Coci Gram-pozitivi grămezi neregulate aerobi, facultativ anaerobi imobili nesporulați pot prezenta microcapsulă catalazo-pozitivi Grupe de interes medical: Stafilococi coagulazo- pozitivi Staphylococcus aureus Stafilococi coagulazo- negativi: Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus etc Staphylococcus aureus: colonizează nările și colonul contaminare tegument purtători sănătoși în colectivitate 10-40% în spital 40-70% rezervor principal: mamifere și păsări contaminare mediu sol apa de mare și apa dulce suprafața plantelor fructe alimente îmbrăcăminte mobilier covoare praful și aerul din încăperi Stafilococii coagulazo-negativi colonizează nările și tegumentul constituenți ai florei normale cutanate (barieră de apărare antimicrobiană) rezervor de plasmide R transferabile la S. aureus și la alți coci Gram +
Coci gram-pozitivi Frotiu din cultură pe mediu solid: dispuși în grămezi neregulate din cultură în mediu lichid sau din produs patologic extracelular (rar intracelular) lanțuri scurte perechi coci izolați Col. Gram, S. aureus dispoziția tipică în ciorchine(x1000) Produs patologic, Col. Gram Produs patologic, Col. Gram medii nutritive simple medii complexe medii hiperclorurate (Chapman) Incubare: 18-24 ore, 35-37ºC aerobioză
pe medii solide: Colonii: S în medii lichide tulburare uniformă cu depozit moderat la fundul tubului Pigment: galben-auriu (Staphylococcus aureus) alb (Staphylococcus epidermidis) galben-citrin (Staphylococcus saprophyticus) Hemoliză: beta (datorată hemolizinei alfa) fără femoliză S. aureus pe G-sg coloniile sunt de 1-2 mm, netede și au un aspect tipic: paint drop Catalazo-pozitivi S. aureus Oxidazo-negative Fermentează glucoza, manitolul, lactoza, zaharoza etc. cu producere de acid S. epidermidis Hidrolizează proteinele: hemoglobina, fibrina, cazeina, gelatina etc Colonii de stafilococ pe mediu Chapman Coloniile de S. aureus - înconjurate de o zonă galbenă, datorată fermentării manitolului și eliberării de acid; alți stafilococi -mediul rămâne roșu 48 de ore incubat la 37 C rezistă în culturi, la frigider câteva luni în puroi uscat 2-3 luni relativ rezistenți la antiseptice/dezinfectante (30 la alcool 70º) distruși în 60 minute la temperatura de 60ºC sensibili la bacteriofagi, la UV
DEOSEBIT DE REZISTENȚI LA ANTIBIOTICE!!! Peste 95% rezistenți la penicilină Tulpini rezistente la meticilină (oxacilină) = polirezistente (cefalosporine, eritromicina, clindamicina) MRSA (stafilococ auriu meticilino-rezistent) Sensibil la vancomicină, linezolid Structuri antigenice legate de corpul celular protaina A (specifică pentru S. aureus) adezine microcapsula eliberate în mediu enzime toxine Adezine Receptor Efect, rol Proteina A IgG anafilaxie locală și sistemică reacții urticariene activarea complementului inhibarea activității anticorpilor proliferarea limfocitelor B Bap, Fbp(proteină asociată biofilmului, fibronectinei, fibrinogenului, colagenului) Coagulaza legată (clumping factor) Fibronectină Fibrinogen Colagen Fibrinogen Enolaza Laminină Atașare Acid teichoic Celule Atașare Pls(plasmin-sensitivecell wall protein) Capsula Atașare, formare de biofilm Colonizarea canalelor galactofore (mastită) Atașare, coagulare GangliozideCM3 Atașare la mucoasa nazală Atașare, protecția bacteriei, biofilm Enterotoxine Receptor Efect/rol Enterotoxinastafilococică produsă de S. aureus Glicosfingolipid Superantigene Receptor Efect/rol Rol emetic, diareigen TSST MHC clasa II Febră, hipotensiune, leziuni eritematoase Enterotoxine Glicosfingolipid Rol emetic, diareigen Toxinele exfoliative Desmoglein 1 Acțiune epidermolitică Hemolizine Receptor Efect/rol Hemolizine α, β, γ, δ Colesterol Liza hematiilor Efect citotoxic Asigură supraviețuirea intrafagocitară Alte toxine Receptor Efect/rol Leucocidina Perete celular Acțiune citolitică asupra polimorfonuclearelor și macrofagelor Toxina pirogenă Enzime Receptor Efect/rol Coagulaza liberă Coagulează plasma recoltată pe citrat Stafilokinaza Plasminogen Digeră cheagurile de fibrină Nucleaza Acizi nucleici Degradează acizii nucleici Lipaza Lipide Acțiune lipolitică Hialuronidaza Hialuronan Crește permeabilitatea țesuturilor Elastaza Elastină Permeabilizează țesutul conjunctiv Lizozim Legătura NAM-NAG Distruge peretele bacteriilor Gram+ Hemoliză β
PROCES INFECȚIOS DE TIP INVAZIV TOXIINFECȚII DE ETIOLOGIE STAFILOCOCICĂ Foliculita infecția foliculului pilos Furuncul abces în jurul foliculului pilos Hidrosadenită infecția glandei sudoripare Panarițiu infecție peri- sau subunghială Impetigo stafilococic Mastită Infecții ale plăgilor chirurgicale, mușcate, tăiate Angina stafilococică otite, mastoidite, sinusite etc. Infecții urinare, uretrită, cistită, pielonefrită Anexite, infecții uterine post-abortum Foliculita invazia foliculului pilos abces de dimensiuni mici La nivelul ochiului = urcior Foliculita Carbuncul afectați mai mulți foliculi piloși adiacenți centrul necrotic se elimină > ulcerație > cicatrice Hidrosadenita Formă ușoară Formă severă
Panarițiu Impetigo stafilococic al feței Impetigo bulos infecție superficială a pielii erupție inițială în jurul nasului, gurii diseminare rapidă la alte zone vezicule cu puroi se sparg cruste copii, tineri invazie sistemică -deces Impetigo vezicule sparte - cruste Impetigo cruste galbene Mastita
Mastita Celulita adiposis edematosa Plagă chirurgicală infectată Bacteriemie, septicemie de la nivelul focarului primar pulmonar (pneumonii, pleurezii) renal osos, articular meningo-cerebral aparat circulator (endocard, pericard, endoteliu vascular) SCN infecția sau colonizarea șunturilor ventriculare, cateterelor i.v., protezelor articulare etc. Pneumonie Enterocolita stafilococică postantibioticoterapie Toxiinfecția alimentară stafilococică Ingestia unuiasau mai multor tipuri de enterotoxină termorezistentă eliberată anterior în aliment Suficientă cantitate foarte mică Sursa: om furuncul, sinuzită, rar portaj asimptomatic animal mastită, furunculoză Alimente frecvent contaminate: lactate, carne, ouă, pește sosuri, budinci latență 1-6 ore, perioadă de stare 24-72 ore, refacere 12-24 ore incidența tulpinilor de S. aureus în alimente după James M Jay, Modern Food Microbiology, 2000
S. aureus poate crește în alimente dacă acestea sunt păstrate perioadă îndelungată la temperatura camerei multiplicarea are loc la 10-46 C dacă este producător de enterotoxine: eliberare în alimente peste 60 C, stafilococii nu se multiplică/mor enterotoxinele rezistă la căldură (100-110 C) toxinele denaturate se pot reactiva în timp sau în prezența ureei nu apar modificări organoleptice ale alimentelor contaminate enterotoxinele stafilococice 17 serotipuri (SEA -SER, fără SEF) proteine hidrosolubile 26-35 kda polipeptidul toxinic alcătuit din multe molecule de lizină, acid aspartic, acid glutamic și tirozină sunt termostabile toxinele care totuși au fost denaturate termic, se pot renatura prin stocare prelungită în prezența ureei rămân active 30 min. la fierbere în ciuperci rezistă 30 min. la 121 C sunt rezistente față de enzimele proteolitice enterotoxinele stafilococice SEA tipul cel mai comun nu este inhibată de gena agr (accessory gene regulator) SED locul II se leagă și de MHC clasa II (= superantigen) SEB mai rar, dar este cea mai termostabilă (rezistă 16 ore la 60 C) rezistentă la enzime proteolitice (tripsină, chimotripsină) genele răspunzătoare de producerea ET bacteriofag (sea, sep) plasmid (sed, sej, ser) cromozomial (seb, seh, sec) enterotoxinele stafilococice expresia genelor condiționată de factori diverși densitate bacteriană, ph, nivel de CO2, NaCl SEA și SEJ produse în faza exponențială de creștere SEB, SEC, SED produse în perioada de tranziție din faza exponențială de creștere spre faza de stare enterotoxinele stafilococice doza infectantă de S. aureus 10 5-10 8 CFU/g 1 ng toxină/g aliment doza de toxină care induce toxiinfecția doza emetică(ed50) 200 ng/kg pentru SEA 400 ng/kg pentru SEB după James M Jay, Modern Food Microbiology, 2000
enterotoxinele stafilococice ingerarea alimentelor contaminate toxina se absoarbe stimulează terminațiile nervoase vagale stomacale stimulează centul medular al vomei produce distrucție a celulelor epiteliale intestinele produce distensia microvililor, elongarea criptelor, hiperplazie limfoidă are efect de superantigen (stimulează foarte multe LiT, macrofage) care inițiază sindromul de șoc toxic stafilococii trec prin tractul intestinal fără a produce reacții adverse/inflamatorii simptome apar în 1-6 ore grețuri vărsături diaree durere abdominală cefalee crampe musculare Șoc toxiinfecția este frecvent autolimitată (24-72 ore) Area postrema Metoclopramid Nerv vag enterotoxinele ca superantigene detectarea stafilococilor patogeni din alimente LiT APC Antigen MCH-II LiT APC Superantigen Macrofag IL-1 TNF-alfa pe medii uzuale cultivare pe mediu Baird Parker RPF (Rabbit Plasma Fibrinogen) permite enumerarea și confirmarea speciei colonii de tip S negre halou clar în jur (lecitinaza) Prezentarea unui antigen normal Prezentarea unui superantigen ȘOC SEPTIC detectarea enterotoxinelor citotoxicitate pe culturi celulare identificarea genelor care produc ET prin PCR ELISA epifluorescență bioluminiscență flow-citometrie Leziuni de natură toxică cutanate sindromul pielii opărite stafilococice = boala exfoliativă generalizată (boala Ritter) necroză de origine toxică a epidermului cauzată de toxina exfoliativă eritem perioralcare se extinde apoi la tot corpul apariția bulelor mari cu lichid clar este urmată de ruperea straturilor superficiale ale epidermei vindecarea are loc la intervale de 10 zile de la apariția anticorpilor protectori
sindromul pielii opărite boala Ritter Sindrom de șoc toxic stafilococic STTS hipertermie hipotensiune vărsături, diaree mialgii insuficiență hepatică și renală acută descuamarea tegumentelor palmare și plantare stare de șoc STTS Efectuarea antibiogramei este obligatorie pentru toate tulpinile de stafilococi izolate din diverse infecții Rezistență crescută prin producerea de beta-lactamaze, enzime care neutralizează antibioticele gen penicilină, cefalosporine modificarea unor proteine ale peretelui celular Vancomicina antibiotic de rezervă Infecțiile grave sau infecțiile asociate cu bacteriemie/septicemie tratament cu antibiotice pe cale parenterală (injectabilă) infecțiile pielii, ale țesuturilor moi sau ale căilor respiratorii tratament prin administrare orală gastroenterite repaus tratament antiemetic reechilibrare hidro-electrolitică per os parenteral daca se pierd multe lichide măsuri de igienă riguroasă în unitățile sanitare spălarea mâinilor înainte și după contactul cu pacienții utilizarea mănușilor determinarea portajului nazal de S. aureus administrarea profilactică de antibiotice preși post-operator
prevenirea toxiinfecțiilor alimentele nu se lasă la temperatura camerei păstrarea alimentelor la frigider alimentele se prepară termic rapid, pentru a nu permite multiplicarea bacteriilor igienă personală evitarea contactului cu alimente dacă sunt prezente leziuni stafilococice purtare de mănuși control microbiologic al suprafețelor instrumentelor de lucru animalelor alimentelor 27.04.2013