ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ: Πρακτική Εργαστηριακή Προσέγγιση



Σχετικά έγγραφα
Ερμηνεία αποτελεσμάτων ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών ορού. Μιχάλης Μιχαήλ MD, PhD Αιματολόγος Γ. Ν Λευκωσίας

Κλασική εργαστηριακή προσέγγιση πλασματοκυτταρικών δυσκρασιών

ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗ ΠΡΟΣΕΓΓΙΣΗ ΣΕ ΑΣΘΕΝΗ ΜΕ ΠΙΘΑΝΗ ΜΟΝΟΚΛΩΝΙΚΗ ΓΑΜΜΑΣΦΑΙΡΙΝΟΠΑΘΕΙΑ. Φ.ΠΑΛΗΟΓΙΑΝΝΗ Καθηγήτρια Μικροβιολογίας-Ανοσολογίας Λοιμώξεων

ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΕΛΕΥΘΕΡΩΝ ΕΛΑΦΡΩΝ ΑΛΥΣΕΩΝ ΣΤΟΝ ΟΡΟ ΚΑΙ ΣΤΑ ΟΥΡΑ. Χρυσούλα Νικολάου

Ηλεκτροφορητική ανάλυση των πρωτεϊνών του ορού

Ηλεκτροφορητικές Μέθοδοι Διαχωρισμού. Πηκτώματα αγαρόζης / ακρυλαμιδίου

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ

ΙΖΗΜΑΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ

Από την Ανόσόηλεκτρόφό ρηση στην Ανόσόκαθη λωση και Ανοσοαφαίρεση-Τριχοειδούς Ηλεκτροφόρησης

ΙΖΗΜΑΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ

Ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών

ΚΙΤ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΟΡΟΥ SPE Beckman REF Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση

ΑΣΚΗΣΗ 2 ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΣΕ ΠΗΓΜΑ ΠΟΛΥΑΚΡΥΛΑΜΙΔΙΟΥ ΥΠΟ ΜΕΤΟΥΣΙΩΤΙΚΕΣ ΣΥΝΘΗΚΕΣ(SDS-PAGE)

ταχύτητα καθίζησης ερυθρών (ΤΚΕ)

Απαρτιωμένη διδασκαλία στην Αιματολογία 2014 Αργύρης Σ. Συμεωνίδης

Παθολογοανατομικό εργαστήριο Κυριακόπουλος Γεώργιος Εδ Ειδικευόμενος ιατρός

ΠΡΩΤΕΙΝΟΥΡΙΑ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ ΟΥΡΩΝ. Νικολάου Χρυσούλα

ΠΛΑΣΜΑΤΟΚΥΤΤΑΡΙΚΕΣ ΔΥΣΚΡΑΣΙΕΣ. Απαρτιωμένη διδασκαλία στην Αιματολογία Ασθενής με παραπρωτεϊναιμία και οστικά άλγη

Άσκηση 11: Ηλεκτροφόρηση μακρομορίων

ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΜΕ ΒΑΣΗ ΤΟ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟ ΤΟΥΣ ΡΟΛΟ

Σύνοψη της προσέγγισης ασθενούς με πανκυτταροπενία. Ιατρικό Τμήμα Πανεπιστημίου Πατρών Απαρτιωμένη διδασκαλία στην Αιματολογία Αργύρης Συμεωνίδης

ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ HYDRAGEL MINI PROTEIN

β. [Η 3 Ο + ] > 10-7 Μ γ. [ΟΗ _ ] < [Η 3 Ο + ]

ηλικία περιεκτικότητα σε λίπος φύλο

Αμινοξέα Αμφολύτες Ισοηλεκτρικό σημείο Καμπύλη τιτλοδότησης

ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΥ. ΑΝΝΑ-ΜΑΡΙΑ ΨΑΡΡΑ Τμήμα Βιοχημείας κ Βιοτεχνολογίας

ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΔΙΑ ΒΙΟΥ ΜΑΘΗΣΗΣ ΑΕΙ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΠΙΚΑΙΡΟΠΟΙΗΣΗ ΓΝΩΣΕΩΝ ΑΠΟΦΟΙΤΩΝ ΑΕΙ (ΠΕΓΑ)

Νεότερα δεδομένα στην εργαστηριακή διάγνωση και παρακολούθηση του Πολλαπλού Μυελώματος

Τι είναι το Πολλαπλούν Μυέλωμα και σε τί διαφέρει από τους άλλους Αιματολογικούς καρκίνους

Απαρτιωμένη διδασκαλία στην Αιματολογία 2015 Αργύρης Σ. Συμεωνίδης

ΒΙΟΧΗΜΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ

ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΟ ΜΑΘΗΜΑ Ι

ΑΣΚΗΣΗ ΦΑΣΜΑΤΟΜΕΤΡΙΑΣ ΜΑΖΑΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΑΝΑΛΥΤΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ ΙΙ

ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ ΟΡΟΥ ΠΑΡΑΠΡΩΤΕΪΝΑΙΜΙΕΣ Ι. ΡΟΜΠΟΣ

ΕΙΔΙΚΗ ΠΑΘΟΛΟΓΙΑ ΟΥΡΟΠΟΙΗΤΙΚΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ. Λ. Αθανασίου Παθολογική Κλινική, Τμήμα Κτηνιατρικής Πανεπιστημίου Θεσσαλίας

ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΜΙΤΟΞΑΝΤΡΟΝΗΣ ΣΕ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΑ ΣΚΕΥΑΣΜΑΤΑ ΜΕ ΤΗΝ ΤΕΧΝΙΚΗ ΤΗΣ ΤΡΙΧΟΕΙΔΟΥΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ

ΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΚΛΙΝΙΚΗΣ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑΣ στη σύγχρονη κλινικο-εργαστηριακή πράξη

γ ρ α π τ ή ε ξ έ τ α σ η σ τ ο μ ά θ η μ α Φ Υ Σ Ι Κ Η Γ Ε Ν Ι Κ Η Σ Π Α Ι Δ Ε Ι Α Σ B Λ Υ Κ Ε Ι Ο Υ

Προβλήματα σχετιζόμενα με την τυποποίηση αντιγόνων Ι

Εργαστηριακή άσκηση 4: Ανοσοδιάχυση. Εργαστήριο Ανοσολογίας Εαρινό εξάμηνο 2019 Υπεύθυνες Διδάσκουσες: Βογιατζάκη Χρυσάνθη, Τσουμάνη Μαρία

ΜΑΡΙΑ ΚΟΖΑΝΙΤΟΥ ΕΠΙΜΕΛΗΤΡΙΑ Α ΒΙΟΠΑΘΟΛΟΓΟΣ ΓΝΑ ΙΠΠΟΚΡΑΤΕΙΟ

β. [Η 3 Ο + ] > 10-7 Μ γ. [ΟΗ _ ] < [Η 3 Ο + ]

Διαγνωστική προσέγγιση και Θεραπευτικές εξελίξεις στις Πλασματοκυτταρικές Δυσκρασίες. Ευστάθιος Καστρίτης Θεραπευτική Κλινική ΕΚΠΑ

ΒΙΟΧΗΜΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ

Σκοπός: Περιγραφή της συμπεριφοράς των νευρικών κυττάρων και ποσοτικά και ποιοτικά.

Ηλεκτρόλυση νερού ή ηλεκτρόλυση αραιού διαλύματος θειικού οξέος με ηλεκτρόδια λευκοχρύσου και με χρήση της συσκευής Hoffman.

ΟΡΘΟΧΡΩΜΕΣΟΡΘΟΚΥΤΤΑΡΙΚΕΣ ΑΝΑΙΜΙΕΣ. ΑΗΔΟΝΟΠΟΥΛΟΣ ΣΤΥΛΙΑΝΟΣ Διευθυντής Αιματολογικού Εργαστηρίου Γ.Ν.Α. «Ο Ευαγγελισμός»

ΒΙΟΧΗΜΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ

ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ-ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΑΝΑΙΜΙΑΣ

ΧΗΜΕΙΑ - ΒΙΟΧΗΜΕΙΑ Γ' ΛΥΚΕΙΟΥ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ ΚΥΚΛΟΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ & ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ

ΑΣΚΗΣΗ: ΠΟΣΟΤΙΚΗ ΠΟΙΟΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ DNA

ΘΕΜΑ 1 ο Να γράψετε στο τετράδιό σας τον παρακάτω πίνακα σωστά συμπληρωμένο: Η 2 SO 4 NH 4 HNO 3 H 2 O. Μονάδες 5 ΑΡΧΗ 1ΗΣ ΣΕΛΙ ΑΣ ΤΑΞΗ

ΕΠΕΑΕΚ ΑΝΑΜΟΡΦΩΣΗ ΤΟΥ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑΤΟΣ ΣΠΟΥΔΩΝ ΤΟΥ Τ.Ε.Φ.Α.Α.ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟΥ ΘΕΣΣΑΛΙΑΣ - ΑΥΤΕΠΙΣΤΑΣΙΑ

F el = z k e 0 (3) F f = f k v k (4) F tot = z k e 0 x f kv k (5)

(1) i mig,k = z 2 kf 2 u k c k (2) i mig = i mig,k = z 2 kf 2 u k c k. k=1. k=1

Α μ ι ν ο ξ έ α - π ε π τ ί δ ι α

ΔΕΙΚΤΕΣ ΗΠΑΤΙΚΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ. Λ.Β. Αθανασίου Παθολογική Κλινική, Τμήμα Κτηνιατρικής, Π.Θ.

To πρωτέωμα είναι η λειτουργική απεικόνιση του γονιδιώματος. Βιοχημεία Ι Γ-1

ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ. Για τις ερωτήσεις Α1 έως Α3 να γράψετε στο τετράδιό σας τον αριθμό της ερώτησης και δίπλα το γράμμα που αντιστοιχεί στη σωστή απάντηση.

Αγωγιμότητα στα μέταλλα

ΑΠΑΝΤΗΣΕΙΣ ΣΤΗ ΧΗΜΕΙΑ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ

ΧΗΜΕΙΑ - ΒΙΟΧΗΜΕΙΑ Γ' ΛΥΚΕΙΟΥ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ ΚΥΚΛΟΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ & ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ

ΑΡΙΆΔΝΗ ΟΜΆΔΑ ΥΠΟΣΤΉΡΙΞΗΣ ΑΣΘΕΝΏΝ ΜΕ ΧΛΛ. Εισαγωγή στην αιματολογία

ΒΙΟΧΗΜΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ

1.2. Ποιο από τα παρακάτω συζυγή ζεύγη οξέος βάσης κατά Brönsted Lowry μπορεί να αποτελέσει ρυθμιστικό διάλυμα στο νερό; α. HCl / Cl _.

ΑΣΚΗΣΗ 8 - Μελέτη της ηλεκτρόλυσης CuSO 4 ΑΣΚΗΣΗ 8. Μελέτη της ηλεκτρόλυσης CuSO 4

ΑΡΧΗ 1ΗΣ ΣΕΛΙ ΑΣ Γ ΗΜΕΡΗΣΙΩΝ

ΑΡΧΗ 1ΗΣ ΣΕΛΙ ΑΣ Γ ΗΜΕΡΗΣΙΩΝ

ΦΡΟΝΤΙΣΤΗΡΙΟ ΜΕΣΗΣ ΕΚΠΑΙΔΕΥΣΗΣ ΗΡΑΚΛΕΙΤΟΣ

Σύσταση του αυγού Λευκό Κρόκος Βάρος 38 g 17 g Πρωτείνη 3,9 g 2,7 g Υδατάνθρακες 0,3 g 0,3 g Λίπος 0 6 g Χοληστερόλη mg

Μονοκλωνικές γαμμαπάθειες με νεφρική συμμετοχή Σ.Μαρινάκη

ΚΥΨΕΛΕΣ ΚΑΥΣΙΜΟΥ ΚΑΚΑΡΟΥΝΤΑ ΑΡΓΥΡΩ Α.Μ. 277 ΜΗΤΣΑΚΗ ΤΑΤΙΑΝΑ Α.Μ. 309 ΠΑΠΑΖΑΦΕΙΡΑΤΟΥ ΙΦΙΓΕΝΕΙΑ Α.Μ.322

ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΑ ΑΝΑΠΝΕΥΣΤΙΚΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ

Πολλαπλούν Μυέλωμα Παραπρωτεϊναιμίες

Αγωγιμότητα στα μέταλλα

ΑΝΑΙΜΙΕΣ. Αθ. ΖΩΜΑΣ Δ ΠΑΝ.ΠΑΘ.ΚΛΙΝΙΚΗ

ΜΑΘΗΜΑ / ΤΑΞΗ : ΧΗΜΕΙΑ - ΒΙΟΧΗΜΕΙΑ / Γ ΛΥΚΕΙΟΥ ΣΕΙΡΑ: 1 ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ: 21 / 09 /2014

ΧΗΜΕΙΑ - ΒΙΟΧΗΜΕΙΑ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΗΣ ΚΑΤΕΥΘΥΝΣΗΣ (ΚΥΚΛΟΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ) 4 ΙΟΥΝΙΟΥ 2014 ΕΚΦΩΝΗΣΕΙΣ ÓÕÃ ÑÏÍÏ

Νεφρολογικό Συµπόσιο Κεντρικής Ελλάδος Α Ανακοίνωση. εκεµβρίου. Λάρισα Ξενοδοχείο Larissa Imperial. Ακαδηµία Νεφρολογίας Κεντρικής Ελλάδος

ΠΟΙΑ Η ΣΗΜΑΣΙΑ ΤΟΥ ΠΝΕΥΜΟΝΑ ΩΣ ΑΝΤΙΡΡΟΠΙΣΤΙΚΟΥ ΟΡΓΑΝΟΥ ΣΤΗΝ ΟΞΕΟΒΑΣΙΚΗ ΙΣΟΡΡΟΠΙΑ. Δημήτρης Α. Λαγονίδης MD, PhD, FCCP Πνευμονολόγος-Εντατικολογος

ΑΣΚΗΣΗ 3 ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΚΑΙ ANIXNEΥΣΗ ΤΗΣ ΕΚΚΡΙΝΟΜΕΝΗΣ ΦΩΣΦΟΛΙΠΑΣΗΣ Α 2

2-1. I I i. ti (3) Q Q i. όπου Q το συνολικό ηλεκτρικό φορτίο που μεταφέρεται και είναι: (4)

Μέθοδοι Ανίχνευσης Αντιγόνων Αντισωμάτων

ΠΟΛΛΑΠΛΟΥΝ ΜΥΕΛΩΜΑ ΕΝΗΜΕΡΩΤΙΚΟ ΦΥΛΛΑΔΙΟ ΓΙΑ ΤΟΥΣ ΑΣΘΕΝΕΙΣ. Έκδοση του IΔPYMAΤΟΣ EΛΛHNIKHΣ AIMATOΛOΓIKHΣ ETAIPEIAΣ. Οκτώβριος 2016.

Βιολογικές Μεμβράνες και Μεταγωγή Σήματος

ΠΑΘΟΦΥΣΙΟΛΟΓΙΑ ΟΙΔΗΜΑΤΩΝ ΠΕΤΡΑΣ ΔΗΜΗΤΡΗΣ ΝΕΦΡΟΛΟΓΟΣ ΙΠΠΟΚΡΑΤΕΙΟ ΑΘΗΝΩΝ

διατήρησης της μάζας.

3.2 ΧΗΜΙΚΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΤΟΥ ΗΛΕΚΤΡΙΚΟΥ ΡΕΥΜΑΤΟΣ

ΩΣΜΩΣΗ ΚΑΙ ΟΙ ΝΕΦΡΟΙ

Ενα τυπικό πρωτόκολλο για τον καθαρισμό μιας διαλυτής κυτταρικής πρωτείνης περιλαμβάνει

ΦΥΓΟΚΕΝΤΡΗΣΗ- ΥΠΕΡΦΥΓΟΚΕΝΤΡΗΣΗ

Ηλεκτρικές Δυνάμεις και Πεδία

1η Διάλεξη ΚΟΛΛΟΕΙΔΕΣ ΣΥΜΠΛΟΚΟ ΕΔΑΦΟΥΣ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΚΑΤΙΟΝΤΩΝ ΤΕΙ ΠΕΛΟΠΟΝΝΗΣΟΥ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ

ΑΝΑΙΜΙΑ ΧΡΟΝΙΑΣ ΝΟΣΟΥ (σύνδρομο)

ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΑ ΑΝΑΠΝΕΥΣΤΙΚΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ

ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΙΩΑΝΝΙΝΩΝ ΑΝΟΙΚΤΑ ΑΚΑΔΗΜΑΪΚΑ ΜΑΘΗΜΑΤΑ

ΚΕΦΑΛΑΙΟ 5 : ΓΑΛΒΑΝΙΚΑ ΣΤΟΙΧΕΙΑ, ΗΕΔ, ΓΕΦΥΡΑ ΑΛΑΤΟΣ, ΣΤΟΙΧΕΙΟ DANIELL, ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑ ΣΤΟΙΧΕΙΟΥ, ΠΡΟΤΥΠΑ ΔΥΝΑΜΙΚΑ ΚΑΙ ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ.

Νεφρική ρύθμιση Καλίου, Ασβεστίου, Φωσφόρου και Μαγνησίου. Βασίλης Φιλιόπουλος Νεφρολόγος Γ.Ν.Α «Λαϊκό»

κλινική και εργαστηριακή προσέγγιση των νοσημάτων του Τ. Ράλλης Καθηγητής Παθολογίας Ζώων Συντροφιάς, Τμήμα Κτηνιατρικής, ΑΠΘ

Transcript:

ΜΜ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ: Πρακτική Εργαστηριακή Προσέγγιση ΜΑΡΙΑΝΝΑ Α. ΝΤΑΛΑΜΑΓΚΑ, MD, MSc, MPH, PhD ΙΑΤΡΟΣ ΒΙΟΠΑΘΟΛΟΓΟΣ, FCAP ΕΠ. ΚΑΘΗΓΗΤΡΙΑ ΚΛΙΝΙΚΗΣ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑΣ ΙΑΤΡΙΚΗΣ ΣΧΟΛΗΣ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟΥ ΑΘΗΝΩΝ ΠΑΝ/ΚΟ ΓΕΝΙΚΟ ΝΟΣΟΚΟΜΕΙΟ «ΑΤΤΙΚΟΝ»

ΤΙ ΕΙΝΑΙ Η ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ; Principle Οι πρωτεϊνες μετακινούνται στο ηλεκτρικό πεδίο (Η/Φ ή ηλεκτρομεταφορά). Η σχετική ταχύτητά τους εξαρτάται από το φορτίο, το μέγεθος και το σχήμα της πρωτεϊνης, τη θερμοκρασία, τις ιδιότητες του μέσου και την ένταση του ηλεκτρικού πεδίου. Η Η/Φ ΕΙΝΑΙ ΜΙΑ ΜΕΘΟΔΟΣ ΣΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΦΟΡΤΙΣΜΕΝΑ ΜΟΡΙΑ (ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ-ΝΟΥΚΛΕΪΚΑ ΟΞΕΑ) ΜΕΤΑΚΙΝΟΥΝΤΑΙ ΣΕ ΕΝΑ ΔΙΑΛΥΜΑ ΥΠΟ ΤΗΝ ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΕΝΟΣ ΣΤΑΘΕΡΟΥ ΗΛΕΚΤΡΙΚΟΥ ΠΕΔΙΟΥ

ΑΜΙΝΟΞΕΑ-ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ Οι πρωτεϊνες έχουν ιδιότητα αμφολύτη, δηλ. είναι + ή φορτισμένες ανάλογα με το ΡΗ του ρυθμιστικού διαλ/τος (buffer) στο οποίο βρίσκονται. Για κάθε πρωτεϊνη υπάρχει μια τιμή ΡΗ, στη οποία η πρωτεϊνη έχει ουδέτερο φορτίο και η οποία ονομάζεται ισοηλεκτρικό σημείο (pι).

Ισοηλεκτρικό Σημείο (pi) Σε συγκεκριμένο ph διαλύματος, η πρωτεϊνη έχει ουδέτερο φορτίο: αυτό είναι το ισοηλεκτρικό σημείο (pi). Πάνω από το pi (αλκαλικό ΡΗ), η πρωτεϊνη είναι αρνητικά φορτισμένη (ανιόν) και κινείται στην άνοδο (+). Κάτω από το pi (όξινο ΡΗ), η πρωτεϊνη είναι θετικά φορτισμένη (κατιόν) και κινείται προς την κάθοδο (-).

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ Απλή, γρήγορη και πολύ ευαίσθητη τεχνική διαχωρισμού των πρωτεϊνών

ΕΙΔΗ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ ΚΙΝΟΥΜΕΝΟΥ ΟΡΙΟΥ TISELIUS, 1937 H/Φ ΖΩΝΗΣ

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΖΩΝΗΣ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΡΙΧΟΕΙΔΩΝ-Capillary zone electrophoresis

Η ΤΕΧΝΙΚΗ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 1. Συσκευή Ηλεκτροφόρησης (πηγή ρεύματος, λεκάνη με 2 δεξαμενές, ταινία Η/Φ) 2. Ρυθμιστικά διαλύματα (δ/τα βαρβιτουρικών με ΡΗ 8,8): μεταφορά ηλεκτρικού ρεύματος και διατήρηση σταθερού ΡΗ 3. Υποστηρικτικά μέσα (ταινίες οξεικής κυτταρίνης, αγαρόζη, πήκτωμα ακρυλαμιδίου) 4. Χρωστικές: μετά το πέρας της Η/Φ γίνονται ορατές οι ζώνες χάρη στα σύμπλοκα χρωστικών και πρωτεϊνών (χρώση Ponceau, Amido Black, Coomassie Brilliant Blue, χρώση αργύρουχρυσού)

From large to small and simple ΣΥΣΚΕΥΕΣ Η/Φ: από τις πιο σύνθετες στις πιο απλές

ΣΥΣΚΕΥΗ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ

Στις περισσότερες μονάδες Η/Φ, το gel βρίσκεται μεταξύ 2 θέσεων buffer όπου υπάρχουν ξεχωριστά ηλεκτρόδια έτσι ώστε η μόνη ηλεκτρική σύνδεση τους γίνεται μέσω του gel.

Aγαρόζη και Πολυακρυλαμίδιο Επειδή οι πόροι του gel αγαρόζης είναι μεγάλοι, η αγαρόζη χρησιμοποιείται στο διαχωρισμό μακρομορίων όπως νουκλεϊκά οξέα, μεγάλες πρωτεϊνες και σύμπλοκα Το πολυακρυλαμίδιο, gel με μικρότερους πόρους, χρησιμοποιείται στο διαχωρισμό πρωτεϊνών και μικρών ολιγονουκλεοτιδίων. Και τα δύο gel είναι ηλεκτρικά ουδέτερα

Gels αγαρόζης Η αγαρόζη είναι ένας ουδέτερος πολυσακχαρίτης που παράγεται από άγαρ Εύκολη στη χρήση Χαμηλό κόστος Εμπορική διαθεσιμότητα Χαμηλή συγγένεια με πρωτεϊνη (δεν επηρεάζει την κινητικότητά τους) Ελεύθερη από ιονισμένες ομάδες

Χρωστική Coomassie Blue

Χρωστική αργύρου Η χρωστική αργύρου είναι συνήθως 10-100 φορές ευαίσθητη από την Coomassie Blue αλλά πιο δύσχρηστη. Οι πολύ λεπτές γραμμές περιέχουν μόνο 0.5 ng πρωτεϊνης!!!

Χρωστική αργύρου

ΧΡΩΣΗ PONCEAU

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΖΩΝΗΣ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΡΙΧΟΕΙΔΩΝ-Capillary zone electrophoresis (1) Παραγωγή ηλεκτρο-ωσμωτικής ροής προς την κάθοδο

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΖΩΝΗΣ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΡΙΧΟΕΙΔΩΝ-Capillary zone electrophoresis (2)

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΖΩΝΗΣ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΡΙΧΟΕΙΔΩΝ (2)

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΖΩΝΗΣ ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΡΙΧΟΕΙΔΩΝ (3) Η/Φ σε μικρά τριχοειδή τα οποία γεμίζουν μόνο με buffer Κάθε τριχοειδές έχει 25-100 μm διάμετρο Εφαρμογή υψηλής τάσης (9000 V) με μεγάλη διακριτική ικανότητα. Διαχωρισμός πρωτεϊνών με βάση το φορτίο και το μέγεθος Εγχυση μικρών όγκων από το εξεταστέο δείγμα Ανάλυση μεγάλου αριθμού δειγμάτων Μικρό κόστος

ΩΣ ΓΕΝΙΚΟΣ ΚΑΝΟΝΑΣ, ΌΤΑΝ ΟΙ ΟΛΙΚΕΣ ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ ΤΟΥ ΟΡΟΥ ΕΊΝΑΙ 8.5 g/dl ή 6 g/dl Η ΕΞΕΤΑΣΗ ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΣΥΜΠΛΗΡΩΝΕΤΑΙ ΜΕ Η/Φ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΤΟΥ ΟΡΟΥ

ΠΡΟΫΠΟΘΕΣΕΙΣ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 1. ΟΡΟΣ ΚΑΙ ΟΧΙ ΠΛΑΣΜΑ ΤΟ ΟΠΟΙΟ ΠΕΡΙΕΧΕΙ ΙΝΩΔΟΓΟΝΟ (β2 και γ περιοχή) 2. ΟΡΟΣ ΌΧΙ ΛΙΠΑΙΜΙΚΟΣ Ή ΑΙΜΟΛΥΜΕΝΟΣ 3. ΜΙΚΡΗ ΠΟΣΟΤΗΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ

ΕΠΙΣΚΟΠΗΣΗ ΚΛΑΣΜΑΤΩΝ (5-6) ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ Με την εφαρμογή υψηλής τάσης και τροποποίηση του buffer γίνονται εμφανή 15 κλάσματα: Η/Φ υψηλής διακριτικής ικανότητας

Φωτομέτρηση σάρωσης (scanning densitometer) για τον προσδιορισμό της % αναλογίας των κλασμάτων

ΚΥΡΙΕΣ ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ ΤΟΥ ΟΡΟΥ ΠΟΥ ΓΙΝΟΝΤΑΙ ΕΜΦΑΝΕΙΣ ΜΕ ΤΗΝ Η/Φ

ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΟ ΠΡΩΤΕΪΝΙΚΟ ΔΙΑΓΡΑΜΜΑ

TI EINAI Η ΜΟΝΟΚΛΩΝΙΚΗ ΠΑΡΑΠΡΩΤΕΪΝΗ; Παραγωγή μιας ανοσολογικά ομοιογενούς πρωτεϊνης από τον πολλαπλασιασμό ενός κλώνου πλασματοκυττάρων. Διακριτή ζώνη στην ταινία Η/Φ Οξυκόρυφο έπαρμα (peak) με στενή βάση (α2-γ περιοχή)

Περαιτέρω διερεύνηση με ανοσοκαθήλωση και ποσοτικό προσδιορισμό ανοσοσφαιρινών με νεφελομετρία

ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΜΕ ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ IgG κ μονοκλωνική παραπρωτεϊνη

ARTEFACTS ΕΚΛΑΜΒΑΝΟΜΕΝΑ ΩΣ ΜΟΝΟΚΛΩΝΙΚΗ ΠΑΡΑΠΡΩΤΕΪΝΗ α2 περιοχή: οξεία φλεγμονώδης αντίδραση ( απτοσφαρίνης-συνυπάρχει όμως με α1 σφαιρίνών) β περιοχή: 1) αιμολυμένος ορός (ελεύθερη αιμσφαιρίνη σχηματίζει σύμπλεγμα και με την α2 περιοχήαπτοσφαιρίνη) 2) αναιμία τρανσφερίνης 3) χολόσταση και αύξηση C3 και 3) υπερλιπιδαιμία με αύξηση της apo- B γ-περιοχή: ινωδογόνου (για πχ λόγω καθυστέρησης πήξης σε πλαστικά σωληνάρια)

Περίπτωση σιδηροπενικής αναιμίας ( τρανσφερίνης )

ΙΝΩΔΟΓΟΝΟ ΠΟΥ ΕΜΦΑΝΙΖΕΤΑΙ ΩΣ ΜΟΝΟΚΛΩΝΙΚΗ ΠΑΡΑΠΡΩΤΕΪΝΗ

Παθήσεις που συνδυάζονται με μονοκλωνική παραπρωτεϊνη Ιδιοπαθή μονοκλωνική γαμμοπάθεια (MGUS) Πολλαπλούν μυέλωμα (ΠΜ) Λεμφοπλασματοκυτταροειδές λέμφωμα (Νόσος του Waldenström) AL αμυλοείδωση Αυτοάνοσα νοσήματα

Ιδιοπαθής μονοκλωνική γαμμοπάθεια (MGUS) Συχνότητα >50y: 3.2% >70y:5.3% >85y:7.5%

ΠΟΛΛΑΠΛΟΥΝ ΜΥΕΛΩΜΑ Definition: Ογκος monoclonal protein Αποτελέσματα plus CRAB Κακοήθεια των πλασματοκυττάρων και διήθηση του μυελού των οστών με παραγωγή μονοκλωνικής παραπρωτεϊνης C: υπερασβεστιαμία και λυτικές βλάβες των οστών R: Νεφρική ανεπάρκεια A: αναιμία B: βλάβες οστών

Η επίπτωση του Π. Μυελώματος αυξάνει με την ηλικία

Plasma Cells The bone marrow aspirate in multiple myeloma

Plasma cell Rouleaux The peripheral blood film in advanced myeloma

Multiple punched-out lytic lesions in the skull in myeloma

Wedge compression fracture of a thoracic vertebra

ΔΙΑΤΑΡΑΧΕΣ ΣΤΗΝ ΑΛΒΟΥΜΙΝΗ

ΔΙΑΤΑΡΑΧΕΣ ΣΤΟ ΝΕΦΡΩΣΙΚΟ ΣΥΝΔΡΟΜΟ

ΔΙΑΤΑΡΑΧΕΣ ΣΤΗΝ ΚΙΡΡΩΣΗ ΤΟΥ ΗΠΑΤΟΣ

ΔΙΑΤΑΡΑΧΕΣ ΣΕ ΧΡΟΝΙΕΣ ΦΛΕΓΜΟΝΩΔΕΙΣ ΚΑΤΑΣΤΑΣΕΙΣ

ΔΙΑΤΑΡΑΧΕΣ ΣΕ ΟΞΕΙΕΣ ΦΛΕΓΜΟΝΩΔΕΙΣ ΚΑΤΑΣΤΑΣΕΙΣ Πτώση αλβουμίνης α1 σφαιρινών α2 σφαιρινών τρανσφερρίνης C3, CRP

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΣΤΟ ΕΝΥ

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΣΤΑ ΟΥΡΑ

ΛΕΥΚΩΜΑ BENCE-JONES Μονοκλωνική παραπρωτεϊνη (κ ή λ) 22-24 kd σε ΜΒ, εμφανιζόμενη στα ούρα, η οποία παράγεται από πλασματοκύτταρα. Πήζει και προκαλεί θολερότητα στους 40-60 0 C η οποία εξαφανίζεται στο βρασμό.

ΔΙΣΔΙΑΣΤΑΤΗ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ: ισοηλεκτρική εστίαση και ηλεκτροφόρηση σε πηκτή SDS-πολυακρυλαμίδης

Η ΧΡΗΣΗ ΤΗΣ MALDI-TOF ΣΤΟΝ ΚΑΘΟΡΙΣΜΟ ΤΟΥ ΠΡΩΤΕΪΝΙΚΟΥ PROFIL

ΕΥΧΑΡΙΣΤΩ!