VII. Ορολογικές οκιµές

Μέγεθος: px
Εμφάνιση ξεκινά από τη σελίδα:

Download "VII. Ορολογικές οκιµές"

Transcript

1 VII. Ορολογικές οκιµές Εισαγωγή Όπως είναι γνωστό όταν κάποιο ζώο θεραπεύεται από µία µολυσµατική ασθένεια, σπάνια προσβάλλεται πάλι από την ίδια ασθένεια. ηλαδή η πρώτη µόλυνση παρέχει ανοσία έναντι µελλοντικών µολύνσεων από το ίδιο παθογόνο. Οι περισσότερες αντιδράσεις ανοσίας των ζώων έχουν την ίδια βάση. Ο ανοσογόνος παράγοντας, δηλαδή αυτός που προκαλεί ανοσία στο ζώο, καλείται αντιγόνο ή ανοσογόνο (στη περίπτωση µας ο ιός) προκαλεί την παραγωγή αντισωµάτων στο αίµα (Εικ. 7). Τα αντισώµατα αντιδρούν εξειδικευµένα µε το αντιγόνο (ιό) που προκάλεσε την παραγωγή τους (οµόλογο αντιγόνο). Για να προκαλέσει την παραγωγή αντισωµάτων ένας ιός, δεν είναι απαραίτητο να προσβάλλει το ζώο στο οποίο εισάγεται. Έτσι όταν καθαρό παρασκεύασµα ενός φυτικού ιού εισαχθεί µε ένεση στο αίµα ενός θηλαστικού, προκαλεί την παραγωγή αντισωµάτων (Εικ. 8). Οι περισσότεροι φυτικοί ιοί αποτελούν πολύ καλά ανοσογόνα. ΒΑΡΙΑ ΑΛΥΣΙ Α ΕΛΑΦΡΙΑ ΑΛΥΣΙ Α ΕΛΑΦΡΙΑ ΑΛΥΣΙ Α IΣΟΥΛΦΙ ΙΚΟΙ ΕΣΜΟΙ Εικόνα 7 Πολλές ουσίες, όπως οι πρωτεϊνες, οι πολυσακχαρίτες και τα νουκλεϊκά οξέα, είναι συνήθως ισχυρά αντιγόνα και προκαλούν τη παραγωγή αντισωµάτων, όταν εισάγονται στο σώµα ενός ζώου. Βέβαια, προκειµένου µια ουσία να προκαλέσει τη παραγωγή αντισωµάτων, πρέπει να έχει µοριακό βάρος τουλάχιστον 10 4, συγκεκριµένη µοριακή δοµή και να µην απαντάται, υπό φυσιολογικές συνθήκες, στο υπό ανοσοποίηση ζώο. Έτσι οι περισσότερες πρωτεϊνες και αρκετοί πολυσακχαρίτες µπορούν να δράσουν ως αντιγόνα, αν και διαφέρουν ως προς την αντιγονική ικανότητα. Τα αντισώµατα που παράγονται σαν απόκριση σε κάποιο αντιγόνο παρουσιάζουν δοµικές διαφορές από τα αντισώµατα που παράγονται για οποιοδήποτε άλλο αντιγόνο αφού και τα δύο αντισώµατα αντιδρούν εξειδικευµένα µόνο µε το οµόλογο τους αντιγόνο, γιατί συνδέονται µεταξύ τους µε ένα µοναδικό τρόπο (όπως κλειδί-κλειδαριά, Εικ. 9). Τα αντισώµατα έχουν δύο θέσεις σύνδεσης στο µόριο τους (Εικόνες 9 και 10). Αντίθετα, τα αντιγόνα έχουν συχνά πολλές αντιγονικές θέσεις, των οποίων ο αριθµός εξαρτάται από το µέγεθος 1

2 και τη πολυπλοκότητα του αντιγόνου. Για παράδειγµα, µωσαϊκού του κάθε ιοσωµάτιο του ιού του Κινητική της εµφάνισης των ανοσοσφαιρινών σε ορό αίµατος µετά από ανοσοποίηση 1ος Εµβολιασµός 2ος Εµβολιασµός Συγκέντωση αντισωµάτων σε ορό αίµατος Χρόνος (εβδοµάδες) Εικόνα 8 Εικόνα 9 καπνού (TMV) έχει περίπου 2100 υποµονάδες πρωτεϊνης (Εικ. 11) που έχουν τις ίδιες αντιγονικές καθοριστικές οµάδες. Συνήθως δεν συνδέονται όλες οι αντιγονικές θέσεις των ιοσωµατίων µε τα αντισώµατα ταυτόχρονα. Ετσι, ακόµη και αν βρεθεί µε περίσσεια αντισώµατος, κάθε ιοσωµάτιο του TMV συνδέεται µόνο µε µόρια ανοσοσφαιρίνης. 2

3 Εργαστήριο Ιολογίας ΒΑΡΙΑ ΑΛΥΣΙ Α ΕΛΑΦΡΙΑ ΑΛΥΣΙ Α Εικόνα 10 Εικόνα 11 Ενα πιθανό αποτέλεσµα της αντίδρασης αντιγόνου-αντισώµατος είναι ο σχηµατισµός ορατού ιζήµατος (Βλέπε δοκιµές ανοσοκατακρήµνισης σε δοκιµαστικό σωλήνα και ανοσοδιάχυση σε πηκτή αγαρόζης). Γενικώς πιστεύεται, αν και δεν έχει αποδειχθεί, ότι τα µόρια των αντισωµάτων σχηµατίζουν γέφυρες µεταξύ των µορίων του αντιγόνου και µ αυτό τον τρόπο δηµιουργούν ένα συσσωµάτωµα, το οποίο, όταν γίνει αρκετά µεγάλο, καθιζάνει λόγω βαρύτητας (Εικ. 12). Οµως υπάρχουν αρκετές ενδείξεις ότι το ίζηµα που σχηµατίζεται από την ένωση αντιγόνου αντισώµατος είναι αποτέλεσµα της κάλυψης των υδρόφιλων οµάδων, όταν το αντιγόνο ενώνεται µε το αντίσωµα, µε αποτέλεσµα το σύµπλοκο να είναι αδιάλυτο, όταν στο διάλυµα υπάρχουν επαρκή ιόντα (π.χ. 0,15Μ χλωριούχο νάτριο). ΣΥΓΚΟΛΗΣΗ ΑΝΤΙΓΟΝΩΝ ΜΕ ΠΟΛΥΚΛΩΝΙΚΑ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΑ Κυκλικό σύµπλοκο ικτυωτό σύµπλοκο ΣΥΓΚΟΛΗΣΗ ΑΝΤΙΓΟΝΩΝ Εικόνα 12 3

4 Στη συνέχεια παρατίθενται ορισµένοι βασικοί όροι ανοσοβιολογίας, που θεωρούνται χρήσιµοι για την καλύτερη κατανόηση των ορολογικών δοκιµών. Ανοσογόνο (Ιmmunogen): µε την ευρεία έννοια, κάθε µακροµοριακή ουσία που, όταν εισαχθεί στον οργανισµό, µπορεί να προκαλέσει ανοσοαπόκριση, δηλαδή παραγωγή αντισωµάτων. Αντιγόνο (Αntigen): κάθε ουσία (µόριο) που είναι ικανό να επάγει ανοσοαπόκριση ή µπορεί να συµµετέχει σε ειδικές ανοσολογικές αντιδράσεις in vivo ή in vitro. Μπορεί να έχει πολλές αντιγονικές καθοριστικές οµάδες. Γενικά στη βιβλιογραφία δε γίνεται διάκριση των όρων αντιγόνο-ανοσογόνο. Η απόκριση θα είναι είτε η παραγωγή αντισωµάτων, δηλαδή χηµική ανοσία, είτε η παραγωγή ευαισθητοποιηµένων κυττάρων, δηλαδή εµφάνιση κυτταρικής ανοσίας ή και τα δύο. Αντιορός (Antiserum): ορός από οποιοδήποτε ζώο που περιέχει αντισώµατα εναντίον κάποιου αντιγόνου. Αντίσωµα (Antibody): ειδική πρωτεϊνη (ανοσοσφαιρίνη) που είναι αποτέλεσµα της εισόδου στον οργανισµό κάποιου αντιγόνου. Τα αντισώµατα, που παράγονται από τα πλασµοκύτταρα, αντιδρούν ειδικά µε τα αντίστοιχα αντιγόνα που προκάλεσαν το σχηµατισµό τους (Εικ. 13). Στην περίπτωση αυτή τα αντισώµατα ονοµάζονται πολυκλωνικά. Τα πολυκλωνικά αντισώµατα περιέχουν µόρια ανοσοσφαιρινών που παρουσιάζουν ηλεκτροφορητική ετερογένεια, η οποία είναι αποτέλεσµα του µεγάλου βαθµού ετερογένειας της αλληλουχίας των αµινοξέων τους. ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΠΛΑΣΜΟΚΥΤΤΑΡΟ Β-ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΟ ΚΥΤΤΑΡΟ ΜΝΗΜΗΣ Εικόνα 13 γ-ανοσοσφαιρίνη (γ-globulin, IgG): οι ανοσοσφαιρίνες διαχωρίζονται σε ένα ηλεκτρικό πεδίο ανάλογα το ηλεκτρικό τους φορτίο, και ταξινοµούνται ως α 1,α 2, β και γ, ανάλογα µε την κινητικότητά τους. Από αυτές, η IgG µε αργή ηλεκτροφορητική ικανότητα στη γάµµα περιοχή περιλαµβάνει τα περισσότερα ανοσοσφαιρινικά µόρια (Εικ. 14). H ΙgG εµφανίζει τη µεγαλύτερη ετερογένεια φορτίου, οι άλλες τάξεις εµφανίζουν πιο περιορισµένη κινητικότητα στην περιοχή β και στην ταχεία γ. 4

5 Πρωτεϊνες που υπάρχουν σε ορό αίµατος πρωτεϊνη ορός αίµατος αλβουµίνη Ηλεκτροφορητική κινητικότητα Εικόνα 14 Αντισφαιρίνη (Antiglobulin): αντίσωµα που παράγεται σ ένα ζώο εναντίον των γ- σφαιρινών ενός άλλου ζώου. Π.χ. αντίσωµα που παράγεται σε κουνέλι εναντίον γ- ανοσοσφαιρίνης κατσίκας. Ανοσοενισχυτικό του Freund (Complete Freund s Adjuvand, CFA): Όταν το αντιγόνο χορηγείται για την παραγωγή αντισωµάτων σε κάποιο πειραµατόζωο (π.χ. κουνέλι) προκαλεί ισχυρότερη ανοσοαπόκριση εάν αναµιχθεί µε βακτηριακά συστατικά τα οποία δρούν ως ανοσοενισχυτικά. Το γνωστότερο ανοσοενισχυτικό σε εργαστηριακή χρήση, είναι το πλήρες ανοσοενισχυτικό του Freund που αποτελείται νεκρά άτοµα του Μycobacterium tubercolosis µέσα σε ένα ελαιώδες εναιώρηµα, το οποίο στη συνέχεια γαλακτωµατοποιείται στο υδατικό διάλυµα του αντιγόνου. Όταν το ανοσοενισχυτικό δεν περιέχει το µυκοβακτήριο ονοµάζεται ατελές ανοσοενισχυτικό του Freund. Ειδικά αντισώµατα (Specific antibodies): αντισώµατα που είναι εξειδικευµένα για κάποιο αντιγόνο το οποίο προκάλεσε την παραγωγή τους και µε το οποίο συνδέονται. Αντιγονικές καθοριστικές οµάδες ή επίτοποι (Antigenic determinants or epitopes): στη τρισδιάστατη κατασκευή κάθε αντιγόνου εντοπίζονται, σε επιφανειακά µέρη, ειδικές δραστικές περιοχές, π.χ. µερικά αµινοξέα σε πρωτεϊνη (Εικ. 15). Οι εκτιθέµενες αυτές περιοχές είναι τα µέρη του αντιγόνου µε τα οποία συνδέονται τα αντισώµατα. Τα µόρια των αντιγόνων µπορεί να έχουν πολλές, διαφορετικές καθοριστικές οµάδες, φανερές ή κρυµµένες, που εµφανίζονται µετά από διάσπαση του µορίου. Κρυπτότοποι ή κρυµµένοι επίτοποι (Cryptotopes): επίτοποι που καθίστανται αντιγονικώς ενεργοί µόνο µετά τη θραύση, τον αποπολυµερισµό ή την αποδιάταξη του αντιγόνου. Στην περίπτωση των ιικών καψιδίων βρίσκονται στην επιφάνεια των µονοµερών πρωτεϊνών και κρύβονται στο εσωτερικό τους κατά τον πολυµερισµό τους. Παράτοπος (Paratop): περιοχή του αντισώµατος που συνδέεται µε τον επίτοπο. Σε κάθε µόριο αντισώµατος υπάρχουν δυο παράτοποι. Οι επίτοποι και οι παράτοποι έχουν µικρό µέγεθος, που φθάνει τα 2Χ3 nm (4-10 αµινοξέα). Μονοκλωνικά αντισώµατα (Monoclonal antibodies): σε αντίθεση µε τα πολυκλωνικά αντισώµατα, τα µονοκλωνικά περιέχουν οµοιογενή µόρια ανοσοσφαιρινών. 5

6 ΑΝΤΙΓΟ ΝΟ ΕΠΙΤΟΠΟΣ 1 ΕΠΙΤΟΠΟΣ 2 ΕΠΙΤΟΠΟΣ 3 Εικόνα 15 Παραγωγή πολυκλωνικών αντισωµάτων Βασική προϋπόθεση για τη παραγωγή αντιορού «καλής ποιότητας» είναι η ανοσοποίηση των ζώων, να γίνει µε όσο το δυνατόν πιο καθαρό παρασκεύασµα του ιού, απαλλαγµένο από πρωτεϊνες του φυτού, που χρησιµοποιείται ως πηγή του ιού για το καθαρισµό του. Για την παραγωγή αντιορών εναντίων φυτικών ιών συνήθως χρησιµοποιούνται κουνέλια (Oryctolagus cuniculus), γιατί είναι εύκολη η διατήρησή τους στα ιολογικά εργαστήρια. Οµως σ ορισµένες περιπτώσεις έχουν χρησιµοποιηθεί και άλλα ζώα, όπως ινδικά χοιρίδια, κότες, γίδες, πρόβατα ή ακόµη και άλογα. Για την παραγωγή αντισωµάτων το αντιγόνο χορηγείται ενδοφλέβια, ενδοπεριτοναϊκά, ενδοµυϊκά ή υποδόρια. Η ποσότητα του καθαρού ιού (αντιγόνου) που χρησιµοποιείται για την ανοσοποίηση ποικίλλει. Οι περισσότεροι ερευνητές χρησιµοποιούν δόσεις 1-10 mg ιού για κάθε χορήγηση (ένεση), αλλά δεν έχει µελετηθεί επακριβώς η ποσότητα του αντιγόνου που απαιτείται για τη πρόκληση ανοσοαπόκρισης. Σε ορισµένες περιπτώσεις, όπως για παράδειγµα στην περίπτωση του ιού του κίτρινου νανισµού του κριθαριού η ποσότητα του ιού σε κάθε ένεση µπορεί να είναι µg (θα πρέπει να σηµειωθεί ότι ο καθαρισµός του ιού είναι αρκετά δύσκολος). Χαρακτηριστικά πολυκλωνικών αντισωµάτων τα πολυκλωνικά αντισώµατα παράγονται εύκολα, γρήγορα (σε 2-3 µήνες) και έχουν µικρότερο κόστος. δίνουν µια γενική εικόνα των αντιγονικών περιοχών του ιού και ανιχνεύουν πολλές φυλές ή το σύνολο των φυλών ενός ιού. είναι λιγότερο ευαίσθητα από τα µονοκλωνικά αντισώµατα. 6

7 Παραγωγή µονοκλωνικών αντισωµάτων Κάθε β-λεµφοκύτταρο παράγει αντίσωµα ενός και µόνο είδους. Τα µονοκλωνικά αντισώµατα παράγονται από λεµφοκύτταρα σπλήνας ενός ειδικού στελέχους ποντικιών, που τους έχει γίνει πρόσφατα έγχυση αντιγόνου. Τα λεµφοκύτταρα αυτά συντήκονται µε καρκινικά λεµφοκύτταρα. Τα υβριδιακά λεµφοκύτταρα που προκύπτουν µπορούν και αναπαράγονται συνεχώς χωρίς να πεθαίνουν. Κάθε τέτοιο υβριδιακό λεµφοκύτταρο που µπορούµε να αποµονώσουµε µπορεί στη συνέχεια να πολλαπλασιάζεται και να δίνει πλήθος κυττάρων που στο σύνολο τους αποτελούν ένα κλώνο, ο οποίος θα παράγει ίδια αντισώµατα τα οποία αναγνωρίζουν ένα και µόνο επίτοπο. Χαρακτηριστικά Μονοκλωνικών Αντισωµάτων Παράγονται εύκολα σε µεγάλες ποσότητες. Απαιτούνται πολύ µικρές ποσότητες αντιγόνου για την παραγωγή τους. Χρησιµοποιούνται για τον διαχωρισµό των φυλών ενός ιού ή για την ανίχνευση ενός γένους ιών. Χρησιµοποιούνται για τη µελέτη της αρχιτεκτονικής των ιών καθώς και του τρόπου µετάδοσης τους. Είναι δυνατή η παραγωγή αντισωµάτων εναντίον αντιγόνων που δεν είναι επαρκώς καθαρισµένα. Εφαρµογές ορολογικών δοκιµών Ο αντιορός που παράγεται έναντι των φυτικών ιών, όπως περιγράφηκε παραπάνω, χρησιµοποιείται για την in vitro εκτέλεση ορολογικών δοκιµών. Οι ορολογικές δοκιµές χρησιµοποιούνται για διάφορους σκοπούς, οι σπουδαιότεροι των οποίων είναι: I. Για τον έλεγχο φυτών προκειµένου να διαπιστωθεί η παρουσία διάφορων ιών, όπως π. χ. για τον έλεγχο «πατατόσπορου» προς διαπίστωση της παρουσίας των PVX και PVY της πατάτας. II. Για τον προσδιορισµό του βαθµού των (ορολογικών) αντιγονικών σχέσεων µεταξύ των ιοσωµατίων δύο διαφορετικών ιών, φυλών ή αποµονώσεων. III. Για τον ποσοτικό προσδιορισµό της ιϊκής νουκλεοπρωτεϊνης ή πρωτεϊνης ενός παρασκευάσµατος. IV. Για τον εντοπισµό των αντιγόνων (ιών) σε ιστούς ή κύτταρα. V. Για τη µελέτη της δοµής των ιοσωµατίων. Στη συνέχεια περιγράφονται οι κυριότερες ορολογικές τεχνικές καθώς και ο τρόπος µε τον οποίο χρησιµοποιούνται για την επίτευξη των παραπάνω σκοπών. 7

8 Ανοσοενζυµική δοκιµή ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA) Eισαγωγή Η χρησιµοποίηση ενζύµων για τη σήµανση αντισωµάτων αναφέρθηκε για πρώτη φορά το 1966 και αναπτύχθηκε για τον εντοπισµό αντιγόνων σε ιστολογικά παρασκευάσµατα, τόσο σε οπτικό όσο και σε ηλεκτρονικό µικροσκόπιο καθώς και για την αναγνώριση γραµµών καθίζησης σε δοκιµές ανοσοδιάχυσης, ενώ ως ορολογική διαγνωστική µέθοδος το 1977 εισήχθη για πρώτη φορά η ανοσοενζυµική δοκιµή ΕLISA, η οποία στη συνέχεια εφαρµόστηκε για την ανίχνευση µεγάλου αριθµού ιών (αντιγόνων). Αρχικά χρησιµοποιήθηκε ευρέως για τη ταυτοποίηση σοβαρών παθογόνων του ανθρώπου και των ζώων, ενώ από το 1977 άρχισαν οι εφαρµογές στη φυτοπαθολογία, αρχικά για τη διάγνωση ιών και αργότερα για τη διάγνωση και άλλων φυτοπαθογόνων όπως βακτήρια, µύκητες και φυτοπλάσµατα. Στην ELISA χρησιµοποιούµε αντιορό µε αντισώµατα που αναγνωρίζουν ένα συγκεκριµένο ιό (αντιγόνο). Ανιχνεύοντας τη σύνδεση του αντισώµατος και του οµόλογου αντιγόνου συµπεραίνουµε την ύπαρξη του ιού στο δείγµα µας. Για την εξαγωγή αξιόπιστων και επαναλήψιµων συµπερασµάτων σε κάθε ορολογική δοκιµή περιλαµβάνονται δύο δείγµατα (µάρτυρες) γνωστής αντίδρασης (ένα θετικό και ένα αρνητικό). Ακόµη και σήµερα, παρ όλη την ανάπτυξη µοριακών διαγνωστικών µεθόδων µεγάλης ακρίβειας και ευαισθησίας, η ορολογική δοκιµή (ELISA) παραµένει η πλέον διαδεδοµένη µέθοδος τόσο για διαγνώσεις ρουτίνας όσο και για ερευνητικούς σκοπούς, γιατί παρουσιάζει τα παρακάτω πλεονεκτήµατα: 1. Yψηλή ευαισθησία, µε δυνατότητες ανίχνευσης πολύ µικρών ποσοτήτων (συνήθως 1-10 ng/ml) αντιγόνου (ιού). 2. Ταχεία λήψη αποτελεσµάτων. Συνήθως είναι διαθέσιµα µέσα σε 6-24 ώρες. 3. υνατότητα εφαρµογής σε µεγάλο αριθµό δειγµάτων. 4. Μπορεί να εφαρµοστεί τόσο σε εκχύλισµα φυτών (ορισµένοι ιοί, όπως οι ιοί των δέντρων, βρίσκονται στους ιστούς του ξενιστή σε µικρές συγκεντρώσεις), όσο και σε καθαρά παρασκευάσµατα ιών. 5. Εξειδίκευση, για τη διαφοροποίηση οροτύπων ενός ιού. 6. Μπορεί να χρησιµοποιηθεί για την ανίχνευση «τεµαχισµένων» αλλά και άθικτων ιοσωµατίων. 7. υνατότητα ποσοτικού προσδιορισµού του αντιγόνου (ιού) στο υπό εξέταση δείγµα. 8. υνατότητα αυτοµατοποίησης και παραγωγής kit (αυτόµατο πλύσιµο των µικροπλακών, ταυτόχρονη διανοµή των αντιδραστηρίων σε όλα τα φρεάτια, κ. λ.π). 9. Χαµηλό κόστος και διατήρηση των αντιδραστηρίων για µεγάλο χρονικό διάστηµα. 10. εν απαιτείται ακριβός εργαστηριακός εξοπλισµός (το πιο ακριβό όργανο είναι το φωτόµετρο). 11. Χρήση µικρών ποσοτήτων αντισωµάτων και αντιορού. Αυτά τα πλεονεκτήµατα έχουν συµβάλει στη ευρύτατη αποδοχή της και χρήση από όλα τα ιολογικά εργαστήρια. Έχουν αναπτυχθεί διάφοροι τύποι της ανοσοενζυµικής δοκιµής ELISA, οι κυριότεροι των οποίων είναι η άµεση και η έµµεση. Περισσότερες πληροφορίες για τις ορολογικές δοκιµές ELISA αναφαίρονται στη βιβλιογραφία (Van Regenmortel, 1982; Ternynck και Avrameas, 1990). 8

9 Καθορισµός των άριστων αραιώσεων γ-ανοσοσφαιρίνης και συζεύγµατος Πριν από την πρώτη εκτέλεση µιας ανοσοενζυµικής δοκιµής ELISA για την διάγνωση ενός ιού θα πρέπει να προσδιοριστούν οι άριστες αραιώσεις των ανοσοσφαιρινών κάλυψης της µικροπλάκας και του συζεύγµατος. Αυτό γίνεται µε το σχεδιασµό ενός πιλοτικού πειραµατικού σχεδίου (Εικόνα 16). Συνδυασµοί διαφόρων αραιώσεων της IgG κάλυψης και του συζεύγµατος ελέγχονται µε εκχύλισµα από ασθενή και υγιή φυτά.. Η εκτέλεση της δοκιµής γίνεται όπως περιγράφεται παραπάνω. Ο συνδυασµός που δίνει το µεγαλύτερο δείκτη διάκρισης µεταξύ των υγιών δειγµάτων και του φυτικού εκχυλίσµατος µε τη µικρότερη ποσότητα αντιγόνου (ιού) επιλέγεται για την εκτέλεση των κανονικών δοκιµών. Εάν προµηθευτείτε τα διαγνωστικά kit από το εµπόριο, θα έχετε επίσης τις πληροφορίες που αφορούν για τις άριστες αραιώσεις των IgG και του συζεύγµατος. Εάν όµως προτιµάτε να προετοιµάσετε τα αντιδραστήρια µόνοι σας, για να µειώσετε το κόστος, θα πρέπει να κάνετε µια πιλοτική ELISA, για να εξακριβώσετε τις άριστες αραιώσεις σύµφωνα µε την Εικόνα., όπου όλοι οι παράγοντες ελέγχονται έναντι όλων. Συγκέντρωση της IgG επίστρωσης (µg/ml) Μολυσµένο είγµα Μάρτυρας ( είγµα αναφοράς) Αραιώσεις της συζευγµένης IgG Εικ. 16. Σχέδιο πιλοτικής ELISA για το προσδιορισµό των συγκεντρώσεων της IgG και της συζευγµένης IgG Αµεση DAS-ELISA (Dοuble Antibody Sandwich Method ELISA) Είναι ο τύπος της δοκιµής που περιγράφηκε από τους Clark και Adams (1977) και σήµερα είναι ο πιο διαδεδοµένος. Η ELISA γίνεται σε µικροπλάκες πολυστιρενίου 96 φρεατίων. Τα 9

10 διάφορα στάδια της άµεσης (double antibody sandwich, DAS) ELISA φαίνονται στην Εικόνα 17. Τα φρεάτια της µικροπλάκας από πολυστηρένιο καλύπτονται αρχικά µε IgG που έχει αποµονωθεί (καθαρισθεί) για το σκοπό αυτό από τον αντιορό. Ακολουθεί επώαση για 2-4 ώρες στους 37 ο C και µετά ξεπλένουµε µε ειδικό ρυθµιστικό διάλυµα (βλ. παράρτηµα). Πολλές φορές η προσθήκη οροαλβουµίνης* (Αλβουµίνης ορού από βοοειδή, Bovine serum albumin, BSA) αµέσως µετά το πρώτο στάδιο, έχει ως σκοπό την αποφυγή των µη εξειδικευµένων αντιδράσεων. Στη συνέχεια προσθέτουµε, το οµογενοποιηµένο µε ειδικό ρυθµιστικό διάλυµα, δείγµα (αραιωµένο 1/10 ή 1/100) και επωάζουµε τη µικροπλάκα όλη νύχτα στους 4 o C. Την επόµενη µέρα, ξεπλένουµε πάλι τη µικροπλάκα, τοποθετούµε τη συζευγµένη IgG και *Πριν από την επώαση µε το αντιγόνο (δείγµα), γίνεται επώαση για 1 ώρα µε διάλυµα ανοσοβιολογικά αδρανών πρωτεϊνών (π.χ. οροαλβουµίνης, ζελατίνη ή σκόνη γάλακτος), έτσι ώστε να συµπληρωθούν (µπλοκαριστούν) οι µη ειδικές θέσεις δέσµευσης πρωτεϊνών στη µικροπλάκα πολυστηρενίου µε αποτέλεσµα στο επόµενο στάδιο της δοκιµής να δεσµεύεται το αντιγόνο (δείγµα) σύµφωνα µόνο µε την ειδική αντίδραση αντιγόνου/αντισώµατος. επωάζουµε για 2-4 ώρες στους 37 ο C. Μετά το τέλος της επώασης ξεπλένουµε και προσθέτουµε το ανάλογο υπόστρωµα το οποίο εξαρτάται από το ένζυµο µε το οποίο έχει γίνει η σήµανση της γ-σφαιρίνης. Στα φρεάτια όπου είχαν τοποθετηθεί θετικά δείγµατα εµφανίζεται χρώµα λόγω υδρόλυσης του υποστρώµατος από το συζευγµένο ένζυµο. Για τη σύζευξη της γ-σφαιρίνης χρησιµοποιείται συνήθως το ένζυµο αλκαλική φωσφατάση και η αναγνώρισή του γίνεται από το υπόστρωµα p-nitrophenylphosphate. Για να εµφανισθεί το κίτρινο χρώµα πρέπει να υπάρξει διαδοχική σε κάθε στάδιο αναγνώριση / σύνδεση των αντισωµάτων µε τα οµόλογα αντιγόνα. Σε αυτή µόνο τη περίπτωση θα υπάρξει κατά το τελευταίο στάδιο η αλκαλική φωσφατάση που καταλύει το σπάσιµο των φωσφοδιεστερικών δεσµών του υποστρώµατος (κίτρινο χρώµα). Η εκτίµηση της έντασης του χρώµατος µπορεί να καταγραφεί µε ειδικό φωτόµετρο (ποσοτική εκτίµηση των αποτελεσµάτων) ή να εκτιµηθεί από τον ερευνητή (ποιοτική εκτίµηση των αποτελεσµάτων). Η υδρόλυση του υποστρώµατος συνήθως αναστέλλεται µε προσθήκη υδροξειδίου του νατρίου ή θειϊκού οξέος στα φρεάτια της µικροπλάκας πριν από τη µέτρηση της έντασης του χρώµατος. Η άµεση ΕLISA έχει δύο µειονεκτήµατα: (Ι) Μπορεί να είναι τόσο εξειδικευµένη, ώστε αντισώµατα εναντίον µιας φυλής να µην αναγνωρίζουν άλλη φυλή του ίδιου ιού. Αυτό το χαρακτηριστικό είναι αρκετά χρήσιµο για τη διαφοροποίηση φυλών, αλλά αποτελεί σοβαρό µειονέκτηµα, όταν στόχος της εργασίας είναι η ανίχνευση όλων των οροτύπων ενός ιού. Η υψηλή εξειδίκευση είναι σχεδόν σίγουρο ότι οφείλεται στο γεγονός ότι η σύζευξη του ενζύµου µε το αντίσωµα αλληλεπιδρά µε ασθενείς αντιδράσεις µε φυλές που δεν είναι στενά συγγενικές. (ΙΙ) Απαιτεί για την εκτέλεσή της την προετοιµασία για κάθε ιό νέου συζεύγµατος ενζύµου-αντισώµατος Εικ.17. Αµεση ανοσοενζυµική δοκιµή DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich, ELISA) 10

11 Άµεση ACP-ELISA (Antigen Coated Plated ELISA) Είναι ο ίδιος τύπος που περιγράφηκε και παραπάνω µε τη µόνη διαφορά ότι στο πρώτο στάδιο αντί της γ-σφαιρίνης προσκολάται στα φρεάτια το αντιγόνο. Η ACP-ELISA γίνεται επίσης σε µικροπλάκες πολυστηρενίου, και τα διάφορα στάδια της παρουσιάζονται σχηµατικά στη εικόνα 18. Τα φρεάτια της µικροπλάκας από πολυστηρένιο καλύπτονται αρχικά όπως αναφέρθηκε και παραπάνω µε αντιγόνο (πρωτεϊνη του ιού µέσα στο οµογενοποιηµένο δείγµα). Ακολουθεί επώαση για 2-4 ώρες στους 37 ο C και µετά ξεπλένουµε µε ειδικό ρυθµιστικό διάλυµα (βλ. παράρτηµα). Προστίθεται επίσης οροαλβουµίνη (Bovine serum albumin, BSA) αµέσως µετά το πρώτο στάδιο για την αποφυγή µη ειδικών αντιδράσεων, και ακολουθεί η προσθήκη γ-σφαιρίνης συζευγµένης µε το ένζυµο αλκαλική φωσφατάση και επώαση της µικροπλάκας όλη νύχτα στους 4 oc. Την επόµενη, ξεπλένουµε πάλι τη µικροπλάκα, και προσθέτουµε το υπόστρωµα p-nitrophenylphosphate. Στα φρεάτια όπου είχαν τοποθετηθεί θετικά δείγµατα εµφανίζεται χρώµα λόγω υδρόλυσης του υποστρώµατος από το συζευγµένο ένζυµο Εικ.18. Αµεση ανοσοενζυµική δοκιµή-acp-elisa (Antigen coated plate ELISA) Έµµεση ELISA (Ιndirect ELISA) Στην έµµεση ELISA, το ένζυµο που χρησιµοποιείται για τη τελική ανίχνευση του αντιγόνου είναι συζευγµένο σε ένα αντίσωµα αντισφαιρίνης. Έτσι αν π.χ. η παραγωγή των αντισωµάτων εναντίον του ιού έγινε σε ποντίκι, µια αντι- ποντίκι σφαιρίνη µπορεί να χρησιµοποιηθεί. Η αντι- ποντίκι σφαιρίνη µπορεί να παραχθεί σε κατσίκα που αναγνωρίζει ως ξένη ουσία τη πρωτεϊνη του ποντικιού που εµείς εισαγάγουµε µέσω ένεσης στη κατσίκα. Το κυριότερο πλεονέκτηµα της µεθόδου είναι ότι ένα και µοναδικό σύζευγµα µπορεί να χρησιµοποιηθεί για όλους τους ιούς και όλοι οι ορότυποι ενός ιού µπορούν να ανιχνευθούν µε αντισώµατα εναντίον µιας µόνο φυλής. Τα στάδια της έµµεσης ΕLISA φαίνονται στην εικόνα 19. Τα φρεάτια καλύπτοντα αρχικά από γ-ανοσοσφαιρίνες κουνελιού (IgG) (σε συγκέντρωση 1-10µg/ml) έναντι του υπό εξέταση ιού (εξειδικευµένο αντίσωµα). Ακολουθεί επώαση στους 37 οc. Μετά από πλύσιµο και επώαση στους 4 ο C µε το αντιγόνο (ιό), προστίθενται ανοσοσφαιρίνες που παρασκευάστηκαν σε ποντίκι και επωάζονται για 2-4 ώρες στους 37 ο C. Επαναλαµβάνεται πλύσιµο της µικροπλάκας και στη συνέχεια προστίθεται σύζευγµα αντι-ποντίκι σφαιρίνης η οποία παρασκευάστηκε σε κατσίκα η οποία ανοσοποιήθηκε µε γ- 11

12 σφαιρίνη από ποντίκι και επωάζονται για 2-4 ώρες στους 37 οc. Τέλος ακολουθεί η προσθήκη του ειδικού υποστρώµατος (Εικ. 22). 1. Προσρόφηση Ειδικού αντισώµατος Α Επώαση πλύσιµο 2. Προσθήκη δείγµατος Επώαση πλύσιµο 3. Προσθήκη του αντισώµατος Β (Μ ονοκλωνικό αντίσωµα Π οντικού ) Επώαση 4. Προσθήκη του συζευγµένου µε ειδικό ένζυµο αντίσωµατος Γ (κατσίκα αντι -ποντίκι αντίσωµα) Επώαση E πλύσιµο πλύσιµο 5. Προσθήκη υποστρώµατος ( ) Π ου υδρολύει το ένζυµο και ίνει χρώµα ( ) E E Εικ. 19. Στάδια της έµµεσης ELISA Κατηγορίες έµµεσης ELISA ACP-ELISA: Εικόνα 20 12

13 Στάδια: 1=Επίστρωση µε φυτικό εκχύλισµα (ιός) 2=Προσθήκη πολυκλωνικού αντισώµατος 3=Προσθήκη συζεύγµατος αντισφαιρίνης κουνελιού 4=Προσθήκη υποστρώµατος TAS-ELISA: Εικόνα 21 Στάδια: 1=Επίστρωση µε ειδικό αντίσωµα 2=Προσθήκη δείγµατος (ιού) 3=Προσθήκη µονοκλωνικού αντισώµατος 4=Προσθήκη συζεύγµατος αντισφαιρίνης ποντικιού 5=Προσθήκη υποστρώµατος Βασικά χαρακτηριστικά της έµµεσης ELISA 1. Το ένζυµο είναι συζευγµένο σε ένα µόριο αντισφαιρίνης. 2. Ανιχνεύει διαφορετικές φυλές 3. Το ίδιο σύζευγµα χρησιµοποιείται για όλους τους ιούς Ερµηνεία αποτελεσµάτων Η ανίχνευση της σύνδεσης αντιγόνου και οµόλογου αντισώµατος στη περίπτωση της ELISA, δίνεται από την εµφάνιση κίτρινου χρώµατος στα βοθρία όπου έχουν τοποθετηθεί δείγµατα µολυσµένα µε ιό οµόλογο του αντισώµατος που χρησιµοποιήσαµε. Όταν οι µη ειδικές αντιδράσεις δίδουν µικρή οπτική πυκνότητα και η ειδική αντίδραση υψηλή τότε η ερµηνεία των αποτελεσµάτων είναι απλή. Οι δυσκολίες αρχίζουν όταν οι τιµές των µη ειδικών αντιδράσεων (υγιή δείγµατα αναφοράς) και των ειδικών αντιδράσεων (δείγµατα για έλεγχο) overlap. Σε αυτή την περίπτωση είναι απαραίτητο να συµπεριληφθεί ένας µεγάλος αριθµός δειγµάτων υγιών δειγµάτων αναφοράς και να εκτιµηθεί στατιστικώς το threshold των µολυσµένων δειγµάτων. Η µέτρηση της οπτικής πυκνότητας (Optical density, O.D) στα 405 nm δίνει και µια ποσοτική εκτίµηση της συγκέντρωσης του ιού στους ιστούς των µολυσµένων ξενιστών. Κατά την ερµηνεία των αποτελεσµάτων πρέπει οι τιµές των δειγµάτων µας να συγκριθούν µε τις αντίστοιχες τιµές των δυο µαρτύρων (θετικού και αρνητικού). Η συµπεριφορά των µαρτύρων µας δίνει τη δυνατότητα της σύγκρισης και της εξαγωγής συµπερασµάτων ως προς την ταυτότητα του ιού. Όταν ο θετικός µάρτυρας δεν αντιδρά ή ο αρνητικός µάρτυρας (δείγµα από υγιές φυτό) αντιδρά τότε το πείραµα δεν έχει πετύχει. Η ύπαρξη ενός θετικού µάρτυρα, µας επιτρέπει να διαπιστώσουµε εάν ο αντιορός αναγνωρίζει το γνωστό θετικό 13

14 (οµόλογο) δείγµα. Έτσι, εάν τα δείγµατα που εξετάζουµε αντιδράσουν όπως και ο θετικός µάρτυρας συµπεραίνουµε ότι ταυτίζονται ορολογικά µε αυτόν. Από την άλλη πλευρά, ο αρνητικός µάρτυρας αποτελεί ένα µάρτυρα µη αντίδρασης. Μας αποτρέπει από το να θεωρήσουµε ένα αρνητικό δείγµα ως θετικό. Αν για παράδειγµα, η οπτική πυκνότητα του υγιούς δείγµατος είναι 0,8, αυτό θα αποτελεί και το όριο σύγκρισης για να θεωρήσουµε τα δείγµατά µας θετικά ή αρνητικά. Η ερώτηση που ακολουθεί είναι πόσο υψηλότερη από την οπτική πυκνότητα του υγιούς µάρτυρα πρέπει να είναι η τιµή ενός δείγµατος για να θεωρηθεί ως θετικό. Σε πολλές δύσκολες περιπτώσεις, η στατιστική ανάλυση των τιµών δίνει απάντηση για το αν οι διαφορές στις τιµές είναι σηµαντικές. Η χρήση της στατιστικής σε µερικές περιπτώσεις στις βιολογικές επιστήµες είναι επικίνδυνη. Θα πρέπει να αναφέρουµε ότι εµπειρικά, οι περισσότεροι ερευνητές θεωρούν ασφαλές το παρακάτω: Χ 2y ή 3y το δείγµα είναι : Μολυσµένο Χ 2y ή 3y το δείγµα είναι : Υγιές Χ= Οπτική πυκνότητα αγνώστου δείγµατος (Optical density, OD) Y= Οπτική πυκνότητα υγιούς δείγµατος (Optical density, OD) Η Άχρωµο διάλυµα 3-nitrophenyl phosphate κίτρινο χρώµα Εικ. 22. ιαδικασία διάσπασης του υποστρώµατος από το ένζυµο της αλκαλικής φωσφατάσης Προβλήµατα κατά την εκτέλεση της ELISA εν αναπτύσσεται χρώµα α) Παράλειψη ενός σταδίου β) εν χρησιµοποιήθηκε το κατάλληλο ρυθµιστικό διάλυµα για κάθε στάδιο. γ) Κακή ποιότητα ενζύµου και αντιορού Συστήνεται: Χρησιµοποίηση αξιόπιστου θετικού µάρτυρα όπως αναφέρθηκε παραπάνω. Μη ειδική ανάπτυξη χρώµατος α) Ανάπτυξη χρώµατος µόνο στα περιφερειακά φρεάτια της µικροπλάκας. Συνιστάται να αποφεύγεται η χρησιµοποίηση των περιφερειακών βοθρίων για την τοποθέτηση δειγµάτων. Προσθήκη σ αυτά αποσταγµένου ύδατος έχει ως αποτέλεσµα τη διατήρηση της οµοιοµορφίας της θερµοκρασίας σε όλα τα φρεάτια της µικροπλάκας. β) Εµφάνιση χρώµατος σε ολόκληρη τη µικροπλάκα 14

15 Ο αντιορός που χρησιµοποιήθηκε ήταν κακής ποιότητας (περιέχει αντισώµατα έναντι πρωτεϊνών του φυτού-ξενιστή από το οποίο έγινε καθαρισµός του ιού για παραγωγή αντισωµάτων) Το πλύσιµο της µικροπλάκας µεταξύ των διαφόρων σταδίων ήταν ανεπαρκές. Χρησιµοποιήθηκε παλιό υπόστρωµα (το οποίο παρασκευάστηκε πριν από µεγάλο χρονικό διάστηµα) Εγιναν σφάλµατα στην αλληλουχία επίστρωσης της µικροπλάκας µε τα διάφορα αντιδραστήρια Για την λήψη αξιόπιστων αποτελεσµάτων συνιστάται η λήψη των παρακάτω µέτρων: α. Χρήση αξιόπιστων µαρτύρων (θετικού και αρνητικού) σε κάθε µικροπλάκα. β. Προσρόφηση του αντιορού έναντι οµογενοποιηµένου διαλύµατος προερχόµενο από υγιές φυτό. γ. Χρησιµοποίηση «φρέσκου» υποστρώµατος. Το διάλυµα υποστρώµατος θα πρέπει να προετοιµάζεται λίγο πριν τη χρησιµοποίησή του. δ. Καθώς ακόµη και τα βοθρία της ίδιας µικροπλάκας µπορεί να διαφέρουν, είναι απαραίτητο κάθε δείγµα να ελέγχεται σε τουλάχιστον δυο βοθρία (και να λαµβάνεται ο µέσος όρος της οπτικής πυκνότητας). ε. Κάλυψη µικροπλάκας µε ειδική µεµβράνη (Parafilm) για να αποφεύγονται οι επιµολύνσεις µε µικροοργανισµούς από τον περιβάλλοντα χώρο (πιθανόν να επηρεάσουν τα αποτελέσµατα της δοκιµής). Ταχεία ανάπτυξη χρώµατος ή ανάπτυξη µικρής έντασης χρώµατος στα βοθρία (φρεάτια) των υγιών δειγµάτων. α) υψηλή συγκέντρωση της συζευγµένης, µε αλκαλική φωσφατάση, γ-ανοσοσφαιρίνης β) υψηλή συγκέντρωση υποστρώµατος Συστήνεται: Επιλογή συζευγµένης γ-ανοσοσφαιρίνης και υποστρώµατος σε συγκεντρώσεις που δίνουν οπτική πυκνότητα (O.D) περίπου 1.0, λεπτά µετά την προσθήκη του υποστρώµατος. Σχόλια για τα διάφορα στάδια της δοκιµής ELISA Κάλυψη της µικροπλάκας Η ευαισθητοποίηση της σταθερής επιφάνειας της µικροπλάκας του πολυστηρενίου περιλαµβάνει την προσρόφηση της γ-ανοσοσφαιρίνης σε µια µη αντιστρεπτή υδρόφοβο αλληλεπίδραση. Μη ιοντικά απορρυπαντικά όπως το Tween 20 εµποδίζει αυτή την αντίδραση αλλά δεν την ανατρέπει και η προσθήκη της στη συνέχεια γίνεται για να παρεµποδίσει την µη ειδική προσρόφηση (binding). Οι µικροπλάκες αποτελούν την πιο κατάλληλη επιφάνεια για την ELISA και οι µικροπλάκες των 96 φρεατίων (8Χ12) αποτελούν τις πλέον κατάλληλες για την τοποθέτησή τους σε αυτόµατες συσκευές πλύσης, ανάγνωσης της οπτικής πυκνότητας κλπ. Όµως, άλλα συστήµατα για ειδικούς σκοπούς είναι επίσης διαθέσιµα. Η ευαισθησία της αντίδρασης που µπορεί να επιτευχθεί ποικίλει µεταξύ των µικροπλακών των διαφόρων εταιρειών. Μικροπλάκες καλυµµένες µε γ-ανοσοσφαιρίνη, εάν καλυφθούν σωστά, µπορούν να αποθηκευτούν στην κατάψυξη (-30 o C, -80 o C) για µερικούς µήνες διατηρώντας τις ιδιότητές τους. Πλύσιµο των µικροπλακών Το πλύσιµο των µικροπλακών µεταξύ των διαφόρων σταδίων της µεθόδου είναι ουσιώδης για να εµποδιστεί η µεταφορά από στάδιο σε στάδιο των αντιδραστηρίων που δεν αποτελούν µέρος του συµπλόκου αντισώµατος και της σταθερής επιφάνειας του πολυστηρενίου. 15

16 Συνήθως µετά την κάλυψη της µικροπλάκας µε το αντίσωµα, την προσθήκη του φυτικού εκχυλίσµατος (δείγµατος) και την διαδικασία επώασης µε το σύζευγµα, οι µικροπλάκες πλένονται τουλάχιστον τρεις φορές µε ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης PBS που περιέχει 0,05 % Tween 20 (PBS-Tween) (βλέπε παράρτηµα) και συχνά το διάλυµα πλύσης παραµένει στην µικροπλάκα για τουλάχιστον µερικά λεπτά. Οι αυτόµατες συσκευές πλύσης που κυκλοφορούν στο εµπόριο επιτρέπουν την standardization της µεθόδου. Σε ορισµένα συστήµατα ξενιστή/ιού, για το πλύσιµο των µικροπλακών έχει χρησιµοποιηθεί αποσταγµένο νερό ή νερό βρύσης µε καλά αποτελέσµατα. Προετοιµασία του φυτικού εκχυλίσµατος (δείγµατος) Η τεχνική προετοιµασίας του φυτικού εκχυλίσµατος µπορεί να τροποποιηθεί ανάλογα µε την συγκέντρωση του ιού στον ξενιστή, την σταθερότητα του ιού και την παρουσία αναστολέων στο φυτό-ξενιστή. Για την εκχύλιση έχουν χρησιµοποιηθεί διάφορα ρυθµιστικά διαλύµατα και διάφορα πρόσθετα στα διάφορα συστήµατα ιών-ξενιστών (Βar-Joseph and Garsney, 1981; Clark, 1981; Clark and Bar-Joseph, 1988). Στις περισσότερες περιπτώσεις το φυτικό εκχύλισµα προετοιµάζεται σε ρυθµιστικό διάλυµα PBS-Tween µε την προσθήκη 2% PVP αλλά ρυθµιστικό διάλυµα που περιέχει 2-µερκαπτοαιθανόλη έδωσε καλύτερα αποτελέσµατα όταν χρησιµοποιήθηκαν καθαρά παρασκευάσµατα του ιού. Εναλλακτικά, διαιθυλο-διθειοκαρβαµαδικά (diethyl-dithiocarbamate) είναι χρήσιµο ως πρόσθετο, σε ορισµένα φυτικά εκχυλίσµατα. Το PVP µπορεί να µειώσει την µη-ειδική αντίδραση αλλά µπορεί να µειώσει επίσης και την ειδική αντίδραση του ιού. Παροµοίως, η προσθήκη διθειοθρεϊτόλης (dithiothreitol) µπορεί επίσης να µειώσει την ειδική και µη-ειδική αντίδραση. Για παράδειγµα στα ξυλώδη φυτά όπως το αµπέλι, ανεξαρτήτως εάν ο ιστός λαµβάνεται από τα φύλλα ή το φλοιό (cortex), η εκχύλιση γίνεται σε PBS-Tween που περιέχει 2% PVP και 1-2,5% νικοτίνη. Η προσθήκη της νικοτίνης είναι απαραίτητη εάν η εκχύλιση θα γίνει από ιστό φύλλων. εν απαιτείται νικοτίνη εάν το διάλυµα εκχύλισης αποτελείται από 0,1 Μ Tris-HCl, ph 8,2 που περιέχει 0,8 % NaCl και 2 % PVP (Walter and Etienne, 1987). Η άριστη αραίωση του φυτικού εκχυλίσµατος θα πρέπει να προσδιοριστεί πειραµατικώς. Σε ιούς µε υψηλό σηµείο οριακής αραίωσης (υψηλή συγκέντρωση ιικού αντιγόνου στους ιστούς του ξενιστή) είναι δυνατή η αραίωση του φυτικού εκχυλίσµατος (1/100 ή και περισσότερο) για να µειωθεί ή να µηδενιστεί η µη-ειδική αντίδραση που οφείλεται σε κυτταρικά συστατικά του φυτού-ξενιστή. Μεγάλης διάρκειας επώαση του φυτικού εκχυλίσµατος στην µικροπλάκα έχει βρεθεί ότι είναι πιο αποτελεσµατική και ολονύκτια επώαση στους 4-6 o C είναι πιο κατάλληλη για δοκιµές ρουτίνας. Προσθήκη του συζεύγµατος Αύξηση της αραίωσης του συζεύγµατος έχει ως αποτέλεσµα την αντίστοιχη µείωση της αντίδρασης της ELISA, αλλά αυτό µπορεί να εξισορροπιστεί µε αύξηση του χρόνο επώασης. Η επώαση του συζεύγµατος για τρεις ώρες στους o C θεωρείται ιδιαίτερα ικανοποιητική, αλλά ολονύκτια επώαση στους 6 o C έδωσε επίσης καλά αποτελέσµατα. Προσθήκη του υποστρώµατος Μετά το τελικό πλύσιµο, προσθέτουµε το υπόστρωµα. Το υπόστρωµα θα πρέπει να έχει παρασκευαστεί λίγο πριν από την χρησιµοποίησή του, στην επιθυµητή συγκέντρωση και να µην εµφανίζει χρώµα. Στην ELISA το χρώµα εµφανίζεται λεπτά µετά την προσθήκη του υποστρώµατος. Η ενεργότητα (δραστηριότητα) της αλκαλικής φωσφατάσης αναστέλλεται µε την προσθήκη 3M υδροξειδίου του νατρίου (NaOH) και µετά την αναστολή 16

17 της αντίδρασης οι µικροπλάκες µπορούν να αποθηκευτούν (καλυµµένες µε parafilm) στους 4 o C για µερικές ώρες έως ότου γίνει η ανάγνωσή τους. Η ανάγνωση (εκτίµηση της έντασης του χρώµατος που αναπτύσσεται) των µικροπλακών µπορεί να γίνει µε το µάτι µε µια ευαισθησία +_0,15 Ο.Π. 405 και σε αρκετές περιπτώσεις η αξιολόγηση αυτή µπορεί να είναι ικανοποιητική για τις ανάγκες του πειράµατος. Όµως, για πιο ακριβή εκτίµηση της έντασης του χρώµατος σε κάθε φρεάτιο η µέτρηση πρέπει να γίνει µε φασµατοφωτόµετρο στα 405 nm όταν ως ένζυµο χρησιµοποιείται η αλκαλική φωσφατάση ή στα 450 nm όταν χρησιµοποιείται υπεροξειδάση. Eξοπλισµός για την ELISA Εάν η αξιολόγηση της αντίδρασης της ELISA γίνει µε το µάτι, και χρησιµοποιηθούν αντιδραστήρια από το εµπόριο (συζεύγµατα κλπ) η δοκιµή µπορεί να εκτελεστεί µε ελάχιστο εξοπλισµό. Όµως, εάν η µέθοδος χρησιµοποιηθεί για τον έλεγχο µεγάλου αριθµού δειγµάτων απαιτείται ο αυτοµατισµός διαφόρων σταδίων της µεθόδου. Για την ταυτόχρονη προσθήκη στην µικροπλάκα τόσο της IgG όσο και του συζεύγµατος θα πρέπει να αγοραστούν πολυκάναλλες πιπέτες (για οκτώ ή δώδεκα φρεάτια) µε ρύγχη µιας χρήσης. Στο εµπόριο κυκλοφορούν επίσης πλυντήρια και φασµατοφωτόµετρα διαφόρων τύπων, το κόστος των οποίων εξαρτάται από το επίπεδο των αυτοµατισµών τους. Η εκχύλιση των φυτικών δειγµάτων αποτελεί το πιο απαιτητικό, από πλευράς εργασίας, στάδιο της ELISA. H µέθοδος προετοιµασίας του δείγµατος θα πρέπει να λαµβάνει υπόψιν τον τύπο του δείγµατος, την φυσική κατάσταση του δείγµατος, την σταθερότητα και τη συγκέντρωση του ιού που περιέχει και την επίδραση των συστατικών του φυτικού κυττάρου στην αντίδραση της ELISA. Για παράδειγµα, σε χυµώδη φυτά µολυσµένα µε σταθερούς ιούς που δεν µεταδίδονται πολύ εύκολα µηχανικά, πίεση µε ρολό που χρησιµοποιούν οι ελαιοχρωµατιστές είναι κατάλληλη. Όταν τα φύλλα είναι λιγότερο χυµώδη, µια αυτόµατη πιπέτα µπορεί να χρησιµοποιηθεί για την προσθήκη ρυθµιστικού διαλύµατος στα ρολά της αυτόµατης συσκευής. Σε περιπτώσεις που υπάρχει κίνδυνος επιµόλυνσης, όταν χειριζόµαστε ιδιαίτερα µολυσµατικούς ιούς, µικρές ποσότητες ιστών φύλλων τοποθετούνται σε µικρές πλαστικές σακούλες. Για ινώδεις φυτικούς ιστούς, όπως των φυτικών ειδών της οικογένειας Poaceae (Graminae), βαθιά κατάψυξη ή ξήρανση των δειγµάτων στον αέρα και στη συνέχεια, λειοτρίβηση σε µύλο έδωσε καλά αποτελέσµατα, µε το πλεονέκτηµα ότι τα δείγµατα µπορούν να αποθηκευτούν για πολύ µεγάλο χρονικό διάστηµα. Για εξαγωγή χυµού από κονδύλους πατάτας, µπορεί να χρησιµοποιηθεί οδοντιατρικός drill. Aνάπτυξη της ELISA για ειδικούς συνδυασµούς ιού/ξενιστή Ενώ η διαδικασία της ELISA είναι σχετικά απλή, για κάθε νέο συνδυασµό ιού/ξενιστή απαιτείται κάποιος πειραµατισµός. Η γνώση του τίτλου του διαθέσιµου αντιορού και της συγκέντρωσης του ιού καθώς και της χωρικής και χρονικής κατανοµής του στους ιστούς του ξενιστή. Aπαιτείται επίσης πειραµατισµός για τον προσδιορισµό των άριστων συγκεντρώσεων της γ-ανοσοσφαιρίνης, του συζεύγµατος και του φυτικού εκχυλίσµατος κάτι που θα πρέπει να επαναλαµβάνεται κάθε φορά που θα χρησιµοποιείται νέο σύζευγµα. Σταυροειδής επιµόλυνση των φρεατίων κατά την επώαση των δειγµάτων και το στάδιο του πλυσίµατος µπορεί να προκαλέσει spurious αντιδράσεις αν και η υιοθέτηση standard ρουτίνας για την τοποθέτηση των δειγµάτων και τις διαδικασίες πλύσης βοηθά στην ερµηνεία τέτοιων σφαλµάτων. Κατά την εκτέλεση της ELISA θα πρέπει να λαµβάνονται µέτρα υγιεινής και καθαριότητας ώστε να αποφεύγονται ανεπιθύµητες µη ειδικές αντιδράσεις. 17

18 Εργαστηριακό µέρος Υλικά Γενικά - Μικροπλάκες πολυστηρενίου (96 φρεατίων) - Γυάλινα φιαλίδια - Επιτραπέζια φυγόκεντρος µέσων ταχυτήτων - Ειδικό φωτόµετρο για την ανάγνωση των µικροπλακών ELISA - Γουδιά και γουδοχέρια ή µεγάλου πάχους πλαστικές σακούλες - Τουλπάνι - Μικροπιπέτες ( µl) και ρύγχη - Σωλήνες διαπίδυσης (προετοιµάζονται µε βρασµό για 10 λεπτά σε διάλυµα 0,01 Μ EDTA) - Eπωαστικός θάλαµος στους o C Φυτικό Υλικό - Υγιές και µολυσµένο φυτικό υλικό - Καθαρό παρασκεύασµα του ιού Χηµικά, ρυθµιστικά διαλύµατα και εναιωρήµατα - Kαθαρή IgG του ιού - ιάλυµα πλύσης της πλάκας (PBS - Τween) - ιάλυµα Επιστρώσεως της πλάκας (Coating Buffer) - ιάλυµα υποστρώµατος (Substrate Buffer) - ιαιθανολαµίνη - Na 2 -EDTA: 0,012 M - Na-DIECA: 0,012 M - Πoλυβινυλο-πυρολιδόνη (Polyvinyl pyrrolidone, ΜΒ 44000) - Οροαλβουµίνη βοδιού, λευκωµατίνη (Bovine Serum Albumin, BSA) - ιάλυµα 3Μ NaOH - Αζίδιο του νατρίου (NaN 3 ) - Υπόστρωµα του ενζύµου (Φωσφoρική παρα-νιτροφαινόλη, PNPP) - Μικροπλάκες ELISA από πολυστηρένιο - Φασµατοφωτόµετρο για µέτρηση της απορρόφησης στα 405nm όταν χρησιµοποιείται αλκαλική φωσφατάση ή στα 450 nm (όταν χρησιµοποιείται η υπεροξειδάση). Η µέτρηση της οπτικής απορρόφησης σε διαφορετικό µήκος κύµατος (πχ. Από 405 nm στα 450 nm) επιτυγχάνεται µε αλλαγή του φίλτρου του φασµατοφωτοµέτρου. ιαδικασία της διαδικασίας DAS-ELISA 1. Προσρόφηση στην πλάκα ειδικού αντισώµατος Τοποθέτηση 200 µl/βοθρίο διαλυµένης γ-ανοσοσφαιρίνης σε Coating Buffer Eπώαση για 2-4 ώρες στους ο C Πλύσιµο τρεις φορές επί 3 λεπτά της πλάκας µε PBS-tween 18

19 2. Προσθήκη οροαλβουµίνης (BSA) 1% σε PBS (για ελαχιστοποίηση της µη ειδικής αντίδρασης) Τοποθέτηση 200 µl/βοθρίο Eπώαση για 1 ώρα στους ο C Πλύσιµο τρεις φορές επί 3 λεπτά της πλάκας µε PBS-tween 3. Προσρόφηση των δειγµάτων Τοποθέτηση 200 µl/βοθρίο των υπό έλεγχο εκχυλισµάτων από τα φυτά-δείγµατα Eπώαση για ώρες στους 4 ο C (ψυγείο) Πλύσιµο τρεις φορές επί 3 λεπτά της πλάκας µε PBS-tween 4. Προσθήκη συζευγµένου µε ειδικό ένζυµο αντισώµατος Τοποθέτηση µl/βοθρίο συζευγµένης γ-ανοσοσφαιρίνης Eπώαση για 2-4 ώρες στους ο C Πλύσιµο 3 φορές επί 3 λεπτά της πλάκας µε PBS-tween 5. Προσθήκη υποστρώµατος Τοποθέτηση 300 µl/βοθρίο του υποστρώµατος PNPP σε διάλυµα υποστρώµατος (Substrate Buffer) Eπώαση σε θερµοκρασία εργαστηρίου ιακοπή της ενζυµικής δραστηριότητας µετά από 60 τοποθετώντας 50 µl/βοθρίο του αναστολέα ΝaOH 3Μ και µέτρηση µετά σε ειδικό φασµατοφωτόµετρο. ιαλύµατα που χρησιµοποιούνται 1. Καθαρή γ-ανοσοσφαιρίνη (γ-globulin) αραιωµένη σε διάλυµα Επιστρώσεως. 2. Συζευγµένη γ-ανοσοσφαιρίνη αραιωµένη διαλυµένη σε PBS-tween + 2% PVP + 0,2% BSA 3. Υπόστρωµα, φωσφορική παρα-νιτροφαινόλη (p-nitrophenyl phosphate) σε αναλογία 0,6% σε διάλυµα υποστρώµατος 4. Φυτικό εκχύλισµα σε ρυθµιστικό διάλύµα (PBS-tween + 2% PVP) Ρυθµιστικά διαλύµατα Φωσφορικό ρυθµιστικό διάλυµα (Phosphate buffer saline, PBS, ph=7,4) 8,0 g NaCl, 0,2g KH 2 PO 4 2,9g Na 2 HPO 4. 12H 2 O 0,2g KCl 0,2g αζιδίου του νατρίου (NaN 3 ) (σε ένα λίτρο απεσταγµένου ύδατος) Το PBS µπορεί να διατηρηθεί χωρίς την προσθήκη συντηρητικού ή αντιβακτηριακού εάν είναι 10 Μ, το οποίο στη συνέχεια µπορεί να αραιωθεί για τις ανάγκες του πειράµατος. Στο αραιό PBS ευνοεί η ανάπτυξη βακτηρίων είναι ταχεία και γι αυτό τον λόγο για την µακρόχρονη διατήρησή τους συνιστάται η προσθήκη συντηρητικού. Για να αποφευχθεί η προσθήκη συντηρητικού, όπως είναι το τοξικό ΝaN 3 είναι προτιµότερο να παρασκευάζεται φρέσκο διάλυµα κάθε µέρα. PBS-Τween= PBS ml Τween 20/λίτρο Ρυθµιστικό διάλυµα Επίστρωσης (Coating Buffer, ph=9,6) 1,59g Na 2 CO 3 19

20 2,93g NaHCO 3 0,2g NaN 3 (σε ένα λίτρο αποσταγµένου ύδατος) Σηµείωση: το NaN 3 είναι τοξικό γι αυτό και η αναρρόφηση του διαλύµατος πρέπει να γίνεται µε σιφώνιο και µε τη βοήθεια κατάλληλης φούσκας. Οι χηµικές ουσίες µπορεί επίσης να δηµιουργήσουν εκρηκτικά µίγµατα µε τα µέταλλα, έτσι θα πρέπει να λαµβάνονται µέτρα κατά την αποµάκρυνσή τους µέσω του νεροχύτη. Ο κίνδυνος από την αποµάκρυνση του αζιδίου ελαχιστοποείται µε ουδετεροποίησή του πριν από την αποµάκρυνση του µε νιτρικό αµµωνιακό δηµήτριο (ammonium ceric nitrate) ως ακολούθως. α. Σε κάθε λίτρο υγρού (που περιέχει αζίδιο) για αποµάκρυνση, προσθέστε προσεκτικά 100 ml νιτρικό αµµωνιακό δηµήτριο. β. Κάνετε έλεγχο για πλήρη διάσπασης του αζιδίου µε την προσθήκη µερικών σταγόνων διαλύµατος χλωριούχου σιδήρου (13,5 g FeCl 3.6H 2 O+2 ml πυκνού HCl σε 100 ml ύδατος). Εάν µετά από 10 λεπτά το προϊόν αντίδρασης παραµένει ερυθρό προσθέτουµε περισσότερο. γ. Το διάλυµα µπορεί µε ασφάλεια να αποµακρυνθεί, µε την προϋπόθεση ότι δεν περιέχει άλλα επικίνδυνα χηµικά. Ρυθµιστικό διάλυµα υποστρώµατος (Substrate Buffer, ph=9,8) 97ml ιαιθανολαµίνη (Diethanolamine) 800 ml απεσταγµένου H 2 O 0,2g NaN 3 Μετά την ανάµιξή τους προσθέτουµε σταγόνα-σταγόνα HCl 1 Ν ώστε το ph να γίνει 9,8. Προσθήκη απεσταγµένου ύδατος µέχρι τελικού όγκου ενός λίτρου. Φιλτράρισµα της γ-ανοσοσφαιρίνης µέσω στήλης κυτταρίνης DE 52 Yλικά 1. Γιάλινη σύριγγα 10 ml 2. Kυτταρίνη DE 52 (Whatman Ltd). 3. Xαρτί glassfibre: Whatman GF/A (Whatman Ltd). 4. Φωσφορικό ρυθµιστικό διάλυµα (PBS) 5. Παρασκεύασµα γ-ανοσοσφαιρίνης 6. Μικρός σωλήνας (για να προσαρµόζεται το ακροφύσιο της σύριγγας) και κάλυµµα για να κλείνει 7. Σωλήνες 5 ml σε στατώ για τη συλλογή των κλασµάτων Εταιρείες Παραγωγής Αντιδραστηρίων ELISA 1. Inotech Ag, Zentralstrasse, 34, CH-5620, Wohlen, Switzerland 2. Boeringer Mannheim GmbH, (BCL), Bell Lane, Lewes, East Sussex, BN7 1LG, UK. Θα πρέπει να σηµειωθεί ότι υπάρχουν σηµαντικές διαφορές µεταξύ των αντιδραστηρίων των διαφόρων εταιρειών τόσο όσο αφορά το κόστος τους αλλά και την ποιότητά τους. Ορισµένες εταιρείες διαθέτουν προς πώληση µόνο αντισώµατα, ενώ άλλες διαθέτουν όλα τα αντιδραστήρια που απαιτούνται για την εκτέλεση των ορολογικών δοκιµών. Στη δεύτερη περίπτωση το κόστος είναι ιδιαίτερα υψηλό και δεν συνιστάται στην 20

21 περίπτωση που τα διαγνωστικά εργαστήρια διαθέτουν υποτυπώδη εξοπλισµό για την παρασκευή τους. Πρωτόκολλο σύζευξης της γ-ανοσοσφαιρίνης µε το ένζυµο της αλκαλικής φωσφατάσης (Εικόνα 23): α. Φυγοκεντρούµε 0,1 ml ενζύµου* αλκαλικής φωσφατάσης στις 4000 στροφές / 5 λεπτά. Αποµακρύνουµε το υπερκείµενο και διατηρούµε το ίζηµα. β. Άµεση διαλυτοποίηση του ιζήµατος, µε 1 ml γ-ανοσοσφαιρίνης (συγκέντρωση 1mg/ml) γ. Υποβάλλουµε το διάλυµα σε διαπίδυση µε τριπλή ενδιάµεση αλλαγή του ρυθµιστικού διαλύµατος (500 ml PBS) και µε συνεχή ανάδευση στους 4 ο C. δ. Σύνδεση του ενζύµου γ-ανοσοσφαιρίνης µε προσθήκη γλουταραλδεϋδης σε αναλογία 0,06% στο σύζευγµα που πήραµε από την διαπίδυση. Αφήνουµε το διάλυµα σε θερµοκρασία εργαστηρίου για τέσσερις (4) ώρες. ε. Υποβάλλουµε το εναιώρηµα σε διαπίδυση τρεις (3) φορές µε 500 ml PBS για να αποµακρυνθεί η γλουταραλδεϋδη. Η διάρκεια των διαπιδύσεων κυµαίνεται από 4 έως 10 ώρες. στ. Προσθέτουµε 5 mg οροαλβουµίνης ανά ml γ-ανοσοσφαιρίνης και αποθηκεύουµε τη συζευγµένη IgG σε θερµοκρασία 4 ο C. Εικ. 23. ιαδικασία σύνδεσης της γ-ανοσοσφαιρίνης µε το ένζυµο της αλκαλικής φωσφατάσης µε τη βοήθεια της γλουταραλδεϋδης συνήθως χρησιµοποιούνται µονάδες ενζύµου ανά ml γ-ανοσοσφαιρίνης (O.D. 1.4). 21

Η γενοκτονία των Ποντίων 1 (11)

Η γενοκτονία των Ποντίων 1 (11) Η γενοκτονία των Ποντίων 1 (11) H γη των µύθων Στα παράλια της άξενης θάλασσας που εκτείνεται πέρα από τα στενά του Βοσπόρου, Έλληνες πριν από σχεδόν 3.000 χρόνια έχτισαν φιλόξενες πολιτείεςκιβωτούς του

Διαβάστε περισσότερα

ΕΘΝΙΚΗ ΣΧΟΛΗ ΗΜΟΣΙΑΣ ΙΟΙΚΗΣΗΣ ΜΑΘΗΜΑ: ΟΡΓΑΝΩΣΗ ΚΑΙ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΟΥ ΚΡΑΤΟΥΣ (ΣΥΝΤΑΓΜΑΤΙΚΟ ΙΚΑΙΟ)

ΕΘΝΙΚΗ ΣΧΟΛΗ ΗΜΟΣΙΑΣ ΙΟΙΚΗΣΗΣ ΜΑΘΗΜΑ: ΟΡΓΑΝΩΣΗ ΚΑΙ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΟΥ ΚΡΑΤΟΥΣ (ΣΥΝΤΑΓΜΑΤΙΚΟ ΙΚΑΙΟ) ΕΘΝΙΚΗ ΣΧΟΛΗ ΗΜΟΣΙΑΣ ΙΟΙΚΗΣΗΣ ΜΑΘΗΜΑ: ΟΡΓΑΝΩΣΗ ΚΑΙ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΤΟΥ ΚΡΑΤΟΥΣ (ΣΥΝΤΑΓΜΑΤΙΚΟ ΙΚΑΙΟ) ΠΡΟΤΕΙΝΟΜΕΝΗ ΕΡΩΤΗΣΗ Με τον όρο δικαίωµα εκφράζεται η εξουσία που παρέχεται από το σύστηµα δικαίου. Ποια είναι

Διαβάστε περισσότερα

ΕΚΘΕΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΑΡΑΝΟΜΗ ΙΑΚΙΝΗΣΗ ΑΝΘΡΩΠΩΝ

ΕΚΘΕΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΑΡΑΝΟΜΗ ΙΑΚΙΝΗΣΗ ΑΝΘΡΩΠΩΝ ΕΚΘΕΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΑΡΑΝΟΜΗ ΙΑΚΙΝΗΣΗ ΑΝΘΡΩΠΩΝ ηµοσιοποιείται από το Γραφείο Παρακολούθησης και Καταπολέµησης της Παράνοµης ιακίνησης Ανθρώπων 12 Ιουνίου 2007 ΕΙΣΑΓΩΓΗ Οι καταθέσεις των θυµάτων που περιλαµβάνονται

Διαβάστε περισσότερα

ΤΜΗΜΑ ΣΥΝΤΗΡΗΣΗΣ ΗΜΟΤΙΚΩΝ αριθ. Πρωτ. Προκ: 54141 & ΣΧΟΛΙΚΩΝ ΚΤΙΡΙΩΝ Κ.Α. 30-7331.055 για το 2015

ΤΜΗΜΑ ΣΥΝΤΗΡΗΣΗΣ ΗΜΟΤΙΚΩΝ αριθ. Πρωτ. Προκ: 54141 & ΣΧΟΛΙΚΩΝ ΚΤΙΡΙΩΝ Κ.Α. 30-7331.055 για το 2015 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Ηράκλειο, 05/05/2015 ΗΜΟΣ ΗΡΑΚΛΕΙΟΥ «Προµήθεια Χρωµάτων» /ΝΣΗ ΣΥΝΤΗΡΗΣΗΣ & Έργο: Συντήρηση Σχολικών Κτιρίων ΑΥΤΕΠΙΣΤΑΣΙΑΣ A/θµιας & Β/θµιας Εκπαίδευσης. ΤΜΗΜΑ ΣΥΝΤΗΡΗΣΗΣ ΗΜΟΤΙΚΩΝ αριθ.

Διαβάστε περισσότερα

Α. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΟΥ Ένα απλό σχολικό µικροσκόπιο αποτελείται από τρία βασικά συστήµατα, το οπτικό, το µηχανικό και το φωτιστικό.

Α. ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΟΥ Ένα απλό σχολικό µικροσκόπιο αποτελείται από τρία βασικά συστήµατα, το οπτικό, το µηχανικό και το φωτιστικό. ΓΝΩΡΙΜΙΑ ΜΕ ΤΟ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΟ Σκοπός - Να γνωρίσετε την κατασκευή και τη λειτουργία του µικροσκοπίου. - Να εξασκηθείτε στην προετοιµασία παρασκευασµάτων. - Να εξοικειωθείτε στη χρήση του µικροσκοπίου. Α.

Διαβάστε περισσότερα

Σ Χ Ο Λ Η :Δ ΙΟ ΙΚ Η Σ Η Σ Κ Α Ι Ο ΙΚ Ο Ν Ο Μ ΙΑ Σ ΤΜ Η Μ Α : Λ Ο Γ ΙΣ Τ ΙΚ Η Σ. ιιιιιιι. Θέμα: Συναλλαγματική Γραμμάτιο εις Δ ια ταγήν Επιταγή

Σ Χ Ο Λ Η :Δ ΙΟ ΙΚ Η Σ Η Σ Κ Α Ι Ο ΙΚ Ο Ν Ο Μ ΙΑ Σ ΤΜ Η Μ Α : Λ Ο Γ ΙΣ Τ ΙΚ Η Σ. ιιιιιιι. Θέμα: Συναλλαγματική Γραμμάτιο εις Δ ια ταγήν Επιταγή τ.ε.ι. Κ Α Β Α Λ Α Σ Σ Χ Ο Λ Η :Δ ΙΟ ΙΚ Η Σ Η Σ Κ Α Ι Ο ΙΚ Ο Ν Ο Μ ΙΑ Σ ΤΜ Η Μ Α : Λ Ο Γ ΙΣ Τ ΙΚ Η Σ ιιιιιιι Θέμα: Συναλλαγματική Γραμμάτιο εις Δ ια ταγήν Επιταγή Καθηγητής: Τσαρουχάς Αναστάσιος Σπουδάστριες:

Διαβάστε περισσότερα

/νση: ΧΑΡΑΚΟΠΟΥΛΟΣ ΧΡΗΣΤΟΣ Μ. Αλεξάνδρου 49, 66100, ράµα Τηλ&φαξ: +2521021972, κιν.: + 6973585563 www.akademia.gr, e-mail: info@akademia.

/νση: ΧΑΡΑΚΟΠΟΥΛΟΣ ΧΡΗΣΤΟΣ Μ. Αλεξάνδρου 49, 66100, ράµα Τηλ&φαξ: +2521021972, κιν.: + 6973585563 www.akademia.gr, e-mail: info@akademia. ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗ ΓΛΩΣΣΑ (Οδηγίες) Α. ΠΕΡΙΛΗΨΗ (25 µονάδες) ιαβάζουµε µια φορά προσεκτικά το κείµενο, κατανοούµε το περιεχόµενό του κι επισηµαίνουµε το θεµατικό του κέντρο. ουλεύουµε ανά παράγραφο. Υπογραµµίζουµε

Διαβάστε περισσότερα

Η ΕΠΑΓΓΕΛΜΑΤΙΚΗ & ΕΠΙΧΕΙΡΗΜΑΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΕΛΛΗΝΩΝ ΤΗΣ ΔΙΑΣΠΟΡΑΣ ΜΕΤΑ ΤΟΝ Β ΠΑΓΚΟΣΜΙΟ ΠΟΛΕΜΟ ΚΑΙ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΗΣ ΣΤΟ ΕΘΝΙΚΟ ΚΕΝΤΡΟ

Η ΕΠΑΓΓΕΛΜΑΤΙΚΗ & ΕΠΙΧΕΙΡΗΜΑΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΕΛΛΗΝΩΝ ΤΗΣ ΔΙΑΣΠΟΡΑΣ ΜΕΤΑ ΤΟΝ Β ΠΑΓΚΟΣΜΙΟ ΠΟΛΕΜΟ ΚΑΙ Η ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΤΗΣ ΣΤΟ ΕΘΝΙΚΟ ΚΕΝΤΡΟ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΌ ΕΚΠΑΙΔΕΥΤΙΚΟ ΙΔΡΥΜΑ ΚΑΒΑΛΑΣ ΣΧΟΛΗ ΔΙΟΙΚΗΣΗΣ ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΔΙΟΙΚΗΣΗ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΕΩΝ Η ΕΠΑΓΓΕΛΜΑΤΙΚΗ & ΕΠΙΧΕΙΡΗΜΑΤΙΚΗ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ ΕΛΛΗΝΩΝ ΤΗΣ ΔΙΑΣΠΟΡΑΣ ΜΕΤΑ ΤΟΝ Β ΠΑΓΚΟΣΜΙΟ ΠΟΛΕΜΟ

Διαβάστε περισσότερα

ΕΘΝΙΚΟ ΠΛΑΙΣΙΟ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝΤΙΚΩΝ ΔΡΑΣΕΩΝ

ΕΘΝΙΚΟ ΠΛΑΙΣΙΟ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝΤΙΚΩΝ ΔΡΑΣΕΩΝ ΕΘΝΙΚΟ ΠΛΑΙΣΙΟ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝΤΙΚΩΝ ΔΡΑΣΕΩΝ 1. ΕΙΣΑΓΩΓΗ Ο σκοπός του Εθνικού Πλαισίου Περιβαλλοντικών Δράσεων είναι να παρέχει μια κοινή πλατφόρμα για τις περιβαλλοντικές δράσεις που αναλαμβάνονται από τις

Διαβάστε περισσότερα

Σ Χ Ε Ι Ο ΟΡΓΑΝΙΣΜΟΣ ΛΙΜΕΝΟΣ ΠΑΤΡΩΝ Α.Ε. ΑΡΙΘ. ΠΡΩΤ.: 3218/5-3-12 ΑΡΙΘ. ΣΧΕ.: 2329 ΕΠΑΝΑΛΗΠΤΙΚΗ ΙΑΚΗΡΥΞΗ ΕΚΜΙΣΘΩΣΗΣ ΧΩΡΟΥ ΓΙΑ ΤΗΝ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΗΣ ΜΕ ΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΑ ΧΑΜΗΛΗΣ ΟΧΛΗΣΗΣ ΣΤΟΝ ΜΕΤΑΠΟΙΗΤΙΚΟ

Διαβάστε περισσότερα

62 η ΣΥΝΟΔΟΣ ΠΡΥΤΑΝΕΩΝ & ΠΡΟΕΔΡΩΝ Δ.Ε. ΤΩΝ ΕΛΛΗΝΙΚΩΝ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΩΝ

62 η ΣΥΝΟΔΟΣ ΠΡΥΤΑΝΕΩΝ & ΠΡΟΕΔΡΩΝ Δ.Ε. ΤΩΝ ΕΛΛΗΝΙΚΩΝ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΩΝ 62 η ΣΥΝΟΔΟΣ ΠΡΥΤΑΝΕΩΝ & ΠΡΟΕΔΡΩΝ Δ.Ε. ΤΩΝ ΕΛΛΗΝΙΚΩΝ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΩΝ Τεχνολογικό Πολιτιστικό Πάρκο Λαυρίου του Ε.Μ.Π. 11 & 12 Δεκεµβρίου 2009, Λαύριο ΕΙΣΗΓΗΣΗ ΓΙΑ ΤΟ ΣΥΣΤΗΜΑ ΠΡΟΣΒΑΣΗΣ ΣΤΗΝ ΤΡΙΤΟΒΑΘΜΙΑ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗ

Διαβάστε περισσότερα

Α Π Ο Σ Π Α Σ Μ Α Από το Πρακτικό της 03ης Τακτικής Συνεδρίασης του ηµοτικού Συµβουλίου Σκοπέλου

Α Π Ο Σ Π Α Σ Μ Α Από το Πρακτικό της 03ης Τακτικής Συνεδρίασης του ηµοτικού Συµβουλίου Σκοπέλου ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΝΟΜΟΣ ΜΑΓΝΗΣΙΑΣ ΗΜΟΣ ΣΚΟΠΕΛΟΥ Πληροφορίες: Σπυριδούλα Καρβέλη Τηλέφωνο: 2424350103 E-mail: dstech@otenet.gr ΑΝΑΡΤΗΤΕΑ ΣΤΟ ΙΑ ΙΚΤΥΟ ΑΡΙΘΜ. ΑΠΟΦ: 31 /2013 Α.Π. 1181 Α Π Ο Σ Π Α Σ Μ Α Από

Διαβάστε περισσότερα

ΕΡΩΤΗΣΗ ΒΟΥΛΕΥΤΩΝ ΤΟΥ ΣΥΡΙΖΑ ΓΙΑ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΕΛΛΕΙΨΕΙΣ ΚΑΙ ΠΑΡΑΒΙΑΣΗ ΝΟΜΟΘΕΣΙΑΣ ΣΤΙΣ ΣΚΟΥΡΙΕΣ

ΕΡΩΤΗΣΗ ΒΟΥΛΕΥΤΩΝ ΤΟΥ ΣΥΡΙΖΑ ΓΙΑ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΕΛΛΕΙΨΕΙΣ ΚΑΙ ΠΑΡΑΒΙΑΣΗ ΝΟΜΟΘΕΣΙΑΣ ΣΤΙΣ ΣΚΟΥΡΙΕΣ εκεµβρίου 2, 2015 ΕΡΩΤΗΣΗ ΒΟΥΛΕΥΤΩΝ ΤΟΥ ΣΥΡΙΖΑ ΓΙΑ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΕΛΛΕΙΨΕΙΣ ΚΑΙ ΠΑΡΑΒΙΑΣΗ ΝΟΜΟΘΕΣΙΑΣ ΣΤΙΣ ΣΚΟΥΡΙΕΣ Σε ερώτησή τους προς τον υπουργό Περιβάλλοντος και Ενέργειας βουλευτές του ΣΥΡΙΖΑ επισηµαίνουν

Διαβάστε περισσότερα

έκφραση έκθεση γενικό λύκειο

έκφραση έκθεση γενικό λύκειο έκφραση έκθεση γενικό λύκειο β τεύχος Τόμος 1 ος ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΠΑΙΔΕΙΑΣ ΚΑΙ ΘΡΗΣΚΕΥΜΑΤΩΝ ΠΟΛΙΤΙΣΜΟΥ ΚΑΙ ΑΘΛΗΤΙΣΜΟΥ ΙΝΣΤΙΤΟΥΤΟ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΥΠΟΛΟΓΙΣΤΩΝ ΚΑΙ ΕΚΔΟΣΕΩΝ «ΔΙΟΦΑΝΤΟΣ» έκθεση έκφραση για το γενικό

Διαβάστε περισσότερα

Όλα όσα πρέπει να γνωρίζουν οι απόφοιτοι των ΕΠΑΛ για τις πανελλαδικές εξετάσεις

Όλα όσα πρέπει να γνωρίζουν οι απόφοιτοι των ΕΠΑΛ για τις πανελλαδικές εξετάσεις Όλα όσα πρέπει να γνωρίζουν οι απόφοιτοι των ΕΠΑΛ για τις πανελλαδικές εξετάσεις Oι κάτοχοι απολυτηρίου Ημερησίων ΕΠΑ.Λ. (ΟΜΑΔΑ Α ) καθώς και οι μαθητές της τελευταίας τάξης Ημερησίων ΕΠΑ.Λ. (ΟΜΑΔΑ Α )

Διαβάστε περισσότερα

ΙΣΤΟΡΙΑ ΘΕΩΡΗΤΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΟΜΑΔΑ Α

ΙΣΤΟΡΙΑ ΘΕΩΡΗΤΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΟΜΑΔΑ Α ΙΣΤΟΡΙΑ ΘΕΩΡΗΤΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΟΜΑΔΑ Α ΘΕΜΑ Α1 α. Να περιγράψετε το πρόγραμμα του καθενός από τα παρακάτω πολιτικά κόμματα: Ραλλικό Κόμμα Λαϊκό Κόμμα (1910) Σοσιαλιστικό Εργατικό Κόμμα Ελλάδας

Διαβάστε περισσότερα

Σηµειώσεις στις Εµπορικές Εταιρίες

Σηµειώσεις στις Εµπορικές Εταιρίες Σηµειώσεις στις Εµπορικές Εταιρίες Βιβλίο: «Εµπορικές Εταιρίες» Ν.Κ. Ρόκας Εισαγωγή 1 Η ιδιορρυθµία και η µοναδικότητα του δικαίου των ενώσεων προσώπων στο πλαίσιο του ιδιωτικού δικαίου συνίσταται κυρίως

Διαβάστε περισσότερα

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΩΝ ΜΑΘΗΤΩΝ ΤΗΣ Β ΛΥΚΕΙΟΥ

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΩΝ ΜΑΘΗΤΩΝ ΤΗΣ Β ΛΥΚΕΙΟΥ ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΕΘΝΙΚΗΣ ΠΑΙ ΕΙΑΣ ΚΑΙ ΘΡΗΣΚΕΥΜΑΤΩΝ ΚΕΝΤΡΟ ΕΚΠΑΙ ΕΥΤΙΚΗΣ ΕΡΕΥΝΑΣ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΩΝ ΜΑΘΗΤΩΝ ΤΗΣ Β ΛΥΚΕΙΟΥ στο µάθηµα «Εισαγωγή στο ίκαιο και τους Πολιτικούς Θεσµούς» ΑΘΗΝΑ 2000 Οµάδα Σύνταξης Συντονιστής:

Διαβάστε περισσότερα

35η ιδακτική Ενότητα ΕΝΟΧΙΚΕΣ ΣΧΕΣΕΙΣ ( ΕΝΟΧΙΚΟ ΙΚΑΙΟ)

35η ιδακτική Ενότητα ΕΝΟΧΙΚΕΣ ΣΧΕΣΕΙΣ ( ΕΝΟΧΙΚΟ ΙΚΑΙΟ) 35η ιδακτική Ενότητα ΕΝΟΧΙΚΕ ΧΕΕΙ ( ΕΝΟΧΙΚΟ ΙΚΑΙΟ) Εργασία για το σχολείο Ο καθηγητής θα µοιράσει µισθωτήρια κατοικιών στους µαθητές, θα τους χωρίσει ανά θρανίο σε εκµισθωτές και µισθωτές και αφού τους

Διαβάστε περισσότερα

2004-2006: Aύξηση φόρου εισοδήµατος, και µείωση µισθών

2004-2006: Aύξηση φόρου εισοδήµατος, και µείωση µισθών 2004-2006: Aύξηση φόρου εισοδήµατος, και µείωση µισθών Περίληψη Το Υπουργείο Οικονοµικών έχει κατορθώσει να µειώσει τους πραγµατικούς µας µισθούς, συνδυάζοντας την επίδραση των ακολούθων γεγονότων που

Διαβάστε περισσότερα

ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΡΟΠΑΡΙΩΝ ΤΗΣ ΚΕΡΚΥΡΑΪΚΗΣ ΚΑΙ ΤΗΣ ΒΥΖΑΝΤΙΝΗΣ ΨΑΛΤΙΚΗΣ 1

ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΡΟΠΑΡΙΩΝ ΤΗΣ ΚΕΡΚΥΡΑΪΚΗΣ ΚΑΙ ΤΗΣ ΒΥΖΑΝΤΙΝΗΣ ΨΑΛΤΙΚΗΣ 1 ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗ ΤΡΟΠΑΡΙΩΝ ΤΗΣ ΚΕΡΚΥΡΑΪΚΗΣ ΚΑΙ ΤΗΣ ΒΥΖΑΝΤΙΝΗΣ ΨΑΛΤΙΚΗΣ 1 Σταματοπούλου Νικολίνα Ωδείο Σύγχρονης Τέχνης Αγρινίου, nistamato@yahoo.gr Περίληψη Για το παρόν άρθρο επιλέχθηκαν

Διαβάστε περισσότερα

Ενότητα 2. Γενικά Οργάνωση Ελέγχου (ΙΙ) Φύλλα Εργασίας Εκθέσεις Ελέγχων

Ενότητα 2. Γενικά Οργάνωση Ελέγχου (ΙΙ) Φύλλα Εργασίας Εκθέσεις Ελέγχων Ενότητα 2 Γενικά Οργάνωση Ελέγχου (ΙΙ) Φύλλα Εργασίας Εκθέσεις Ελέγχων Φύλλα Εργασίας (Γενικά) Με τον όρο "φύλλα εργασίας" εννοούµε, το σύνολο των φύλλων που περιέχουν όλο το αποδεικτικό υλικό, το οποίο

Διαβάστε περισσότερα

ΚΕΦΑΛΑΙΟ 8 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ

ΚΕΦΑΛΑΙΟ 8 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ ΚΕΦΑΛΑΙΟ 8 ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ ΚΕΦΑΛΑΙΟ 8 : ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Σύμφωνα με τα όσα αναλυτικά έχουν περιγραφεί στα προηγούμενα κεφάλαια της παρούσας μελέτης η κατασκευή του τμήματος «Βρύσες Ατσιπόπουλο», του Βόρειου Οδικού

Διαβάστε περισσότερα

Έφη Κατσαδήµα, Αθηνά Νέγρη, Χρυσάνθη Παλαµά

Έφη Κατσαδήµα, Αθηνά Νέγρη, Χρυσάνθη Παλαµά Έφη Κατσαδήµα, Αθηνά Νέγρη, Χρυσάνθη Παλαµά Εκπαιδευτική και κοινωνική πραγµατικότητα: µέτωπα διαπραγµάτευσης και δράσης στους νοµούς Ιωαννίνων, Άρτας και Πρέβεζας Στα πλαίσια της εκπαιδευτικής και κοινωνικής

Διαβάστε περισσότερα

ΑΠΟΦΑΣΗ. Βαθµός Ασφαλείας... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ. Μαρούσι 30-9-2009 Αριθ. Πρωτ. 120641/Γ2 Βαθ. Προτερ...

ΑΠΟΦΑΣΗ. Βαθµός Ασφαλείας... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ. Μαρούσι 30-9-2009 Αριθ. Πρωτ. 120641/Γ2 Βαθ. Προτερ... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Βαθµός Ασφαλείας... Μαρούσι 30-9-2009 Αριθ. Πρωτ. 120641/Γ2 Βαθ. Προτερ.... ΕΝΙΑΙΟΣ ΙΟΙΚΗΤΙΚΟΣ ΤΟΜΕΑΣ Π/ΘΜΙΑΣ & /ΘΜΙΑΣ ΕΚΠ/ΣΗΣ /ΝΣΗ ΣΠΟΥ ΩΝ / ΘΜΙΑΣ ΕΚΠ/ΣΗΣ ΤΜΗΜΑ Α' Αν. Παπανδρέου 37,

Διαβάστε περισσότερα

A1. Να γράψετε στο τετράδιό σας την περίληψη του κειμένου που σας δόθηκε (100-120 λέξεις). Μονάδες 25

A1. Να γράψετε στο τετράδιό σας την περίληψη του κειμένου που σας δόθηκε (100-120 λέξεις). Μονάδες 25 ΠΑΝΕΛΛΑΔΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Γ ΤΑΞΗΣ ΗΜΕΡΗΣΙΟΥ ΚΑΙ Δ ΤΑΞΗΣ ΕΣΠΕΡΙΝΟΥ ΓΕΝΙΚΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥ ΚΑΙ ΕΠΑΛ (ΟΜΑΔΑ Β ) ΤΕΤΑΡΤΗ 28 ΜΑΪΟΥ 2014 - ΕΞΕΤΑΖΟΜΕΝΟ ΜΑΘΗΜΑ: ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗ ΓΛΩΣΣΑ ΓΕΝΙΚΗΣ ΠΑΙΔΕΙΑΣ ΚΕΙΜΕΝΟ Η «ανθρωπιά» είναι

Διαβάστε περισσότερα

ΥΠΟΔΕΙΓΜΑ ΣΥΜΠΛΗΡΩΣΗΣ

ΥΠΟΔΕΙΓΜΑ ΣΥΜΠΛΗΡΩΣΗΣ Έντυπο Υπολογισμού Κενών-Πλεονασμάτων Σχολείου στο Σύστημα «Αθηνά» Γενικές Πληροφορίες ΓΥΜΝΑΣΙΩΝ Ωράριο Διευθυντή 5 δηλ. τόσο εμφανίζεται στην οθόνη με τα ωράρια στο Αθηνά Όνομα/τα Υποδιευθυντή/ών 1. Βασιλόπουλος

Διαβάστε περισσότερα

ΣΧΕΔΙΟ. ΝΟΜΟΣ. Δηµόσιες υπεραστικές οδικές µεταφορές επιβατών. Κεφ. Α - ΓΕΝΙΚΕΣ ΔΙΑΤΑΞΕΙΣ. Άρθρο 1 Σκοπός πεδίο εφαρµογής

ΣΧΕΔΙΟ. ΝΟΜΟΣ. Δηµόσιες υπεραστικές οδικές µεταφορές επιβατών. Κεφ. Α - ΓΕΝΙΚΕΣ ΔΙΑΤΑΞΕΙΣ. Άρθρο 1 Σκοπός πεδίο εφαρµογής ΣΧΕΔΙΟ ΝΟΜΟΣ. Δηµόσιες υπεραστικές οδικές µεταφορές επιβατών Κεφ. Α - ΓΕΝΙΚΕΣ ΔΙΑΤΑΞΕΙΣ Άρθρο 1 Σκοπός πεδίο εφαρµογής 1. Σκοπός του παρόντος νόµου είναι : α) η εξασφάλιση της συνεχούς προσφοράς δηµοσίων

Διαβάστε περισσότερα

15PROC003313118 2015-11-16

15PROC003313118 2015-11-16 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΝΟΜΟΣ ΛΕΣΒΟΥ ΗΜΟΣ ΛΗΜΝΟΥ ΤΜΗΜΑ ΟΙΚ. ΥΠΗΡΕΣΙΩΝ ΓΡΑΦΕΙΟ ΠΡΟΜΗΘΕΙΩΝ Μύρινα, 13 Νοεµβρίου 2015 Αρ. Πρωτ. : 17043 ΙΑΚΗΡΥΞΗ Ο ΗΜΑΡΧΟΣ ΛΗΜΝΟΥ Έχοντας υπ όψη: 1. Τις διατάξεις: α. Των άρθρων

Διαβάστε περισσότερα

ΠΟΛΙΤΙΚΉ ΠΑΙΔΕΙΑ. Α Γενικού Λυκείου και ΕΠΑ.Λ. Καζάκου Γεωργία, ΠΕ09 Οικονομολόγος

ΠΟΛΙΤΙΚΉ ΠΑΙΔΕΙΑ. Α Γενικού Λυκείου και ΕΠΑ.Λ. Καζάκου Γεωργία, ΠΕ09 Οικονομολόγος 1 ΠΟΛΙΤΙΚΉ ΠΑΙΔΕΙΑ Α Γενικού Λυκείου και ΕΠΑ.Λ. 2 ΚΕΦΑΛΑΙΟ 11 Ο ΤΟ ΧΡΗΜΑ ΚΑΙ ΟΙ ΤΡΑΠΕΖΕΣ 11.1 Από τον αντιπραγματισμό στην οικονομία του χρήματος 11.1 ΑΠΟ ΤΟΝ ΑΝΤΙΠΡΑΓΜΑΤΙΣΜΟ ΣΤΗΝ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑ ΤΟΥ ΧΡΗΜΑΤΟΣ

Διαβάστε περισσότερα

ΓΝΩΜΟ ΟΤΗΣΗ. Κώστας Χ. Χρυσόγονος Καθηγητής Συνταγµατικού ικαίου Τµήµα Νοµικής Αριστοτελείου Πανεπιστηµίου Θεσσαλονίκης

ΓΝΩΜΟ ΟΤΗΣΗ. Κώστας Χ. Χρυσόγονος Καθηγητής Συνταγµατικού ικαίου Τµήµα Νοµικής Αριστοτελείου Πανεπιστηµίου Θεσσαλονίκης Κώστας Χ. Χρυσόγονος Καθηγητής Συνταγµατικού ικαίου Τµήµα Νοµικής Αριστοτελείου Πανεπιστηµίου Θεσσαλονίκης Ακρίτας Καϊδατζής Λέκτορας Συνταγµατικού ικαίου Τµήµα Νοµικής Αριστοτελείου Πανεπιστηµίου Θεσσαλονίκης

Διαβάστε περισσότερα

(Πράξη κατάθεσης Υπουργείου Απασχόλησης και Κοινωνικής Προστασίας:ΠΚ 69/18-7-08)

(Πράξη κατάθεσης Υπουργείου Απασχόλησης και Κοινωνικής Προστασίας:ΠΚ 69/18-7-08) ΣΥΛΛΟΓΙΚΗ ΣΥΜΒΑΣΗ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ ΕΡΓΑΤΟΤΕΧΝΙΤΩΝ ΚΑΙ ΥΠΑΛΛΗΛΩΝ ΜΕΤΑΛΛΟΥ ΟΛΩΝ ΤΩΝ ΜΕΤΑΛΛΟΥΡΓΙΚΩΝ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΕΩΝ ΚΑΘΩΣ ΚΑΙ ΤΜΗΜΑΤΩΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ, ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ, ΣΥΝΑΡΜΟΛΟΓΗΣΗΣ, ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ, ΕΠΙΣΚΕΥΗΣ Κ.Λ.Π ΜΕΤΑΛΛΟΥ

Διαβάστε περισσότερα

του Αναπληρωτή Εκπαιδευτικού Π.Ε. Ένας χρήσιµος οδηγός αφιέρωµα στον αναπληρωτή εκπαιδευτικό της Π.Ε..

του Αναπληρωτή Εκπαιδευτικού Π.Ε. Ένας χρήσιµος οδηγός αφιέρωµα στον αναπληρωτή εκπαιδευτικό της Π.Ε.. ηµητρακόπουλος Γιώργος Αιρετός Π.Υ.Σ.Π.Ε. Πειραιά (εκλεγµένος µε το ψηφοδέλτιο της Π. Α. Σ. Κ.) Τηλ. επικοινωνίας 6977 747439 e-mail: dimitrako@sch.gr http://users.sch.gr/dimitrako του Αναπληρωτή Εκπαιδευτικού

Διαβάστε περισσότερα

ΑΠΟΦΑΣΗ. Βαθμός Ασφαλείας... Μαρούσι 24-9-08 Αριθ. Πρωτ. 122459 /Γ2 Βαθ. Προτερ... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ

ΑΠΟΦΑΣΗ. Βαθμός Ασφαλείας... Μαρούσι 24-9-08 Αριθ. Πρωτ. 122459 /Γ2 Βαθ. Προτερ... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Βαθμός Ασφαλείας... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Μαρούσι 24-9-08 Αριθ. Πρωτ. 122459 /Γ2 Βαθ. Προτερ.... ΕΝΙΑΙΟΣ ΙΟΙΚΗΤΙΚΟΣ ΤΟΜΕΑΣ Π/ΘΜΙΑΣ & /ΘΜΙΑΣ ΕΚΠ/ΣΗΣ ΙΕΥΘΥΝΣΗ ΣΠΟΥ ΩΝ / ΘΜΙΑΣ ΕΚΠΑΙ ΕΥΣΗΣ ΤΜΗΜΑ Α' Αν. Παπανδρέου

Διαβάστε περισσότερα

Φιλολογικό Φροντιστήριο http://www.filologikofrontistirio.gr

Φιλολογικό Φροντιστήριο http://www.filologikofrontistirio.gr Φιλολογικό Φροντιστήριο http://www.filologikofrontistirio.gr Πανελλήνιες 2014 Ενδεικτικές απαντήσεις στη Νεοελληνική Λογοτεχνία Α1 Είναι γνωστό ότι η ειδοποιός διαφορά μεταξύ πεζογραφίας και δραματικού

Διαβάστε περισσότερα

α. Ιδρύεται σύλλογος µε την επωνυµία Ενιαίος Σύλλογος ιδακτικού Προσωπικού

α. Ιδρύεται σύλλογος µε την επωνυµία Ενιαίος Σύλλογος ιδακτικού Προσωπικού ΚΑΤΑΣΤΑΤΙΚΟ ΤΟΥ ΣΥΛΛΟΓΟΥ ΜΕ ΤΗΝ ΕΠΩΝΥΜΙΑ «ΕΝΙΑΙΟΣ ΣΥΛΛΟΓΟΣ Ι ΑΚΤΙΚΟΥ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟΥ ΤΟΥ XAΡΟΚΟΠΕΙΟΥ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟΥ» ΚΕΦΑΛΑΙΟ Α ΣΥΣΤΑΣΗ ΕΠΩΝΥΜΙΑ ΣΦΡΑΓΙ Α - Ε ΡΑ ΣΚΟΠΟΣ ΜΕΣΑ Άρθρο 1 α. Ιδρύεται σύλλογος µε την

Διαβάστε περισσότερα

Κωδ. 001-002: Οι κωδικοί αυτοί συμπληρώνονται από την φορολογική διοίκηση. Κωδ. 003: Γράψτε τη Δ.Ο.Υ. της έδρας ή του κεντρικού της επιχείρησής σας.

Κωδ. 001-002: Οι κωδικοί αυτοί συμπληρώνονται από την φορολογική διοίκηση. Κωδ. 003: Γράψτε τη Δ.Ο.Υ. της έδρας ή του κεντρικού της επιχείρησής σας. Ι. Γενικά Με την ΑΓΓΔΕ ΠΟΛ 1198/2014 όπως τροποποιήθηκε με την ΑΓΓΔΕ ΠΟΛ 1049/2015 ορίστηκε ο τύπος και το περιεχόμενο της δήλωσης Φ.Π.Α. Με την παρούσα παρέχονται διευκρινίσεις για την ορθή συμπλήρωση

Διαβάστε περισσότερα

ΧΕΙΜΕΡΙΝΟΣ ΤΟΥΡΙΣΜΟΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑ Α

ΧΕΙΜΕΡΙΝΟΣ ΤΟΥΡΙΣΜΟΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑ Α ΑΝΩΤΑΤΟ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ Ι ΡΥΜΑ ΚΡΗΤΗΣ ΣΧΟΛΗ ΙΟΙΚΗΣΗΣ ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΤΟΥΡΙΣΤΙΚΩΝ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΕΩΝ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΧΕΙΜΕΡΙΝΟΣ ΤΟΥΡΙΣΜΟΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑ Α ΥΠΕΥΘΥΝΟΣ ΚΑΘΗΓΗΤΗΣ : ΓΙΑΝΝΟΥΛΙ ΟΥ ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΣΠΟΥ ΑΣΤΡΙΑ

Διαβάστε περισσότερα

(ΜΕ ΤΑ ΔΥΟ ΜΕΙΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ)

(ΜΕ ΤΑ ΔΥΟ ΜΕΙΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ) 1 ΤΟ ΒΙΒΛΙΟ ΤΩΝ ΠΟΝΩΝ ΤΟΥ ΣΩΜΑΤΟΣ (ΜΕ ΤΑ ΔΥΟ ΜΕΙΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ) Η πραγματικότητα ξεπερνά και την πιο τολμηρή φαντασία. Επίκτητος Σοφός δεν είναι όποιος ξέρει πολλά, αλλά όποιος ξέρει χρήσιμα. Ηράκλειτος Οι

Διαβάστε περισσότερα

Α. Η ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑ Μ ΕΤΑ ΤΗΝ ΕΠΑΝ ΑΣΤ ΑΣΗ

Α. Η ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑ Μ ΕΤΑ ΤΗΝ ΕΠΑΝ ΑΣΤ ΑΣΗ Α. Η ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑ Μ ΕΤΑ ΤΗΝ ΕΠΑΝ ΑΣΤ ΑΣΗ Κεφ. 1 Τα δημογραφικά δεδομένα Αντλώντας στοιχεία από το κείμενο που ακολουθεί και αξιοποιώντας τις ιστορικές σας γνώσεις: α. Να αιτιολογήσετε την άποψη ότι

Διαβάστε περισσότερα

Αναλυτικό Πρόγραµµα Σπουδών του Μαθήµατος. Α Τάξη 1 ου Κύκλου Τ.Ε.Ε. 3 ώρες /εβδοµάδα. Αθήνα, Απρίλιος 2001

Αναλυτικό Πρόγραµµα Σπουδών του Μαθήµατος. Α Τάξη 1 ου Κύκλου Τ.Ε.Ε. 3 ώρες /εβδοµάδα. Αθήνα, Απρίλιος 2001 Αναλυτικό Πρόγραµµα Σπουδών του Μαθήµατος Α Τάξη 1 ου Κύκλου Τ.Ε.Ε. 3 ώρες /εβδοµάδα Αθήνα, Απρίλιος 2001 Μάθηµα : «Στοιχεία Κλωστοϋφαντουργίας» Α. ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ Ι ΑΣΚΑΛΙΑΣ ΤΟΥ ΜΑΘΗΜΑΤΟΣ: Σκοπός του µαθήµατος

Διαβάστε περισσότερα

ΟΙ ΘΕΩΡΗΤΙΚΟΠΑΙΔΑΓΩΓΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΣΤΗΝ ΠΟΛΙΤΕΙΑ ΤΟΥ ΠΛΑΤΩΝΑ

ΟΙ ΘΕΩΡΗΤΙΚΟΠΑΙΔΑΓΩΓΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΣΤΗΝ ΠΟΛΙΤΕΙΑ ΤΟΥ ΠΛΑΤΩΝΑ ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΦΙΛΟΣΟΦΙΚΗ ΣΧΟΛΗ ΤΜΗΜΑ ΦΙΛΟΣΟΦΙΑΣ ΚΑΙ ΠΑΙΔΑΓΩΓΙΚΗΣ ΤΟΜΕΑΣ ΦΙΛΟΣΟΦΙΑΣ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑ ΟΙ ΘΕΩΡΗΤΙΚΟΠΑΙΔΑΓΩΓΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΣΤΗΝ ΠΟΛΙΤΕΙΑ ΤΟΥ ΠΛΑΤΩΝΑ ΕΠΟΠΤΗΣ ΚΑΘΗΓΗΤΗΣ:

Διαβάστε περισσότερα

ΕΘΝΙΚΟ ΚΑΠΟ ΙΣΤΡΙΑΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ

ΕΘΝΙΚΟ ΚΑΠΟ ΙΣΤΡΙΑΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ ΕΘΝΙΚΟ ΚΑΠΟ ΙΣΤΡΙΑΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ ΣΧΟΛΗ ΝΟΜΙΚΩΝ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΩΝ ΚΑΙ ΠΟΛΙΤΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΤΜΗΜΑ ΝΟΜΙΚΗΣ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΑΚΟ ΕΤΟΣ: 2007-2008 ΜΑΘΗΜΑ ΣΥΝΘΕΣΗ ΗΜΟΣΙΟΥ ΙΚΑΙΟΥ ΚΑΘΗΓΗΤΗΣ κ. ΑΝ ΡΕΑΣ ΗΜΗΤΡΟΠΟΥΛΟΣ ΘΕΜΑ

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΕΚΠΑΙ ΕΥΤΙΚΟ Ι ΡΥΜΑ ΚΡΗΤΗΣ ΣΧΟΛΗ ΙΟΙΚΗΣΗΣ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑΣ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΕΚΠΑΙ ΕΥΤΙΚΟ Ι ΡΥΜΑ ΚΡΗΤΗΣ ΣΧΟΛΗ ΙΟΙΚΗΣΗΣ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑΣ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΕΚΠΑΙ ΕΥΤΙΚΟ Ι ΡΥΜΑ ΚΡΗΤΗΣ ΣΧΟΛΗ ΙΟΙΚΗΣΗΣ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΛΟΓΙΣΤΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΦΟΡΟΛΟΓΙΑ ΕΙΣΟ ΗΜΑΤΟΣ ΦΥΣΙΚΩΝ ΚΑΙ ΝΟΜΙΚΩΝ ΠΡΟΣΩΠΩΝ ΣΤΗΝ ΕΥΡΩΠΑΙΚΗ ΕΝΩΣΗ ΣΠΟΥ ΑΣΤΗΣ: ΦΟΥΣΚΑΡΗΣ ΠΑΝΑΓΙΩΤΗΣ

Διαβάστε περισσότερα

ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΔΗΜΟΣ ΠΟΛΥΓΥΡΟΥ ΑΡΙΘΜ. ΑΠΟΦ:

ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΔΗΜΟΣ ΠΟΛΥΓΥΡΟΥ ΑΡΙΘΜ. ΑΠΟΦ: ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΔΗΜΟΣ ΠΟΛΥΓΥΡΟΥ ΑΡΙΘΜ. ΑΠΟΦ: 1/2013 Απόσπασμα από το πρακτικό της 1/2013 συνεδρίασης του Δημοτικού Συμβουλίου ΟΡΘΗ ΕΠΑΝΑΛΗΨΗ Θέμα: Εκλογή Προεδρείου Δημοτικού Συμβουλίου και των μελών

Διαβάστε περισσότερα

Έχοντας υπόψη: τη συνθήκη για την ίδρυση της Ευρωπαϊκής Κοινότητας, και ιδίως το άρθρο 175 παράγραφος 1, την πρόταση της Επιτροπής ( 1 ),

Έχοντας υπόψη: τη συνθήκη για την ίδρυση της Ευρωπαϊκής Κοινότητας, και ιδίως το άρθρο 175 παράγραφος 1, την πρόταση της Επιτροπής ( 1 ), L 197/30 EL Επίσηµη Εφηµερίδα των Ευρωπαϊκών Κοινοτήτων 21.7.2001 Ο ΗΓΙΑ 2001/42/ΕΚ ΤΟΥ ΕΥΡΩΠΑΪΚΟΥ ΚΟΙΝΟΒΟΥΛΙΟΥ ΚΑΙ ΤΟΥ ΣΥΜΒΟΥΛΙΟΥ της 27ης Ιουνίου 2001 σχετικά µε την εκτίµηση των περιβαλλοντικών επιπτώσεων

Διαβάστε περισσότερα

Ταχ. /νση: Ερµού 23-25 ΠΡΟΣ: Ως Πίνακας Αποδεκτών Ταχ. Κώδικας: 101 84 Αθήνα Τηλέφωνο: 210 32 53 748 210 33 75 360

Ταχ. /νση: Ερµού 23-25 ΠΡΟΣ: Ως Πίνακας Αποδεκτών Ταχ. Κώδικας: 101 84 Αθήνα Τηλέφωνο: 210 32 53 748 210 33 75 360 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Αθήνα, 10 Μαρτίου 2005 ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑΣ Αρ. Πρωτ. 1025108/84/0013 ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΩΝ ΓΕΝΙΚΗ ΙΕΥΘΥΝΣΗ ΦΟΡΟΛΟΓΙΑΣ ΙΕΥΘΥΝΣΗ ΦΟΡΟΛΟΓΙΑΣ ΚΕΦΑΛΑΙΟΥ ΤΜΗΜΑ Φ.Μ.Α.Π. ΠΟΛ:1047 Ταχ. /νση: Ερµού

Διαβάστε περισσότερα

Η ΚΟΙΝΩΝΙΚΗ ΔΙΑΣΤΡΩΜΑΤΩΣΗ ΤΟΥ ΜΟΥΣΟΥΛΜΑΝΙΚΟΥ ΠΛΗΘΥΣΜΟΥ ΤΟΥ ΡΕΘΥΜΝΟΥ ΚΑΙ Η ΔΙΕΚΔΙΚΗΣΗ ΤΗΣ ΑΝΤΑΛΛΑΞΙΜΗΣ ΠΕΡΙΟΥΣΙΑΣ, 1924-1927

Η ΚΟΙΝΩΝΙΚΗ ΔΙΑΣΤΡΩΜΑΤΩΣΗ ΤΟΥ ΜΟΥΣΟΥΛΜΑΝΙΚΟΥ ΠΛΗΘΥΣΜΟΥ ΤΟΥ ΡΕΘΥΜΝΟΥ ΚΑΙ Η ΔΙΕΚΔΙΚΗΣΗ ΤΗΣ ΑΝΤΑΛΛΑΞΙΜΗΣ ΠΕΡΙΟΥΣΙΑΣ, 1924-1927 ΣΠΥΡΟΣ ΔΗΜΑΝΟΠΟΥΛΟΣ Η ΚΟΙΝΩΝΙΚΗ ΔΙΑΣΤΡΩΜΑΤΩΣΗ ΤΟΥ ΜΟΥΣΟΥΛΜΑΝΙΚΟΥ ΠΛΗΘΥΣΜΟΥ ΤΟΥ ΡΕΘΥΜΝΟΥ ΚΑΙ Η ΔΙΕΚΔΙΚΗΣΗ ΤΗΣ ΑΝΤΑΛΛΑΞΙΜΗΣ ΠΕΡΙΟΥΣΙΑΣ, 924-927 Στη χώρα μας η μελέτη του αστικού φαινομένου εντάχθηκε στα

Διαβάστε περισσότερα

ΕΝ ΕΙΚΤΙΚΕΣ ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ

ΕΝ ΕΙΚΤΙΚΕΣ ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ 45 Χρόνια ΦΡΟΝΤΙΣΤΗΡΙΑ ΜΕΣΗΣ ΕΚΠΑΙ ΕΥΣΗΣ ΣΑΒΒΑΪ Η-ΜΑΝΩΛΑΡΑΚΗ ΠΑΓΚΡΑΤΙ : Χρυσ Σµύρνης 3 : Τηλ.: 2107601470 ΙΑΓΩΝΙΣΜΑ : ΝΕΑ ΕΛΛΗΝΙΚΑ Β ΤΕΕ 2 ΟΥ ΚΥΚΛΟΥ 2006 ΕΝ ΕΙΚΤΙΚΕΣ ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ ΕΝΟΤΗΤΑ Α 1. «Η κοινωνική

Διαβάστε περισσότερα

στον κόσμο Τομείς παραγωγής - Οικονομικοί δείχτες Ι. Πρωτογενής τομέας: ΙΙ. Δευτερογενής τομέας:

στον κόσμο Τομείς παραγωγής - Οικονομικοί δείχτες Ι. Πρωτογενής τομέας: ΙΙ. Δευτερογενής τομέας: στον κόσμο Τομείς παραγωγής - Οικονομικοί δείχτες Γεωγράφοι και οικονομολόγοι κατατάσσουν τις ανθρώπινες οικονομικές δραστηριότητες σε (4) τέσσερις τομείς παραγωγής (αντί τρεις που ίσχυαν μέχρι πριν λίγα

Διαβάστε περισσότερα

ΣΧΕΔΙΟ ΠΡΟΤΑΣΕΩΝ ΣΥΛΛΟΓΟΥ ΓΟΝΕΩΝ & ΚΗΔΕΜΟΝΩΝ ΕΠΙ ΤΟΥ ΠΡΟΣΧΕΔΙΟΥ ΤΟΥ ΕΣΩΤΕΡΙΚΟΥ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΥ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΟΥ 1 ου ΓΥΜΝΑΣΙΟΥ ΜΑΡΚΟΠΟΥΛΟΥ ΣΗΜΕΙΩΣΗ

ΣΧΕΔΙΟ ΠΡΟΤΑΣΕΩΝ ΣΥΛΛΟΓΟΥ ΓΟΝΕΩΝ & ΚΗΔΕΜΟΝΩΝ ΕΠΙ ΤΟΥ ΠΡΟΣΧΕΔΙΟΥ ΤΟΥ ΕΣΩΤΕΡΙΚΟΥ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΥ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΟΥ 1 ου ΓΥΜΝΑΣΙΟΥ ΜΑΡΚΟΠΟΥΛΟΥ ΣΗΜΕΙΩΣΗ ΣΧΕΔΙΟ ΠΡΟΤΑΣΕΩΝ ΣΥΛΛΟΓΟΥ ΓΟΝΕΩΝ & ΚΗΔΕΜΟΝΩΝ ΕΠΙ ΤΟΥ ΠΡΟΣΧΕΔΙΟΥ ΤΟΥ ΕΣΩΤΕΡΙΚΟΥ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΥ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΤΟΥ 1 ου ΓΥΜΝΑΣΙΟΥ ΜΑΡΚΟΠΟΥΛΟΥ ΣΗΜΕΙΩΣΗ 02/03/2015 Με "μαύρα" γράμματα είναι το Σχέδιο Κανονισμού Καθηγητών,

Διαβάστε περισσότερα

7. ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΣΠΟΥΔΩΝ ΕΛΛΗΝΙΚΗΣ ΝΟΗΜΑΤΙΚΗΣ ΓΛΩΣΣΑΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΗΣ ΤΑΞΗΣ ΤΟΥ ΔΗΜΟΤΙΚΟΥ ΣΧΟΛΕΙΟΥ

7. ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΣΠΟΥΔΩΝ ΕΛΛΗΝΙΚΗΣ ΝΟΗΜΑΤΙΚΗΣ ΓΛΩΣΣΑΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΗΣ ΤΑΞΗΣ ΤΟΥ ΔΗΜΟΤΙΚΟΥ ΣΧΟΛΕΙΟΥ 7. ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΣΠΟΥΔΩΝ ΕΛΛΗΝΙΚΗΣ ΝΟΗΜΑΤΙΚΗΣ ΓΛΩΣΣΑΣ ΤΗΣ ΠΡΩΤΗΣ ΤΑΞΗΣ ΤΟΥ ΔΗΜΟΤΙΚΟΥ ΣΧΟΛΕΙΟΥ 7.1. Περιεχόμενο 1.Κατανόηση Γλώσσας- Ο μαθητής θα κατανοήσει το θέμα που εκφέρεται στην Ελληνική Νοηματική Γλώσσα.

Διαβάστε περισσότερα

Αθήνα, 14 Ιουνίου 2006. Αρ. Πρωτ. 1891/05.2.3 Π Ο Ρ Ι Σ Μ Α

Αθήνα, 14 Ιουνίου 2006. Αρ. Πρωτ. 1891/05.2.3 Π Ο Ρ Ι Σ Μ Α Αθήνα, 14 Ιουνίου 2006 Αρ. Πρωτ. 1891/05.2.3 Π Ο Ρ Ι Σ Μ Α Ο Συνήγορος του Πολίτη στο πλαίσιο των αρµοδιοτήτων του, κατά το άρθρο 103 παρ. 9 του Συντάγµατος και το ν. 3094/2003, εξέτασε την αναφορά του

Διαβάστε περισσότερα

ΣΥΛΛΟΓΙΚΗ ΣΥΜΒΑΣΗ ΕΡΓΑΣΙΑΣ. Για τους όρους αµοιβής και εργασίας των Εργαζοµένων στις Ξενοδοχειακές Επιχειρήσεις Νοµού Χανίων

ΣΥΛΛΟΓΙΚΗ ΣΥΜΒΑΣΗ ΕΡΓΑΣΙΑΣ. Για τους όρους αµοιβής και εργασίας των Εργαζοµένων στις Ξενοδοχειακές Επιχειρήσεις Νοµού Χανίων ΣΥΛΛΟΓΙΚΗ ΣΥΜΒΑΣΗ ΕΡΓΑΣΙΑΣ Για τους όρους αµοιβής και εργασίας των Εργαζοµένων στις Ξενοδοχειακές Επιχειρήσεις Νοµού Χανίων (Πράξη κατάθεσης Υπουργείου Εργασίας και Κοινωνικής Ασφάλισης: Π.Κ. 30/4-10-2010)

Διαβάστε περισσότερα

Μη ανταγωνιστικές δραστηριότητες και παιχνίδια (υλικό)

Μη ανταγωνιστικές δραστηριότητες και παιχνίδια (υλικό) Μη ανταγωνιστικές δραστηριότητες και παιχνίδια (υλικό) Posted on 28 Αυγούστου, 2015 γράφει: Τοµπούλογλου Ιωάννης Υπεύθυνος Αγωγής Υγείας Δ/νση ΠΕ Ανατολ. Θεσσαλονίκης Χαρακτηριστικά: Αυξηµένα στοιχεία

Διαβάστε περισσότερα

ΠΡΟΣ: ΚΟΙΝ: ΘΕΜΑ: Ενηµερωτικό σηµείωµα για το πρόβληµα της παράνοµης υλοτοµίας και ειδικά αυτό της καυσοξύλευσης

ΠΡΟΣ: ΚΟΙΝ: ΘΕΜΑ: Ενηµερωτικό σηµείωµα για το πρόβληµα της παράνοµης υλοτοµίας και ειδικά αυτό της καυσοξύλευσης 1 Ιωάννης Κέκερης ασοπόνος Επίτιµος Πρόεδρος Ένωσης ασοπόνων Μακεδονίας Θράκης Μέλος.Σ. Πανελλήνιας Ένωσης ασοπόνων και ιαχειριστών Φυσικού Περιβάλλοντος ΠΡΟΣ: ΚΟΙΝ: Αρναία 16/12/2012 Κα Πρόεδρο Ειδικής

Διαβάστε περισσότερα

ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗ ΓΛΩΣΣΑ 2014

ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗ ΓΛΩΣΣΑ 2014 2014 Α1. Ο δοκιµιογράφος αναφέρεται στην έννοια του ανθρωπισµού. Αρχικά, παραδίδει τον ορισµό της έννοιας επιχειρώντας και µια διαχρονική προσέγγιση του όρου. Στη συνέχεια, περιγράφει τις ιδιότητες του

Διαβάστε περισσότερα

ΣΧΕ ΙΑΣΜΟΣ ΖΩΝΩΝ ΧΡΗΣΕΩΝ ΓΗΣ ΣΕ ΠΕΡΙΟΧΕΣ Γ.Π.Σ.

ΣΧΕ ΙΑΣΜΟΣ ΖΩΝΩΝ ΧΡΗΣΕΩΝ ΓΗΣ ΣΕ ΠΕΡΙΟΧΕΣ Γ.Π.Σ. ΤΕΧΝΙΚΟ ΕΠΙΜΕΛΗΤΗΡΙΟ ΕΛΛΑ ΟΣ ΤΜΗΜΑ ΚΕΝΤΡΙΚΗΣ ΜΑΚΕ ΟΝΙΑΣ ΣΧΕ ΙΑΣΜΟΣ ΖΩΝΩΝ ΧΡΗΣΕΩΝ ΓΗΣ ΣΕ ΠΕΡΙΟΧΕΣ Γ.Π.Σ. (Οµάδα Εργασίας σύµφωνα µε την 136/ 2005 απόφαση) Πρώτη Έκθεση Οµάδα Εργασίας: ΑΓΓΕΛΙ ΗΣ Ι. ΑΜ, πολεοδόµος

Διαβάστε περισσότερα

ΠΡΑΣΙΝΟΙ ΤΟΙΧΟΙ - ΠΡΑΣΙΝΑ ΣΧΟΛΕΙΑ

ΠΡΑΣΙΝΟΙ ΤΟΙΧΟΙ - ΠΡΑΣΙΝΑ ΣΧΟΛΕΙΑ Κίνηση Πολιτών Ηλιούπολης Aρ.Μητρώου Μ.Π.Α 27156 Σκρά 10, 163 46 Ηλιούπολη Ηλιούπολη 12 Μαρτίου 2012 ΠΡΑΣΙΝΗ ΑΤΤΙΚΗ ΠΡΑΣΙΝΟΙ ΤΟΙΧΟΙ ΠΡΑΣΙΝΑ ΣΧΟΛΕΙΑ 10 ο ηµοτικό Σχολείο Ηλιούπολης Μυκόνου 34, Ηλιούπολη

Διαβάστε περισσότερα

Οι Βαλκανικοί Πόλεµοι (1912-1913) στα ελληνικά διδακτικά εγχειρίδια Ιστορίας (δευτεροβάθµιας εκπαίδευσης) της περιόδου 1950-1974.

Οι Βαλκανικοί Πόλεµοι (1912-1913) στα ελληνικά διδακτικά εγχειρίδια Ιστορίας (δευτεροβάθµιας εκπαίδευσης) της περιόδου 1950-1974. Οι Βαλκανικοί Πόλεµοι (1912-1913) στα ελληνικά διδακτικά εγχειρίδια Ιστορίας (δευτεροβάθµιας εκπαίδευσης) της περιόδου 1950-1974 Κλεονίκη Δρούγκα Το σχολικό βιβλίο συνιστά έναν τρόπο µετάδοσης γνώσης,

Διαβάστε περισσότερα

ΕΛΛΗΝΙΚΟ ΑΝΟΙΚΤΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΠΡΟΠΤΥΧΙΑΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΣΠΟΥΔΩΝ «ΔΙΟΙΚΗΣΗ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΕΩΝ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΙΣΜΩΝ» Θ.Ε. ΔΕΟ 10 Βασικές Αρχές Δικαίου και Διοίκησης

ΕΛΛΗΝΙΚΟ ΑΝΟΙΚΤΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΠΡΟΠΤΥΧΙΑΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΣΠΟΥΔΩΝ «ΔΙΟΙΚΗΣΗ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΕΩΝ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΙΣΜΩΝ» Θ.Ε. ΔΕΟ 10 Βασικές Αρχές Δικαίου και Διοίκησης ΕΛΛΗΝΙΚΟ ΑΝΟΙΚΤΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΠΡΟΠΤΥΧΙΑΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΣΠΟΥΔΩΝ «ΔΙΟΙΚΗΣΗ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΕΩΝ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΙΣΜΩΝ» Θ.Ε. ΔΕΟ 10 Βασικές Αρχές Δικαίου και Διοίκησης Τρίτη Γραπτή Εργασία στο Αστικό και Εργατικό Δίκαιο Ακαδημαϊκό

Διαβάστε περισσότερα

Τρίτη, 23 Μαΐου 2006 Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΓΕΝΙΚΗΣ ΠΑΙ ΕΙΑΣ ΕΚΦΡΑΣΗ - ΕΚΘΕΣΗ ΚΕΙΜΕΝΟ

Τρίτη, 23 Μαΐου 2006 Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΓΕΝΙΚΗΣ ΠΑΙ ΕΙΑΣ ΕΚΦΡΑΣΗ - ΕΚΘΕΣΗ ΚΕΙΜΕΝΟ Τρίτη, 23 Μαΐου 2006 Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΓΕΝΙΚΗΣ ΠΑΙ ΕΙΑΣ ΕΚΦΡΑΣΗ - ΕΚΘΕΣΗ ΚΕΙΜΕΝΟ Έχει παρατηρηθεί ότι οι πέρα από τα κοινά µέτρα δηµιουργικοί άνθρωποι στον τοµέα του πνεύµατος έχουν σιδερένιαν αντοχή και µπορούν

Διαβάστε περισσότερα

Η εξέλιξη της επιστηµονικής σκέψης και του πειραµατισµού στην Ελληνιστική

Η εξέλιξη της επιστηµονικής σκέψης και του πειραµατισµού στην Ελληνιστική ΟΙ ΕΠΙΣΤΗΜΟΝΙΚΕΣ ΚΑΙ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΞΕΛΙΞΕΙΣ ΤΗΣ ΕΛΛΗΝΙΣΤΙΚΗΣ ΠΕΡΙΟΔΟΥ Η εξέλιξη της επιστηµονικής σκέψης και του πειραµατισµού στην Ελληνιστική εποχή Παρά τους διαρκείς πολέµους και το κλίµα σχετικής ανασφάλειας,

Διαβάστε περισσότερα

ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΑΡ ΕΥΣΗΣ ΗΜΟΥ ΑΜΦΙΠΟΛΗΣ

ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΑΡ ΕΥΣΗΣ ΗΜΟΥ ΑΜΦΙΠΟΛΗΣ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΑΡ ΕΥΣΗΣ ΗΜΟΥ ΑΜΦΙΠΟΛΗΣ Άρθρο 1ο Ο παρών κανονισµός άρδευσης αφορά στην άρδευση των κτηµάτων της περιοχής, που βρίσκονται στα όρια του ήµου Αµφίπολης, που εξυπηρετούνται από τα νερά που διαχειρίζεται

Διαβάστε περισσότερα

ΠΡΟΤΕΙΝΟΜΕΝΕΣ ΛΥΣΕΙΣ

ΠΡΟΤΕΙΝΟΜΕΝΕΣ ΛΥΣΕΙΣ ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΠΑΙ ΕΙΑΣ ΚΑΙ ΠΟΛΙΤΙΣΜΟΥ ΙΕΥΘΥΝΣΗ ΑΝΩΤΕΡΗΣ ΚΑΙ ΑΝΩΤΑΤΗΣ ΕΚΠΑΙ ΕΥΣΗΣ ΥΠΗΡΕΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΕΩΝ ΠΑΓΚΥΠΡΙΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ 2012 ΠΡΟΤΕΙΝΟΜΕΝΕΣ ΛΥΣΕΙΣ ΜΑΘΗΜΑ: ΝΕΑ ΕΛΛΗΝΙΚΑ ΙΑΡΚΕΙΑ: 3 ΩΡΕΣ ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ: 18 ΜΑΪΟΥ

Διαβάστε περισσότερα

Το τείχος του είναι πολυγωνικού σχήματος, με πέντε πύργους και πολλές μικρές πολεμίστρες. Το κάστρο είναι χωρισμένο σε τρία διαζώματα.

Το τείχος του είναι πολυγωνικού σχήματος, με πέντε πύργους και πολλές μικρές πολεμίστρες. Το κάστρο είναι χωρισμένο σε τρία διαζώματα. «ΒΑΡΟΥΣΙ. ΣΥΝΟΙΚΙΑ ΟΝΕΙΡΟ;» Τα Τρίκαλα έγιναν γνωστά στο Πανελλήνιο, χάρη στην ιστορία του Σαρκαφλιά που περιγράφει σε κάποιο από τα τραγούδια του ο Βασίλης Τσιτσάνης: «Στα Τρίκαλα, στα δυο στενά, σκοτώσανε

Διαβάστε περισσότερα

Περιεχόμενα !"#$%&%'(((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((( )!

Περιεχόμενα !#$%&%'(((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((( )! Περιεχόμενα!"#$%&%'(((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((( )! *+",',"-+.-"/'0$.-$".1$/!1"#,'0"+(((((((((((((((((((((((23! 14+,$%0$ ((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((((()5!

Διαβάστε περισσότερα

Επισκόπηση των διεθνών τάσεων στο χώρο της Στρατιωτικής ικαιοσύνης Συγκριτικές παρατηρήσεις και αξιολόγηση *

Επισκόπηση των διεθνών τάσεων στο χώρο της Στρατιωτικής ικαιοσύνης Συγκριτικές παρατηρήσεις και αξιολόγηση * Επισκόπηση των διεθνών τάσεων στο χώρο της Στρατιωτικής ικαιοσύνης Συγκριτικές παρατηρήσεις και αξιολόγηση * Κωνσταντίνου Γώγου LLΜ, Στρατιωτικού ικαστή Α', Αντιπροέδρου Στρατοδικείου Αθηνών * Η παρούσα

Διαβάστε περισσότερα

ΒΙΟΛΟΓΙΑ ΓΕΝΙΚΗΣ ΠΑΙ ΕΙΑΣ 2010 ΕΚΦΩΝΗΣΕΙΣ

ΒΙΟΛΟΓΙΑ ΓΕΝΙΚΗΣ ΠΑΙ ΕΙΑΣ 2010 ΕΚΦΩΝΗΣΕΙΣ ΘΕΜΑ Α ΒΙΟΛΟΓΙΑ ΓΕΝΙΚΗΣ ΠΑΙ ΕΙΑΣ 2010 ΕΚΦΩΝΗΣΕΙΣ Να γράψετε στο τετράδιό σας τον αριθµό καθεµιάς από τις παρακάτω ηµιτελείς προτάσεις Α1 έως Α5 και δίπλα το γράµµα που αντιστοιχεί στη λέξη ή στη φράση,

Διαβάστε περισσότερα

ΕΤΟΣ 1936. Συνεδρίαση 171/9-2-1936

ΕΤΟΣ 1936. Συνεδρίαση 171/9-2-1936 ΕΤΟΣ 1936 ΝΕΟ ΙΟΙΚΗΤΙΚΟ ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΠΡΟΕ ΡΟΣ ΑΝΤΙΠΡΟΕ ΡΟΣ ΓΡΑΜΜΑΤΕΑΣ ΤΑΜΙΑΣ ΤΑ ΜΕΛΗ : Κυπριάδης Ανδρέας : Βούλγαρης Κωνσταντίνος : Μανδηλαράς Γεώργιος : Σίµος Γεώργιος : Κουµερτάς Ματθαίος Λεγάκης Μάριος

Διαβάστε περισσότερα

Πολιτισµική πολυµορφία και εκπαιδευτικά χαρακτηριστικά στα νησιά Ρόδος - Κως:

Πολιτισµική πολυµορφία και εκπαιδευτικά χαρακτηριστικά στα νησιά Ρόδος - Κως: ΣΑΒΒΑΤΩ Σ. ΣΑΒΒΙ ΟΥ Πολιτισµική πολυµορφία και εκπαιδευτικά χαρακτηριστικά στα νησιά Ρόδος - Κως: Μορφές σύγκλισης και αναπαραγωγής πολιτισµικών διαφορών στην Α/θµια Εκπαίδευση -Θεωρητική και Εµπειρική

Διαβάστε περισσότερα

Επαρχιακός Γραμματέας Λ/κας-Αμ/στου ΠΟΑ Αγροτικής

Επαρχιακός Γραμματέας Λ/κας-Αμ/στου ΠΟΑ Αγροτικής Πρόεδρος Αίγλη Παντελάκη Γενική Διευθύντρια Υπουργείου Γεωργίας, Φυσικών Πόρων και Περιβάλλοντος Αντιπρόεδρος Χάρης Ζαννετής Πρώτος Λειτουργός Γεωργίας, Φυσικών Πόρων και Περιβάλλοντος Μέλη Χρίστος Κουρτελλάρης

Διαβάστε περισσότερα

Οδηγία 91/439/ΕΟΚ του Συµβουλίου της 29ης Ιουλίου 1991 για την άδεια οδήγησης

Οδηγία 91/439/ΕΟΚ του Συµβουλίου της 29ης Ιουλίου 1991 για την άδεια οδήγησης Οδηγία 91/439/ΕΟΚ του Συµβουλίου της 29ης Ιουλίου 1991 για την άδεια οδήγησης Επίσηµη Εφηµερίδα αριθ. L 237 της 24/08/1991 σ. 0001-0024 Φινλανδική ειδική έκδοση: Κεφάλαιο 7 τόµος 4 σ. 0022 Σουηδική ειδική

Διαβάστε περισσότερα

ΜΟΥΣΕΙΟ ΑΡΧΑΙΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΙΣΤΟΡΙΑΣ ΤΗΣ ΤΕΧΝΗΣ ΑΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΝΕΟΣ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΙΣΜΟΣ ΕΡΓΑΣΙΩΝ ΚΑΙ ΔΡΑΣΕΩΝ

ΜΟΥΣΕΙΟ ΑΡΧΑΙΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΙΣΤΟΡΙΑΣ ΤΗΣ ΤΕΧΝΗΣ ΑΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΝΕΟΣ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΙΣΜΟΣ ΕΡΓΑΣΙΩΝ ΚΑΙ ΔΡΑΣΕΩΝ Προς το Τμήμα Ιστορίας και Αρχαιολογίας ΜΟΥΣΕΙΟ ΑΡΧΑΙΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΙΣΤΟΡΙΑΣ ΤΗΣ ΤΕΧΝΗΣ ΑΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΝΕΟΣ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΙΣΜΟΣ ΕΡΓΑΣΙΩΝ ΚΑΙ ΔΡΑΣΕΩΝ Α. Απολογισμός δραστηριότητας ακαδημαϊκού έτους 2012-13 Στο

Διαβάστε περισσότερα

ΑΣΦΑΛΙΣΗ ΣΚΑΦΩΝ ΑΝΑΨΥΧΗΣ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΑ ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΕΤΟΥΣ 2 0 0 7

ΑΣΦΑΛΙΣΗ ΣΚΑΦΩΝ ΑΝΑΨΥΧΗΣ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΑ ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΕΤΟΥΣ 2 0 0 7 ΑΣΦΑΛΙΣΗ ΣΚΑΦΩΝ ΑΝΑΨΥΧΗΣ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΑ ΣΤΟΙΧΕΙΑ ΕΤΟΥΣ 2 0 0 7 1. Γ Ε Ν Ι Κ Α Η Επιτροπή Μεταφορών & Σκαφών της Ένωσης Ασφαλιστικών Εταιριών Ελλάδος στα πλαίσια της διαρκούς προσπάθειάς της για συνεχή παροχή

Διαβάστε περισσότερα

Ορίζουµε ως αστικές οχλήσεις όλα εκείνα τα στοιχεία του αστικού ελεύθερου κοινόχρηστου χώρου και τα οποία ενώ έχουν ως σκοπό:

Ορίζουµε ως αστικές οχλήσεις όλα εκείνα τα στοιχεία του αστικού ελεύθερου κοινόχρηστου χώρου και τα οποία ενώ έχουν ως σκοπό: ΑΣΤΙΚΕΣ ΟΧΛΗΣΕΙΣ Ορίζουµε ως αστικές οχλήσεις όλα εκείνα τα στοιχεία του αστικού ελεύθερου κοινόχρηστου χώρου και τα οποία ενώ έχουν ως σκοπό: να καλύψουν διάφορες ανάγκες να ενηµερώσουν και να πληροφορήσουν

Διαβάστε περισσότερα

ΚΕΝΤΡΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΙΣΜΟΥ ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΩΝ ΕΡΕΥΝΩΝ ΑΜΕΡΙΚΗΣ 11, ΑΘΗΝΑ Τ.Κ. 10672, Τηλ. 210 3676400 Fax 210 3611136

ΚΕΝΤΡΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΙΣΜΟΥ ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΩΝ ΕΡΕΥΝΩΝ ΑΜΕΡΙΚΗΣ 11, ΑΘΗΝΑ Τ.Κ. 10672, Τηλ. 210 3676400 Fax 210 3611136 ΚΕΝΤΡΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΙΣΜΟΥ ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΩΝ ΕΡΕΥΝΩΝ ΑΜΕΡΙΚΗΣ 11, ΑΘΗΝΑ Τ.Κ. 10672, Τηλ. 210 3676400 Fax 210 3611136 Διεύθυνση Διοικητικού Αθήνα, 16.5.2014 Πληροφορίες: Χ. Νούνης Α.Π. 839/379 Διευθυντής Διοικητικού

Διαβάστε περισσότερα

[Σηµ: Ο ένας αστερίσκος σηµειώνει τα άρθρα που αναθεωρήθηκαν το 1986 και οι δύο, αυτά που αναθεωρήθηκαν το 2001]

[Σηµ: Ο ένας αστερίσκος σηµειώνει τα άρθρα που αναθεωρήθηκαν το 1986 και οι δύο, αυτά που αναθεωρήθηκαν το 2001] ΣΥΝΤΑΓΜΑ 1975/1986/2001 [Σηµ: Ο ένας αστερίσκος σηµειώνει τα άρθρα που αναθεωρήθηκαν το 1986 και οι δύο, αυτά που αναθεωρήθηκαν το 2001] Άρθρο 2 (αξία του ανθρώπου, διεθνείς σχέσεις) 1. Ο σεβασµός και

Διαβάστε περισσότερα

ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΚΟΙΜΗΤΗΡΙΩΝ

ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΚΟΙΜΗΤΗΡΙΩΝ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΚΟΙΜΗΤΗΡΙΩΝ ΗΜΙΑΣΤΙΚΩΝ ΠΕΡΙΟΧΩΝ ΚΑΙ ΤΟΠΙΚΩΝ ΙΑΜΕΡΙΣΜΑΤΩΝ ΚΑΛΑΜΑΤΑΣ ΕΚΕΜΒΡΙΟΣ 2011 Σελίδα 1 από 16 Περιεχόµενα : Άρθρο 1: Αντικείµενο και σκοπός του κανονισµού Σελ.3 Άρθρο 2: Νοµικό

Διαβάστε περισσότερα

ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΗΜΟΣΙΟΥ ΙΚΑΙΟΥ ΒΙΟΪΑΤΡΙΚΗ & ΣΥΝΤΑΓΜΑ. Υπεύθυνος καθηγητής : ηµητρόπουλος Α. ΙΩΑΝΝΗΣ.Α ΜΕΪ ΑΝΗΣ ΑΜ 1340200200760 ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΕΙΣΑΓΩΓΗ...

ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΗΜΟΣΙΟΥ ΙΚΑΙΟΥ ΒΙΟΪΑΤΡΙΚΗ & ΣΥΝΤΑΓΜΑ. Υπεύθυνος καθηγητής : ηµητρόπουλος Α. ΙΩΑΝΝΗΣ.Α ΜΕΪ ΑΝΗΣ ΑΜ 1340200200760 ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΕΙΣΑΓΩΓΗ... ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΗΜΟΣΙΟΥ ΙΚΑΙΟΥ ΒΙΟΪΑΤΡΙΚΗ & ΣΥΝΤΑΓΜΑ Υπεύθυνος καθηγητής : ηµητρόπουλος Α. ΙΩΑΝΝΗΣ.Α ΜΕΪ ΑΝΗΣ ΑΜ 1340200200760 ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΕΙΣΑΓΩΓΗ... 1 ΚΕΦΑΛΑΙΟ Α ΟΙ ΒΙΟΪΑΤΡΙΚΕΣ ΕΞΕΛΙΞΕΙΣ ΥΠΟ ΤΟ ΠΡΙΣΜΑ ΤΟΥ

Διαβάστε περισσότερα

ΔΗΛΩΣΕΙΣ ΣΥΜΜΕΤΟΧΗΣ ΜΕ ΠΡΟΚΛΗΣΗ

ΔΗΛΩΣΕΙΣ ΣΥΜΜΕΤΟΧΗΣ ΜΕ ΠΡΟΚΛΗΣΗ ΔΗΛΩΣΕΙΣ ΣΥΜΜΕΤΟΧΗΣ ΜΕ ΠΡΟΚΛΗΣΗ 1) Δήµος Κοζάνης: Θα πεζοδροµούν κάθε Κυριακή την οδό Μαδεδονοµάχων, οδό που καταλήγει στην κεντρική πλατεία της πόλης, αν οι δηµότες χρησιµοποιούν τα 2) Δήµος Διονύσου:

Διαβάστε περισσότερα

Ερωτήσεις πολλαπλής επιλογής

Ερωτήσεις πολλαπλής επιλογής ΑΡΧΕΣ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΗΣ ΘΕΩΡΙΑΣ Κεφάλαιο 1 ο : Βασικές Οικονομικές Έννοιες ΕΠΙΜΕΛΕΙΑ: ΝΙΚΟΛΑΟΣ Χ. ΤΖΟΥΜΑΚΑΣ ΟΙΚΟΝΟΜΟΛΟΓΟΣ Ερωτήσεις πολλαπλής επιλογής 1. Όταν μια καμπύλη παραγωγικών δυνατοτήτων είναι ευθεία,

Διαβάστε περισσότερα

Ο κοινωνικός αποκλεισµός στους Ροµ και οι προοπτικές απασχόλησης σε επαγγέλµατα που σχετίζονται µε το περιβάλλον

Ο κοινωνικός αποκλεισµός στους Ροµ και οι προοπτικές απασχόλησης σε επαγγέλµατα που σχετίζονται µε το περιβάλλον 1 ΣΩΜΑΡΑΣ Ε. ΧΡΗΣΤΟΣ (Μηχανικός Χωροταξίας και Περιφερειακής Ανάπτυξης) (Μεταπτυχιακό στα Πληροφοριακά Συστήµατα) Ο κοινωνικός αποκλεισµός στους Ροµ και οι προοπτικές απασχόλησης σε επαγγέλµατα που σχετίζονται

Διαβάστε περισσότερα

ΠΡΟΛΟΓΟΣ Αθήνα, εκέµβριος 2004 Μαρία ΠροΪστάκη

ΠΡΟΛΟΓΟΣ Αθήνα, εκέµβριος 2004 Μαρία ΠροΪστάκη ΠΡΟΛΟΓΟΣ Η εν λόγω εργασία αποτελεί ένα πλάνο των συγκεντρωτικών αποτελεσµάτων των ελληνικών βουλευτικών εκλογών από το 1926 έως το 2004.Σκοπός της ήταν ακριβώς η συγκέντρωση αυτών των αποτελεσµάτων σε

Διαβάστε περισσότερα

ΑΝΑΡΤΗΤΕΑ ΣΤΟ ΙΑ ΙΚΤΥΟ. ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΝΟΜΟΣ ΗΜΑΘΙΑΣ ΗΜΟΣ ΑΛΕΞΑΝ ΡΕΙΑΣ Αλεξάνδρεια, 13-02-2012 Αριθµ. Πρωτ.: 4699

ΑΝΑΡΤΗΤΕΑ ΣΤΟ ΙΑ ΙΚΤΥΟ. ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΝΟΜΟΣ ΗΜΑΘΙΑΣ ΗΜΟΣ ΑΛΕΞΑΝ ΡΕΙΑΣ Αλεξάνδρεια, 13-02-2012 Αριθµ. Πρωτ.: 4699 ΑΝΑΡΤΗΤΕΑ ΣΤΟ ΙΑ ΙΚΤΥΟ ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΝΟΜΟΣ ΗΜΑΘΙΑΣ ΗΜΟΣ ΑΛΕΞΑΝ ΡΕΙΑΣ Αλεξάνδρεια, 13-02-2012 Αριθµ. Πρωτ.: 4699 ΑΝΑΚΟΙΝΩΣΗ Για την πρόσληψη προσωπικού µε σύµβαση εργασίας ιδιωτικού δικαίου ορισµένου

Διαβάστε περισσότερα

ΘΕΜΑ: «Παραθεριστικοί Οικοδοµικοί Συνεταιρισµοί. Μελέτη Περίπτωσης του «Βραχόκηπου» ήµου Γουβών Ηρακλείου Κρήτης»

ΘΕΜΑ: «Παραθεριστικοί Οικοδοµικοί Συνεταιρισµοί. Μελέτη Περίπτωσης του «Βραχόκηπου» ήµου Γουβών Ηρακλείου Κρήτης» ΕΘΝΙΚΟ ΜΕΤΣΟΒΙΟ ΠΟΛΥΤΕΧΝΕΙΟ ΠΜΣ: ΑΡΧΙΤΕΚΤΟΝΙΚΗ - ΣΧΕ ΙΑΣΜΟΣ ΤΟΥ ΧΩΡΟΥ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗ: ΠΟΛΕΟ ΟΜΙΑ ΧΩΡΟΤΑΞΙΑ ΜΑΘΗΜΑ: ΥΝΑΜΙΚΗ ΤΩΝ ΧΩΡΙΚΩΝ ΟΜΩΝ ΚΑΙ ΤΩΝ ΧΡΗΣΕΩΝ ΓΗΣ ΚΑΙ ΣΥΓΧΡΟΝΕΣ ΠΡΑΚΤΙΚΕΣ ΣΧΕ ΙΑΣΜΟΥ Ι ΑΣΚΟΝΤΕΣ:

Διαβάστε περισσότερα

ΑΠΟΦΑΣΗ. Βαθμός Ασφαλείας... Μαρούσι 24-9-08 Αριθ. Πρωτ. 122455 /Γ2 Βαθ. Προτερ... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ

ΑΠΟΦΑΣΗ. Βαθμός Ασφαλείας... Μαρούσι 24-9-08 Αριθ. Πρωτ. 122455 /Γ2 Βαθ. Προτερ... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Βαθμός Ασφαλείας... ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ Μαρούσι 24-9-08 Αριθ. Πρωτ. 122455 /Γ2 Βαθ. Προτερ.... ΕΝΙΑΙΟΣ ΔΙΟΙΚΗΤΙΚΟΣ ΤΟΜΕΑΣ Π/ΘΜΙΑΣ & Δ/ΘΜΙΑΣ ΕΚΠ/ΣΗΣ ΔΙΕΥΘΥΝΣΗ ΣΠΟΥΔΩΝ Δ/ΘΜΙΑΣ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗΣ ΤΜΗΜΑ Α' Αν. Παπανδρέου

Διαβάστε περισσότερα

Συλλόγου ιπλωµατούχων Νοσηλευτριών και Νοσηλευτών Χειρουργείου

Συλλόγου ιπλωµατούχων Νοσηλευτριών και Νοσηλευτών Χειρουργείου Κ Α Τ Α Σ Τ Α Τ Ι Κ Ο Συλλόγου ιπλωµατούχων Νοσηλευτριών και Νοσηλευτών Χειρουργείου Άρθρο 1 ο ΣΥΣΤΑΣΗ ΕΠΩΝΥΜΙΑ Ε ΡΑ Ιδρύεται Σωµατείο µε την επωνυµία «Σύλλογος ιπλωµατούχων Νοσηλευτριών και Νοσηλευτών

Διαβάστε περισσότερα

ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΙΑΣ

ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΙΑΣ ΑΚΑΔΗΜΑΪΚΟ ΕΤΟΣ 2009 2010 ΟΔΗΓΟΣ ΣΠΟΥΔΩΝ ΤΜΗΜΑ ΓΕΩΠΟΝΙΑΣ ΦΥΤΙΚΗΣ ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ ΚΑΙ ΑΓΡΟΤΙΚΟΥ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝΤΟΣ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΙΑΣ Ν. Ιωνία, ΒΟΛΟΣ Τη συγκέντρωση της ύλης του και την επιμέλεια της έκδοσης είχε

Διαβάστε περισσότερα

ΦΕΚ Β 2139 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΠΑΙΔΕΙΑΣ, ΕΡΕΥΝΑΣ ΚΑΙ ΘΡΗΣΚΕΥΜΑΤΩΝ ----- Βαθμός Ασφαλείας: Να διατηρηθεί μέχρι: Βαθ. Προτεραιότητας: -----

ΦΕΚ Β 2139 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΠΑΙΔΕΙΑΣ, ΕΡΕΥΝΑΣ ΚΑΙ ΘΡΗΣΚΕΥΜΑΤΩΝ ----- Βαθμός Ασφαλείας: Να διατηρηθεί μέχρι: Βαθ. Προτεραιότητας: ----- ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΠΑΙΔΕΙΑΣ, ΕΡΕΥΝΑΣ ΚΑΙ ΘΡΗΣΚΕΥΜΑΤΩΝ ----- ----- ΓΕΝΙΚΗ ΔΙΕΥΘΥΝΣΗ ΣΠΟΥΔΩΝ Π/ΘΜΙΑΣ ΚΑΙ Δ/ΘΜΙΑΣ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗΣ ΔΙΕΥΘΥΝΣΗ ΣΠΟΥΔΩΝ, ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΩΣΗΣ ΔΕΥΤΕΡΟΒΑΘΜΙΑΣ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗΣ

Διαβάστε περισσότερα

I.Επί της Αρχής του σχεδίου Νόµου: ΙΙ. Επί των άρθρων του σχεδίου Νόµου: ΕΙΣΗΓΗΤΙΚΗ ΕΚΘΕΣΗ

I.Επί της Αρχής του σχεδίου Νόµου: ΙΙ. Επί των άρθρων του σχεδίου Νόµου: ΕΙΣΗΓΗΤΙΚΗ ΕΚΘΕΣΗ ΕΙΣΗΓΗΤΙΚΗ ΕΚΘΕΣΗ στο σχέδιο νόµου «Πρωτοβάθµιο Εθνικό Δίκτυο Υγείας (Π.Ε.Δ.Υ.), αλλαγή σκοπού Ε.Ο.Π.Υ.Υ. και λοιπές διατάξεις» Προς τη Βουλή των Ελλήνων I.Επί της Αρχής του σχεδίου Νόµου: Με τις διατάξεις

Διαβάστε περισσότερα

ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΣΠΟΥ ΩΝ ΤΕΙ ΠΕΙΡΑΙΑ (Απόφαση Συνέλευσης ΤΕΙ αριθ. 5/16-12-98, ΦΕΚ 816/21-05-99, τ. Β )

ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΣΠΟΥ ΩΝ ΤΕΙ ΠΕΙΡΑΙΑ (Απόφαση Συνέλευσης ΤΕΙ αριθ. 5/16-12-98, ΦΕΚ 816/21-05-99, τ. Β ) ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ ΣΠΟΥ ΩΝ ΤΕΙ ΠΕΙΡΑΙΑ (Απόφαση Συνέλευσης ΤΕΙ αριθ. 5/16-12-98, ΦΕΚ 816/21-05-99, τ. Β ) ΚΕΦΑΛΑΙΟ ΠΡΩΤΟ Σπουδαστές Τ.Ε.Ι., εγγραφές, κύκλοι σπουδών, µαθήµατα. Άρθρο 1 Σπουδαστές Τεχνολογικών Εκπαιδευτικών

Διαβάστε περισσότερα

ΕΝΔΕΙΚΤΙΚΕΣ ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ ΘΕΜΑΤΩΝ ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗΣ ΓΛΩΣΣΑΣ A1. Ο συγγραφέας ορίζει το φαινόμενο του ανθρωπισμού στη σύγχρονη εποχή. Αρχικά προσδιορίζει την

ΕΝΔΕΙΚΤΙΚΕΣ ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ ΘΕΜΑΤΩΝ ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗΣ ΓΛΩΣΣΑΣ A1. Ο συγγραφέας ορίζει το φαινόμενο του ανθρωπισμού στη σύγχρονη εποχή. Αρχικά προσδιορίζει την ΕΝΔΕΙΚΤΙΚΕΣ ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ ΘΕΜΑΤΩΝ ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗΣ ΓΛΩΣΣΑΣ A1. Ο συγγραφέας ορίζει το φαινόμενο του ανθρωπισμού στη σύγχρονη εποχή. Αρχικά προσδιορίζει την έννοια της ανθρωπιάς ως συμμετοχής στα προβλήματα των

Διαβάστε περισσότερα

Ηµεροµηνία επίδοσης της 033149 πρόσκλησης στα µέλη της Οικονοµικής Επιτροπής η 9/7/2015. Ηµεροµηνία συνεδρίασης : 13 Ιουλίου 2015

Ηµεροµηνία επίδοσης της 033149 πρόσκλησης στα µέλη της Οικονοµικής Επιτροπής η 9/7/2015. Ηµεροµηνία συνεδρίασης : 13 Ιουλίου 2015 ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΑΝΑΡΤΗΤΕΑ ΣΤΟ ΙΑ ΙΚΤΥΟ ΝΟΜΟΣ ΑΤΤΙΚΗΣ ΑΡ. ΠΡΩΤ.: ΗΜΟΣ ΑΜΑΡΟΥΣΙΟΥ ΜΟΝΑ Α Γ' ΥΠΟΣΤΗΡΙΞΗ ΟΙΚΟΝΟΜΙΚΗΣ ΕΠΙΤΡΟΠΗΣ Α Π Ο Σ Π Α Σ Μ Α Από το βιβλίο πρακτικών της Οικονοµικής Επιτροπής της 36ης

Διαβάστε περισσότερα

ΠΑΝΕΛΛΑΔΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Γ ΤΑΞΗΣ ΗΜΕΡΗΣΙΟΥ ΓΕΝΙΚΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥ & ΠΑΝΕΛΛΗΝΙΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Γ ΤΑΞΗΣ ΗΜΕΡΗΣΙΟΥ ΕΠΑΛ (ΟΜΑΔΑ Β )

ΠΑΝΕΛΛΑΔΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Γ ΤΑΞΗΣ ΗΜΕΡΗΣΙΟΥ ΓΕΝΙΚΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥ & ΠΑΝΕΛΛΗΝΙΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Γ ΤΑΞΗΣ ΗΜΕΡΗΣΙΟΥ ΕΠΑΛ (ΟΜΑΔΑ Β ) ΠΑΝΕΛΛΑΔΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Γ ΤΑΞΗΣ ΗΜΕΡΗΣΙΟΥ ΓΕΝΙΚΟΥ ΛΥΚΕΙΟΥ & ΠΑΝΕΛΛΗΝΙΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Γ ΤΑΞΗΣ ΗΜΕΡΗΣΙΟΥ ΕΠΑΛ (ΟΜΑΔΑ Β ) ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ: 28 / 5 / 2014 ΕΞΕΤΑΖΟΜΕΝΟ ΜΑΘΗΜΑ: ΝΕΟΕΛΛΗΝΙΚΗ ΓΛΩΣΣΑ ΠΡΟΤΕΙΝΟΜΕΝΕΣ ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ

Διαβάστε περισσότερα

ΓΡΑΠΤΕΣ ΠΡΟΑΓΩΓΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ ΙΟΥΝΙΟΥ 2005 ΜΑΘΗΜΑ : ΝΕΑ ΕΛΛΗΝΙΚΑ

ΓΡΑΠΤΕΣ ΠΡΟΑΓΩΓΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ ΙΟΥΝΙΟΥ 2005 ΜΑΘΗΜΑ : ΝΕΑ ΕΛΛΗΝΙΚΑ ΛΥΚΕΙΟ ΑΓΙΑΣ ΦΥΛΑΞΕΩΣ ΛΕΜΕΣΟΥ ΣΧΟΛΙΚΗ ΧΡΟΝΙΑ 2004 2005 ΓΡΑΠΤΕΣ ΠΡΟΑΓΩΓΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ ΙΟΥΝΙΟΥ 2005 ΜΑΘΗΜΑ : ΝΕΑ ΕΛΛΗΝΙΚΑ Ηµεροµηνία: 13 / 06 / 05 Τάξη: Β Ενιαίου Λυκείου Ώρα: 7.45π.µ. Σελίδες: 5 ιάρκεια:

Διαβάστε περισσότερα

ΣΥΜΒΟΛΗ ΤΩΝ ΝΕΩΝ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΩΝ ΣΤΗΝ ΚΑΤΑΡΤΙΣΗ ΚΑΙ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗ ΤΟΥ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟΥ ΜΙΑΣ ΣΥΓΧΡΟΝΗΣ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΗΣ

ΣΥΜΒΟΛΗ ΤΩΝ ΝΕΩΝ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΩΝ ΣΤΗΝ ΚΑΤΑΡΤΙΣΗ ΚΑΙ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗ ΤΟΥ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟΥ ΜΙΑΣ ΣΥΓΧΡΟΝΗΣ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΗΣ ΤΕΙ ΗΠΕΙΡΟΥ- ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ ΠΡΕΒΕΖΑΣ ΣΧΟΛΗ ΔΙΟΙΚΗΣΗΣ ΚΑΙ ΟΙΚΟΝΟΜΙΑΣ ΤΜΗΜΑ ΛΟΓΙΣΤΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΣΥΜΒΟΛΗ ΤΩΝ ΝΕΩΝ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΩΝ ΣΤΗΝ ΚΑΤΑΡΤΙΣΗ ΚΑΙ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗ ΤΟΥ ΠΡΟΣΩΠΙΚΟΥ ΜΙΑΣ ΣΥΓΧΡΟΝΗΣ ΕΠΙΧΕΙΡΗΣΗΣ ΕΠΙΜΕΛΕΙΑ:

Διαβάστε περισσότερα

ΚΕΦΑΛΑΙΟ 1 : ΙΣΤΟΡΙΚΗ ΕΞΕΛΙΞΗ. 1.1 Αρχαίοι χρόνοι

ΚΕΦΑΛΑΙΟ 1 : ΙΣΤΟΡΙΚΗ ΕΞΕΛΙΞΗ. 1.1 Αρχαίοι χρόνοι ΚΕΦΑΛΑΙΟ 1 : ΙΣΤΟΡΙΚΗ ΕΞΕΛΙΞΗ 1.1 Αρχαίοι χρόνοι Ο νοµός Ροδόπης ο οποίος σήµερα ορίζεται από την οµώνυµη οροσειρά προς Βορρά, από το Θρακικό Πέλαγος προς νότο, από το νοµό Ξάνθης δυτικά και από το νοµό

Διαβάστε περισσότερα

Αρείου Πάγου: 699/1995 Τµ. Β' Πηγή:.Ε.Ε. 3/96, σ.299, Ε.Ε.. 55/96, σ.830,.ε.ν. 52/96, σ. 239

Αρείου Πάγου: 699/1995 Τµ. Β' Πηγή:.Ε.Ε. 3/96, σ.299, Ε.Ε.. 55/96, σ.830,.ε.ν. 52/96, σ. 239 Αρείου Πάγου: 699/1995 Τµ. Β' Πηγή:.Ε.Ε. 3/96, σ.299, Ε.Ε.. 55/96, σ.830,.ε.ν. 52/96, σ. 239 Περίληψη: Εργατικό ατύχηµα - Αδικοπραξία - Θάνατος Μισθωτού. Σε περίπτωση εργατικού ατυχήµατος που έχει ως αποτέλεσµα

Διαβάστε περισσότερα

Η ΔΙΔΑΣΚΑΛΙΑ ΤΗΣ ΘΡΗΣΚΕΙΑΣ ΣΤΟ ΟΥΔΕΤΕΡΟΘΡΗΣΚΟ ΣΧΟΛΕΙΟ (ΤΟΥ ΡΕΖΙΣ ΝΤΕΜΠΡΕ)

Η ΔΙΔΑΣΚΑΛΙΑ ΤΗΣ ΘΡΗΣΚΕΙΑΣ ΣΤΟ ΟΥΔΕΤΕΡΟΘΡΗΣΚΟ ΣΧΟΛΕΙΟ (ΤΟΥ ΡΕΖΙΣ ΝΤΕΜΠΡΕ) Η ΔΙΔΑΣΚΑΛΙΑ ΤΗΣ ΘΡΗΣΚΕΙΑΣ ΣΤΟ ΟΥΔΕΤΕΡΟΘΡΗΣΚΟ ΣΧΟΛΕΙΟ (ΤΟΥ ΡΕΖΙΣ ΝΤΕΜΠΡΕ) I Το Δεκέμβριο του 2001 ο Ζακ Λαγκ, Υπουργός Εθνικής Παιδείας της Γαλλίας ζήτησε από τον καθηγητή Ρεζίς Ντεμπρέ, το θεωρητικό ενδιαφέρον

Διαβάστε περισσότερα