Short Commiunication Iranian Journal of Medical Microbiology Iran J Med Microbiol: Volume 10, Number 3 (July - August) Journal homepage: www.ijmm.ir The Detection of and blatem genes encoding B-Lactamase in clinical samples of Salmonella typhimurium by Multiplex PCR method KumarssAmini 1, Parisa Mobasseri 2, Alireza Mokhtari 3 1. Department of Microbiology, Faculty of Basic Science, Saveh Branch, Islamic Azad University, Saveh, Iran 2. Department of Microbiology, Faculty of Biology sciences, Tehran north Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran 3. Department of Microbiology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran Article Information Article history: Received: 2015/10/08 Accepted: 2016/02/12 Available online: 2016/10/16 Article Subject: Molecular Microbiology IJMM 2016; 10(3): 73-78 Corresponding author at: Dr. KumarssAmini Department of Microbiology, Faculty of Basic Science, Saveh Branch, Islamic Azad University, Saveh, Iran Tel: : +981981994314 Email: Dr_kumarss_amini@yahoo.com Abstract Background and Aim: B-Lactam antibiotics are widely used in the treatment of salmonellosis. Alarming reports have pointed out the rapid development of resistance to these agents, involving Salmonella serovars such as Enteritidis, Typhimurium, Panama, and Typhi in several countries. The aim of this study was to investigate the antibiotic resistance profiles and the prevalence of and blatem genes among Salmonella typhimurium in humans in Tehran. Materials and Methods: All 46 isolates were detected from a collection of human sampels in veterinary faculty, Islamic Azad University. Samples were tested to resist to ampicillin, chloramphenicol, tetracycline, cephalothin, ceftriaxone, ceftazidime, amoxicillin-clavulanate, gentamicin, trimethoprim-sulfamethoxazole and amikacin. Isolates examined by Polymerase chain reaction analysis to detect the presence of the and blatem resistance genes. Results and Conclusions: Results of antibiogram showed (82.6%) resistance to ampicillin, (80.4%) to chloramphenicol, (69.5%) to tetracycline, (80.4%) to cephalothin, (56.5%) to amoxicillin-clavulanate and (43.4%) to trimethoprim-sulfamethoxazole. Among 46 Salmonella isolates, 43 (93.4%) showed resistance to two or more antibiotic families. blatem gene were identified in 1 (2.1%) Salmonella isolates. All the isolates were negative for gene. Salmonella strains among humans were resistant to ampicillin, cephalothin, chloramphenicol, tetracycline, amoxicillin-clavulanic acid and trimethoprim-sulfamethoxazole.the identification of genes in Salmonella and MDR Multi Drug Resistance (93.4%) has considerable implications for public health. Carrying two or more beta-lactamase resistance gene is very worring, because certain combinations of genes could effectively limit all β-lactam therapeutic options. Besides, producing bacteria are typically associated with multidrug resistance. KeyWords: Salmonella typhimurium,, blatem Copyright 2016 Iranian Journal of Medical Microbiology. All rights reserved. How to cite this article: Amini K, Mobasseri P, Mokhtari A. Detection of and blatem genes encoding B-Lactamase in clinical samples of Salmonella typhimurium by Multiplex PCR. Iran J Med Microbiol. 2016; 10 (3) :73-78 Īrān. Majallah-i mīkrub/shināsī-i pizishkī-i مجله میکرب شناسی پزشکی ایران 37
مجله میکربشناسی پزشکی ایران سال 10 شماره 3 مرداد شهریر 1312 مقاله کتاه Journal homepage: www.ijmm.ir بررسی ژنهای blatem ملد بتاالکتاماز در جدایه های بالینی سالمنال تیفی مریم با رش Multiplex PCR کیمرث امینی 1 پریسا مبصری 2 علیرضا مختاری 1. گره میکربیلژی دانشکده علم پایه دانشگاه آزاد اسالمی احد ساه ساه ایران 2. گره میکربیلژی دانشکده علم زیستی دانشگاه آزاد اسالمی احد تهران شمال تهران ایران 3 7. گره میکربیلژی دانشکده علم تخصصی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسالمی احد علم تحقیقات تهران ایران اطالعات مقاله تاریخچه مقاله دریافت: 1314/07/11 پذیرش: 1314/11/23 انتشار مضع: آنالین: 1312/07/22 میکرب شناسی ملکلی IJMM 1395; 10(3): 73-78 نیسنده مسئل: دکتر کیمرث امینی گره میکربیلژی دانشکده علم پایه دانشگاه آزاد اسالمی احد ساه ساه ایران چکیده زمینه اهداف :آنتی بیتیک های بتاالکتام به طر گستردهای در درمان سالمنلز مرد استفاده قرار میگیرند. گزارشات هشدار دهنده تسعه سریع مقامت در برابر این عامل شامل سرار های سالمنال مانند انتریتیدیس تیفی مریم پاناما تیفی را در چند کشر اشاره کردهاند. هدف از این مطالعه بررسی پرفایل مقامت آنتی بیتیکی شیع ژن blatem سالمنال تیفی مریم در انسان در تهران بد. ماد رش کار: 64 جدایه از کلکسین دانشکده دامپزشکی دانشگاه آزاد اسالمی احد علم تحقیقات تهران از نمنههای انسانی جمع آری شده بدند. نمنهها جهت بررسی مقامت در برابر آمپی سیلین کلرامفنیکل تتراسایکلین سفالتین سفتریاکسن سفتازیدیم آمکسی سیلین- اسید کالالنیک جنتامایسین تری- متپریم سلفامتکسازل آمیکاسین مرد آزمایش قرار گرفتند. جدایه ها با تجزیه تحلیل اکنش زنجیرهای پلیمراز برای حضر ژنهای مقامت blatem مرد بررسی قرار گرفتند. یافتهها بحث : نتایج آنتیبیگرام نشان داد که میزان مقامت به آمپی سیلین )%28/4( کلرامفنیکل )%28/6( تتراسایکلین )%46/5( سفالتین )%28/6( آمکسی سیلین- اسید کالالنیک )%54/5( تری متپریم- سلفامتکسازل )%64/6( بد. از مجمع 64 جدایه سالمنال ) 64/6( 64 مرد مقامت در برابر د یا چند خاناده آنتی بیتیک را نشان دادند. ژن blatem در 1 مرد ) 8/1( جدایه سالمنال مشخص شد. همه جدایه ها برای ژن تلفن: 41141117717 پست الکترنیک: Dr_kumarss_amini@yahoo.com منفی بدند. سیههای سالمنال انسانی مقام به آمپی سیلین سفالتین کلرامفنیکل تتراسایکلین آمکسی سیلین-اسید کالالنیک تری متپریم-سلفامتکسازل بدند. شناسایی ژنهای در سالمنال مقام به چند دار )Multi Drug Resistance( MDR )%64/6( دارای پیامدهای قابل تجهی برای سالمت عممی است. حمل د یا چند ژن مقام به بتاالکتاماز نگران کننده است زیرا ترکیب خاصی از ژنهای مؤثر میتاند تمام گزینههای درمانی بتاالکتام را محدد کند. باکتریهای تلید کننده معمال با مقامت به چند دار مرتبط هستند. کلمات کلیدی سالمنال تیفی مریم blatem مقدمه تب غیر تیفئیدی که عمدتا تسط سالمنال تیفی مریم سالمنال انتریتیدیس ایجاد میشد همچنان به صرت یک مشکل عمده درکشرهای درحال تسعه است )1(. برای سالهای بسیاری کلرامفنیکل آمپی سیلین تری متپریم- سلفمتاکسازل )کتریمکسازل( داری انتخابی بد. در سالهای اخیر افزایش مقامت سالمنال به آنتی بیتیک های به کپیرایت : حق چاپ نشر استفاده علمی از این مقاله برای مجله میکربشناسی پزشکی ایران محفظ است. 37 طر معمل استفاده شده تبدیل به یک نگرانی شده است. نگرانی خاص آن است که گنه مقامت به چند دار )MDR( دربرابر د یا بیشتر عامل درمانی به دست آرد. اگر چه فلرکینلن ها مانند سیپرفلکساسین افلکساسین سفالسپرین های سیع الطیف نظیر سفتریاکسن سفتاکسیم ثابت شده است که جایگزین مثری است مقامت در برابر این عامل پدید آمده
مجله میکرب شناسی پزشکی ایران سال 14 شماره 7 مرداد شهریر 1711 (Pseudomonas-specific PSE-1 نع TEM بدند.)4( enzyme) 31 است )2(. مقامت به سفالسپرین طیف گسترده عمدتا به تلید آنزیمی به نام بتاالکتاماز طیف گسترده )( ابسته است. آنزیم آنزیمی پالسمیدی که قادر به هیدرلیز غیر فعال کردن طیف گستردهای از بتاالکتام از جمله سفالسپرین های های نسل سم پنی سیلین آزترنام میباشد. این آنزیم نتیجه جهش در TEM-2 SHV-I است. همه این بتاالکتامازها معمال در خاناده انترباکتریاسه پیدا شده است. استفاده گسترده از سفالسپرین های نسل سم آزترنام علت عمدهای از جهش در این آنزیم است که به ظهر بتاالکتاماز سیع الطیف منجر شده است )3(. این آنزیم اسطه مقامت به سفتاکسیم سفتازیدیم سایر سفالسپرین های طیف گسترده منباکتام ها مانند آزترنام است اما هیچ فعالیت قابل تشخیصی در برابر سفامایسین ها ایمی پنم مشاهده نمیشد. به دلیل محدده سبسترا تا حد زیادی گسترش یافته خد اینها آنزیمهای بتاالکتاماز سیع الطیف نامیده میشدند. نع TEM در سال 1191 ینان به نام مشتقات TEM-2 هستند.. های ابتدا از اشریشیا کلی جدایه شده از یک بیمار در آتن Temoneira گزارش شد. قادر به هیدرلیز آمپی سیلین با میزان بیشتری نسبت به کاربنی سیلین اگزاسیلین یا سفالتین است فعالیت کمی در برابر سفالسپرین های سیع الطیف دارد تسط اسید کالالنیک مهار میشد. TEM-2 است اما از دارای مشخصات هیدرلیتیک همان با داشتن یک پرمتر فعالتر تسط تفات در نقطه ایزالکتریک متفات است. همچنین دارای مشخصات هیدرلیتیک مشابه 3 TEM-2 است. با این حال در در فرانسه درسال 1147 حامل بتاالکتاماز 1143 کلبسیال پنمنیه جدا شده )cefotaxime( CTX -1 مرتبط با پالسمید جدیدی بد. آنزیم جدید در اصل CTX-1 دلیل فعالیتهای افزایش یافته خد در برابر سفتاکسیم داشت. این آنزیم در حال حاضر نگاهی به گذشته TEM-3 TEM-3 ممکن است الین نامیده میشد. به نام با TEM نع نباشد. کلبسیال اکسی تکا دارای پالسمید حامل یک ژن کد کننده مقامت سفتازیدیم برای الین بار در لیرپل انگلستان در سال 1142 جدا شد. مسئل آنزیم بتاالکتاماز هم اکنن به نام 2 تکا اکسی است. سیه از بخش نزادانی که تسط شیع کلبسیال ملد دچار شده بد منشأ گرفته بد. سفتازیدیم برای درمان افراد آلده مرد استفاده قرار گرفت اما پس از آن جدایه های کلبسیال اکسی تکا از همان احد حامل شایعترین بتاالکتاماز با منشأ پالسمید یافت شده در جدایه های بالینی مقام در برابر بتاالکتام سدمناس آئرژینزا است که با جد منشأ اصلی خد به عنان یک آنزیم خاص در باکتری سدمناس در دیگر اعضای خاناده انترباکتریاسه هم جد دارد )2(. بیتیکی آنتی بیتیک )MDR( افزایش علت به ارگانیسم این مقامت بیژه ظهر سیههای مقام به چند آنتی مشکالت درمان برای را بسیاری عفنتهای ناشی از آن هم در عرصه پزشکی هم دامپزشکی ایجاد کرده است. همچنین گسترش ژنهای مقامتی به دیگر سیهها حتی باکتریها ایجاد سیههای مقام نیز از دیگر معضالت مجد در درمان میباشد. لذا هدف از مطالعه حاضر شناسایی همزمان ژنهای بتاالکتاماز سیع الطیف در blatem سیههای سالمنال تیفی مریم جدا شده از نمنههای انسانی به رش میباشد. Multiplex PCR ماد رشها سطح تعیین الگی حساسیتی این سیهها در این مطالعه مقطعی- تصیفی بر اساس مطالعات قبلی فرمل از استفاده با %11 اطمینان n=z2p(1-p)/d2 خطای قابل قبل 4/41 از 79 نمنه بالینی انسانی )از مدفع افراد بیمار( که در سال 1717 از مراکز درمانی جنب تهران جمعآری شده بد در کلکسین دانشکده دامپزشکی دانشگاه آزاد اسالمی احد علم تحقیقات نگهداری میشد استفاده گردید. این تعداد 79 نمنه شناسایی شده از مجمع 114 نمنه مدفع بیماران دارای اسهال که در بازه زمانی اردیبهشت تا شهریر 1717 جمعآری شده بد جداسازی گردید. نمنهها به محیطهای کشت مک کانکی آگار )MAC( سالمنال شیگال آگار )SS( گزیلز لیزین دکربکسیالت آگار )XLD( منتقل گرمخانه گذاری شدند پس از آن کلنیهای بی رنگ با مرکز سیاه بر ری SS کلنیهای قرمز با مرکز سیاه بر مرفلژی کلنیها تستهای بیشیمیایی XLD TSI تسط LIA اره MRVP سیمن سیترات (Merk, Germany).)9( شناسایی شدند تست حساسیت آنتی بیتیکی جدایه ها با دیسکهای آنتی بیتیک )پادتن طب ایران( به رش استاندارد انتشار دیسک مطابق با )CLSI( صرت گرفت )7(. اشریشیا کلی ATCC 21122 قرار گرفت. به عنان ارگانیسم کنترل کیفیت مرد استفاده پس از استخراج DNA نمنهها با کیت با عنان
امینی همکاران بررسی ژنهای blatem ملد بتاالکتاماز تجاری )Molecular Biological System Transfer( MBST که تسط دکتر شایان در دانشکده دامپزشکی تهران طراحی تلید میگردد ایران( غلظت نمنههای )eppendorff( سنجیده سپس DNA flic با دستگاه بیفتمتر جدایه ها با پرایمر اختصاصی برای شناسایی افتراق سالمنال تیفی مریم شناسایی شدند. حجم نهایی اکنش میکرلیتر PCR شامل: آب مقطر 13/7 1X. PCR buffer به میزان 2 میکرلیتر )2μl( )4/7 آنزیم Taq polymerase μl(dntp mix (5Mm ( )4/2μl( 2.5unit پرایمرهای مرد استفاده با غلظت با غلظت 0.5 µm هرکدام ( )4/1μl نمنه 7 DNA میکرلیتر در حجم نهایی 21 میکرلیتر تهیه گردید. ژنهای جدل blatem 1 ترمسایکلر در نشان داده شده است. انجام گرفت. مشخصات پرایمر های مرد استفاده در این مطالعه در اکنش PCR (Germany Eppendorf( در دستگاه برنامه شامل دناتراسین الیه در C 17 به مدت 1 دقیقه 74 سیکل که هر سیکل شامل سه مرحله دناتراسین در C 17 به مدت 74 ثانیه اتصال پرایمر 11 C به مدت 74 ثانیه گسترش پرایمر در 32 C 14 ثانیه گسترش نهایی در C 32 محصل PCR به مدت به مدت 3 دقیقه سپس را بر ری ژل آگارز 1/2 درصد جداسازی پس از رنگ آمیزی با اتیدیم برماید تسط دستگاه Rad( )USA Bio بررسی شدند. از کلبسیال Gel Document پنمنیه 13331 ATCC که اجد ژنهای مرد نظر در این مطالعه بدند به عنان کنترل مثبت PCR استفاده شد. دادههای آماری با نرمافزار نسخه SPSS (version 19) با استفاده از آزمنهای آماری تصیفی t- test مرد تجزیه تحلیل قرار گرفت. جدل 1- مشخصات پرایمر های مرد استفاده در این مطالعه ژن مقامت Forward primer (5 3 ) Reverse primer (5 3 ) CAGCGGTAAGATCCTTGAGA TTCATCCATAGTTGCCTGACT GCTCGTATAGGTGTTTCCGTTT CGATCCGCAATGTTCCATCC blatem طل قطعه )bp( 666 منبع 8 8 575 نتایج بحث نتایج حاصل از الگی حساسیت آنتی بیتیکی نسبت به جدایه های سالمنال تیفی مریم در نمدار 1 بر حسب تعداد درصد نشان داده شده است. بیشترین حساسیت نسبت به آمیکاسین )کمترین میزان مقامت( گزارش شد. در این تحقیق 77 نمنه )%17/7( دارای الگی مقامتی به 2 یا بیشتر از د نع از آنتی بیتیکهای مرد استفاده مشاهده گردید که میتاند نشان دهنده مقامت چند داریی باشد. همچنین در مجمع 1 نمنه )%2/1( دارای ژن blatem بده ژن یک از جدایهها شناسایی ردیابی نگردید. شکل الکترفرز ژن blatem 1 جدایه سالمنال شناسایی شده در هیچ تصیر ژل را نشان میدهد. در میان 79 74 نمنه )%42/9( به آنتی بیتیک آمپی سیلین مقام بدند )1(. در پزشکی امرز دارهای ضد میکربی جدیدتری استفاده شدهاند که منجر به ظهر انتشار سریع سیههای باکتریایی مقام شده است. یکی از مکانیسمهای مقامت باکتریایی در برابر آنتی بیتیکها تلید آنزیم بتاالکتاماز است که حلقه سازنده بتاالکتام پنی سیلین مشتقات مصنعی آن را میشکند. این آنزیمها اکثرا تسط گنههای کلبسیال اشریشیا کلی تلید میگردد اما در سایر باکتریهای گرم منفی از جمله انترباکتر سالمنال پرتئس سیترباکتر شیگال دیسانتری سدمناس آئرژینزا غیره نیز مشاهده میشد. استفاده از آنتیبیتیکهایی نظیر سفتازیدیم یا سفتاکسیم در ابتدای دره درمان در برابر عفنتهای ایجاد شده تسط باکتریهای تلید کننده میتاند مجب شکست در درمان شد ) 10 (.ژنهای کدکننده این سفالسپرین طیف گسترده تسط پالسمیدهای کانجگیتی ترانسپزن ها یا اینتگرن ها حمل میشند. این عناصر ژنتیکی متحرک میتانند به صرت افقی بین ارگانیسمهای ردهای در داخل بدن پالسمید های مقام در برابر دار را از دیگر پاتژن های ردهای مقام در دستگاه گارش بیماران کسب نمایند. بنابراین استفاده نامناسب از آنتیبیتیکها چه در دام چه در انسان مجب میشد سیههای مقام ظهر یافته در سطح جامعه گسترش یابد )11(. بتاالکتاماز طیف سیع معمال کد گذاری شده در پالسمیدهای بزرگ است که میتاند بین گنههای باکتریایی تبادل گردد. در بسیاری از مارد این پالسمیدها همچنین دیگر ژنهای مقامت ضد میکربی را رمز میکنند. بنابراین برای ارگانیسمهایی که بیانگر هستند امری رایج است که مقامت به آنتی بیتیک های تری متپریم- سلفامتکسازل تتراسایکلین را هم بیان کنند )12(. سیههای سالمنال که کاهش حساسیت به یکی یا بیشتر از سفتازیدیم سفرکسیم سفتاکسیم سفتریاکسن سفپدکسیم یا آزترنام را نشان میدهد اما حساس به سفکسیتین یا سفتتان باقی میماند به عنان تلید کنندگان اصلی بتاالکتاماز سیع الطیف در نظر گرفته میشند )13(. 39
مجله میکرب شناسی پزشکی ایران سال 14 شماره 7 مرداد شهریر 1711 blatem 33 نتایج سالمنال انتریکا بتاالکتام پیپراسیلین- مطالعهای تسط González-López سرار تیفی ها به جز آمکسی سیلین- همکاران در بررسی سیه نشان از مقامت به همه اسید کالالنیک تازباکتام سفکسیتین کرباپنم بد )14(. در Elumalai همکاران در بررسی سرتیپ سالمنال تیفی جدایه ها به آمپی سیلین کلرامفنیکل کتریمکسازل تتراسایکلین سفالسپرین )سفتاکسیم سفتازیدیم سفتریاکسن سفیکسیم سفپیم( حساس بدند) 12 (. 1- نمدار تزیع فراانی مقامت به آنتیبیتیکهای مختلف مرد استفاده در این تحقیق نسبت به سالمنال تیفیمریم جداسازی شده از نمنههای بالینی بر حسب تعداد درصدAMP آمپی سیلین C کلرامفنیکل سفتریاکسن کالالنیک TE تتراسایکلین CEF سفالتین CRO CAZ سفتازیدیم AMX GEN جنتامایسین سلفامتکسازل AMK آمیکاسین SXT آمکسی سیلین-اسید تری متپریم- شکل 1. تصیر ژل الکترفرز ژن blatem با طل باند 111 bp ژن با محصل به طل M 272 bp به ترتیب از چپ به راست مارکر 20bp ستن کنترل مثبت ستن کنترل منفی ستن 1-12 جدایه های سالمنال تیفی مریم شناسایی شده از منابع انسانی. نمنه 10 اجد ژن blatem با طل باند 111 bp میباشد. که علت عدم تطابق نتایج آنان با یافتههای حاضر میتاند به علت تفات در سال نع سرتیپ مرد بررسی باشد. نتایج Gebreyes برای -1 همکاران در بررسی سالمنال انتریکا نشان داد که منفی blatem مثبت بدند )11(. در سیههای سالمنال انتریتیدیس آمپی سیلین در تحقیقات Zou مطالعهای تسطTajbakhshهمکاران ژن بالینی مقام به همکاران حضر داشت )17(. در های blatem به ترتیب در ) 97( ) 14( از سیههای سالمنال جداشده از نمنههای بالینی که مقامت به آمپی سیلین داشتهاند گزارش گردید )14(. بررسی همکاران Li را در ) 7/79( ) 2/72( از سیههای سالمنال خک اردک مرغ آشکار ساخت )11(. blatem مطالعه جداشده از Chuma همکاران بر ری سالمنال اینفنتیس مشخص نمد که ژن های blatem جدایه هایی که ) 11 (.مشاهدات بتاالکتاماز گرم منفی گنههای به ترتیب دارای فنتیپ در ) 27/3( ) 29/4( از بدند مشاهده گردید با افزایش فرکانس در دیگر ردهای مانند باکتری اشریشیا کلی نشان میدهد که سالمنال ممکن است ژن bla را از فلر رده انسان یا حیانات به ارث ببرد. در اقع انتقال مقامت به آمکسی سیلین بین سالمنال اشریشیا کلی به تازگی نشان داده شده است که در داخل بدن رخ میدهد. سالمنال ممکن است به طر مثری ژن بتاالکتاماز را از منابع مختلف باکتریایی به دست آرد افزایش شیع مقامت به آمکسی سیلین در این باکتری بخشی از یک رند جهانی است که شامل بسیاری دیگر از گنههای گرم منفی ملد آنزیم مقامت نسبت به بتاالکتام ناشی از تلید آنزیم است. در مقابل تسعه PSE-1 انتشار چند کلن بیماری همه گیر در داخل جمعیت است. از نتایج سفالسپرین طیف گسترده داری انتخابی برای درمان عفنت گنه سالمنال مقام به فلرکینلن است. بتاالکتاماز طیف سیع بارزترین مکانیسم مقامت آنتی بیتیکی در میان خاناده انترباکتریاسه با تجه به فشار انتخابی اعمال شده تسط استفاده نامناسب از سفالسپرین های نسل سم است. بنابراین انتخاب استفاده مناسب بجا از آنتیبیتیکها بر حسب فاکترهای سن جنس منطقه جغرافیایی همچنین نظارت مستمر الگی حساسیت آنتی بیتیکی میتاند کمکی برای کنترل گسترش گنههای مقام باشد. نگرانی قبال در مرد استفاده از سفالسپرین طیف گسترده حضر سفامایسین در اشریشیا کلی سالمنال بیان شده است. دادههای به دست آمده در این تحقیق مقایسه آن با سایر مطالعات انجام شده نشان میدهد که این نگرانیها نیز ممکن است با انتخاب آنتیبیتیکهای سیع الطیف مجب گسترش blatem در جامع گردد.
امینی همکاران بررسی ژنهای blatem ملد بتاالکتاماز تعارض منافع: بین نیسندگان مجله میکربشناسی پزشکی ایران گنه تعارض منافعی جد ندارد. هیچ References 1. Crump JA, Luby SP, Mintz ED. The global burden of typhoid fever. Bull World Health Organ. 2004; 82 (5): 346-53. 2. Parry CM. Antimicrobial drug resistance in Salmonella enterica. Curr Opin Infec Dis. 2003; 16 (5): 467-72. 3. Paterson DL, Bonomo RA. Extended-spectrum β- lactamases: a clinical update. Clin Microbiol Rev 2005; 18(4): 657 86. 4. Cheung TKM, Chu YWC, Chu MY, Choi HM, Yung RWHY, Kam KM. Plasmid-mediated resistance to ciprofloxacin and cefotaxime in clinical isolates of Salmonella enterica serotype enteritidis in Hong Kong. J Antimicrob Chemother. 2005; 56: 586-89. 5. Huovinen Pentti, Jacoby GA. Sequence of the PSE-1 β-lactamase Gene. Antimicrob. Agents Chemother. 1991: 35(11): 2428-2430. 6. Washington W, Allen S, Janda W, Koneman. E, Procop G, Schreckenberger P, Woods G. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 6th ed. Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins Press; 2002. 7. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). (2011) Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 21th Information Supplement. M100-S21. CLSI, Wayne, PA. 8. Li R, Lai J, Wang Y, Liu Sh, Li Y, Liu K, Shen J, Wu C. Prevalence and characterization of Salmonella species isolated from pigs, ducks and chickens in Sichuan Province, China. Int J Food Microbiol. 2013; 163 (1): 14-18. 9. Budak F, Nordmann P, Girlich D, Gür D. Characterization of extended-spectrum ß-lactamaseproducing Salmonella isolates in a children s hospital in Ankara- first report of SHV-2a and SHV- 9 in Salmonella spp. from Turkey. Turk J Pediatr. 2009; 51(1): 28-34. 10. Gautam K, Pokhrel BM, Bhatta DR, Shrestha CD. Studies on Extended Spectrum Beta Lactamase () producing salmonella isolates from clinical samples of Nepal. Nepal Med Coll J. 2012; 14(3): 204-206. 34 11. Su LH, Chiu CH, Chu C, Wang MH, Chia JH, Wu TL. In vivo acquisition of ceftriaxone resistance in Salmonella enterica serotype anatum. Antimicrob Agents Chemother. 2003; 47(2): 563-7. 12. Jacoby GA, Medeiros AA. More extended-spectrum beta-lactamases. Antimicrob Agents Chemother.1991; 35(9): 1697-704. 13. Sturenburg E, Mack D. Extended-spectrum betalactamases: implications for the clinical microbiology laboratory, therapy, and infection control. J Infect. 2003; 47(4): 273-95. 14. González-López JJ, Piedra-Carrasco N, Salvador F, Rodríguez V, Sánchez-Montalvá A, Planes AM, et.al. -Producing Salmonella enterica Serovar Typhi in Traveler Returning from Guatemala to SpainEmerg Infect Dis. 2014; 20(11):1918-20. 15. Elumalai S, Muthu G, Esther Mary Selvam R, Ramesh S. Detection of TEM-,SHV- and CTX-Mtype b-lactamase production among clinical isolates of Salmonella species. J Med Microbiol. 2014; 63(Pt 7): 962 967. 16. Gebreyes WA, Thakur Siddhartha. Multidrug- Resistant Salmonella enterica Serovar Muenchen from Pigs and Humans and Potential Interserovar Transfer of Antimicrobial Resistance. Antimicrob Agents Chemother. 2005; 49(2): 503-511. 17. Zou M, Keelara Sh, Thakur S. Molecular Characterization of Salmonella enterica Serotype Enteritidis Isolates from Humans by Antimicrobial Resistance, Virulence Genes, and Pulsed-Field Gel Electrophoresis. Foodborne Pathog Dis. 2012; 9(3): 232-238. 18. Tajbakhsh M, Hendriksen RS, Nochi Z, Zali MR, Aarestrup FM, Garcia-Migura L. Antimicrobial resistance in Salmonella spp. recovered from patients admitted to six different hospitals in Tehran, Iran from 2007 to 2008. Folia Microbiol. 2012; 57(2): 91-97. 19. ChumaT, MiyasakoD, Dahshan H, TakayamaT, NakamotoY, Shahada F, Akiba M, Okamoto K. Chronological change of resistance to β-lactams in Salmonella enterica serova rinfantis isolated from broilers in Japan. Front Microbiol. 2013; 4:113.