Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας Τμήμα Βιοχημείας & Βιοτεχνολογίας Χειμερινό Ακαδημαϊκό Εξάμηνο 2016_17. Αμανατιάδου Π. Έλσα, PhD

Σχετικά έγγραφα
Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας Τμήμα Βιοχημείας & Βιοτεχνολογίας Χειμερινό Ακαδημαϊκό Εξάμηνο 2016_17

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗ ΒΙΟΛΟΓΙΑ

Σύντομη Περιγραφή Συνολικής Προόδου Φυσικού Αντικειμένου από την έναρξη του έργου μέχρι τις 30/06/2015

Βιοστατιστική ΒΙΟ-309

Εικόνα 1. Αιµοκυτταρόµετρο. A. Πλάγια όψη και κάτοψη τυπικού αιµοκυτταρόµετρου, που φέρει δύο πλέγµατα µέτρησης. Β. Μεγεθυµένη άποψη του πλέγµατος

Βιοστατιστική ΒΙΟ-309

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

Εισαγωγή. Οι β-θαλασσαιμίες αποτελούν μία ετερογενή ομάδα κληρονομικών νοσημάτων που χαρακτηρίζονται από μειωμένη σύνθεση των β-αλυσίδων της αιμοσφαιρ

Μάθημα «Εισαγωγή στις Βιοϊατρικές Επιστήμες»

Σχεδιασμός και Διεξαγωγή Πειραμάτων

Βιοστατιστική ΒΙΟ-309

Ερευνητικές Εργασίες

ιαγονιδιακή τεχνολογία G. Patrinos

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

(CTL) κλώνων στον καρκίνο του πνεύμονα

ΒΙΟΛΟΓΙΑ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ Γ ΛΥΚΕΙΟΥ

Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας Τμήμα Επιστήμης Φυσικής Αγωγής & Αθλητισμού. ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ ΕΡΕΥΝΑΣ & ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΗ Γ Εξάμηνο

ΕΙΔΗ ΕΡΕΥΝΑΣ I: ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΗ ΕΡΕΥΝΑ & ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΟΙ ΣΧΕΔΙΑΣΜΟΙ

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

Εισαγωγή - Πειραματικοί Σχεδιασμοί. Κατσιλέρος Αναστάσιος

Ο όρος Βλαστικά κύτταρα περιλαμβάνει κυτταρα με διαφορετικές ιδιότητες:

Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας Τμήμα Βιοχημείας & Βιοτεχνολογίας Χειμερινό Ακαδημαϊκό Εξάμηνο 2016_17

Περιεχόμενα. ΚΕΦΑΛΑΙΟ 1 Κατευθύνσεις στην έρευνα των επιστημών υγείας. ΚΕΦΑΛΑΙΟ 2 Έρευνα και θεωρία

ΠΕΤΡΟΣ ΔΕΔΕΣ ΔΙΔΑΚΤΟΡΙΚΗ ΔΙΑΤΡΙΒΣΙ ΠΕΡΙΛΗΨΗ

Βιοπληροψορική, συσιημική βιολογία και εξατομικευμένη θεραπεία

ΕΞΩΤΕΡΙΚΕΣ ΔΙΠΛΩΜΑΤΙΚΕΣ ΕΡΓΑΣΙΕΣ

Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΒΙΟΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΤΗ RHIZOACTIVE ΣΤΗΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΤΟΥ ΜΑΡΟΥΛΙΟΥ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΤΟΥ ΡΙΖΙΚΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΑΝΤΩΝΙΑΔΗΣ ΚΩΝΣΤΑΝΤΙΝΟΣ

ΕΘΝΙΚΟ ΚΑΙ ΚΑΠΟΔΙΣΤΡΙΑΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ ΣΧΟΛΗ ΘΕΤΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΤΜΗΜΑ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ ΤΟΜΕΑΣ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑΣ ΚΑΙ ΜΟΡΙΑΚΗΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

Η δειγματοληψία Ι. (Από Saunders, Lewis & Thornhill 2009)

ΜΕ ΕΠΕΑΕΚ: ΑΝΑΜΟΡΦΩΣΗ ΤΟΥ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΟΣ ΣΠΟΥΔΩΝ ΤΟΥ ΤΕΦΑΑ ΠΘ ΑΥΤΕΠΙΣΤΑΣΙΑ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΕΠΙΣΤΗΜΗΣ ΦΥΣΙΚΗΣ ΑΓΩΓΗΣ & ΑΘΛΗΤΙΣΜΟΥ

ΑΝΟΣΟΒΙΟΛΟΓΙΑ. Εξεταστική Ιανουαρίου 2010

ΜΕΛΕΤΗ ΚΑΙ ΚΛΙΝΙΚΗ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΟΥ ΝΕΟΥ ΑΠΟΠΤΩΤΙΚΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ BCL2L12 ΚΑΙ ΤΗΣ L-DOPA ΑΠΟΚΑΡΒΟΞΥΛΑΣΗΣ ΣΤΟΝ ΚΑΡΚΙΝΟ ΤΟΥ ΠΑΧΕΟΣ ΕΝΤΕΡΟΥ

ΓΕΝΙΚΗ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑ. Μαντώ Κυριακού 2015

Μεταλλαξιγένεση Παναγούλιας Ιωάννης, MSc,PhD

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

Περιεχόμενα. Πρόλογος... 15

5.1 Ο ΕΛΕΓΧΟΣ SMIRNOV


ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ. Θεωρία - Πείραμα Μετρήσεις - Σφάλματα

Εναλλακτικά του πειράματος

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

Μάθημα: «Μεθοδολογία έρευνας» Μορφές επικοινωνίας μεταξύ νηπιαγωγείου και οικογένειας

Περιγραφική και πειραματική έρευνα

Διάλεξη 2. Εργαλεία θετικής ανάλυσης Ή Γιατί είναι τόσο δύσκολο να πούμε τι συμβαίνει; Ράπανος-Καπλάνογλου 2016/7

ΜΕΛΕΤΗ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΤΟΥ ΚΑΡΚΙΝΟΥ ΤΟΥ ΜΑΣΤΟΥ ΣΤΗ ΘΕΡΑΠΕΙΑ

Προβλήματα σχετιζόμενα με την τυποποίηση αντιγόνων Ι

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

ΔΟΜΗ ΤΗΣ ΓΡΑΠΤΗΣ ΕΡΓΑΣΙΑΣ. Η γραπτή εργασία θα περιλαμβάνει τα παρακάτω μέρη:

ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ. ΠΡΟΛΟΓΟΣ... vii ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ... ix ΓΕΝΙΚΗ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ... xv. Κεφάλαιο 1 ΓΕΝΙΚΕΣ ΕΝΝΟΙΕΣ ΑΠΟ ΤΗ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΗ

Θεμελιώδεις αρχές επιστήμης και μέθοδοι έρευνας

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ Α ΕΞΑΜΗΝΟΥ ΤΜΗΜΑΤΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ

4 ο Εργαστήριο (βιωματικό) Ενδεικτικός χρονοπρογραμματισμός των Ομάδων

Μεθοδολογία ερευνητικής εργασίας

Άσκηση 1 : Μικροβιακή κινητική (Τρόποι μέτρησης βιοκαταλυτών)

ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ ΕΡΕΥΝΑΣ. Κοινωνικά Πειράματα. Καθηγητής Α. Καρασαββόγλου Επίκουρος Καθηγητής Π. Δελιάς

Κεφάλαιο 1. Εισαγωγή

ΟΡΓΑΝΩΣΗ ΚΑΙ ΥΛΟΠΟΙΗΣΗ ΜΙΑΣ ΕΡΕΥΝΑΣ. ΜΑΝΟΥΣΟΣ ΕΜΜ. ΚΑΜΠΟΥΡΗΣ, ΒΙΟΛΟΓΟΣ, PhD ΙΑΤΡΙΚHΣ

Σ ΤΑΤΙΣΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ

Οργανοτυπικές Καλλιέργειες

Γιάννης Τούρλος, ΠΕ 17 Ηλεκτρολόγος, Πρόεδρος Πανελλήνιας Ένωσης Καθηγητών Τεχνολογίας (ΠΕΚΑΤΕ)

Γ. Πειραματισμός - Βιομετρία

Εισαγωγή στην κοινωνική έρευνα. Earl Babbie. Κεφάλαιο 7. Κοινωνικά πειράματα 7-1

Τρόπος Παράδοσης Πρόσωπο με πρόσωπο διδασκαλία καθ έδρας Παρακολούθηση διαλέξεων (διδασκαλία), εργαστηριακών ασκήσεων και φροντιστηριακών μαθημάτων.

Τμήμα Διοίκησης Επιχειρήσεων (Γρεβενά) Μάθημα: Στατιστική II Διάλεξη 1 η : Εισαγωγή-Επανάληψη βασικών εννοιών Εβδομάδα 1 η : ,

Αρχικά αδιαφοροποίητα κύτταρα που έχουν την ικανότητα να διαφοροποιούνται σε ιστικά εξειδικευμένους κυτταρικούς τύπους.

ΒΙΟΛΟΓΙΑ ΘΕΤΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ

Επανάληψη ελέγχων υποθέσεων

Γονιδιωματική. G. Patrinos

ΘΕΡΜΙΚΗ ΘΑΝΑΤΩΣΗ ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΩΝ

ΣΧΕΔΙΟ ΜΑΘΗΜΑΤΟΣ. Ενότητα : ΝΟΜΟΙ ΙΔΑΝΙΚΩΝ ΑΕΡΙΩΝ: ΙΣΟΧΩΡΗ ΜΕΤΑΒΟΛΗ ΝΟΜΟΣ CHARLES ΔΙΔΑΚΤΙΚΟΙ ΣΤΟΧΟΙ. Θεωρητική υποστήριξη

ΒΙΟΛΟΓΙΑ: Η επιστήμη της ζωής

Διπλωματική Εργασία: «Συγκριτική Μελέτη Μηχανισμών Εκτίμησης Ελλιπούς Πληροφορίας σε Ασύρματα Δίκτυα Αισθητήρων»

ΠΟΣΟΤΙΚΗ ΓΕΝΕΤΙΚΗ 03. ΜΕΣΗ ΤΙΜΗ & ΔΙΑΚΥΜΑΝΣΗ

2) Ανάπτυξη βασικών αρχών της in vivo μεταφοράς γονιδίων με την βοήθεια ειδικών συστημάτων μεταφοράς (πλασμίδια, αδενοϊοί)

ΓΕΝΙΚO ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΦΥΣΙΚΗΣ

Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. Ερευνητικό Κέντρο Αθηροθρόμβωσης. Σ. Παπαδάκη 1, Σ. Σιδηροπούλου 1, Β. Χαντζηχρήστος 1, Μ. Πασχόπουλος 2, Α.

ΑΤΕΙΘ Β ΕΞΑΜΗΝΟ Πεδίο Β2-Μοριακή προ- και μετα-γεννητική διάγνωση ασθενειών Συμμετρίες και μοριακή θερμοδυναμική βιομορίων

Γιάννης Τούρλος, ΠΕ 17 Ηλεκτρολόγος, Πρόεδρος Πανελλήνιας Ένωσης Καθηγητών Τεχνολογίας (ΠΕΚΑΤΕ)

Αλάτι - To καλό, το κακό και το νόστιµο

Στατιστική Συμπερασματολογία

Πληροφορική Βάσεις Δεδομένων (Θ και Ε) Α/Α Εξάμηνο 3 ο (Γ') ΔΜ ΠΜ Α/Α Εξάμηνο 4 ο (Δ') ΔΜ ΠΜ Διατροφική Αγωγή (Θ και Ε) 4 5

ΑΝΑΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΚΥΤΤΑΡΩΝ

Ε.Κ.Φ.Ε ΑΓΙΩΝ ΑΝΑΡΓΥΡΩΝ

ΒΙΟΛΟΓΙΑ ΘΕΤΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ

Ειδικές μέθοδοι ανάλυσης κυτταρικών διεργασιών Απομόνωση λεμφοκυττάρων από τη σπλήνα ποντικού

ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΑΝΑΡΤΗΤΕΑ ΣΤΟ ΔΙΑΔΙΚΤΥΟ

Συγγραφή επιστημονικής εργασίας ΨΧ 126

Δασική Γενετική Εισαγωγή: Βασικές έννοιες

Α. Ερωτήσεις Σωστού - Λάθους

Ερευνητική υπόθεση. Η ερευνητική υπόθεση αναφέρεται σε μια συγκεκριμένη πρόβλεψη σχετικά με τη σχέση ανάμεσα σε δύο ή περισσότερες μεταβλητές.

Π Ρ Ο Σ Κ Λ Η Σ Η Ε Κ Δ Η Λ Ω Σ Η Σ Ε Ν Δ Ι Α Φ Ε Ρ Ο Ν Τ Ο Σ Ε Ξ Ω Τ Ε Ρ Ι Κ Ο Υ Σ Υ Ν Ε Ρ Γ Α Τ Η

ΙΪΚΟΙ ΦΟΡΕΙΣ & Γενετικά Τροποποιημένα Κύτταρα

ΑΝΤΟΧΗ ΥΛΙΚΩΝ Εισαγωγή. ΕργαστηριακήΆσκηση1 η

Transcript:

7 Πανεπιστήμιο Θεσσαλίας Τμήμα Βιοχημείας & Βιοτεχνολογίας Χειμερινό Ακαδημαϊκό Εξάμηνο 2016_17 Αμανατιάδου Π. Έλσα, PhD eamanat@pharm.auth.gr Κυτταροκαλλιέργειες: Σχεδιασμός πειραμάτων με τη χρήση κυτταροκαλλιεργειών - Παραδείγματα

ΣΧΕΔΙΑΣΜΟΣ ΠΕΙΡΑΜΑΤΩΝ ΜΕ ΚΥΤΤΑΡΟΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ: Σαφής διατύπωση του ερευνητικού ερωτήματος (!) Επιλογή μοντέλου- συγκριτικών μοντέλων (κριτήρια) Ορισμός μεταβλητών παραμέτρων πειράματος (π.χ. χρονοεξαρτώμενη/ δοσοεξαρτώμενη επίδραση) Καλλιέργειες αναφοράς (ενσωμάτωση θετικών και αρνητικών προτύπων αναφοράς) Κυτταρική ανάλυση, Μεθοδολογίες που χρησιμοποιούνται σε σύζευξη με την καλλιέργεια ευκαρυωτικών κυττάρων για την παρατήρηση του αποτελέσματος (όπως οπτική παρατήρησηφαινότυπος, μεταβολή της κυτταρικής ανάπτυξης-θανάτου, απομόνωση DNA/RNA/πρωτεϊνικών δειγμάτων και μοριακή ανάλυση κ.ά.) Επαναληψιμότητα πειραμάτων, Βιολογικές/τεχνικές επαναλήψεις, Στατιστική ανάλυση διαφορών 2/14

2 Βασικά κριτήρια επιλογής πειραματικού μοντέλου όπως: Είδος προέλευσης (π.χ. άνθρωπος, ποντίκι) Προσομοίωση του ιστού προέλευσης (π.χ. φαινοτυπικά χαρακτηριστικά κυττάρων, βαθμός διαφοροποίησης, προφίλ γονιδιακής έκφρασης) Διαθεσιμότητα μοντέλου Επαρκής χαρακτηρισμός Συνεχής ή μη κυτταρική σειρά Φυσιολογικά ή μεταμορφωμένα κύτταρα (φυσιολογικά διπλοειδή κύτταρα ή συνεχή κυτταρική σειρά μεταμορφωμένων κυττάρων) - Συγκριτικές μελέτες (π.χ. καρκινική σε σχέση με αντίστοιχη φυσιολογική κυτταρική σειρά) - Έκφραση φυσιολογικών ή μεταλλαγμένων μορφών των μακρομορίων ενδιαφέροντος-μελέτης, αντίστοιχα μονοπάτια ενδοκυττάριας σηματοδότησης Επιδεκτικότητα χειρισμών (π.χ. χαρακτηριστικά ανάπτυξης, ευκολία μετασχηματισμού) Η ίδια κυτταρική σειρά σε άλλο πείραμα μπορεί να εξυπηρετεί διαφορετικό ερευνητικό σκοπό 3/14

Cell growth (x 10⁴ cells/ml) Cell death (% trypan blue + cells) 6 Γραφήματα κυτταρικής ανάπτυξης- κυτταρικού θανάτου Παράδειγμα: Επίδραση φαρμάκου ετοποσίδη σε λευχαιμικά κύτταρα ΜΕL MEL MEL MEL + Drug MEL + Drug 24 48 72 96 24 48 72 96 Time (hrs) Time (hrs) 4/14

6 Ερμηνεία αποτελεσμάτων.. Επιδρά το φάρμακο στα κύτταρα στη συγκεκριμένη συγκέντρωση?? Είναι χρονοεξαρτώμενη η επίδρασή του?? Περιορίζει το φάρμακο τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό?? Έχει το φάρμακο κυτταροτοξική δράση?? Σε ποια φάση της καμπύλης ανάπτυξης είναι περισσότερο ορατή η επίδραση?? Πιθανός μηχανισμός δράσης..?? 5/14

ΠΑΡΑΔΕΙΓΜΑ: ΕΚΤΙΜΗΣΗ ΤΗΣ ΑΝΤΙΝΕΟΠΛΑΣΜΑΤΙΚΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΦΑΡΜΑΚΩΝ ΣΕ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΛΕΥΧΑΙΜΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ Κύτταρα Κ562 (ανθρώπινα, χρόνια μυελογενή λευχαιμία) http://www.addexbio.com/productdetail?pid=52 Φ1 Φ2 Φ3 καλλιέργεια αναφοράς (control) (10 ⁹-10 ³M) (10 ⁹-10 ³M) (10 ⁹-10 ³M) Μέτρηση της κυτταρικής ανάπτυξης μετά από 48hrs Η επίδραση των διαφορετικών φαρμάκων στην κυτταρική ανάπτυξη προσδιορίστηκε με αιμοκυτταρόμετρο: υπολογισμός % κυτταρικής ανάπτυξης και προσδιορισμός IC50 για κάθε Φ 6/14

ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Κύτταρα Κ562 (1ml καλλιέργειας, Cαρχ = 10⁵κύτταρα/ml) επωάστηκαν σε 24well plate για 48ώρες με τα φάρμακα Ετοποσίδη, Μεθοτρεξάτη, Κυταραβίνη (Ara-C). Καλλιέργειες που δεν προστέθηκε φάρμακο αποτελούν τις καλλιέργειες αναφοράς Χρησιμοποιήθηκαν συγκεκριμένες συγκεντρώσεις των φαρμάκων σε κλίμακα 10 ⁹ - 10 ³ M Στο χρονικό σημείο 48 ωρών μετράται ο αριθμός των κυττάρων κάθε καλλιέργειας με τη βοήθεια αιμοκυτταρόμετρου Γίνονται γραφικές παραστάσεις της % κυτταρικής ανάπτυξης για κάθε καλλιέργεια σε σχέση με τις διαφορετικές συγκεντρώσεις των Φ που χρησιμοποιήθηκαν Υπολογισμός της IC₅₀ για κάθε φάρμακο (IC: Inhibitory Concentration, συγκέντρωση Φ που προκαλεί αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης κατά 50%) 7/14

ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Φ1 Φ1 Φ1 10 9M Φ1 Φ1 Φ1 10 8M Φ1 Φ1 Φ1 10 7M 10 9M 10 7M 10 9M 10 8M 10 8M 10 7M Φ1 Φ1 Φ1 10 6M 10 6M 10 6M Φ1 Φ1 Φ1 10 5M Φ1 Φ1 Φ1 10 4M Φ1 Φ1 Φ1 10 3M 10 5M 10 4M 10 3M 10 5M 10 4M 10 3M cntr cntr cntr Πειραματικός σχεδιασμός: 24 well plate (1ml καλλιέργειας, Cαρχ=10⁵ κυτ/ml) από την stock καλλιέργεια με εφαρμογή του τύπου C1xV1 = C2xV2 Εύρος συγκεντρώσεων Φαρμάκου: 10 ³ - 10 ⁹Μ & καλλιέργειες αναφοράς! Χρόνος επώασης με το φάρμακο: 48 ώρες Τριπλή επανάληψη Ομοίως για τα άλλα δύο Φ.. Πιθανά λάθη στην προετοιμασία?? 8/14

ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Χρονικό σημείο 48 ωρών Φ1 Φ2 Φ3 Μικροσκοπική παρατήρηση!!! Πολύ καλή ομογενοποίηση κάθε δείγματος καλλιέργειας φόρτωση πλάκας Neubauer http://www.microbehunter.com/thehemocytometer-counting-chamber/ Προσδιορισμός κυτταρικής ανάπτυξης και % κυτταρικής ανάπτυξης σε κάθε δείγμα 9/14

ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Μεθοτρεξάτη (ΜΤΧ) 1 η μέτρηση 2 η μέτρηση Κυταραβίνη (Αra-C) 1 η μέτρηση 2 η μέτρηση control Α: 41 B: 42 C: 31 D: 38 1 x 10-9 M Α: 39 B: 28 C: 34 D: 47 1 x 10-8 M Α: 36 B: 23 C: 23 D: 21 1 x 10-7 M Α: 6 B: 12 C: 12 D: 11 1 x 10-6 M Α: 5 B: 4 C: 3 D: 11 1 x 10-5 M A: 10 B: 7 C: 6 D: 11 1 x 10-4 M A: 2 B: 3 C: 6 D: 3 1 x 10-3 M A: 1 B: 0 C: 1 D: 0 A: 35 B: 26 C: 43 D: 41 A: 40 B: 34 C: 29 D: 43 Α: 23 B: 26 C: 19 D: 11 A: 10 B: 4 C: 8 D: 12 A: 10 B: 7 C: 9 D: 4 A: 8 B: 12 C: 8 D: 13 A: 4 B: 2 C: 5 D: 5 A: 2 B: 0 C: 1 D: 2 Α: 12 B: 39 C: 25 D: 37 Α: 30 B: 17 C: 27 D: 27 Α: 27 B: 18 C: 23 D: 36 Α: 9 B: 8 C: 15 D: 13 Α: 8 B: 6 C: 11 D: 8 A: 10 B: 8 C: 7 D: 6 A: 4 B: 6 C: 3 D: 8 A: 2 B: 0 C: 3 D: 2 A: 31 B: 27 C: 25 D: 35 A: 32 B: 34 C: 44 D: 30 A: 21 B: 23 C: 26 D: 17 A: 8 B: 19 C: 11 D: 15 A: 5 B: 6 C: 8 D: 10 A: 8 B: 5 C: 3 D: 3 A: 2 B: 3 C: 1 D: 2 A: 2 B: 3 C: 1 D: 0 control Α: 74 B: 96 C: 77 D: 82 1 x 10-9 M Α: 67 B: 62 C: 72 D: 71 1 x 10-8 M Α: 50 B: 39 C: 31 D: 45 1 x 10-7 M Α: 18 B: 11 C: 12 D: 16 1 x 10-6 M Α: 10 B: 9 C: 10 D: 12 1 x 10-5 M A: 8 B: 3 C: 7 D: 7 1 x 10-4 M A: 7 B: 9 C: 4 D: 5 1 x 10-3 M A: 2 B: 2 C: 5 D: 8 A: 58 B: 54 C: 71 D: 82 A: 80 B: 66 C: 65 D: 70 Α: 39 B: 39 C: 32 D: 28 A: 12 B: 15 C: 12 D: 13 A: 17 B: 12 C: 15 D: 8 A: 5 B: 5 C: 8 D: 7 A: 7 B: 6 C: 4 D: 5 A: 1 B: 3 C: 0 D: 2 Α: 81 B: 74 C: 75 D: 62 Α: 72 B: 66 C: 76 D: 73 Α: 45 B: 42 C: 48 D: 42 Α: 9 B: 11 C: 18 D: 13 Α: 19 B: 23 C: 17 D: 15 A: 10 B: 7 C: 8 D: 9 A: 5 B: 9 C: 10 D: 8 A: 2 B: 2 C: 1 D: 1 A: 70 B: 76 C: 89 D: 65 A: 71 B: 68 C: 72 D: 72 A: 32 B: 37 C: 43 D: 40 A: 10 B: 14 C: 11 D: 13 A: 10 B: 7 C: 9 D: 6 A: 8 B: 5 C: 8 D: 8 A: 5 B: 4 C: 2 D: 3 A: 3 B: 1 C: 0 D: 1 10/14

ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Ετοποποσίδης (Etoposide) 1 η μέτρηση 2 η μέτρηση control Α: 95 B: 100 C: 85 D: 99 A: 98 B: 101 C: 79 D: 88 Α: 88 B: 95 C: 110 D: 98 A: 92 B: 109 C: 97 D: 80 Υπολογισμός % Κυτταρικής ανάπτυξης: 1 x 10-9 M Α: 84 B: 88 C: 92 D: 83 1 x 10-8 M Α: 58 B: 60 C: 70 D: 62 1 x 10-7 M Α: 46 B: 59 C: 49 D: 49 1 x 10-6 M Α: 16 B: 10 C: 16 D: 11 1 x 10-5 M A: 13 B: 11 C: 10 D: 16 A: 91 B: 80 C: 94 D: 85 Α: 66 B: 82 C: 66 D: 58 A: 47 B: 52 C: 55 D: 52 A: 12 B: 12 C: 8 D: 10 A: 11 B: 10 C: 16 D: 10 Α: 99 B: 93 C: 87 D: 73 Α: 50 B: 61 C: 55 D: 59 Α: 60 B: 51 C: 59 D: 48 Α: 11 B: 17 C: 9 D: 17 A: 15 B: 11 C: 8 D: 12 A: 87 B: 84 C: 100 D: 70 A: 58 B: 65 C: 68 D: 68 A: 51 B: 49 C: 47 D: 60 A: 13 B: 12 C: 15 D: 15 A: 17 B: 15 C: 9 D: 11 % Κυτταρική Ανάπτυξη Κυτταρική Ανάπτυξη στο δείγμα με Φ Μ.Ο. = x Μ.Ο. Κυτταρική Ανάπτυξη της καλλιέργειας αναφοράς 100% 1 x 10-4 M A: 16 B: 11 C: 14 D: 14 A: 12 B: 12 C: 12 D: 12 A: 19 B: 11 C: 6 D: 14 A: 15 B: 7 C: 13 D: 13 1 x 10-3 M A: 8 B: 4 C: 11 D: 7 A: 9 B: 7 C: 10 D: 6 A: 5 B: 4 C: 3 D: 9 A: 6 B: 7 C: 5 D: 8 11/14

IC50 Φ1 IC50 Φ2 IC50 Φ3 % Cell growth ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Πίνακας αποτελεσμάτων: 12/14 Drug conc (M) % Cell growth Φ1 Φ2 Φ3 control 100 100 100 10 9 10 8 10 7 10 6 10 5 10 4 10 3 86 92 95 55 74 79 27 50 56 10 20 45 8 10 25 5 5 10 2 2 4 100 75 50 25 Φ1 Φ2 Φ3 10 9 10 8 10 7 10 6 10 5 10 4 10 3 Drug concentration (M) Log scale!

ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΑ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ - ΕΡΜΗΝΕΙΑ Επιδρούν τα τρία κυτταροτοξικά φάρμακα στο συγκεκριμένο τύπο καρκινικών κυττάρων (Κ562)?? Σε ποιο εύρος συγκεντρώσεων συμβαίνει αυτό? Συνοδεύεται από φαινοτυπικές αλλαγές των κυττάρων? Παρατηρήσατε διαφορές στη δραστικότητα των τριών διαφορετικών φαρμάκων? Πώς το αποδείξατε?? Ποιο από τα τρία φάρμακα θα επιλέγατε για χρήση σε ασθενείς με το συγκεκριμένο τύπο καρκίνου??? (ΠΡΟΣΟΧΗ: υπεραπλούστευση ) 13/14

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Η ΔΙΕΞΑΓΩΓΗ ΟΡΘΩΝ ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΩΝ ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΩΝ ΕΞΑΡΤΑΤΑΙ ΚΡΙΣΙΜΑ ΑΠΟ ΤΟΝ ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΟ ΣΧΕΔΙΑΣΜΟ (Διαφάνειες 2, 4-5, 11-12!!!) Επόμενη διάλεξη: Κυτταρικός κύκλος- Κυτταρικός θάνατος