ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΟΙ ΑΝΑΠΝΕΥΣΤΙΚΟΥ ΕΝΗΛΙΚΩΝ ΜΕ ΚΥΣΤΙΚΗ ΙΝΩΣΗ Παναγέα Θ. 1, Δημητρουλέα Α. 1, Βελετζά Αικ. 1, Σκαρμούτσου Ν. 1, Σταμούλος Κ. 1, Βελεγράκη Α. 2, Μαρτσούκου Μ. 1 1 Βιοπαθολογικό Τμήμα, Γ.Ν. Σισμανόγλειο- Α.Φλέμιγκ 2 Μικροβιολογικό Τμήμα, Ιατρική Σχολή ΕΚΠΑ
Εισαγωγή Η παρουσία μικροοργανισμών στο αναπνευστικό σύστημα ασθενών με κυστική ίνωση σχετίζεται με κλινική επιδείνωση. P.aeruginosa: βλεννώδης φαινότυπος και χρόνια λοίμωξη P.a. επιτάχυνση επιδείνωσης πνευμονικής λειτουργίας S.aureus και φαινότυπος Small Colony Variant (SCV): κακή κλινική πορεία σε παιδιά CF. Burkholderia cepacia complex
Λοιποί μικροοργανισμοί S.maltophilia Achromobacter spp H.influenzae Λοιπά αζυμωτικά (Ralstonia spp, Pandoreae spp, κ.ά.) Aspergillus spp Scedosporium spp Τrichosporon spp Άτυπα μυκοβακτηρίδια (M.abscessus complex, M.avium complex)
ΣΚΟΠΟΣ Εκτίμηση αποικισμού-λοίμωξης του αναπνευστικού συστήματος ενηλίκων CF ασθενών από διάφορους μικροοργανισμούς χρόνιας λοίμωξης από P.aeruginosa λοίμωξης από ανθεκτικά παθογόνα
Υλικό και μέθοδοι (κοινές καλλιέργειες) 277 ποσοτικές κ/ες πτυέλων από 155 CF ασθενείς στη διάρκεια 7 μηνών (1/3/2017 έως 30/9/2017) στο Μικροβιολογικό Τμήμα του Γ.Ν.Σισμανογλείου-Α.Φλέμιγκ Ταυτοποίηση: μέθοδοι κλασσικής μικροβιολογίας (Microscan71- Siemens) Scedosporium spp. και Pseudallescheria boydii με ITS sequencing Έλεγχος ευαισθησίας με Kirby-Bauer(όρια CLSI) Colistin: μέθοδος μικροαραιώσεων σε ζωμό (Microscan) και επί αντοχής επιβεβαίωση με Sensitest Colistin (Liofilchem).
Υλικό και μέθοδοι (μυκοβακτηρίδια) Κατά το ίδιο διάστημα πραγματοποιήθηκαν: 72 κ/ες μυκοβακτηριδίων πτυέλων σε 32 CF ασθενείς Σε όλες τις κοινές κ/ες έγινε παράταση επώασης του B.cepacia agar(mast) για 2 εβδομάδες για απομόνωση ταχέως αναπτυσσόμενων ατύπων μυκοβακτηριδίων. Ταυτοποίηση με GenotypeMycobacteriumCM ver 2.0,Hain(Life Science)
Εκτίμηση χρονιότητας λοίμωξης από P.a. Τροποιημένα κριτήρια Lee (ανασκόπηση κ/ων 1 έτους 1/10/16-30/9/17) (Lee, T.W.R.et al., 2003. J. Cyst. Fibros. 2, 29 34) Ορισμός χρόνιας λοίμωξης (απαιτούνται τουλάχιστον 2 κ/ες εντός 1 έτους): 3 κ/ες ετησίως: τουλάχιστον 2 θετικές για P.a. (με χρονική διαφορά τουλάχιστον 3 μηνών) 2 κ/ες ετησίως: και οι 2 θετικές για P.a. (με διαφορά τουλάχιστον 3 μηνών)
Αποτελέσματα Αριθμός δειγμάτων ανά ασθενή 4 (2.6%) 1 (0.6%) 30 (19.3%) 46 (29.7%) 74 (47.7%) 1 κ/α 2 κ/ες 3 κ/ες 4 κ/ες 5 κ/ες
Αποτελέσματα (κοινές καλλιέργειες) Καταγράφηκαν: Αζυμωτικά Gr (-) βακτηρίδια (ID score 85%) S.aureus H.influenzae Υφομήκυτες Aspergillus spp Scedosporium spp Trichosporon spp. Εξαιρέθηκαν 20 στελέχη αζυμωτικών Gr(-) βακτηριδίων από 10 ασθενείς με ID score <85% (A.xylosoxidans, n=9, Alcaligenes spp, n=11, κολιστίνη ευαίσθητα)
Μικροοργανισμός Αριθ. στελεχών P.a βλεννώδης 148 P.a.μη βλεννώδης 208 S.maltophilia 32 Achromobacter xylosoxidans 39 Alcaligenes spp 13 P.stutzeri 2 P.orizyhabitans 1 P.fluorescens 1 P.putida 1 Ral.pickettii 2 S.aureus 118 S.aureus SCV 17 H.influenzae 10 A.fumingatus 28 A.flavus 10 A.niger 2 Sced.apiospermum 4 Sced.prolificans 1 Pseudallescheria boydii 4
Μικροοργανισμοί ανά ασθενή 12 10 8 6 4 2 0 1 5 9 13 17 21 25 29 33 37 41 45 49 53 57 61 65 69 73 77 81 85 89 93 97 101 105109 113117 121125 129133 137 141145 149153 Pa S.malt Achr.xylosoxidans Alcaligenes spp P.stutzeri P.orizyhabitans P.putida S.a H.influenzae Asp.fumingatus Asp.flavus Asp.niger Scedosporium spp Pseudallescheria boydii Ralstonia picketii
Αρ.ασθενών 140 75.5% Aποικισμός - λοίμωξη CF ασθενών ανά μικροοργανισμό 120 100 60.6% 80 60 40 20 0 11.6% 13.5% 5.8% 43.9% 11.6% 1.3%0.6% 0.6% 1.3% 7.1% 1.3% 0.6% 5.2% 3.9% 1.3% 1.3% Δεν απομονώθηκαν B.cepacia complex και Trichosporon spp από κανέναν ασθενή.
Μικροβιακός αποικισμός - λοίμωξη CF ασθενών Αρ.ασθενών 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 26.4% 5.8% 0.6% 0.6% μόνο P.a. μόνο S.au μόνο Asp.fum μόνο Scedo.apio 29.7% P.a και S.au 1 μικροοργανισμός
Χρόνια λοίμωξη από P.a. και ανθεκτικά παθογόνα - Χρόνια P.a. λοίμωξη: 64.7% των ασθενών (79 από 122 ασθενείς) MRSA 8.4% MDR P.a 16.1% 64.7% Χρόνια P.a. 0 20 40 60 80 100 Αρ.ασθενών - 60.3% των δειγμάτων(167 από 277) έφεραν υψηλό μικρ.φορτίο( 10^6) και 65.3% από αυτά είχαν υψηλό φορτίο P.a.( 10^6) (n=109).
Απομόνωση P.aeruginosa και S.aureus σε σχέση με ηλικία ασθενούς 50 45 40 35 30 25 20 15 Αρ.ασθενών P.a. S.a. 10 5 0 18-20 21-25 26-30 31-35 36-40 41-45 46-50 51-55 70 Ηλικία ασθενών: διάμεση τιμή:28 έτη, μέσος όρος: 30.1
Αντοχή P.aeruginosa στα αντιβιοτικά Χρησιμοποιήθηκαν τα αποτελέσματα 1 κ/ας για κάθε ασθενή (η πιο πρόσφατη κ/α που ανέπτυσε P.a.) Βλεννώδη στελέχη: n=95 Μη βλεννώδη στελέχη: n=132 % 70 60 50 40 30 20 10 0 P.a. βλεν P.a μη βλεν
Αποτελέσματα - μυκοβακτηρίδια - 5 ασθενείς είχαν λοίμωξη από άτυπα μυκοβακτηρίδια: 4 M.abscessus complex 1 M.intracellulare Όλα τα M.abscessus complex αναπτύχθηκαν στο B.cepacia agar (πρώτη απομόνωση για 1 ασθενή).
Αποτελέσματα - Συμπεράσματα Η λοίμωξη από βλεννώδη φαινότυπο P.a., η λοίμωξη από S.a. και η χρόνια λοίμωξη από P.a., είναι σχετικά υψηλή στην ομάδα ενηλίκων CF ασθενών που ελέγχθηκαν. Η απομόνωση λοιπών αζυμωτικών, μυκήτων και NTM παραμένει χαμηλή. Η P.a. συνήθως συνυπάρχει με άλλους μικροοργανισμούς, ενώ αποτελούσε το μόνο παθογόνο στο ¼ των ασθενών
Αποτελέσματα-Συμπεράσματα Ο μη βλεννώδης φαινότυπος P.a. εμφανίζει υψηλότερα ποσοστά αντοχής σε σχέση με το βλεννώδη. Η λοίμωξη από MDR P.a., παρότι όχι ανησυχητικά υψηλή, θα μπορούσε να αποτελέσει πρόβλημα σε αυτούς τους ασθενείς, αναδεικνύοντας την σημασία εφαρμογής μέτρων ελέγχου λοιμώξεων. Το B.cepacia agar ήταν χρήσιμο στο screening των ασθενών για λοίμωξη από M.abscessus complex.
Βιβλιογραφικές αναφορές 1. Laboratory Standards for Processing Microbiological Samples from people with Cystic Fibrosis. The UK CF Trust Microbiology Laboratory Standards Working Group. 2010, 1 st ed. 2. Lee, T.W.R.et al., 2003. J. Cyst. Fibros. 2, 29 34 1. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 3.11.3. Respiratory cultures from CF patients, 2015, 11 th ed. 1. Gilligan PH. Clin Lab Med. 2014 Jun;34(2):197-217 1. Parad et al. Infect Immun. 1999 Sep;67(9):4744-50