Αξρέο θαη Πξαθηηθή Δθαξκνγή θιαζηθώλ κεζόδσλ δηάγλσζεο Φπκαηίσζεο ΗΜΟΝΑ ΚΑΡΑΜΠΔΛΑ ΜΗΚΡΟΒΗΟΛΟΓΗΚΟ ΔΡΓΑΣΖΡΗΟ ΔΘΝΗΚΟ ΚΔΝΣΡΟ ΑΝΑΦΟΡΑ ΜΤΚΟΒΑΚΣΖΡΗΓΧΝ ΓΝΝΘΑ «Ζ ΧΣΖΡΗΑ»
ηόρνη Μηθξνβηνινγηθνύ εξγαζηεξίνπ γηα δηάγλσζε ηεο θπκαηίσζεο Αλίρλεπζε θαη απνκόλσζε ησλ κπθνβαθηεξηδίσλ Σαπηνπνίεζε ηνπ είδνπο ή ηνπ ζπκπιέγκαηνο πνπ απνκνλώζεθε. Έιεγρνο ηεο αληνρήο ησλ ζηειερώλ Παξαθνινύζεζε ηεο αληαπόθξηζεο ηνπ αζζελνύο ζηε ζεξαπεία Δπηδεκηνινγηθή δηεξεύλεζε ησλ ζηειερώλ πνπ απνκνλώλνληαη.
Δπίπεδα Δξγαζηεξηαθήο δηάγλσζεο θπκαηίσζεο Πξώην επίπεδν: Αθνξά ηα εξγαζηήξηα πνπ θάλνπλ ζπιινγή θιηληθώλ δεηγκάησλ, ηελ πξνεηνηκαζία, ηε ρξώζε θαη ηε κηθξνζθόπηζε. Δπίζεο θξνληίδεη γηα ζσζηή απνζηνιή ησλ δεηγκάησλ ζε εξγαζηήξηα 2εο βαζκίδαο. Γεύηεξν επίπεδν: Αθνξά ηα εξγαζηήξηα πνπ δηαζέηνπλ επηπιένλ ηνλ θαηάιιειν εμνπιηζκό θαη εκπεηξία γηα θαιιηέξγεηα θαη ηαπηνπνίεζε. Απνζηέιιεη ζηε ζπλέρεηα ηα απνκνλνύκελα ζηειέρε γηα έιεγρν αληνρήο θαη γηα ηππνπνίεζε ησλ αηύπσλ κπθνβαθηεξηδίσλ. Σξίην επίπεδν: Δίλαη ηα εξγαζηήξηα αλαθνξάο γηα δηάγλσζε ηεο θπκαηίσζεο.
Mycobacterium tuberculosis Οηθνγέλεηα: Mycobacteriaceae Γέλνο: Mycobacterium Δίδνο: M. tuberculosis νμεάληνρα βαθηεξίδηα αεξόβηα βξαδέσο αλαπηπζζόκελα πςειήο κνιπζκαηηθόηεηαο ελδνθπηηάξηα παζνγόλα αλζεθηηθά ζηα θνηλά αληηβηνηηθά M. tuberculosis complex M. tuberculosis M. bovis M. canettii M. africanum M. microti
Γηαγλσζηηθέο εξγαζηεξηαθέο κέζνδνη Κλινικό δείγμα Εμπλοςηιζμόρ Μοπιακή μέθοδορ Μικποζκοπική εξέηαζη Καλλιέπγεια Σηεπεό ςλικό Υγπό ςλικό Μικποζκοπική εξέηαζη Ταςηοποίηζη μςκοβακηηπιδίων Έλεγσορ ανηοσήρ
Πλεπκνληθά 80% Πηύεια ΔΝΤ ΕΝ, θαι/γεηα,pcr Λεκθαδέλαο Πιεπξηηηθό πγξό Οπξνπνηνγελλεηηθό Άιια θιηληθά δείγκαηα Πεξηθαξδηαθό Πεξηηνλατθό Οζηά/Αξζξώζεηο Δμσπλεπκνληθά 20%
ζάιηα πύν Αληηπξνζσπεπηηθό δείγκα ρσξίο επηκνιύλζεηο σζηόο ρξόλνο ιήςεο ηνπ δείγκαηνο Δπαξθήο πνζόηεηα Καηάιιεια δνρεία ζπιινγήο
1 3 2 4 5 6
Μηθξνζθόπεζε Ε-Ν 300 νπηηθά πεδία (10 ιεπηά) ε έλα παξαζθεύαζκα 1Υ2 cm 100-300 νπηηθά πεδία (10min) 1-4% ηνπ παξαζθεπάζκαηνο ε ρξώζε ανπξακίλεο-ξνδακίλεο 30 νπηηθά πεδία (90sec)
Μηθξνζθνπηθή εμέηαζε Ζ ηαρύηεξε κέζνδνο αλίρλεπζεο Δπαηζζεζία 50-80% (σο πξνο ηελ θαιιηέξγεηα) Αληρλεύεη 1000-10000 βαθηήξηα/ml πιηθνύ
Αξηζκόο κπθνβαθηεξηδίσλ θαη πηζαλόηεηα ζεηηθήο κηθξνζθνπηθήο εμέηαζεο Απνηέιεζκα Μέζε ζπγθέληξωζε νμεάληνρωλ/ml πηπέιωλ Πηζαλόηεηα ζεηηθνύ απνηειέζκαηνο (%) (-) 1000 10 1+ 5.000-10.000 50 2+ 50.000 90 3+ 100.000 96 4+ >500.000 99
Γηάγλσζε ε άκεζν Μεηά εκπινπηηζκό ε ζηέιερνο Μηθξνζθνπηθή εμέηαζε Γηαηί γίλεηαη; Πνξεία λόζνπ Αληαπόθξηζε ζηελ αληηθπκαηηθή ζεξαπεία Άξζε ησλ κέηξσλ κόλσζεο ηνπ αζζελνύο Δπηδεκηνινγηθνύο ζθνπνύο - νηθνλνκηθνί κεηαλάζηεο
Ομεάληνρα Mycobacterium spp Mycobacterium leprae Nocardia spp Gordonia spp Tsukamurella spp Legionella micdadei Rhodococcus spp Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora Nocardia spp
M. tuberculosis M. kansasii M. avium
Φεπδώο ζεηηθά απνηειέζκαηα Artifacts Δπηκνιύλζεηο Υξήζε λεξνύ επηκνιπζκέλνπ κε ΝΣΜ (ζπλήζσο M. gordonae) Φαθνί- θεδξέιαην
Φεπδώο αξλεηηθά Αθαηάιιειν θιηληθό δείγκα Λάζε ζηηο ρξώζεηο θαη ρξσζηηθέο Μηθξόο αξηζκόο κπθνβαθηεξηδίσλ
Καιιηέξγεηα Δπηβεβαηώλεη νξηζηηθά ηε θιηληθή δηάγλσζε Δπηιύεη ηπρόλ δηαθνξνδηαγλσζηηθά πξνβιήκαηα
Θξεπηηθά πιηθά ηεξεά ζξεπηηθά πιηθά: Lowenstein-Jensen (Μέζνδνο αλαθνξάο) Middlebrook 7H10/11 Τγξά ζξεπηηθά πιηθά: Ηκηαπηόκαην ζύζηεκα Bactec 460 Απηνκαηνπνηεκέλν Bactec MGIT 960
Δπεμεξγαζία δείγκαηνο Ρεπζηνπνίεζε Οκνγελνπνίεζε Απν-κόιπλζε Φπγνθέληξεζε ηδήκαηνο Δμνπδεηέξσζε (πξνζηίζεηαη πεληθηιιίλεο θαη H 2 SO 4 Φπγνθέληξεζε Δκβνιηαζκόο ζε 2 ζσιελάξηα L.J. Δπώαζε ζε θεθιηκέλε ζέζε ζηνπο 37 ν C
Δπεμεξγαζία δείγκαηνο Μέζνδνο Petrof Σξνπνπνηεκέλε Petrof Πξνζζήθε NaOΗ 4% ή αθεηπινθπζηείλε Μέζνδνο Zephiran
Καιιηέξγεηα Μέζνδνο αλαθνξάο Δπαηζζεζία 80-93% Δηδηθόηεηα 98% Αληρλεύεη 10-100 βαθηήξηα/ml πιηθνύ
Καιιηέξγεηα Απαηηνύκελνο ρξόλνο αλάπηπμεο: 5-6 εβδνκάδεο Υξόλνο αλαπαξαγσγήο Μπθνβαθηεξίδηα: 15-22h Άιια κηθξόβηα: 20-30min
Απάληεζε θαιιηέξγεηαο Αλάγλσζε Απάληεζε Κακία απάληεζε Αξλεηηθή 1-50 απνηθίεο ζεηηθή αξηζκόο απνηθηώλ 50-100 απνηθίεο ζεηηθή (1+) 100-200 απνηθίεο ζεηηθή (2+) 200-500 απνηθίεο ζεηηθή (3+) >500 απνηθίεο ζεηηθή (4+ ζπξξένπζα) Δπηκόιπλζε Δπηκόιπλζε
Καιιηέξγεηα ζε πγξά ζξεπηηθά πιηθά πζηήκαηα ηαρείαο αλίρλεπζεο κπθνβαθηεξηδίσλ BACTEC ΣΒ 460 BD BΑCTEC MGIT 960 BD BΑCTEC 9000 MB/BacT Septi-Check MBCheck MB Redox ΔSP BD Organon Roche Hoffman - LaRoche Biotest Difco
Ζκηαπηόκαην ζύζηεκα Bactec 460 Ραδηνκεηξηθή κέζνδνο - ζξεπηηθό ππόζηξσκα κε ζεζεκαζκέλν 14 C - κεηξάεη ην παξαγώκελν 14 CO 2 Πιενλέθηεκα - κείσζε ηνπ ρξόλνπ αλάπηπμεο Μεηνλεθηήκαηα - θίλδπλνο επηκνιύλζεσλ - ρξήζε ξαδηελεξγώλ νπζηώλ - απμεκέλν θόζηνο - απνπζία απνηθίαο
Απηνκαηνπνηεκέλν ζύζηεκα Bactec MGIT 960 (Mycobacterium Growth Indicator Tube) Γείθηεο θζνξηζκνύ ζηε ζηιηθόλε ηνπ ππζκέλα. Φζνξίδεη ζε ζπλζήθεο έιιεηςε Ο 2 κεηά από ηε θαηαλάισζε ηνπ από ηα κηθξόβηα Δπαηζζεζία 60-90% Γελ ρξεζηκνπνηεί ξαδηελεξγέο νπζίεο Δθαξκόδεηαη θαη γηα έιεγρν επαηζζεζίαο
Υξόλνο Μέζνο ρξόλνο αλάπηπμεο L-J Bactec 460 MGIT 960 αλάπηπμεο 24,1 14,4 15,2 Κίλδπλνο επηκνιύλζεσλ 2-4% 4,9% 8,1%
Απαξαίηεηε Καιιηέξγεηα Σαπηνπνίεζε ηνπ είδνπο Γνθηκή επαηζζεζίαο ζηα αληηθπκαηηθά Γνλνηππηθόο έιεγρνο (επηδεκηνινγηθέο κειέηεο θαη έιεγρνο εξγαζηεξηαθήο επηκόιπλζεο)
Έιεγρνο πνηόηεηαο θ/αο Δζσηεξηθόο έιεγρνο πνηόηεηαο Κάζε λέα παξηίδα (πγξνύ ή ζηεξενύ) ζξεπηηθνύ πιηθνύ, πνπ παξαζθεπάδεηαη ζην εξγαζηήξην, ή πξνέξρεηαη από εηαηξεία, πξέπεη λα ειέγρεηαη γηα: ηεηξόηεηα Ιθαλόηεηα ππνζηήξημεο αλάπηπμεο ηνπ κηθξννξγαληζκνύ Δθιεθηηθή ή/θαη αλαζηαιηηθή ηθαλόηεηα Θεηηθόο αξλεηηθόο κάξηπξαο (Πξόηππα ζηειέρε)
Έιεγρνο πνηόηεηαο θ/αο Δμσηεξηθόο έιεγρνο πνηόηεηαο (EQA) πκκεηνρή ζε πξνγξάκκαηα: >2010: INSTAND e.v. (ERLN- TB) >2011: + WHO/GLI SRL Network
Έιεγρνο επαηζζεζίαο
Αληνρή κπθνβαθηεξηδίσλ Φπζηθή αληνρή Τπάξρεη ζην βαθηήξην ρσξίο πξνεγνύκελε επαθή ηνπ κε ην θάξκαθν Γελ αλαπηύζζεηαη κε πξόζιεςε γνληδίσλ
Αληνρή κπθνβαθηεξηδίσλ Yςειή (10-3 ): Ethionamide, Capreomycin, Cycloserine, Thiacetazone Μεζαία (10-6 ): Isoniazide, Streptomycin, Ethambutole, Kanamycin Υακειή (10-8 ): Rifampicin INH + RIF: 10-6 ρ 10-8 = 10-14 πλδπαζκόο 3 θαξκάθσλ: 10-19
Αληνρή κπθνβαθηεξηδίσλ Πξσηνπαζήο αληνρή (primary drug-resistance ή drug-resistance among new cases) Γεπηεξνπαζήο ή επίθηεηε αληνρή (acquired drug-resistance ή drug-resistance among previously treated cases)
Αληνρή κπθνβαθηεξηδίσλ Πνιπαλζεθηηθόηεηα Multi Drug Resistance MDR (INH + RIF) Τπεξαλζεθηηθόηεηα - Extensively Drug Resistance XDR (INH + RIF + QNL + AMIK ή KAN ή CAP)
Έιεγρνο επαηζζεζίαο Πόηε πξέπεη λα εθαξκόδεηαη; ε όιεο ηηο λέεο πεξηπηώζεηο Καιιηέξγεηα ζεηηθή κεηά από 3 κήλεο αγσγήο Όπνηε δελ ππάξρνπλ ηθαλνπνηεηηθά απνηειέζκαηα ζηε ζεξαπεία
The Current Standard M24-A NCCLS /CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institude) πγθεληξώζεηο αληη-tb θαξκάθωλ θαη θξηηηθέο αλαινγίεο (critical proportions) Drug Μέζνδνο Αλαινγηώλ: Canetti (1εο γξακκήο Φάξκαθα) LJ κg/ml 7H10 κg/ml 7H11 κg/ml Bactec 460 κg/ml INH 0.2 0.2 0.2 0.1 RIF 40 1 1 2 EMB 2 5 7.5 2.5 PZA 100 100
ηέιερνο αλζεθηηθό ζηε INH INH αλζεθηηθό ζηε RIF, ή ζε 2 ηνπιάρηζηνλ θάξκαθα ηεο 1εο γξακκήο ειέγρνληαη όια ηα αληη- Tb 2εο γξακκήο θάξκαθα 2 εο γξακκήο Φάξκαθα Drug 7H10κg/ml 7H11κg/ml Capreomycin 10 10 Ethionamide 5 10 Ethamputol 10 10 Kanamycin 5 6 Ofloxacin 2 2 p-aminosalicylic acid 2 8 Rifabutin 0.5 0.5 Streptomycin 2 10 2 10
ΜΔΘΟΓΟΗ ΠΡΟΓΗΟΡΗΜΟΤ ΔΤΑΗΘΖΗΑ Mtb ΣΑ ΑΝΣΗΦΤΜΑΣΗΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ Κιαζηθέο Μέζνδνη Μέζνδνο ηεο απνιύηνπ πεξηεθηηθόηεηαο ζε αληηθπκαηηθά θάξκαθα Absolute concentration Method Μέζνδνο ππνινγηζκνύ ηνπ ιόγνπ αλζεθηηθόηεηαο κεηαμύ ηνπ ππό εμέηαζε θαη ηνπ πξόηππνπ ζηειέρνπο H37Rv Resistant Ratio Μέζνδνο ηεο αλαινγίαο ησλ αλζεθηηθώλ βαθηεξηδίσλ πξνο ηνλ όιν πιεζπζκό ηνπ κηθξνβίνπ Proportion method Μέζνδνο κε ρξήζε πγξώλ ζξεπηηθώλ πιηθώλ Bactec 460 (Becton Dickinson) ESP II (Trek Diagnostics System) MGΗT 960 (Becton Dickinson) MB/BacT ALERT 3D system (biomerieux) Georges Canetti 1911-1971
Πόηε έλα ζηέιερνο είλαη αλζεθηηθό in vitro; Αλζεθηηθό: είλαη έλα ζηέιερνο όηαλ αλαπηύζζεηαη ζε πνζνζηό >1%, παξνπζία ηεο θξηηηθήο ζπγθέληξσζεο ηνπ αληη-tb θαξκάθνπ Κξηηηθή αλαινγία Πνζνζηό >1% ηνπ πιεζπζκνύ Κξηηηθή ζπγθέληξσζε Ζ ρακειόηεξε ζπγθέληξσζε ηνπ θαξκάθνπ πνπ αλαζηέιιεη ην 95% ησλ άγξησλ ζηειερώλ ηνπ Μ.tb
Γνθηκαζία επαηζζεζίαο Απάληεζε: ζπγθέληξσζε ηνπ θαξκάθνπ ζξεπηηθό πιηθό κέζνδνο πνπ εθαξκόζηεθε Αληνρή ζηηο ρακειέο ζπγθεληξώζεηο έιεγρνο θαη ζηηο πςειέο ζπγθεληξώζεηο πξνζαξκνγή ηεο δνζνινγίαο ησλ αληη-tb θαξκάθσλ Έιεγρνο PZA (όμηλν PH) κόλν ζε πγξά ζξεπηηθά πιηθά πληνκόηεξε απάληεζε κε έιεγρν ζε πγξά ζξεπηηθά πιηθά CDC- έγθξηζε γηα θάξκαθα 1 ε γξακκήο Σα ζηειέρε M. tb πνπ είλαη αλζεθηηθά ζηε RIF ή ζε 2 ηνπιάρηζηνλ θάξκαθα ηεο 1εο γξακκήο ειέγρνληαη θαη ζηα αληη- Tb 2εο γξακκήο.
Antibiotics used in MGIT TM 960 Category agreement k value (%) Sensitivity (%) (true Resistance) Specificity (%) (true Susceptibility) Positive Predictive Value (%) Negative Predictive Value (%) Ofloxacin (2 ug/ml) 0.554 (87.23) 83.33 87.8 50 97.30 Rifabutin (0.5 ug/ml) 0.628 (82.98) 92.31 79.41 63.16 97.30 Ethionamide (5 ug/ml) 0.539 (78.72) 70.59 83.33 70.59 83.33 Capreomycin (2.5 ug/ml) 0.624 (91.49) 100 90.7 50 100 BacTec MGIT 960 system evaluation for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis against second-line anti-tuberculosis drugs S. Nikolaou, D. Papaventsis*, S. Karabela, E. Konstantinidou, I. Marinou, A. Sainti, S. Kanavaki (Athens, GR) 20th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases (ECCMID) 10.04.2010-13.04.2010
Μπθνβαθηεξίδηα Τπνρξεσηηθά παζνγόλα - M. tuberculosis complex (MTBC) - M. leprae Δπθαηξηαθά - Non tuberculous mycobacteria (NTM) απξόθπηα
Γηαθνξέο ΜΣΒ-ΝΣΜ ΜΣΒ ΝΣΜ Παζνγνληθόηεηα + + Αλζεθηηθόηεηα + + Διεύζεξα δώληα - + Μεηάδνζε + -
Αίηηα απμαλόκελεο ζπρλόηεηαο ΝΣΜ Αύμεζε αλνζνθαηαζηαικέλσλ αηόκσλ Νέεο κέζνδνη ηαπηνπνίεζεο (κνξηαθέο) Απμεκέλε πεξηβαιινληηθή έθζεζε
Ολνκαηνινγία ΝΣΜ αηαμηλόκεηα αλώλπκα ςεπδνθπκαηηώδε πεξηβαιινληηθά άηππα επθαηξηαθά * άιια από θπκαηίσζε - Mycobacteria Other Than Tuberculosis (MOTT) ** Wolinski 1979 - Με θπκαηηώδε - Non Tuberculous Mycobacteria (NTM)
ΝΣΜ Αξηζκόο: >130 (ζήκεξα) 50 (1997-ζήκεξα) www.bacterio.cict.fr/m/mycobacterium.html E. Tortoli, CMI 2009 Αύμεζε ηνπ αξηζκνύ ησλ θιηληθά ζεκαληηθώλ εηδώλ
Ηζηνξηθή εμέιημε ηαμηλόκεζεο ΝΣΜ 1882: βάθηιινο Koch ηέινο 19 νπ αηώλα: αλαγλώξηζε δηαθνξεηηθώλ κπθνβαθηεξηδίσλ: βννεηδώλ, πνπιεξηθώλ, ρνίξσλ, ζαπξνθύησλ 1900-1918: πεξηγξαθή «αζπλήζσλ» κπθνβαθηεξηώζεσλ ζηνλ άλζξσπν
1932: Pinner M κε ηππηθά ή «άηππα» νμεάληνρα βαθηήξηα πξνθαινύλ (;) λόζν ζηνλ άλζξσπν δηαθνξέο από ΜΣΒ: κνξθνινγία παξαγσγήο ρξσζηηθήο ινηκνγόλνο δύλακε ζηα δώα - δύζθνια ηαμηλνκηθά θξηηήξηα
1954-1958: Feldman W Timpe, Dye W, Runyon E πλεξγαζία ησλ: Veterans Administration (Committee on Bacteriology) θαη American Trudeau Society of the National Tuberculosis Association πλειέγεζαλ θαη κειεηήζεθαλ 400 ζηειέρε από 93 εξγαζηήξηα (ΗΠΑ + άιιεο ρώξεο)
Κξηηήξηα θαηά Runyon ηαρύηεηα αλάπηπμεο παξαγσγή ρξσζηηθήο βηνρεκηθά ραξαθηεξηζηηθά Γηακνξθώλνληαη 4 νκάδεο ΝΣΜ I. Φσηνρξσκνγόλα (παζνγόλα) II. θνηνρξσκνγόλα (κε παζνγόλα) IΙΙ. Με Υξσκνγόλα (παζνγόλα) ΙV. Σαρέσο αλαπηπζζόκελα (δπλεηηθά παζνγόλα)
1979 Wolinsky E Σαμηλόκεζε κε βάζε - ηαρύηεηα αλάπηπμεο - παζνγνληθόηεηα (ζηνλ άλζξσπν)
Καηαθηήζεηο - πξνβιεκαηηζκνί - εμειίμεηο Έσο ην 1990. Οη ηαμηλνκηθέο κειέηεο βαζίδνληαη ζηε ζύγθξηζε 100 θαηλνηππηθώλ θαη βηνρεκηθώλ ραξαθηεξηζηηθώλ Δξγαζία: θνπηώδεο, ρξνλνβόξα, αλεπαξθήο
Καηαθηήζεηο - πξνβιεκαηηζκνί - εμειίμεηο ήκεξα... Ζ αλαγλώξηζε ελόο λένπ είδνπο είλαη απιή: DNA sequencing αλάιπζε ηνπ «ύπνπηνπ λένπ» είδνπο ύγθξηζε απνηειέζκαηνο: βάζε GENBANK Αλαξίζκεηα είδε πξνθύπηνπλ από εξγαζηήξηα αλά ηνλ θόζκν, παξά από ιίγνπο «ηαμνλνκηζηέο»
Σαμηλόκεζε ΝΣΜ ζήκεξα Α. ΒΡΑΓΔΧ ΑΝΑΠΣΤΟΜΔΝΑ α. ΝΣΜ πνπ ζπρλά απνκνλώλνληαη από ινηκώμεηο ζηνλ άλζξσπν M. avium complex M. genavense M. haemophilum M. kansasii M. malmoensae M. marinum M. simiae M. szulgai M. ulcerans M. xenopi
Σαμηλόκεζε ΝΣΜ ζήκεξα β. ΝΣΜ πνπ ζπαλίσο απνκνλώλνληαη από ινηκώμεηο ζηνλ άλζξσπν M. asiaticum M. celatum M. gordonae M. scrofulaceum M. shimoidei M. terrae
Σαμηλόκεζε ΝΣΜ ζήκεξα B. ΣΑΥΕΩ ΑΝΑΠΣΤΟΜΕΝΑ ΝΣΜ α. πρλά απνκνλώλνληαη: M. abscessus M. chelonae M. fortuitum
Σαμηλόκεζε ΝΣΜ ζήκεξα β. Ληγόηεξν ζπρλά απνκνλώλνληαη : M. boenickei M. goodii M. immunogenum M. peregrinum M. smegmatis γ. παλίσο απνκνλσζέληα δ. Με απνδεδεηγκέλα παζνγόλα
Σαπηνπνίεζε NTM Καιιηέξγεηα Έιεγρνο ηαρύηεηαο αλάπηπμεο (θαζεκεξηλά) Τατέως αναπησζζόμενα Α. Κλαζζικός (προκαηαρκηικός) έλεγτος Αλαθαιιηέξγεηα ζε LJ 45 O C 25 O C 37 O C 37 O C Βραδέως αναπησζζόμενα αξπιζνπιθαηάζε Β. Μοριακός έλεγτος Σαρέσο 3 ε εκέξα + 14 ε εκέξα + Βξαδέσο 3 ε εκέξα + 14 ε εκέξα + Αλάπηπμε LJ + NaCl 5% + - Πξόζιεςε Fe + - ζωμός Dubos Αλαγσγή ληηξηθώλ + + Αλάπηπμε McConkey + - Σκοηοτρωμογόνο (αλοσμινόταρηο) Φωηοτρωμογόνο Παξαγσγή νπξεάζεο - + Τδξόιπζε Tween 80 - + Αλαγσγή Σειινπξηθνύ K - +
Βηνρεκηθά ραξαθηεξηζηηθά ΝΣΜ παξαγωγή ληαζίλεο αλαγωγή ληηξηθώλ πδξόιπζε Tween 80 αληίδξαζε αξύιζνπιθαηάζεο παξαγωγή νπξεάζεο αλαγωγή ηεινπξηθνύ παξαγωγή θαηαιάζεο επαηζζεζία ζην TCH (thiophen 2 carboxylacid hydrazide) αλάπηπμε ζε PNB (παξαλίηξνβελδνηθό νμύ)
Βηνρεκηθέο Εμεηάζεηο Σαπηνπνίεζεο ΝΣΜ
M.avium 28 νξόηππνη AIDS- δηάζπαξηε λόζνο Παηδηά- ηξαρειηθή ιεκθαδελίηηδα Πνιπαλζεθηηθό Γηαρσξηζκόο M.avium- M.intracellulare: όρη θιηληθή ζεκαζία
ΝΣΜ M.haemophilum: δέξκα, αξζξώζεηο, ιεκθαδέλεο, νζηά M.kansasii: πλεύκνλεο, ιεκθαδέλεο, νζηά M.malmoense: 8-12 εβδνκάδεο M.marinum: δέξκα, αξζξώζεηο, νζηά M.szulgai: πλεπκνληθή λόζνο M.xenopi: πλεπκνληθή λόζνο M.ulcerans: έιθνο Buruli
M.kansasii: πλεύκνλεο, ιεκθαδέλεο, νζηά
M.marinum: δέξκα, αξζξώζεηο, νζηά
M.ulcerans: έιθνο Buruli
ΝΣΜ M.fortuitum: Λνηκώμεηο ρεηξνπξγηθώλ ηνκώλ, θαζεηήξσλ M.abscessus: 90% ρξνλίσλ ΝΣΜ πλεπκνληθώλ ινηκώμεσλ M.chelonae: ινηκώμεηο ζηνπο αλνζνθαηαζηαικέλνπο
M.abscessus
M.fortuitum
ΝΣΜ- έιεγρνο επαηζζεζίαο MIC άγλσζηεο Άιινη κεραληζκνί αληνρήο Γηαθνξεηηθέο ζπγθεληξώζεηο MIC ζε όξν θαη ηζηνύο Έιεγρνο 8 θαξκάθσλ (AM, KEF, CLAR, CIP, DOX, LIN, SXT, TOB)
Γηαγλσζηηθά θξηηήξηα Θεηηθή αηκνθαιιηέξγεηα Σνπιάρηζηνλ 2 ζεηηθέο θαιιηέξγεηεο κε ίδηα εζηία Θεηηθή θαιιηέξγεηα βηνςίαο θιεηζηήο βιάβεο ATS/IDSA 2007
Table. ROUTINE NON-TUBERCULOUS MYCOBACTERIA (NTM) DETECTION, 2005-2009 Year / Species 2005 2006 2007 2008 2009* TOTAL n % n % n % n % n % n % M.avium 21 26.5 18 23 8 9 12 17.5 11 27 70 25 M.fortuitum 13 17 11 13.5 11 20 12 17.5 6 14.5 53 16 M.intracellulare 2 2.5 5 6 9 16 9 13 10 24 35 11 M.chelonae 2 2.5 4 5 8 14 8 12 4 10 26 8 M.gordonae 9 11 5 6 1 2 5 7 3 7 23 7 M.peregrinum 3 4 8 10 5 9 3 4 0 0 19 6 M.abssecus 4 5 2 2.5 1 2 3 4 1 2.5 11 3 M. kansasii 3 4 2 2.5 2 4 3 4 1 2.5 11 3 M.xenopi 3 4 2 2.5 2 4 1 2 1 2.5 9 2.5 M.malmoense 1 1 1 1 0 0 3 4 1 2.5 6 2 M. lentiflavum 0 0 1 1 0 0 3 4 2 5 6 2 M. celatum 2 2.5 2 2.5 0 0 1 2 1 2.5 6 2 M.marinum 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 2 0.5 Unidentified 15 19 19 23.5 8 14 6 9 0 0 48 15 TOTAL 79 24% 81 25% 55 17% 69 21% 41 13% 325 100 Routine non-tuberculous mycobacteria detection and molecular identification, Athens, Greece, 2005-2009 S. Nikolaou, D. Papaventsis*, S. Karabela, P. Ioannidis, A. Sainti, E. Konstantinidou, I. Marinou, S. Kanavaki 20th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases (ECCMID) 10.04.2010-13.04.2010
ΚΛΙΝΙΚΗ ΕΚΣΙΜΗΗ ΕΡΓΑΣΗΡΙΑΚΗ ΕΚΣΙΜΗΗ