیبیتیک صناعی لینزلید برای حذف عفنتهای (MRSA) Methicillin-resistant Staphylococcus aureus انجام یافت )23(. زخمها پای پشتی مشه یا پای دیابتی سری ایجاد شدند. یک فاژ پنج فاژ جداسی شده فاضالب که گستره میزبانی سیعتری داشت مدل مشی استفاده شد. اثر استفاده فاژ )مضعی( مشا اثر لینزلید )خراکی( بد اما مان مرکب با هر د عامل ضد میکربی اثر تری بد زخمها داشت. نتایج این بررسی این رش را عنان استراتژی مؤثر برای مان (MRSA) پای دیابتی تأیید کرد. عفنتهای پای دیابتی 39

7 زارع همکاران جدا سی باکتریفاژ الیتیک مثر بر اشریشیا کلی که صد آنها معمال تسط آنتیبیتیکهای لیز ( MRSA )ایجاد میشند متدال مقام هستند پاسخ مناسبی مانی نمیدهند. فاژ های جداسی شده این مطالعه نیز قا سیههای اشریشیا کلی جداشده یا تنهایی لذا بدند صرت مان مرکب با آنتیبیتیک امکان استفاده مطالعات آتی عفنتهای ناشی باکتری E.coli سطحی این باکتری را اختیار ما خاهند گذاشت. خصص عفنت زخم با تجه نرخ بسیار باالی افراد مبتال دیابت ایران که هماره تبعات عمدهای برای بیماران قبیل زخم پای دیابتی را همراه دارد این مطالعه صدد جداسی فاژهای لیتیک بمی ایران برای سیههای پاتژن مقام دار اشریشیا کلی ایزله شده زخم بیماران دیابتی بد. همانگنه که اشاره شد نمنه فاضالب بیمارستانی عنان مخزن برای جداسی تعیین هیت فاژ لیتیک استفاده گردید. با تجه امکان دسترسی آسان فاضالب بیمارستانی یک عنان مخزن غنی فاژ نتایج این مطالعه نیز امکان جداسی آسان فاژ منابع فاضالب بیمارستانی را متذکر ساخت. سیههای بالینی باکتری جداسی شده بیماران دارای زخم مقامت باال نسبت آنتیبیتیکهای دسترس معمل مرداستفاده را نشان دادند. فاژ جداسی شده فاضالب این مطالعه قا لیز سیههای یا تنهایی اشریشیا صرت کلی استفادهشده فاژی مخلط امکان مطالعه این استفاده آتی منظر کنترل مهار عفنتهای ناشی باکتری لذا بدند مطالعات E.coli خصص عفنت زخم سطحی این باکتری علیالخصص مرد زخم ایجادشده تسط سیههای مقام مان بیماران دیابتی را اختیار ما خاهد گذاشت. تقدیر تشکر نیسندگان بر خد فرض میدانند تمامی همکاران پارک علم فناری گیالن مرکز تحقیقات سللی ملکلی گره میکربیلژی دانشگاه علم پزشکی گیالن بابت کمکه یا علمی اجرایی انجام این تحقیق کمال تشکر قدانی را عملآرند. این مقاله برگرفته پایاننامه کارشناسی ارشد رشته میکربیلژی پزشکی دانشگاه علم پزشکی گیالن میباشد. تعارض منافع بین نیسندگان مجله میکربشناسی پزشکی ایران هیچگنه تعارض منافعی جد ندارد. References 1. Bruttin A, Brussow H. Human volunteers receiving Escherichia coli phage T4 orally: a safety test of phage therapy. Antimicrob Agents Chemother 2005;49(7): Dufour N, Debarbieux L, Fromentin M, Ricard JD. Treatment of highly virulent extraintestinal pathogenic Escherichia coli pneumonia with bacteriophages. Crit Care Med 2015;43(6): Abedon ST, Kuhl SJ, Blasdel BG, Kutter EM. Phage treatment of human infections. Bacteriophage 2011;1(2): Renvall S, Niinikoski J, Aho AJ. Wound infections in abdominal surgery. A prospective study on 696 operations. Acta Chir Scand 1980; 146(1): Petkovšek Ž, Elersic K, Gubina M, Zgur-Bertok D, Starcic Erjavec M. Virulence potential of Escherichia coli isolates from skin and soft tissue infections. J Clin Microbiol 2009;47(6): Aghili R, Malek M, Baradaran HR, Peyvandi AA, Ebrahim Valojerdi A, Khamseh ME. General Practitioners' Knowledge and Clinical Practice in Management of People with Type 2 Diabetes in Iran; The Impact of Continuous Medical Education Programs. Arch Iran Med 2015; 18(9): Boykoe EJ, Lipsky BA. In: Diabetes in America. Harris MI, editor. Washington DC: National Institutes of Health. Infection and diabetes mellitus; 1995 pp Haghighatpanah M, Mozaffari Nejad AS, Mojtahedi A, Amirmozafari N, Zeighami H. Detection of extendedspectrum β-lactamase (ESBL) and plasmid-borne blactx-m and blatem genes among clinical strains of Escherichia coli isolated from patients in the north of Iran. J Glob Antimicrob Resist 2016; 7: Sulakvelidze A. Bacteriophage therapy. Antimicrob Agents Chemother 2001; 45(3):

8 مجله میکرب شناسی پزشکی ایران سال 11 شماره 2 خرداد تیر Ackermann HW. Phage Classification and Characterization. Methods Mol Biol 2009;501: Ackermann, HW Phages examined in the electron microscope. Arch Virol 2007; 152(2): Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing: Twenty-Fifth Informational Supplement. M100-S25. Wayne, Pennsylvania, USA January Krupovic M, Dutilh BE, Adriaenssens EM, WittmannJ, Vogensen FK, Sullivan MB, et al. Taxonomy of prokaryotic viruses: update from the ICTV bacterial and archaeal viruses subcommittee. Arch Virol 2016;4: Bradley D. Ultrastructure of Bacteriophages and Bacteriocins. Bacteriological Reviews. 1967; 31(4): Ochman H, Selander RK. Standard reference strains of Escherichia coli from natural populations. J Bacteriol 1984;157(2): Chain E, Florey HW, Gardner AD, Heatley NG. Penicillin as a chemotherapeutic agent. Lancet 1940; 236(6104): Sulakvelidze A. The challenges of bacteriophage therapy. Eur Ind Pharm 2010;10: Hagens S, Loessner MJ. Application of bacteriophages for detection and control of foodborne pathogens. Appl Microbiol Biotechnol 2007; 76(3): Mahony D, Clow J, Atkinson L, Vakharia N, Schlech W. Development and application of a multiple typing system for Clostridium difficile. Appl Environ Microbiol 1991; 57: Slopek S, Durlakowa I, Weber-Dabrowska B, Kucharewicz-Krukowska A, Dabrowski M, Bisikiewicz R. Results of bacteriophage treatment of suppurative bacterial infections. I. General evaluation of the results. Arch Immunol Ther Exp 1983; 31: Smith HW, Huggins M. Successful treatment of experimental Escherichia coli infections in mice using phage: its general superiority over antibiotics. Microbiology 1982;128(2): Moş I, Micle O, Zdranca M, Muresan M, Vicas L. Antibiotic sensitivity of the Escherichia coli strains isolated from infected skin wounds. Farmacia 2010;58(5): Biswas B, Adhya S,Washart P, Paul B, Trostel AN, Powel B, et al. Bacteriophage therapy rescues mice bacteremic from a clinical isolate of vancomycinresistant Enterococcus faecium. Infect Immun 2002;70(1):