Endogenous Biotin Blocking Kit

Transcript

1 Endogenous Biotin Blocking Kit Αρ. καταλόγου ΕΝΔΕΙΞΕΙΣ ΚΑΙ ΧΡΗΣΗ Προοριζόμενη Χρήση Το κιτ αυτό προορίζεται για in vitro διαγνωστική χρήση (IVD). Το Endogenous Biotin Blocking Kit του οίκου Ventana Medical Systems' (Ventana) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να βοηθήσει τη μείωση της μη ειδικής χρώσης που προκαλείται από την ενδογενή βιοτίνη που υπάρχει στα κύτταρα και στους ιστούς που έχουν χρωματιστεί με τους Ventana automated slide stainers. Το Blocker A δεσμεύει ειδικά την ενδογενή βιοτίνη που υπάρχει στον ιστό. Το Blocker B συμπληρώνει τις εναπομένουσες θέσεις δέσμευσης της αβιδίνης από το ασπράδι του αβγού με Blocker A, μειώνοντας έτσι την μη ειδική χρώση. Η κλινική ερμηνεία οποιασδήποτε χρώσης, ή η απουσία χρώσης, πρέπει να συμπληρώνεται από μορφολογικές μελέτες και αξιολόγηση με κατάλληλα πρότυπα ελέγχου. Η αξιολόγηση πρέπει να πραγματοποιείται από πεπειραμένο παθολογοανατόμο, λαμβάνοντας υπόψη το κλινικό ιστορικό του ασθενούς και τις λοιπές διαγνωστικές εξετάσεις. Περίληψη και επεξήγηση Η παρουσία της ενδογενούς βιοτίνης που προκαλεί αυξημένη χρώση υποβάθρου του ιστού έχει τεκμηριωθεί λεπτομερώς. 1 Το υπόβαθρο αυτό απαλείφεται με αβιδίνη και κατόπιν με βιοτίνη πριν τη χρήση βιοτινυλιωμένων αντιδραστηρίων ανίχνευσης. Τη χρήση πρωτοταγών αντισωμάτων και φραγμού ενδογενούς βιοτίνης ακολουθεί η χρήση των κιτ ανίχνευσης Ventana, που χρησιμοποιούν βιοτινυλιωμένα δευτεροταγή αντισώματα για να εντοπίσουν το δεσμευμένο πρωτοταγές αντίσωμα. Ακολουθεί η δέσμευση ενός συζεύγματος ενζύμου-στρεπταβιδίνης στη βιοτίνη. Τότε το σύμπλοκο απεικονίζεται χρησιμοποιώντας ένα καθιζάνον προϊόν ενζύμου. Αρχές λειτουργίας και διαδικασίες Το Endogenous Biotin Blocking Kit καλύπτει τη βιοτίνη που υπάρχει στον ιστό και στα κύτταρα δεσμεύοντας την αβιδίνη. Οι υπόλοιπες θέσεις δέσμευσης βιοτίνης στο δεσμευμένο μόριο αβιδίνης αποκλείονται στη συνέχεια με την προσθήκη βιοτίνης. Το πρωτοταγές αντίσωμα εντοπίζεται από έναν τύπο δευτεροταγούς αντισώματος συζευγμένο σε βιοτίνη, που αναγνωρίζει τις ανοσοσφαιρίνες του κουνελιού και του ποντικιού. Το βήμα αυτό ακολουθείται από την προσθήκη ενός συζεύγματος ενζύμου στρεπταβιδίνης το οποίο συνδέεται στην βιοτίνη που υπάρχει στο δευτεροταγές αντίσωμα. Κατόπιν το σύμπλοκο του πρωτοταγούς αντισώματος, του δευτεροταγούς αντισώματος και του ενζύμου στρεπταβιδίνης εμφανίζεται με τη χρήση ενός προϊόντος της αντίδρασης ενζύμου που προκαλεί αντίδραση. Σε κάθε βήμα προβλέπεται επώαση για συγκεκριμένο χρόνο και σε συγκεκριμένη θερμοκρασία. Στο τέλος κάθε φάσης επώασης, τους Ventana automated slide stainers (αυτοματοποιημένα συστήματα χρώσεως ανιτκειμενοφόρων πλακών) ξεπλένει τις τομές απομακρύνοντας το αδέσμευτο υλικό ενώ εφαρμόζει μια "υγρή καλυπτρίδα", που ελαχιστοποιεί την εξάτμιση των αντιδραστηρίων υδατικής βάσης από την αντικειμενοφόρο πλάκα. 2 Τα αποτελέσματα ερμηνεύονται χρησιμοποιώντας κοινό μικροσκόπιο και βοηθούν στην διάγνωση παθοφυσιολογικών διαδικασιών, οι οποίες είναι δυνατόν να σχετίζονται με κάποιο συγκεκριμένο αντιγόνο. Για περισσότερες λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με το χειρισμό του οργάνου, αναφερθείτε στο ανάλογο εγχειρίδιο χρήσης του Ventana automated slide stainer (αυτοματοποιημένο σύστημα χρώσεως αντικειμενοφόρων πλακών). ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ Αντιδραστήρια που Παρέχονται Το Endogenous Biotin Blocking Kit περιέχει επαρκή αντιδραστήρια για 250 αναλύσεις. 1 διανεμητής 25 ml με διάλυμα Blocker A; περιέχει περίπου 0,1 mg/ml αβιδίνης από ασπράδι του αβγού σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών με συντηρητικό. 1 διανεμητής 25 ml με διάλυμα Blocker Β; περιέχει περίπου 0,1 mg/ml ελεύθερης βιοτίνης σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών με συντηρητικό. Ανασύσταση, Ανάμιξη, Αραίωση, Τιτλοδότηση Το Endogenous Biotin Blocking Kit ενδείκνυται για χρήση σε Ventana automated slide stainer. Δεν απαιτείται ανασύσταση, ανάμιξη, αραίωση ή τιτλοδότηση των αντιδραστηρίων που περιέχονται στο κιτ. Περαιτέρω αραίωση ενδέχεται να προκαλέσει κακή λειτουργία του προϊόντος. Ο χρήστης πρέπει να εξασφαλίζει ότι δεν έχουν επέλθει οποιεσδήποτε τέτοιες αλλαγές. Διαφοροποιήσεις στην διαδικασία κατεργασίας ιστών και στις τεχνικές διαδικασίες που εφαρμόζονται στο εργαστήριο του χρήστη, ενδέχεται να επιφέρουν σημαντικές διακυμάνσεις στα αποτελέσματα, γεγονός που απαιτεί την διεξαγωγή τακτικών ελέγχων από το χρήστη (Βλ. ενότητα Διαδικασίες Ελέγχου Ποιότητας). Υλικά και Αντιδραστήρια που Απαιτούνται αλλά δεν Παρέχονται Τα παρακάτω αντιδραστήρια και υλικά ενδέχεται να απαιτούνται για τη χρώση, αλλά δεν παρέχονται: 1. Θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες (ιστοί) 2. Ventana Negative Control Reagent* 3. Ventana Rabbit Negative Control* 4. Primary Antibody 5. Αντικειμενοφόροι πλάκες, θετικά φορτισμένες 6. Κλίβανο ξήρανσης με ικανότητα διατήρησης της θερμοκρασίας στους 70 C ± 5 C 7. Ετικέτες γραμμικού κώδικα (κατάλληλες για αρνητικό μάρτυρα ή για το εξεταζόμενο πρωτοταγές αντίσωμα) 8. Ουδέτερο ρυθμιστικό διάλυμα φορμόλης 10% 9. Δοχεία ή λουτρά χρώσης 10. Χρονόμετρο 11. Ξυλόλη 12. Αιθανόλη ή αλκοόλη 13. Απιονισμένο ή απεσταγμένο νερό 14. Biocare Medical s Decloaking Chamber* (ES και NexES IHC automated slide stainers) 15. ES, NexES IHC, BenchMark και BenchMark XT automated slide stainers 16. Ventana iview TM DAB, AEC, V Red (ALK PHOS) ή Enhanced V Red κιτ ανίχνευσης 17. Εξειδικευμένο λογισμικό κιτ ανίχνευσης (μόνο για ES automated slide stainer ) 18. Ventana APK Wash Solution* (ES και NexES IHC automated slide stainers) 19. Διάλυμα Ventana Liquid Coverslip TM *(ES και NexES IHC automated slide stainers) 20. Διάλυμα Ventana EZ Prep TM * (BenchMark και BenchMark XT automated slide stainers) 21. Ventana Reaction Buffer* (BenchMark και BenchMark XT automated slide stainers) 22. Ventana LCS* (BenchMark και BenchMark XT automated slide stainers) 23. Ventana Cell Conditioning 1 (CC1) ή Cell Conditioning 2 (CC2) (BenchMark και BenchMark XT automated slide stainers)* 24. Ventana Protease I, II, ή III* 25. Ventana Hematoxylin* 26. Ventana Bluing Reagent* 27. Επικαλυπτικό μέσο 28. Καλυπτρίδες 29. Κοινό μικροσκόπιο (20-80X) * Όπως χρειάζεται για ειδικές εφαρμογές. Φύλαξη και Χειρισμός Αποθηκεύεται στους 2-8 C. Να μην καταψύχεται. Ο χρήστης πρέπει να εξακριβώνει αν υπάρχουν άλλες συνθήκες αποθήκευσης διαφορετικές από εκείνες που προβλέπονται από τις Οδηγίες Χρήσης. Το κιτ φραγμού είναι έτοιμο για χρήση, αμέσως μετά την απομάκρυνσή του από το ψυγείο. Για να εξασφαλίσετε την σωστή διανομή των συστατικών του κιτ και σταθερότητά τους, μετά από κάθε κύκλο εξετάσεων, ο διανεμητής πρέπει να επαναπωματίζεται και να τοποθετείται αμέσως σε όρθια θέση, μέσα σε ψυγείο. Κάθε διανεμητής έχει ημερομηνία λήξεως. Εφόσον αποθηκεύονται σύμφωνα με τις προβλεπόμενες οδηγίες φύλαξης, τα αντιδραστήρια παραμένουν αναλλοίωτα μέχρι την ημερομηνία που αναγράφεται στην ετικέτα. Μην χρησιμοποιείτε το αντιδραστήριο πέραν της ημερομηνίας λήξης, για την ενδεικνυόμενη μέθοδο φύλαξης. Η αλλοίωση του προϊόντος αυτού δεν παρουσιάζει σαφείς ενδείξεις. Επομένως, με άγνωστα δείγματα, πρέπει να χρησιμοποιούνται ταυτόχρονα θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες. Στο πρώτο σημάδι πιθανής αλλοίωσης του αντιδραστηρίου, επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της Ventana. Συλλογή Δειγμάτων και Προετοιμασία προς Ανάλυση Οι ιστοί που έχουν μονιμοποιηθεί σε φορμόλη, έχουν υποστεί επεξεργασία με τη συνήθη μέθοδο, και έχουν εγκλεισθεί σε παραφίνη, καθώς και οι κατεψυγμένοι ιστοί, είναι κατάλληλοι για χρήση, σε συνδυασμό με το Endogenous Biotin Detection Kit και τη χρήση ενός Ventana automated slide stainer (αυτοματοποιημένο σύστημα χρώσεως αντικειμενοφόρων πλακών)(βλ. ενότητα Υλικά και Αντιδραστήρια που Απαιτούνται αλλά Σελίδα 1 από EL Rev B

2 δεν Παρέχονται) Για την μονιμοποίηση των ιστών συνιστάται η χρήση ουδέτερου ρυθμιστικού διαλύματος φορμόλης 10% 3. Παραλλαγμένα αποτελέσματα ενδέχεται να προκύψουν λόγω παρατεταμένης μονιμοποίησης ή της εφαρμογής ειδικών διαδικασιών, όπως για παράδειγμα αφαλάτωση παρασκευασμάτων μυελού των οστών. Η κάθε τομή πρέπει να κόβεται στο κατάλληλο πάχος και να τοποθετείται σε αντικειμενοφόρο πλάκα που είναι θετικά φορτισμένη. Οι αντικειμενοφόροι πλάκες που φέρουν τομές ιστών μπορούν να θερμαίνονται επί τουλάχιστον 2 ώρες (αλλά όχι περισσότερο από 24 ώρες) σε κλίβανο με θερμοκρασία 70 C ± 5 C. Οι κατεψυγμένες τομές θα πρέπει να έχουν το ενδεικνυόμενο πάχος, να τοποθετούνται σε αντικειμενοφόρους πλάκες που είναι αρνητικά φορτισμένες και να τοποθετούνται αμέσως σε κρύα ακετόνη (4 ως 8 C) για δέκα λεπτά. Κατόπιν, οι τομές στεγνώνονται σε αέρα για τουλάχιστον τριάντα λεπτά και κατά προτίμηση κατά τη διάρκεια της νύχτας. Οι στεγνές πλέον αντικειμενοφόρους πλάκες πρέπει να σημαίνονται με τις αντίστοιχες ετικέτες γραμμικού κώδικα. Χειροκίνητη Διαδικασία Αποπαραφίνωσης Απαιτείται όταν χρησιμοποιείτε τα ES ή NexES IHC automated slide stainers ή αν η αποπαραφίνωση δεν επιλέχθηκε στα BenchMark ή τα BenchMark XT automated slide stainer: 1. Για οδηγίες σχετικά με το πότε να σημάνετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες με ετικέτες γραμμικού κώδικα, ανατρέξτε στις Οδηγίες Χρήσης του συγκεκριμένου automated slide stainer. 2. Εμβαπτίστε τις αντικειμενοφόρους πλάκες, διαδοχικά στα 3 δοχεία ξυλόλης, επί 5 ± 1 λεπτό στο κάθε ένα από αυτά. 3. Μεταφέρετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες σε αιθανόλη 100% και εμβαπτίστε τες διαδοχικά σε 2 δοχεία επί 3 ± 1 λεπτά στο κάθε ένα από αυτά. 4. Μεταφέρετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες σε δοχείο με διάλυμα αιθανόλης 95% και βυθίστε τες επί 3 ± 1 λεπτά. 5. Μεταφέρετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες και εμβαπτίστε τες σε δοχείο αιθανόλης 80% επί 3 ± 1 λεπτά. 6. Μεταφέρετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες σε δοχείο απιονισμένου ή απεσταγμένου νερού και εμβαπτίστε τες 10 φορές τουλάχιστον. 7. Μεταφέρετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες στο κατάλληλο APK Wash (1X) ή ρυθμιστικό διάλυμα. Για το διάλυμα APK Wash, οι αντικειμενοφόροι πλάκες πρέπει να παραμείνουν έως ότου είστε έτοιμοι να πραγματοποιήσετε τη διαδικασία χρώσεως. Για το ρυθμιστικό διάλυμα, οι αντικειμενοφόροι πλάκες πρέπει να παραμείνουν έως ότου είστε έτοιμοι να πραγματοποιήσετε τη διαδικασία αποκάλυψης του αντιγόνου. Μην αφήνετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες να στεγνώσουν. Οι αντικειμενοφόροι πλάκες που έχουν χρωματιστεί στα BenchMark ή BenchMark XT automated slide stainers μπορούν να αποπαραφινωθούν πάνω στο όργανο. Αν επιλέξετε την επιλογή αυτή, τοποθετήστε στις αντικειμενοφόρους γραμμικό κώδικα και τοποθετήστε τις πάνω στο όργανο. Αν δεν επιλέξετε αυτή την διαδικασία, ακολουθήστε τη Χειροκίνητη Διαδικασία Αποπαραφίνωσης, όπως αναφέρεται παραπάνω. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ 1. Λάβετε τις δέουσες προφυλάξεις όταν χειρίζεστε αντιδραστήρια. Χρησιμοποιείτε γάντια μιας χρήσης όταν χειρίζεστε ενδεχομένως καρκινογόνα ή τοξικά υλικά (π.χ.: ξυλόλη ή φορμαλδεΰδη). 2. Αποφύγετε επαφή των αντιδραστηρίων με τα μάτια και τις βλεννογόνους μεμβράνες. Αν τα αντιδραστήρια έλθουν σε επαφή με ευαίσθητες περιοχές, ξεπλύνετε με άφθονο νερό. 3. Μην καπνίζετε, τρώτε ή πίνετε στους χώρους όπου χειρίζεστε δείγματα ή αντιδραστήρια. 4. Τα δείγματα που προέρχονται από ασθενείς, καθώς και όλα τα υλικά που έρχονται σε επαφή με ασθενείς, πρέπει να αντιμετωπίζονται ως υλικά βιολογικώς επικίνδυνα και να απορρίπτονται με τις ενδεδειγμένες προφυλάξεις. Κατά την αναρρόφηση των υγρών με πιπέττα, μην χρησιμοποιείτε το στόμα σας. 5. Αποφύγετε τη μικροβιακή επιμόλυνση των αντιδραστηρίων, καθώς τούτο μπορούσε να επιφέρει εσφαλμένα αποτελέσματα. 6. Η εφαρμογή χρόνων και θερμοκρασιών επώασης διαφορετικών από τα προβλεπόμενα, ενδέχεται να δώσουν εσφαλμένα αποτελέσματα. Ο χρήστης πρέπει να εξασφαλίσει ότι δεν έχει επέλθει οποιαδήποτε τέτοια μεταβολή. 7. Τα αντιδραστήρια έχουν αραιωθεί καταλλήλως και περαιτέρω αραίωση πιθανόν να προκαλέσει απώλεια χρώσης του αντιγόνου. Ο χρήστης πρέπει να εξασφαλίσει ότι δεν έχει επέλθει οποιαδήποτε τέτοια μεταβολή. 8. Όταν χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες, το προϊόν αυτό δεν θεωρείται επιβλαβές. Το αντιδραστήριο περιέχει ProClin 300 ως συντηρητικό. Συμπτώματα υπερβολικής έκθεσης στο ProClin 300 περιλαμβάνουν ερεθισμό του δέρματος και των ματιών και ερεθισμό των βλεννογόνων μεμβρανών και των άνω αναπνευστικών οδών. Η συγκέντρωση του ProClin 300 στο προϊόν αυτό είναι 0,05% και δεν ικανοποιεί τα κριτήρια του OSHA για επικίνδυνες ουσίες. Συστημικές αλλεργικές αντιδράσεις είναι πιθανές σε ευαίσθητα άτομα. 9. Επικοινωνήστε με τις τοπικές ή κρατικές αρχές σχετικά με την συνιστώμενη μέθοδο απόρριψης. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ Διαδικασία Βήμα-προς-Βήμα Το Ventana Endogenous Biotin Blocking Kit έχει σχεδιασθεί για να χρησιμοποιείται στους Ventana automated slide stainers σε συνδυασμό με τα Ventana primary antibodies και τα παρελκόμενά τους. Οι παράμετροι για τις αυτοματοποιημένες διαδικασίες μπορούν να απεικονιστούν, να εκτυπωθούν και να διαμορφωθούν σύμφωνα με τη διαδικασία στο Εγχειρίδιο χρήσης για το συγκεκριμένο automated slide stainer. Οι άλλες παράμετροι λειτουργίας για τους automated slide stainers, έχουν ρυθμιστεί εργοστασιακά. Οι διαδικασίες για τη χρώση στα Ventana automated slide stainers έχουν ως ακολούθως. Για περισσότερες λεπτομέρειες και επιπλέον επιλογές πρωτοκόλλου ανατρέξτε στο δικό σας Εγχειρίδιο χρήσης. ES και NexES IHC Automated Slide Stainers Απαιτείται Αποκάλυψη Αντιγόνου: 1. Πραγματοποιήστε αποπαραφίνωση των αντικειμενοφόρων πλακών, εμβαπτίζοντάς τες διαδοχικά μέσα σε δοχεία που περιέχουν ξυλόλη και κατόπιν σε σειρά δοχείων που περιέχουν αλκοόλη σε κατιούσα πυκνότητα και τέλος, σε νερό και στο κατάλληλο ρυθμιστικό διάλυμα. Πραγματοποιήστε τη διαδικασία αποκάλυψης του αντιγόνου και μεταφέρετε τις αντικειμενοφόρους στο APK Wash (1X). 2. Τοποθετήστε τους διανεμητές του πρωτοταγούς αντισώματος, του κιτ ανίχνευσης καθώς και των απαιτούμενων συνοδευτικών αντιδραστηρίων, επάνω στο δίσκο αντιδραστηρίων και τοποθετήστε τον στο automated slide stainer. Ελέγξτε τα ειδικά διαλύματα (bulk fluids) και τα απόβλητα. 3. Στεγνώστε το άκρο της αντικειμενοφόρου πλάκας και μετά εφαρμόστε την ετικέτα γραμμικού κώδικα της αντικειμενοφόρου πλάκας, η οποία αντιστοιχεί με το πρωτόκολλο του αντισώματος που πρόκειται να εφαρμοσθεί. 4. Απομακρύνετε από το διάλυμα έκπλυσης APK Wash (1Χ)τις αντικειμενοφόρους πλάκες, που φέρουν τις αποπαραφινωμένες τομές που έχουν υποβληθεί σε διαδικασία αποκάλυψης αντιγόνου και τοποθετήστε τες στο αυτοματοποιημένο σύστημα χρώσης. Προσοχή: οι αντικειμενοφόρους πλάκες δεν πρέπει να στεγνώσουν. Δεν Απαιτείται Αποκάλυψη Αντιγόνου: 1. Σημάνετε τις αντικειμενοφόρους πλάκες με ετικέτα γραμμικού κώδικα. Πραγματοποιήστε αποπαραφίνωση των αντικειμενοφόρων πλακών, εμβαπτίζοντάς τες διαδοχικά μέσα σε δοχεία που περιέχουν ξυλόλη και σε σειρά δοχείων που περιέχουν αλκοόλη σε κατιούσα πυκνότητα και τέλος, σε νερό. Τοποθετήστε τις αντικειμενοφόρους πλάκες στο APK Wash (1X). 2. Τοποθετήστε τους διανεμητές του πρωτοταγούς αντισώματος, του κιτ ανίχνευσης καθώς και των απαιτούμενων συνοδευτικών αντιδραστηρίων, επάνω στο δίσκο αντιδραστηρίων και τοποθετήστε τον στο automated slide stainer. 3. Απομακρύνετε από το διάλυμα έκπλυσης APK Wash (1Χ)τις αντικειμενοφόρους πλάκες, που φέρουν τις αποπαραφινωμένες τομές που έχουν υποβληθεί σε διαδικασία αποκάλυψης αντιγόνου και τοποθετήστε τες στο αυτοματοποιημένο σύστημα χρώσης. Προσοχή: οι αντικειμενοφόροι πλάκες δεν πρέπει να στεγνώσουν. BenchMark ή BenchMark XT Automated Slide Stainers 1. Σημάνετε την αντικειμενοφόρο πλάκα με την ετικέτα γραμμικού κώδικα που αντιστοιχεί στο πρωτόκολλο αντισώματος που πρόκειται να εφαρμοσθεί. 2. Τοποθετήστε τους διανεμητές του πρωτοταγούς αντισώματος και του κιτ ανίχνευσης, καθώς και το απαιτούμενο συνοδευτικό αντιδραστήριο, επάνω στο δίσκο αντιδραστηρίων και τοποθετήστε τα στο automated slide stainer. Ελέγξτε τα ειδικά διαλύματα (bulk fluids) και τα απόβλητα. 3. Τοποθετήστε τις αντικειμενοφόρους πλάκες στο σύστημα. Για όλα τα Όργανα 1. Ξεκινήστε τη διαδικασία χρώσης. 2. Με την ολοκλήρωση της διαδικασίας, αφαιρέστε τις αντικειμενοφόρους πλάκες από το όργανο και ξεπλύνετε με ήπιο απορρυπαντικό ή αλκοόλη για να αφαιρέσετε το "διάλυμα καλυπτρίδας" (liquid coverslip). Αφυδατώστε, διαυγάστε και καλύψτε με κοινό επικαλυπτικό μέσο κατά το συνήθη τρόπο Σελίδα 2 από EL Rev B

3 Διαδικασίες ελέγχου ποιότητας Έλεγχος θετικού μάρτυρα (Ιστός) Σε κάθε κύκλο χρώσεων πρέπει να χρησιμοποιείται και ένας θετικός μάρτυρας (ιστός). Τα συστατικά του ιστού με θετική χρώση, επιβεβαιώνουν την εφαρμογή του αντισώματος και την ορθής λειτουργία του συστήματος. Ο ιστός αυτός μπορεί να περιέχει κύτταρα και συστατικά στοιχεία, τόσο θετικής όσο και αρνητικής χρώσης, τα οποία λειτουργούν ως θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες. Οι πρότυποι ιστοί ελέγχου πρέπει να είναι δείγματα χειρουργικά ή να προέρχονται από πρόσφατη νεκροψία, βιοψία, και να έχουν παρασκευασθεί και μονιμοποιηθεί άμεσα, κατά τρόπο πανομοιότυπο με τις προς εξέταση τομές ιστών. Αυτοί οι ιστοί πρέπει να υποβάλλονται σε όλα τα βήματα της εξέτασης, από την προετοιμασία των ιστών έως την χρώση τους. Η χρήση τομής ιστού που έχει υποστεί επεξεργασία με διαφορετικό τρόπο από αυτόν του προς εξέταση δείγματος, επιτρέπει τον έλεγχο όλων των αντιδραστηρίων και των βημάτων της μεθόδου, πλην αυτών της μονιμοποίησης και επεξεργασίας του ιστού. Η χρήση ιστού με ασθενή θετική χρώση παρέχει τον βέλτιστο έλεγχο της ποιότητας και ενδείκνυται για την ανίχνευση ελασσόνων αλλοιώσεων των αντιδραστηρίων. Η χρήση γνωστών θετικών μαρτύρων ενδείκνυται μόνο για την απεικόνιση της σωστής απόδοσης των επεξεργασμένων ιστοτεμαχίων και των αντιδραστηρίων εξέτασης και όχι επικουρικά, για τον καθορισμό συγκεκριμένης διάγνωσης σε δείγματα ασθενών. Αν οι θετικοί μάρτυρες δεν εμφανίσουν θετική χρώση, τα αποτελέσματα της εξέτασης των δειγμάτων πρέπει να θεωρούνται άκυρα. Αρνητικός Μάρτυρας (Ιστός) Ως αρνητικός μάρτυρας μπορεί να χρησιμοποιηθεί ο ιστός που χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας. Η ποικιλία των κυτταρικών τύπων, που παρουσιάζουν οι τομές των ιστών προσφέρει εσωτερικά σημεία που μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως αρνητικοί μάρτυρες, κάτι όμως που, πρέπει να εξακριβώνεται από τον χρήστη. Τα συστατικά στα οποία δεν παρουσιάζεται χρώση, δεν πρέπει να εμφανίζουν ειδική χρώση, και έτσι αποτελούν ένδειξη ειδικής χρώσης στο υπόβαθρο (φόντο) Αν παρατηρηθεί ειδική χρώση στα σημεία αυτά, που χρησιμοποιούνται ως αρνητικοί μάρτυρες, τα αποτελέσματα των δειγμάτων των ασθενών πρέπει να θεωρηθούν άκυρα. Ανεξήγητες Ασυμφωνίες Ανεξήγητες ασυμφωνίες στους μάρτυρες πρέπει να γνωστοποιούνται αμέσως στον τοπικό αντιπρόσωπο του οίκου Ventana. Αν τα αποτελέσματα του ελέγχου ποιότητας δεν ανταποκρίνονται στις προδιαγραφές, τα αποτελέσματα για τους ασθενείς είναι άκυρα. Βλ.την ενότητα Αντιμετώπιση Προβλημάτων, στο παρόν ένθετο. Εντοπίστε και διορθώστε το πρόβλημα και ακολούθως επαναλάβετε την εξέταση των δειγμάτων των ασθενών. Αρνητικός Μάρτυρας (Αντιδραστήριο) Μαζί με κάθε ένα δείγμα, πρέπει να χρησιμοποιείται και ένας αρνητικός μάρτυρας (αντιδραστήριο), για την διευκόλυνση της ερμηνείας των αποτελεσμάτων. Ο αρνητικός μάρτυρας (αντιδραστήριο) χρησιμοποιείται στην θέση του πρωτοταγούς αντισώματος, για την αξιολόγηση της μη-ειδικής χρώσης. Η χρώση της αντικειμενοφόρου πλάκας πρέπει να γίνεται με το Negative Control Reagent (mouse) ή με το Rabbit Negative Control, κατά περίπτωση. Σε περίπτωση χρήσης διαφορετικού αντιδραστηρίου στη θέση αρνητικού μάρτυρα, αυτό πρέπει να αραιωθεί με το Ventana Antibody Diluent στην ίδια συγκέντρωση που έχει το πρωτοταγές αντίσωμα/αντιορός. Το ίδιο το αραιωτικό μπορεί να χρησιμοποιηθεί από μόνο του ως αρνητικός μάρτυρας. Ο χρόνος επώασης του αρνητικού μάρτυρα (αντιδραστήριο) πρέπει να ισούται με τον χρόνο επώασης του πρωτοταγούς αντισώματος. Όταν χρησιμοποιείται σειρά (panel) διαφόρων αντισωμάτων σε διαδοχικές τομές, ο αρνητικός μάρτυρας (αντιδραστήριο) σε μία αντικειμενοφόρο πλάκα μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως αρνητικός μάρτυρας ή μάρτυρας μη ειδικής χρώσης υποβάθρου (φόντου) για άλλα αντισώματα. Επιβεβαίωση Δοκιμασίας Πριν την αρχική χρήση αντισώματος ή συστήματος χρώσης στη διαγνωστική διαδικασία, η ειδικότητα του αντισώματος πρέπει να επιβεβαιωθεί με δοκιμές σε σειρές ιστών που αντιπροσωπεύουν γνωστούς θετικούς και αρνητικούς ιστούς, με γνωστά χαρακτηριστικά ανοσοϊστοχημικής συμπεριφοράς (ανατρέξτε στις Διαδικασίες Ελέγχου Ποιότητας, που περιέχονται συνοπτικά παραπάνω στην παρούσα ενότητα και στις Quality Control recommendations of the College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic Pathology Checklist 4 ή στο NCCLS Approved Guideline 5 ή και στα δύο έγγραφα). Αυτές οι διαδικασίες ελέγχου ποιότητας πρέπει να επαναλαμβάνονται για κάθε καινούργια παρτίδα αντισώματος, ή οποτεδήποτε υπάρχει μεταβολή στις παραμέτρους της δοκιμασίας. Οι ιστοί που αναφέρονται στην ενότητα Περίληψη Αναμενόμενων Αποτελεσμάτων είναι κατάλληλοι για επαλήθευση της δοκιμασίας. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Το Ventana Endogenous Biotin Blocking Kit μειώνει τη μη ειδική χρώση λόγω της βιοτίνης που υπάρχει στο δείγμα ιστού. Το Blocker A ενώνεται ειδικά με την ενδογενή βιοτίνη στο δείγμα. Το Blocker B δεσμεύεται με τις υπόλοιπες θέσεις δέσμευσης στο μόριο του Blocker A, και μειώνει έτσι τη μη ειδική χρώση. Η αυτοματοποιημένη ανοσοχρωστική διαδικασία του οίκου Ventana προκαλεί την επικάθηση ενός χρωματισμένου προϊόντος αντίδρασης στις θέσεις αντιγόνου που εντοπίζονται από το πρωτοταγές αντίσωμα. Ανατρέξτε στο ένθετο της συσκευασίας του κατάλληλου Ventana detection kit για το αναμενόμενο χρώμα. Η αξιολόγηση των μαρτύρων και του προϊόντος της χρώσεως πρέπει να γίνει από έμπειρο παθολογοανατόμο εξοικειωμένο με τις διαδικασίες της ανοσοϊστοχημείας πρέπει να προηγηθεί της ερμηνείας των αποτελεσμάτων. Πρέπει πρώτα να διαπιστωθεί η χρώση των αρνητικών μαρτύρων η οποία και συγκριθεί με το χρωματισμένο υλικό, για να αξιολογήσει σωστά τα αποτελέσματα της χρώσης. Όπως συμβαίνει και σε κάθε ανοσοϊστοχημική εξέταση, τυχόν αρνητικό αποτέλεσμα σημαίνει ότι το εν λόγω αντιγόνο απλώς δεν ανιχνεύθηκε, και όχι ότι το αντιγόνο απουσιάζει από τους ιστούς που έχουν εξετασθεί. Κατά την ερμηνεία οποιουδήποτε ανοσοϊστοχημικού αποτελέσματος, πρέπει να εξετάζεται και η μορφολογία κάθε δείγματος ιστού, με την χρήση μίας τομής χρωματισμένης με αιματοξυλίνη και εωσίνη. Τα μορφολογικά ευρήματα του ασθενούς και οποιαδήποτε συναφή κλινικά δεδομένα πρέπει να ερμηνεύονται από έμπειρο παθολογοανατόμο. Έλεγχος θετικού μάρτυρα (Ιστός) Για την επιβεβαίωση της ορθής λειτουργίας των αντιδραστηρίων, πρέπει κατ' αρχήν να εξετάζεται ο θετικός μάρτυρας (Ιστός), που έχει υποβληθεί στην διαδικασία χρώσεως. Η παρουσία μέσα στα κύτταρα-στόχους ενός προϊόντος αντίδρασης που έχει χρωματισθεί κατά τα αναμενόμενα, αποτελεί ένδειξη θετικής αντιδραστικότητας. Ανατρέξτε στις Οδηγίες Χρήσης του χρησιμοποιούμενου κιτ ανίχνευσης για αναμενόμενες χρωματικές αντιδράσεις. Ανάλογα με τη διάρκεια της επώασης και την αποτελεσματικότητα της αιματοξυλίνης που χρησιμοποιείται, η αντίχρωση δημιουργεί ανοιχτό έως σκούρο μπλε χρωματισμό των κυτταρικών πυρήνων. Υπερβολική ή ατελής αντίχρωση ενδέχεται να υποβαθμίσει την ορθή ερμηνεία των αποτελεσμάτων. Αν ο θετικός μάρτυρας (ιστός) δεν εμφανίσει θετική χρώση, όλα τα αποτελέσματα της εξέτασης των δειγμάτων πρέπει να θεωρούνται άκυρα. Αρνητικός Μάρτυρας (Ιστός) Η εξέταση του αρνητικού μάρτυρα (ιστός) πρέπει να έπεται αυτής του θετικού μάρτυρα, για να επιβεβαιώνεται η ειδική σήμανση του αντιγόνου-στόχου, από το πρωτοταγές αντίσωμα. Η απουσία ειδικής χρώσης στον αρνητικό μάρτυρα (ιστό) επιβεβαιώνει την μη-ύπαρξη διασταυρούμενης αντιδραστικότητας του αντισώματος προς τα κύτταρα ή τα κυτταρικά συστατικά. Αν παρατηρηθεί ειδική χρώση στον αρνητικό μάρτυρα (ιστό), τα αποτελέσματα στα δείγματα των ασθενών πρέπει να θεωρούνται άκυρα. Εάν υπάρχει μη-ειδική χρώση, έχει διάχυτο παρουσιαστικό. Σποραδική ελαφρά χρώση του συνδετικού ιστού ενδέχεται επίσης να παρατηρηθεί σε τομές, που έχουν υποστεί υπερβολική μονιμοποίηση σε φορμόλη. Για την ερμηνεία των αποτελεσμάτων πρέπει να χρησιμοποιούνται τα άθικτα κύτταρα. Νεκρωτικά ή αλλοιωμένα κύτταρα, συχνά παρουσιάζουν μη-ειδική χρώση. Ιστός Ασθενούς Τα δείγματα των ασθενών πρέπει να εξετάζονται τελευταία. Η ένταση θετικής χρώσης πρέπει να αξιολογείται, λαμβάνοντας υπ'όψιν τυχόν χρώση φόντου του αρνητικού μάρτυρα (αντιδραστηρίου). Όπως συμβαίνει και σε κάθε ανοσοϊστοχημική εξέταση, τυχόν αρνητικό αποτέλεσμα σημαίνει ότι το εν λόγω αντιγόνο απλώς δεν ανιχνεύθηκε, και όχι ότι το αντιγόνο απουσιάζει από τα κύτταρα ή τους ιστούς που έχουν εξετασθεί. Εφόσον είναι απαραίτητο, χρησιμοποιήστε σειρά (panel) αντισωμάτων, επικουρικά για τον εντοπισμό των ψευδώς αρνητικών αντιδράσεων (βλ. Ενότητα Περίληψη Αναμενόμενων Αποτελεσμάτων). Κατά την ερμηνεία οποιουδήποτε ανοσοϊστοχημικού αποτελέσματος, πρέπει να εξετάζεται και η μορφολογία κάθε δείγματος ιστού, με την χρήση μίας τομής χρωματισμένης με αιματοξυλίνη και εωσίνη. Τα μορφολογικά ευρήματα του ασθενούς και οποιαδήποτε συναφή κλινικά δεδομένα πρέπει να ερμηνεύονται από έμπειρο παθολογοανατόμο. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ Γενικοί περιορισμοί 1. Η ανοσοϊστοχημεία είναι μια διαγνωστική διαδικασία πολλαπλών βημάτων που απαιτεί εξειδίκευση στην επιλογή των καταλλήλων αντιδραστηρίων και ιστών, στην μονιμοποίηση, την επεξεργασία, την προετοιμασία της αντικειμενοφόρου πλάκας για ανοσοϊστοχημεία, καθώς και στην ερμηνεία των αποτελεσμάτων χρώσης. 2. Η χρώση των ιστών εξαρτάται από το χειρισμό και επεξεργασία των ιστών πριν την διαδικασία χρώσης. Ακατάλληλη μονιμοποίηση, κατάψυξη, απόψυξη, πλύση, Σελίδα 3 από EL Rev B

4 στέγνωμα, θέρμανση, κατάτμηση των ιστών ή επιμόλυνση με άλλους ιστούς ή υγρά, ενδέχεται να έχουν ως αποτέλεσμα την δημιουργία μορφωμάτων, την παγίδευση του αντισώματος, ή την παραγωγή ψευδώς αρνητικών αποτελεσμάτων. Τυχόν διαφοροποιήσεις στις μεθόδους μονιμοποίησης και έγκλεισης, καθώς και η ύπαρξη εγγενών ανωμαλιών εντός του ιστού ενδέχεται να επιφέρουν ασυνεπή αποτελέσματα. 3. Υπερβολική ή ατελής αντίχρωση ενδέχεται να υποβαθμίσει την ορθή ερμηνεία των αποτελεσμάτων. 4. Η κλινική ερμηνεία οποιασδήποτε θετικής χρώσης, ή της απουσίας της, πρέπει να αξιολογείται εντός του πλαισίου του κλινικού ιστορικού, της μορφολογίας και άλλων ιστοπαθολογικών κριτηρίων. Η κλινική ερμηνεία οποιασδήποτε χρώσης, ή της απουσίας της, πρέπει να συμπληρώνεται από μορφολογικές μελέτες και κατάλληλους ελέγχους, καθώς και από άλλες διαγνωστικές εξετάσεις. Το αντίσωμα αυτό προορίζεται για χρήση μέσα σε σειρά (panel) αντισωμάτων. Η χρώση του παρασκευάσματος με τη χρήση αντισωμάτων, αντιδραστηρίων και καταλλήλων μεθόδων, πρέπει να γίνεται με ευθύνη έμπειρου παθολογοανατόμου. Η χρώση πρέπει να πραγματοποιείται σε πιστοποιημένο εργαστήριο υπό την επίβλεψη παθολογοανατόμου ο οποίος είναι και ο υπεύθυνος για την εξέταση των χρωματισμένων αντικειμενοφόρων πλακών καθώς και την επάρκεια των θετικών και των αρνητικών μαρτύρων. 5. Ο οίκος Ventana παρέχει αντισώματα και αντιδραστήρια σε προ-αραιωμένα καταλλήλως και έτοιμα προς χρήση, σύμφωνα με τις παρεχόμενες οδηγίες. Οποιαδήποτε απόκλιση από τις συνιστώμενες διαδικασίες της δοκιμασίας ενδέχεται να ακυρώσει τα αναμενόμενα αποτελέσματα. Κατάλληλοι έλεγχοι πρέπει να διεξάγονται και να τεκμηριώνονται. Οι χρήστες που αποκλίνουν από τις συνιστώμενες διαδικασίες της εξέτασης, αναλαμβάνουν και την ευθύνη της ερμηνείας των αποτελεσμάτων των ασθενών. 6. Το προϊόν αυτό δεν προορίζεται για χρήση σε κυτταρομετρία ροής. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης δεν έχουν προσδιοριστεί για κυτταρομετρία ροής. 7. Τα αντιδραστήρια ενδέχεται να παρουσιάσουν μη αναμενόμενες αντιδράσεις σε ιστούς που εξετάζονται για πρώτη φορά. Η πιθανότητα απροσδόκητων αντιδράσεων ακόμη και σε δοκιμασμένες ομάδες ιστών δεν μπορεί να αποκλειστεί εντελώς, εξαιτίας βιολογικής μεταβλητότητας της έκφρασης του αντιγόνου σε νεοπλασίες, ή άλλους παθολογικούς ιστούς. 6 Επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο του οίκου Ventana, τεκμηριώνοντας κάθε απροσδόκητο αποτέλεσμα. 8. Ιστοί από άτομα μολυσμένα με ιό ηπατίτιδας B που περιέχουν επιφανειακό αντιγόνο ηπατίτιδας B (HBsAg), ενδέχεται να παρουσιάσουν μη ειδική χρώση με υπεροξειδάση του χρένου (horseradish) Οταν χρησιμοποιείται σε βήματα φραγμού (blocking), ο φυσιολογικός ορός, που έχει την ίδια ζωική προέλευση με τον δευτεροταγή αντιορό ενδέχεται να επιφέρει ψευδώς αρνητικά ή ψευδώς θετικές αποτελέσματα, εξαιτίας αυτοαντισωμάτων ή των φυσικών αντισωμάτων. 10. Ψευδώς θετικές αποτελέσματα ενδέχεται να παρουσιαστούν λόγω μη ανοσολογικής σύνδεσης των πρωτεϊνών ή λόγω εμφάνισης αντιδρώντων προϊόντων υποστρώματος (χρωμογόνου). Ψευδώς θετικά αποτελέσματα ενδέχεται επίσης να προκληθούν από δραστηριότητα ψευδο-υπεροξειδάσης (ερυθροκύτταρα), δραστηριότητα ενδογενούς υπεροξειδάσης (κυτόχρωμα C), δραστηριότητα αλκαλικής φωσφατάσης ή ενδογενούς βιοτίνης (π.χ.: ήπαρ, εγκέφαλος, μαστός, νεφρός) ανάλογα με τον τύπο της ανοσοχρωστικής ουσίας που χρησιμοποιείται Όπως συμβαίνει και με οποιαδήποτε ανοσοϊστοχημική εξέταση, τυχόν αρνητικό αποτέλεσμα σημαίνει ότι το εν λόγω αντιγόνο απλώς δεν ανιχνεύθηκε, και όχι ότι το αντιγόνο απουσιάζει από τα κύτταρα ή τους ιστούς που έχουν εξετασθεί. Ειδικοί περιορισμοί 1. Κάθε βήμα της διαδικασίας του κιτ ανίχνευσης έχει βελτιστοποιηθεί και είναι προεπιλεγμένο στα Ventana automated slide stainers. Λόγω ενδεχομένων διαφοροποιήσεων στη μονιμοποίηση και επεξεργασία ιστών, σε ορισμένα δείγματα είναι πιθανόν να απαιτείται αύξηση ή μείωση του χρόνου επώασης του πρωτοταγούς αντισώματος. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τους παράγοντες που επηρεάζουν την μονιμοποίηση, ανατρέξτε στο "Immunohistochemistry Principles and Anvances" Το detection kit, σε συνδυασμό με τα Ventana primary antibodies και τα παρελκόμενά τους, ανιχνεύει αντιγόνα που επιζούν των διαδικασιών ρουτίνας της μονιμοποίησης σε φορμόλη, της επεξεργασίας ιστών και της δημιουργίας τομών. 3. Ο χρόνος επώασης των πρωτοταγών αντισωμάτων εξαρτάται από το βαθμό της μονιμοποίησης ιστού και κυμαίνεται από 4 ως 32 λεπτά. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τους παράγοντες που επηρεάζουν τη μονιμοποίηση, ανατρέξτε στο: "Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical Pathologist Το Endogenous Biotin Blocking Kit έχει βελτιστοποιηθεί για χρήση με το Ventana APK και το Reaction Buffer Wash, σε συνδυασμό με τα πρωτοταγή αντισώματα και τα παρελκόμενά τους στα Ventana automated slide stainers. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 1. Το Endogenous Biotin Blocking Kit έχει εξεταστεί με 32 ιστοτεμάχια, από 11 διαφορετικά είδη ιστών, για να ελεγχθούν οι μη αναμενόμενες δραστικότητες. Δεν ανιχνεύτηκαν δραστικότητες που θα μπορούσαν να εμποδίσουν την χρήση για την οποία προορίζεται το προϊόν αυτό. 2. Η επαναληψιμότητα κατά την διεξαγωγή ενός κύκλου οδήγησε σε μείωση της μη ειδικής χρώσης στο 100% των περιπτώσεων, στις οποίες εφαρμόστηκε. 3. Η επαναληψιμότητα κατά την διεξαγωγή διαφορετικών κύκλων οδήγησε σε μείωση της μη ειδικής χρώσης στο 100% των περιπτώσεων, στις οποίες εφαρμόστηκε. ΑΝΤΙΜΕΤΩΠΙΣΗ ΠΡΟΒΛΗΜΑΤΩΝ 1. Αν ο θετικός μάρτυρας (ιστός) παρουσιάζει ασθενέστερη χρώση από την αναμενόμενη, πρέπει να ελεγχθούν και άλλοι θετικοί μάρτυρες, που χρησιμοποιούνται στον ίδιο κύκλο χρώσεων, για να προσδιοριστεί εάν η ασθενής χρώση οφείλεται στο πρωτοταγές αντίσωμα ή σε ένα από τα κοινά δευτερεύοντα αντιδραστήρια. 2. Αν ο θετικός μάρτυρας δώσει αρνητικό αποτέλεσμα, πρέπει να επιβεβαιωθεί ότι η αντικειμενοφόρος πλάκα φέρει την σωστή ετικέτα γραμμικού κώδικα. Αν η αντικειμενοφόρος έχει τη σωστή σήμανση, άλλοι θετικοί μάρτυρες που εξετάζονται κατά τον ίδιο κύκλο χρώσεων, πρέπει να ελεγχθούν, για να προσδιοριστεί εάν η ασθενής χρώση οφείλεται στο πρωτογενές αντίσωμα ή σε ένα από τα κοινά δευτερεύοντα αντιδραστήρια. Η συλλογή, μονιμοποίηση ή αποπαραφίνωση των ιστών ενδέχεται να έχει γίνει πλημμελώς. Η ορθή διαδικασία πρέπει να ακολουθείται για τη συλλογή, φύλαξη και μονιμοποίηση των ιστών. 3. Αν παρατηρηθεί υπερβολική χρώση υποβάθρου (φόντου), ενδέχεται να υπάρχουν υψηλά επίπεδα ενδογενούς βιοτίνης. Πρέπει να συμπεριληφθεί ένα βήμα φραγμού της βιοτίνης (Endogenous Biotin Blocking Kit). 4. Αν δεν έχει απομακρυνθεί όλη η παραφίνη, η αποπαραφίνωση πρέπει να επαναληφθεί. 5. Αν η ειδική χρώση με το αντίσωμα είναι υπερβολικά έντονη, η διαδικασία πρέπει να επαναληφθεί με το χρόνο επώασης συντομευμένο κατά 4 λεπτά, όσες φορές χρειάζεται, μέχρι να επιτευχθεί η επιθυμητή ένταση χρώσης. 6. Προς αποφυγήν αποκόλλησης των τομών από τις αντικειμενοφόρους, πρέπει να χρησιμοποιούνται αντικειμενοφόροι θετικά φορτισμένες. 7. Για τις ενδεικνυόμενες διορθωτικές ενέργειες, ανατρέξτε στην Ενότητα Διαδικασία Βήμα-προς-Βήμα, στις Οδηγίες Χρήσης του automated slide stainer, ή επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο του οίκου Ventana. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. Wood, GS., Warnke R. Suppression of endogenous avidin-binding activity in tissues and its relevance to biotin-avidin detection systems. J. Histochem. Cytochem. 29(10): , Elias JM, Gown AM, Nakamura RM, Wilbur DC, Herman GE, Jaffe ES, Battifora H, Brigati DJ. Quality control in immunohistochemistry. Report of a workshop sponsored by the Biological Stain Commission. Am J Clin Pathol 92(6): , Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and practice of histotechnology, 2nd Edition. The C.V. Mosby Company, St. Louis, College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic Pathology Checklist, NCCLS. Quality Assurance for Immunocytochemistry: Approved Guideline. NCCLS document MM4-A- (ISBN ). NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA USA, Herman GE, Elfont EA. The taming of immunohistochemistry: the new era of quality control. Biotech Histochem 66(4): , Omata M, Liew CT, Ashcavai M, Peters RL. Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen. A possible source of error in immunohistochemistry. Am J Clin Pathol 73(5): , Nadji M, Morales AR. Immunoperoxidase: part 1. The technique and its pitfalls. Lab Med 14: 767, Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. (NR Rose Ed.) ASM Press, Taylor C and Cote RJ. Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical Pathologist, 2nd Edition. W.B. Saunders Company, Philadelphia Σελίδα 4 από EL Rev B

5 ΠΝΕΥΜΑΤΙΚΗ ΙΔΙΟΚΤΗΣΙΑ CONFIRM TM, EZ Prep TM, και Liquid Coverslip TM αποτελούν εμπορικά σήματα της Ventana Medical Systems, Inc.; BenchMark, ES, Gen II, NexES και Ventana αποτελούν σήματα κατατεθέντα της Ventana Medical Systems, Inc. Καλύπτεται από τις εξής ευρεσιτεχνίες: Αρ. Ευρεσιτ. ΗΠΑ , B1, B1 και αντίστοιχα άλλων χωρών Σελίδα 5 από EL Rev B

6 ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΕΠΙΚΟΙΝΩΝΙΑΣ Ventana Medical Systems, Inc E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona USA (USA) Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D Mannheim Germany Σελίδα 6 από EL Rev B