Ζωή Μπεζιργιαννίδου Αιματολόγος Επιμ. Α Κέντρο Αιμοδοσίας Π.Γ.Ν.Αλεξανδρούπολης

Ζωή Μπεζιργιαννίδου Αιματολόγος Επιμ. Α Κέντρο Αιμοδοσίας Π.Γ.Ν.Αλεξανδρούπολης

Το πιο πολύπλοκο από τα συστήματα πρωτεασών(κινίνης-καλλικρείνης, πήξης, ινωδόλυσης, κ.α.) Αποτελείται από 23 διαλυτές πρωτεΐνες στο πλάσμα και 10 μεμβρανικές. Η δράση του συστήματος εκδηλώνεται με μια σειρά αλυσιδωτών αντιδράσεων κατά τις οποίες από τις πρόδρομες μορφές προκύπτουν ενεργοποιημένα ένζυμα.

Το σύστηµα του συµπληρώµατος περιλαµβάνει τρείς οµάδες πρωτεϊνών 1. Πρωτεΐνες των οδών ενεργοποίησης 2. Υποδοχείς 3. Ρυθµιστικές πρωτεΐνες

Ορολογία Συμπληρώματος C: Συµπλήρωµα Tης κλασικής οδού Παράγοντες C1, C2 έως C9 C1q, C1r, C1s υποµονάδες του C1 Της εναλλακτικής οδού Παράγοντες B, D, H, I, P(properdine), C3

Κλασσική οδός: ενεργοποίηση με αντίδραση Ag-Ab Εναλλακτική: Συνήθως δεν προκαλείται από αντίσωμα Οδός Λεκτίνης

Η σύνδεση Ag-Ab προκαλεί μεταβολή του Fc τμήματος της ανοσοσφαιρίνης, αφήνοντας ελεύθερη μια περιοχή του σταθερού τμήματος της βαριάς αλυσίδας CH2 (IgG) &CH3(IgM), για να αντιδράσει με το κλάσμα C1 του Συμπληρώματος Αυτή η ειδική περιοχή για τη σύνδεση του C1, υπάρχει στις βαριές αλυσίδες των υποκλάσεων IgG1,2,3 και στην IgM

Το πενταμερές μόριο IgM παρέχει αφθονία κοντινών ενεργοποιημένων περιοχών CH3 στα Fc τμήματα του μορίου IgM. Έτσι ένα απλό μόριο IgM μπορεί να ενεργοποιήσει τον καταρράκτη του C Για τα IgG, πρέπει δύο τουλάχιστον αντισώματα IgG να αντιδράσουν με δύο γειτονικά αντιγόνα ώστε να ενεργοποιηθεί το C.

Το C1 complex είναι ένα μακρομόριο που αποτελείται από 3 ξεχωριστές πρωτείνες(c1q, C1r, and C1s). Όταν μια αντίδραση Ag-Ab, συμβεί, 2 ή περισσότερες αλυσίδες C1q ενεργοποιούνται και στη συνέχεια ενεργοποιούν 2 μόρια C1r τα οποία στη συνέχεια ενεργοποιούν 2 μόρια C1s που μετατρέπονται σε μια ισχυρή σερίνη εστεράση. Το σύπλεγμα C1r, C1s, και C1q σταθεροποιείται με ιόντα Ca2+.

Ενεργοποίηση C1 έως C3 Το C1s ενεργοποιεί 2 υποστρώµατα: το C4 το οποίο διαστπάται σε ένα µεγάλο τµήµα (C4b) και ένα µικροτερο το C4a το οποίο έχει αναφυλαξοτοξικές ιδιότητες. Το µεγαλύτερο µέρος του C4b αδρανοποιείται ενώ µέρος του C4b συνδέεται πάνω στην κυτταρική επιφάνεια Το C1s επίσης ενεργοποιεί το C2, το οποίο διασπάται σε C2b και C2a. Το C2a συνδέεται στο C4b και σχηµατίζεται το ενεργοποιηµένο σύµπλεγµα C4b2a, γνωστό ως C3 κονβερτάση. C4 a C1 s C4 C3a C4 b C3 C2 C2 a κύττα ρο Κάθε C3 κονβερτάση µπορεί να ενεργοποιήσει > από 200 ανενεργά µόρια C3 To C3 διασπάται σε ένα µικρό κλάσµα C3a µε αναφυλαξοτοξικές ιδιότητες και ένα µεγαλύτερο,το C3b που προσκολλάται σε πρωτείνες και σάκχαρα των κυττταρικών µεµβρανών. C3b C2b

Οδός λεκτίνης Οι λεκτίνες αποτελούν πρωτείνες που προσδένονται σε υδατάνθρακες στόχους. Η MBL(Mannan Binding Lectin) είναι ένας διαλυτός υποδοχέας Μανόζης που προσδένεται σε μανόζες ή Ν- ακέτυλογλυκοζαμίνες πάνω σε μεμβράνες μικροοργανισμών. ΗδομήτηςMBLείναιπαρόμοιατουC1q

Οδός λεκτίνης Μετά τη σύνδεση της MBL με μανόζες, ακολουθεί η ενεργοποίηση των σερινών πρωτεασών MASP1,2,3 (MPL-Associated Serine Protease) Το σύμπλοκο μπορεί να ενεργοποιήσει τα C4 και C2 με επακόλουθο την ενεργοποίηση της C3 κονβερτάσης C3-Bypass

Χυμικός μηχανισμός άμυνας(μη ειδική ανοσία) που δεν χρειάζεται αντίδραση Ag-Ab Ενεργοποιείται από μεμβράνες όπως μύκητες, βακτήρια αλλά και πρωτεϊνικά συμπλέγματα που περιέχουν και αντισώματα που δεν συνδέουν το C ή Σύστημα Προπερδίνης

To C3υφίσταται αυτόματη χαμηλή συνεχή υδρόλυση, παράγοντας το C3iπου ταχύτατα αδρανοποιείται από τους αναστολείς του C. Ένα μέρος ενώνεται με τον Factor B και παράγει το C3iB Πάνω στοc3ibδρά ο Factor D και τον μετατρέπει σε ενεργόc3ibb, δηλαδή C3 κονβερτάση, ικανή να μετατρέψει το C3 σε C3a και C3b. C3a Θετική Ανάστροφη Αλληλορύθμιση (Positive feedback) Αποδόμηση C3b H2O C3 C3i C3iBb C3iB Factor D Ba

Θετική Ανάστροφη Αλληλορύθμιση (Positive feedback) Αποδόμηση H2O C3i Φαγοκυττάρωση C3a C3 C3iB C3b Αποδόμηση C3dg ic3b Σύμπλεγμα Προσβολής της Μεμβράνης Membrane attack Complex(MAC) C5,6,7,8 & 9 Λύση κυττάρου Factor I Factor B C3b C3bB Factor D Ba C3iBb C3 Κονβερτάση C3bBb Factor D Ba Προπερδίνη (P) Αποδόµηση Αγκύλη Ενίσχυσης (Amplification Loop)

Κλασσική Οδός C3 Κονβερτάση C4b2a C3 C3a C5 Κονβερτάση C4b2a3b C3b C5 C5 Κονβερτάση C3bBb3b C5a C5b C6 C7 C9 C8

Υποδοχείς του συμπληρώματος Υποδοχέας CR1(CD35), CR3((CD11bCD18), CR4(CD11cCD18) CR2(CD21) C5aR:υποδοχείςγια διαλυτά µόρια C5a σε βασεόφιλα, µαστοκύτταρα, λείες µυικές ίνες και ουδετερόφιλα C3aR/C4aR: ράση Υποδοχείς οψωνινώνστα φαγοκύτταρα. ιευκολύνουν τη φαγοκυττάρωση µετά τη σύνδεση µε το C3b Επηρεάζει την ενεργοποίηση των Β λεµφοκυττάρων και την ανοσολογική ανοχή Υποδοχέας αναφυλατοξινών:απελευθέρωση ισταµίνης και άλλων βιολογικών τροποποιητών µε αποτέλεσµα φαινόµενα φλεγµονής και αναφυλαξίας, αγγειακή διαπερατότητα Υποδοχέας χηµειοταξίας: µεταναστευτικότητα των ουδετεροφίλων Υποδοχέας αναφυλατοξινών

Ρύθµιση της ενεργοποίησης του συµπληρώµατος

Ρυθµιστικές Πρωτείνες Αποσυνδέουν, αποδοµούν, αναστέλoυν ή σταθεροποιούν Ρυθµιστική Πρωτείνη C1(C1-Inh) Αναστολέας C1 εστεράσης Προπερδίνηή παράγοντας P DAF(decay accelerating factor- CD55) MIRL CD59(membrane inhibitor of reactive lysis). Factor I: Factor H: AI: Τρόπος δράσης παρεµβαίνει και στο σύστηµα πήξης και κινίνης καλλικρείνης. σταθεροποιεί τη δοµή της C3 κονβερτάσηςκαι επιβραδύνει τη διάσπασή της. Αποδοµεί τη C3 Κονβερτάση Mεµβρανικός αναστολέας της αντιδραστικής λύσης Αποδοµεί C3,C4 Αποδοµείτην C3 κονβερτάση C3bBbτης εναλλακτικής οδού Αναστολέας αναφυλατοξινών C3a, C4a, C5a

Ρόλος του Συμπληρώματος: Η ενίσχυση της άμυνας του ξενιστή 1. Προώθηση(πρόκληση) οξέων φλεγμονωδών αντιδράσεων με χημειοτακτικές ουσίες C3a, C5aγια προσέλκυση φαγοκυττάρων 2. Μεταβολή των κυτταρικών επιφανειών, ώστε τα κύτταρα να είναι ευάλωτα στη φαγοκυττάρωση με οψωνινοποίηση(c3b) 3. Τροποποίηση κυτταρικών μεμβρανών που οδηγεί στην κυτταρική λύση με το σύμπλεγμα MAC 4. Περιορισμός σχηματισμού ανοσοσυμπλεγμάτων 5. Ενίσχυση ανοσολογικής απάντησης

Άµυνα έναντι µικροβίων Οψωνινιποίηση Χηµειοταξία και ενεργοποίηση λευκοκυττάρων Λύση βακτηρίων

Κάθαρση Ανοσοσυµπλεγµάτων CIC (Circulating Immunocomplex) Με την ενεργοποίηση του C επί των ανοσοσυµπλεγµάτων, επικάθονται κλάσµατα C3b/C4b. Τα CIC δεσµεύονται από τα ερυθρά µέσω του ECR1 υποδοχέα Τα CIC δεσµεύονται από τα ηπατικά µακροφάγα διότι οι υποδοχείς των µακροφάγων CRs έχουν µεγαλύτερη συγγένεια µε τα C3b/C4b.

Ενίσχυση ανολογικής απάντησης από τα Β-Λεµφοκύτταρα µέσω C3d

Βιολογικές συνέπειες έλλειψης παράγόντων ή ανασταλτών του Συµπληρώµατος Έλλειψη C1(C1-Inh) Αναστολέας C1 εστεράσης Επίπτωση Κληρονοµικό αγγειοοίδηµα Προπερδίνη ή παράγοντας P DAF(decay accelerating factor-cd55) HRF(Οµόλογος περιοριστικός παράγοντας) MIRL CD59(membrane inhibitor of reactive lysis). C3+++ C2,C4(+) C6-9(+) PNH(Παροξυντικής Νυκτερινής Αιµοσφαιρινουρίας PNH(Παροξυντικής Νυκτερινής Αιµοσφαιρινουρίας Ως θάνατο Νοσήµατα ανοσοσυµπλ. (SLE) ΕυαισθησίασεNeisseria)

Chido και Rogers Οµάδες αίµατος στο C4 Οι οµάδες αίµατος Chido και Rogers αποτελούν επιτόπους του παράγοντα C4 του C που λειτουργούν ως αντιγόνα που µπορούνναενεργοποιήσουντηνπαραγωγή αντισωµάτων.

Η επίδραση του C στην καταστροφή (αιµόλυση) των ερυθρών Ενδοαγγειακή αιµόλυση Εξωαγγειακή αιµόλυση

Ενδοαγγειακή αιµόλυση Ο καταρράκτης του C φτάνει στο τελικό στάδιο, δηλαδή τη δηµιουργία του συµπλέγµατος MAC. ιακόπτεται η συνέχεια της ερυθροκυτταρικής µεµβράνης και αιµοσφαιρίνη απελευθερώνεται στο πλάσµα. Έκλυση κυτοκινών, ενεργοποίηση φλεγµονώδους αντίδρασης και καταρράκτη της πήξης

Εξωαγγειακή καταστροφή.σε περίπτωση παρουσίας µόνο C3b, ένζυµα µπορούν να διασπάσουν περαιτέρω το συνδεδεµένο C3b, αφήνοντας µόνο ένα µικρότερο κλάσµα, το C3dg πάνω στο ερυθρό. Τα ερυθρά µε το C3dg, επιβιώνουν φυσιολογικά, καθώς τα φαγοκύτταρα δεν έχουν υποδοχείς για το C3dg.

Παρουσία IgG και C3b Εάν υπάρχουν IgG συνδεδεµένα πάνω στα ερυθρά, τότε ακολουθεί φαγοκυττάρωση µέσω των FcγRυποδοχέων Έτσι εάν υπάρχουν και IgG και C3b, η φαγοκυττάρωση θα επιτευχθεί λόγω του IgG και θα επιταχυνθεί µέσω της προσέλκυσης φαγοκυττάρων µέσω του C3b.

Η δράση του C στο εργαστήριο Αιµόλυση του δείγµατος στο εργαστήριο σηµαίνει ενεργοποίηση C µέχρι το σχηµατισµό του συµπλέγµατος MAC. Αυτό µπορεί να φανεί µόνο σε βιοχηµικό σωληνάριο διότι όταν υπάρχει αντιπηκτικό, δεσµεύει τα κατιόντα Ca++ που είναι απαραίτητα για την ενεργοποίηση του C.

Direct Antiglobulin Test Άµεση Coombs Μέθοδος για ανίχνευση προσκολληµένων αντισωµάτων που καλύπτουν in vivo τα ερυθρά αλλά δεν προκαλούν αυτόµατη συγκόλληση. Χρησιµοποιούνται αντισώµατα έναντι ανθρώπινων ανοσοσφαιρινών για αυτό και λέγεται τεστ αντισφαιρινικού ορού.

DIRECT ANTIGLOBOYLIN TEST (ΑΜΕΣΗ COOMBS) Κάθε Fab τµήµα του αντιανθρώπειου anti-igg συνδέεται µε ένα Fc τµήµα του αντιερυθροκυτταρικού αντισώµατος και έτσι λειτουργεί ως γέφυρα µεταξύ δύο αντισωµάτων γειτονικών ευαισθητοποιηµένων ερυθρών ώστε να παραχθούν ορατές συγκολλήσεις + Patient s RBCs Ερυθρά µε ατελή Ab (Ευαισθητοποιηµένα) Coombs Reagent (Antiglobulin)

DIRECT ANTIGLOBOYLIN TEST (ΑΜΕΣΗ COOMBS) Χρησιµεύει για τον διαχωρισµό της Άνοσης αιµόλυσης από τη µη άνοση αιµόλυση. Ταυτοποιεί τον υπεύθυνο παράγοντα ευαισθητοποίησης των ερυθρών IgG, IgM, IgA,C3c, C3d

Θετική Coombs δεν σηµαίνει αιµόλυση Μικρά ποσά µορίων IgG (5-90 µόρια/ερυθρό) & C3d (5-97 µόρια/ερυθρό) υπάρχουν σε όλα τα ερυθρά. Ανιχνεύονται έως και 500µόρια /ερυθρό σε φυσιολογικά άτοµα. Η κλασσική Άµεση Coombsανιχνεύει 100-500 µόρια IgG /ερυθρό και 400-1100 µόρια C3d/ερυθρό.

Η αιµολυτική δράση του αυτοαντισώµατος εξαρτάται από: Την τάξη της ανοσοσφαιρίνης IgG, IgM, IgA Την υποτάξη της ανοσοσφαιρίνης IgG3>IgG1>>IgG2>>IgG4 Αριθµό µορίων /ερυθρό

Αρνητική Coombsδεν αποκλείει την άνοση αιµόλυση Πιθανή αδυναµία ανίχνευσης της µεθόδου o Ο αριθµός των προσκολληµένων µορίων ανοσοσφαιρινών είναι µικρότερος από το όριο ευαισθησίας της µεθόδου. (Κυτταροµετρία>τεχνικήγέλης>σωληνάρια) o Tο αντίσωµα είναι τύπου IgA ή IgM ή υπάρχουν κλάσµατα του συµπληρώµατος που δεν συµπεριλαµβάνονται στον έλεγχο ρουτίνας όλων των νοσοκοµείων. o Kαταστολή του αντιγόνου όταν το αυτοαντίσωµα έχει ειδικότητα πχ. Kell, Rh, κλπ. Σε αυτές τις περιπτώσεις, ενώ ανιχνεύεται το αυτοανατίσωµα στον ορό και στο έκλουµα, αρνητική ή ασθενώς θετική η άµεση είναι

Ψευδώς αρνητική Άµεση Coombs Εάν δεν γίνει σωστό πλύσιµο και αποµάκρυνση των αυτοαντισωµάτων από τον ορό, αυτά θα εξουδετερώσουν τον AHG και δεν θα αντιδράει µε τα προσκολληµένα στα ερυθρά αντισώµατα. Ακατάλληλη φύλαξη αντιδραστηρίων, βακτηριακή επιµόλυνση Παράληψη προσθήκης ανντισφαιρινικού ορού Οαριθµόςτωνκυττάρωνείναιπολύµεγάλοςκαιτα ερυθρά δίνουν ασθενή αντίδραση ή είναι πολύ λίγα και επηρεάζουν την ανάγνωση του αποτελέσµτος.

ΑΙΤΙΕΣ ΘΕΤΙΚΗΣ ΑΜΕΣΗΣ COOMBS Αυτοαντισώµατα Κλάσµατα Συµπληρώµατος C3c και C3d Αλλοαντισώµατα µετά από πρόσφατη µεταγγιση Αλλοαντισώµατα από παράγωγα πλάσµατος που µεταγγίστηκαν Αλλοαντισώµατα της µητέρας επί των ερυθρών του νεογνού Αντισώµατα έναντι φαρµάκων που συνδέονται µε τα ερυθρά Ανοσοσφαιρίνες µη ειδικές όπως στο ΠΜ καιτη Νόσο Waldestrom Αντισώµατα από λεµφοκύτταρα του δότη (GVHD)

ιερεύνηση Άµεσης Coombs

DAT(+) Ληψη ιστορικού κυρίας νοσου µεταγγίσεων, κυήσεων, φαρµάκων Ελεγχος µε µονοκλωνικούς αντιορούς IgG, IgM, IgA, C3c, C3d Τιτλοποίηση Εµµεση Coombs Πλήρης φαινότυπος ασθενούς Elution

Το Cως µοναδικό εύρηµα στη DAT 1. Σε 10-20% ασθενών µε θερµού τύπου AAA, ανιχνεύονται µόνο C3 καθώς τα µόριά του είναι πολύ περισσότερα από τα IgG. 2. Στη νόσο Ψυχροσυγκολλητινών, το IgM, σε κεντρικώτερα και θερµότερα σηµεία, αποσυνδέεται ενώ παραµένει στην ερυθροκυτταρική µεµβράνη, το ενεργοποιηµένο C. Τα IgM ανιχνεύονται πολύ δύσκολα διότι αποσυνδέονται εύκολα από το αντιγόνο και κατά το πλύσιµο αλλά και ο AHG περιέχει ελάχιστες ποσότητες anti-igm. 3. Φαινόµενο innocent bystanter (αθώος περαστικός): Κλάσµατα συµπληρώµατος που ενεργοποιήθηκαν από κυκλοφορούντα ανοσοσυµπλέγµατα, προσρροφώνται από τα ερυθρά. 4. PCH

Έµµεση Coombs Εκτελείται για να ελέγξουµε την παρουσία αντισωµάτων στον ορό. Αυτά ανάλογα µε την αιτία είναι: Αλλοαντισώµατα ή Aυτοαντισώµατα

Πλήρης Φαινότυπος συνδυάζεται µε την ειδικότητα του ταυτοποιηµένου αντισώµατος Εάν τα αντισώµατα του ορού στρέφονται έναντι Agπου έχει ο ασθενής, αυτά είναι Αυτοαντισώµατα. Εάν στρέφονται έναντι Ag που λείπουν από τον ασθενή αυτά είναιαλλοαντισώµατα.

Είδη Elution Υπάρχουν τεχνικές που Βλάπτουν ή καταστρέφουν τα ερυθρά Απελευθερώνουν τα αντισώµατα αφήνοντας σχεδόν ανεπηρέαστα τα ερυθρά. Κάποια αντιγόνα µεταβάλλονται ανάλογα µε την τεχνική που χρησιµοποιείται.

Είδη Elution

DAT(+) elution + - Αυτό Ab (αντιδρά µε όλα) Άλλο Ab (έχει ειδικότητα) Mimicking Ab Ψευδώς (+) DAT Μικρή ποσότητα IgG Μόνο συστατικά C Αντι-Α, αντι-β Το αντίσωµα είναι IgA ή IgM Κακή Τεχνική

Το έκλουµα είναι θετικό Όταν το έκλουµα είναι θετικό µε όλα τα ερυθρά του πάνελ συνήθως πρόκειται για αυτοαντίσωµα Όταν είναι θετικό µε κάποια ερυθρά και µε άλλα όχι, τότε συνήθως πρόκειται για αλλοαντίσωµα µετά από πρόσφατη µετάγγιση. Mimicking αντίσωµα

Αυτοαντίσωµα που µιµείται αλλοαντίσωµα (Mimicking antibody) Εµφανίζονται κυρίως µετά από µετάγγιση. Το αυτοαντίσωµα εκφράζει ειδικότητα αλλοαντισώµατος Προσροφάται πάνω σε ερυθρά που είναι αρνητικά ως προς το αντιγόνο έναντι του οποίου στρέφονται. Τα πραγµατικά αλλοαντισώµατα προσκολλώνται µόνο πάνω σε ερυθρά θετικά ως προς το αντιγόνο για το οποίο έχουν ειδικότητα ενώ Τα mimicking προσροφώνται και σε θετικά και αρνητικά ως προς το αντιγόνο ερυθρά είτε αυτόλογα είτε αλλογενή.

Παράδειγµα: Ασθενής: c(-), Άµεση IgG(+) Εµµεση Coombs(+): ταυτοποιηθέν αντίσωµα anti-c Έκλουµα (+): ταυτοποιηθέν αντίσωµα anti-c από τα ερυθράτουασθενούςπουείναι c(-)!!!!!

Tο έκλουµα είναι αρνητικό Συνήθως πρόκειται για µη ειδική προσρόφηση σφαιρινών. Αν όµως το έκλουµα είναι αρνητικό και υπάρχει κλινικά αιµόλυση, πρέπει να ελεγχθεί και ΈναντιΑκαιΒερυθρών (αφούτοπάνελείναιεξορισµούο), ο ασθενής έχει µεταγγιστεί µε ασύµβατο πλάσµα ή αιµοπετάλια ή έχει προηγηθεί µεταµόσχευση από δότη διαφορετικής οµάδας ΑΒΟ ή υπάρχει HDN λόγω ασυµβατότητας ΑΒΟ µητέρας-νεογνού (νεογνό Α ή Β, µητέραο). Έναντι σπανίων αντιγόνων µε ερυθρά της µονάδας που µεταγγίστηκε ο ασθενής ή ταερυθράτουπατέραγιανεογνόµε HDN.. Μπορούν να χρησιµοποιηθούν άλλες τεχνικές εκλούµατος αύξησης της ευαισθησίας όπως συµπύκνωση, µεταβάλλοντας την αναλογία υγρού/ερυθρών, αύξηση επώασης, πλύσιµο ερυθρών µε LISS αντί φυσιολογικού ορού, χρήση PEG(Polyethylene glycol).

ΚΙΝ ΥΝΟΙ ΜΕΤΑΓΓΙΣΗΣ σε ΑΑΑ Πιθανή ύπαρξη αλλοαντισώµατος (αν έχει προηγηθεί µετάγγιση) ηµιουργία νέων αλλοαντισωµάτων που θα επιπλέξουν τις επόµενες µεταγγίσεις. Τα µεταγγισµένα ερυθρά πιθανόν να αιµολυθούν γρηγορότερα από τα δικά του. Η µετάγγιση από µόνη της προκαλεί άνοση αιµόλυση. Η διερεύνιση των επιπλοκών της µετάγγισης είναι πολύ δύσκολη

Αποφυγή αλλοαντισωµάτων Στόχος είναι να µην συµβεί επιπλέον αιµόλυσηλόγω του ή των αλλοαντισωµάτων. Αυτόλογη ΠΡΟΣΡΟΦΗΣΕΙΣ Τα αυτόλογαερυθρά επεξεργάζονται µε ένζυµα για να αφαιρεθούν τα αυτοαντισώµατακαι στη συνέχεια χρησιµοποιούνται για προσροφήσεις του ορού µε σκοπό να µείνει στο τέλος µόνο τυχόν αλλοαντίσωµα. εν εφαρµόζεται όταν προηγήθηκε πρόσφατη µετάαγγιση Αλλογενής Συνιστάται σε ασθενείς µε πρόσφατη µετάγγιση και είναι δύσκολη η επιλογή ερυθρών από αρκετούς δότες µε επιλεγµένους φαινοτύπους. Μειονεκτήµατα χρειάζονται 6-10 ώρες Πολλά αντιγόνα καταστρέφονται µε αποτέλεσµα το συµπέρασµα να µην είναι πάντα αξιόπιστο.

Εναλλακτική πρόταση για µετάγγιση αίµατος Εφόσον ο στόχος είναι η αποφυγή των αντιγόνων για τα οποία υπάρχει αλλοαντίσωµα που θα το ταυτοποιήσουµε µετά από χρονοβόρες διαδικασίες. Αντί για προσροφήσεις µπορούµε να ελέγξουµε το φαινότυπο του ασθενούς και να χορηγήσουµε αίµα σύµφωνα µε το φαινότυπο του ασθενούς τουλάχιστον ως προς τα κλινικά σηµαντικά αντιγόνα όταν αυτό είναι δυνατόν. Ο φαινότυπος ακόµα και µε αυτοαντισώµατα µπορεί να ελεγχθεί πολύ γρήγορα µε χρήση ενζύµων.

Χωρίς επεξεργασία Μετά επεξεργασία

ιερεύνηση ψυχρών αυτοαντισωµάτων Εάν χρειαστεί µπορούµε να εκτελέσουµε τις παρακάτω εξειδικευµένες εξετάσεις: DATσεθερµοκρασίες(37, 22, 4ο C) (Μόνοστους 4ήκαι 0oCανιχνεύονται τα ψυχρά IgMή IgG αντισώµατα) Elutionενψυχρώγιαναµηχάσουµε τοψυχρόαντίσωµα Από ΕΙΓΜΑ εν ΘΕΡΜΩ Πάνελ σε όλες τις θερµοκρασίες(37, 22, 4ο C) και σε κάρτα µε µόνο IgG για να αποφύγουµε τη δράση του C Έµµεση και µε I(-) ερυθρά σε όλες τις θερµοκρασίες και σε κάρτα IgG που πιθανόν να διευκρινίσει την ειδικότητα Προσρόφηση ψυχρού αυτοαντισώµατος για να φανούν τα αλλοαντισώµατα που πιθανόν κρύβονται Τίτλος Ψυχροσυγκολλητινών σε όλες τις θερµοκρασίες(37, 30, 22, 4ο C) για να εκτιµηθεί το θερµικό εύρος και ο τίτλος Donath Lansteiner test όταν όλα τα άλλα είναι αρνητικά και υπάρχει αιµόλυση ιάκριση IgG-IgM. Με χρήση ενζύµων και τιτλοποίηση

Χαµηλοί τίτλοι Αντι-Ι έως 1/64 υπάρχουν και φυσιολογικά. Ττλοι 1/128 1/528 δικαιολογούν εργαστηριακά προβλήµατα από το ψυχρό αντίσωµα. Τίτλος και ειδικότητα Τίτλοι >1/1024 είναι Παθολογικοί και παρατηρούνται σε CAS. Ειδικότητα ψυχροσυγκολλητίνης Anti-I, anti-i, anti-h Η ειδικότητα αν και έχει µόνο ακαδηµαικό ενδιαφέρον µπορεί να ελεγχθεί µε τιτλοποίηση σε πολλές σειρές ερυθρών:ο(+) Ι(+) Ενηλίκου, Ο(+) Ι(+) Ενηλίκου µε ένζυµο, Ο(+) Ι(-) Οµφαλίου λώρου, της ίδιας ως προς ΑΒΟ οµάδος (αν δεν είναι Ο) και Αυτόλογα ερυθρά

Μετάγγιση στην CAS Προτιµούµε σωληνάριο γενικής µε EDTA που αδρανοποιεί το Cή χρησιµοποιούµε Σουλφυδρυλικούς παράγοντες όπως 2-Μερκαπτοεθανόλη ή DDT που αποδοµούν τα IgM αντισώµατα. Ταυτοποίηση οµάδος από θερµό δείγµα. Πλύσιµο ερυθρών µε θερµό φυσιολογικό ορό Προσπάθεια περιορισµού της δράσης του ψυχρού αντισώµατος διατηρώντας τα κλινικά σηµαντικά. Όλα τα αντιδραστήρια και η επώαση στους 37 ο C µόνο. Αποφυγή ενισχυτικών µέσων, όπως λευκωµατίνη Φυγοκέντρηση σε θερµαινόµενη φυγόκεντρο ή επώαση για 2 ώρες χωρίς φυγοκέντρηση Χρήση µονοκλωνικού αντιορού αντι-igg (για την παράκαµψη του C3d)αντι του AHG(anti-IgG & C3d) Τεχνικές προσρόφισης. Μετάγγιση σε θερµό χώρο µε συσκευή θέρµανσης

Προσρόφηση Ψυχρού αυτοντισώµατος 1. Αυτοπροσρόφηση στους 4ο C 2. Χρήση ZZAP (µείγµα ενζύµων) πριν την προσρόφηση 3. Προσρόφηση σε REST ( οκιµασία προσρόφησης ψυχρών αυτοαντισωµάτων σε στρώµα κονίκλειων ερυθροκυττάρων) όπου γίνεται πλήρης προσρόφηση των ψυχρών αυτοαντισωµάτων anti-i, ή anti-h, ή anti-ih.)

Παροξυσµική Hbουρία από ψύχος (PCH) Παλαιώτερα στη Σύφιλη Σήµερα σε ιογενείς λοιµώξεις µικρών παιδιών IgG ιφασική αιµολυσίνη Συνδέεται στα ερυθρά σε χαµηλή θερµοκρασία Ενεργοποιεί το συµπλήρωµα µέχρι του C3, C4. Αιµολύει τα καλυµµένα µε συµπλήρωµα ερυθρά στους 37ºC. AHG(+) IgG(-) αρν C3d(+) Ειδικότητα αυτοαντισώµατος: αντι-p εν αντιδρά µόνο µε σπάνιο φαινότυπο p,p1k, p2k 1/200000

PCH Ο τίτλος του αντισώµατος(igg), που ανιχνεύεται στους 4ο C, είναι χαµηλός. Η έµµεση Coombs είναι αρνητική Οι διασταυρώσεις συµβατές. Τα µόνα θετικά ευρήµατα στην PCH, είναι το C3d και το ειδικό τεστ Donath-Landstainer Test(DLT),

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Επιφύλαξη στο να δώσουμε αρνητικό αποτέλεσμα όταν υπάρχουν εργαστηριακά αιμόλυσης Η εκτέλεση των δοκιμασιών σε διάφορες Η εκτέλεση των δοκιμασιών σε διάφορες θερμοκρασίες και με χρήση ενισχυτικών μέσων μπορεί να αποκαλύψει ευρήματα που με την πρώτη ματιά ήταν αρνητικά.

Καλά Χριστούγεννα