Ο ΡΟΛΟΣ ΤΗΣ ΑΙΜΟΔΟΣΙΑΣ ΣΤΗ ΔΙΑΧΕΙΡΙΣΗ ΤΩΝ ΑΣΘΕΝΩΝ ΜΕ ΠΜ ΥΠΟ ΘΕΡΑΠΕΙΑ ΜΕ DARATUMUMAB Α. ΓΑΤΟΥ, ΑΙΜΟΔΟΣΙΑ ΓΝΑ «ΑΛΕΞΑΝΔΡΑ» 10 o Σεμινάριο Ελληνικής Εταιρείας Μεταγγισιοθεραπείας Αθήνα, 7-8 Απριλίου 2017
Daratumumab : ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα Δεσμεύει την πρωτεΐνη CD38, που εκφράζεται σε χαμηλά επίπεδα στα ερυθρά αιμοσφαίρια. Αποτέλεσμα : Θετική έμμεση Coombs (+/- θετική άμεση Coombs) Θετικό Screening Panel με εικόνα παν- συγκολλητίνης Θετική δοκιμασία συμβατότητας. Το Daratumumab δεν έχει επίδραση στην ταυτοποίηση των αντιγόνων ΑΒΟ/ Rh
Μέθοδος κατεργασίας των ερυθρών με διθειοθρεϊτόλη ( DTT ) το DTT καταστρέφει τη δομή της CD38 Διασπώνται έτσι οι δεσμοί με το Daratumumab Καθίσταται δυνατή Πραγματοποίηση της διασταύρωσης Έλεγχος των αντισωμάτων του ασθενούς (Screening Panel) Ταυτοποίηση του φαινοτύπου των ερυθρών του ασθενούς.
Το DTT καταστρέφει τα αντιγόνα Kell οι ασθενείς πρέπει να μεταγγίζονται με ερυθρά Kell αρνητικά, εκτός αν ο ασθενής είναι Kell θετικός. Μέχρι σήμερα, δεν έχει παρατηρηθεί κλινικά σημαντική αιμόλυση σε ασθενείς που λαμβάνουν θεραπεία με Daratumumab δεν έχουν μετάγγιση. σημειωθεί αντιδράσεις σε ασθενείς που χρειάζονται
Internahonal validahon of a dithiothreitol (DTT)- based method to resolve the daratumumab interference with blood compahbility teshng TRANSFUSION Volume 56, December 2016 Chapuy et al, and the DARA- DTT Study Group* for the BEST Collaborahve ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ: Η μέθοδος DTT είναι ισχυρή και επαναλήψιμη και μπορεί να υλοποιηθεί στις υπηρεσίες Αιμοδοσίας σε όλο τον κόσμο και να βοηθήσει στην παροχή ασφαλών προϊόντων αίματος σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με DARA
SUPPLEMENTAL INFORMATION Chapuy et al. BEST DARA DTT Validahon Τhe DARA-DTT Study: Cibele Nucci Sao Paulo 1 Katrin Denker Greifswald Hatsue Tsuneyama & Sumie Hayashi Tokyo Renee Smith & Askale Haile Seattle Janet Kilbride & Adele Tirella Boston Stephanie Krohto Providence R. Sue Shirey Baltimore Συµβατότητα µετά επώαση µε DTT Pat Arndt Pomona Cindy Marx-Wood Lebanon Anna Privenau Braunschweig Παρασκευή PBS διαφόρων ph Rebecca Dangerfield Minneapolis Michael Ng Singapore Julie Staves Oxford Bill Magee Melbourne Tobie Kaufman & Sharol Saunders Tempe Vivian Stephens & Tony Dolnik Vancouver Thelma Jean Purcelli San Francisco Maria Giselda Aravechia Sao Paulo 2 Claudia Bouchard Montreal Farah El-Zein Iowa City Leslie Buchanan Stanford Jeremy Martin Burlington Hilde Ulvesaeter, Mona Bruun & Kari Tefre Bergen Juana Cardoso Barcelona
ΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ ΜΕΤΑ ΕΠΩΑΣΗ ΜΕ DTT ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΣ Απαραίτητα υλικά για τη διασταύρωση Dithiothreitol (DTT) Phosphate Buffered saline (PBS), ph 7.3 Phosphate Buffered saline (PBS), ph 8.0 Ερυθρά φιάλης Ερυθρά ασθενούς, ως AC (αυτοκοντρόλ) Ερυθρά Ε (+), είτε E+e+ είτε E+e-, ως θετικό κοντρόλ ( + ) Ερυθρά Κ (+), είτε K+k+ είτε K+k-, ως αρνητικό κοντρόλ ( 0 ) Coombs Control Cells (για τη μέθοδο σωληναρίου) Απαραίτητος εξοπλισμός Επωαστήρας 37 0 Κελσίου Hood, phμετρο
Διαλύουμε ΜΕΘΟΔΟΣ Παρασκευάζουμε DTT 0,2 Μ ως εξής : 1gr DTT σε 32ml PBS ph 8.0 * κάτω από Hood, με τη βοήθεια Βιολόγου ή Βιοχημικού. Ανακατεύουμε καλά. Μοιράζουμε το διάλυμα σε πλαστικά φιαλίδια με πώμα (aliquots), βάζοντας περίπου 10 σταγόνες σε κάθε φιαλίδιο. Φυλάσσουμε τα φιαλίδια σε θερμοκρασία - 18 ο C.
ΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ Μέθοδος σωληναρίου Πλένουμε ερυθρά της ή των φιαλών που θέλουμε να διασταυρώσουμε, ερυθρά του ασθενούς (AC), ερυθρά Ε+ (θετικό κοντρόλ) και ερυθρά Κ+ (αρνητικό κοντρόλ) 4 φορές με PBS ph 7.3. Επωάζουμε με DTT 0,2 Μ για 30 λεπτά. Πλένουμε τα επωασμένα ερυθρά 4 φορές με PBS ph 7.3
Test Control Ελέγχουμε τα επωασμένα ερυθρά Ε και Kell σε κάρτα φαινοτύπου Rhesus- kell ή στο σωληνάριο Πρέπει τα ερυθρά Ε να παραμένουν Θετικά τα ερυθρά kell να έχουν αρνητικοποιηθεί. ( Χρησιμοποιούμε ερυθρά Screening ή Panel ή ερυθρά αιμοδότη )
ΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ Μέθοδος σωληναρίου (Συνέχεια) Προσθέτουµε σε κάθε σωληνάριο 2 σταγόνες πλάσµατος ασθενούς και ανακατεύουµε καλά. ** Επωάζουµε στους 37 ο C για 15 λεπτά. Πλένουµε όλα τα σωληνάρια 3 φορές µε Φ.Ο. Προσθέτουµε 1-2 σταγόνες αντισφαιρινικό ορό Φυγοκεντρούµε για 1 λεπτό και εξετάζουµε για συγκολλήσεις Σε όλα τα αρνητικά σωληνάρια προσθέτουμε 1 σταγόνα Coombs Control Cells Φυγοκεντρούμε και εξετάζουμε για συγκολλήσεις.
** Volume 55, June 2015 TRANSFUSION Blood Bank, Department of Pathology, Brigmhamand Women;s Hospital, Boston, Massachuse s τα επωασμένα με DTT και πλυμένα με PBS ph 7.3 ερυθρά δοκιμάσθηκαν με όλες τις μεθόδους που χρησιμοποιούν οι Αιμοδοσίες, συμπεριλαμβανομένης της μεθόδου μικροπλάκας (solid- phase) σε αυτόματο αναλυτή.
Συµπερασµατικά προτείνεται η χρήση των επωασµένων µε DTT ερυθρών µετά το Test Control για διασταύρωση µε την όποια µέθοδο του κάθε εργαστηρίου (σωληνάριο, κάρτα γέλης ή αυτόµατο αναλυτή) και για Screening - Panel
ΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑ - Άλλη μέθοδος Μετά το Test Control, το οποίο θα επιβεβαιώσει τη σωστή επώαση των ερυθρών με DTT, χρησιμοποιούμε τα επωασμένα και πλυμένα ερυθρά για : Διασταύρωση σε κάρτα γέλης ή αυτόματο αναλυτή, καθώς και Screening και Panel
Η ΕΜΠΕΙΡΙΑ ΜΑΣ ΟΙ ΑΣΘΕΝΕΙΣ ΜΑΣ Στο νοσοκοµείο µας από τον 2ο/2016 έως σήµερα, βρίσκονται σε πρωτόκολλα θεραπείας µε Daratumumab συνολικά 21 ασθενείς 18 ασθενείς ακόµη έχουν αρχίσει αγωγή από 1,5 έτους και πλέον µέσα στα πλαίσια κλινικών µελετών 1 διέκοψε λόγω προϊούσης νόσου ( Δεν χρήζουν ακόµη µετάγγισης πλην ενός )
Χαρακτηριστικά 20 ασθενών Διάμεση ηλικία: 60 έτη ( από 35 έως 78 ετών ) Φύλλο: 11 άνδρες 9 γυναίκες Τύπος μυελώματος: 10 IgG- κ 1 IgG- λ 4 IgA- κ 2 IgA- λ 2 KLC (ελαφρών αλύσεων) 1 IgG- κ και KLC Στάδιο νόσου: 8 στη 2 η - 6 η Υποτροπή διαγνωσθέντες από 2006-2009 10 στη 2 η - 5 η Υποτροπή διαγνωσθέντες από 2012-2016 1 ασθενής σε θεραπεία πρώτης γραμμής 1 ασθενής με πρωτοπαθές ανθεκτικό ΠΜ 13 ασθενείς έχουν υποβληθεί σε ΜΜΟ (11 προ DARA, 1 μετά,1 αλλογενή μετά)
- Screening προ έναρξης DARA: 20 (- ) αρν 1 δεν εστάλη - Άμεση Coombs μετά έναρξη DARA: 16 (- )αρν, 1 (+/- ), 1 (++), 1 (+/++), 1 (++/+++) - Ταυτοποίηση φαινοτύπου ερυθρών: 21 19 ορολογική, 2 μόνο μοριακή και σε 9 ορολογική και μοριακή - 6 ασθενείς απεβίωσαν 2 διέκοψαν τη θεραπεία Συνολικά για 6 ασθενείς διασταυρώθηκαν μετά επώαση ερυθρών με DTT 54 μον, εκ των οποίων μεταγγίστηκαν 36 μονάδες ΣΕ.
Screening µετά επώαση µε DTT
Σημαντικά για τη διαχείριση των ασθενών υπό αγωγή με Daratumumab θεωρούνται : 1. Η διενέργεια άµεσης και έµµεσης Coombs, Screening και η ορολογική ή µοριακή ταυτοποίηση του φαινοτύπου ερυθρών του ασθενούς, πριν τη λήψη Daratumumab ( Συνεργασία Αιµοδοσίας µε θεράποντες γιατρούς) Έµµεση Coombs είναι θετική περαιτέρω διερεύνηση και ταυτοποίηση του ή των υπεύθυνων αλλοαντισωµάτων. 2. Η διενέργεια συµβατότητας µε ορό ασθενούς υπό θεραπεία µε Daratumumab πριν χρειαστεί µετάγγιση (επιβεβαίωση της λειτουργικότητας της µεθόδου)
3. Σε κάθε περίπτωση να μεταγγίζουμε όλους τους ασθενείς με ερυθρά συμβατά με το φαινότυπο Rhesus και kell αρνητικά, εκτός εάν ο ασθενής είναι kell θετικός. 4. Σε πολυμεταγγιζόμενους ασθενείς κατά τακτά διαστήματα να κάνουμε έμμεση Coombs ή Screening, μετά επώαση με DTT των ερυθρών του Screening, και εάν είναι θετικό περαιτέρω διερεύνηση για ταυτοποίηση του αλλοαντισώματος
5. Όλες οι Αιμοδοσίες να καταγράφουμε τις παρατηρήσεις μας και τις όποιες απορίες μας, έτσι ώστε να υπάρχει ανταλλαγή πληροφοριών που θα βοηθήσουν το έργο μας.
Υπό την καθοδήγηση