i=jççáñáéç=qü~óéêjj~êíáå=ejqj=fff=^ö~ê =

Transcript

1 i=jççáñáéç=qü~óéêjj~êíáå=ejqj=fff=^ö~ê = i=jççáñáéç=qü~óéêjj~êíáå=ejqj=fff=^ö~ê=j=dçåçjm~â= i=jççáñáéç=qü~óéêjj~êíáå=ejqj=fff=^ö~ê=j=bj_b`= immtpvo= Αναθ. 09 Σεπτέμβριος 2007 ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΕΣ ΠΟΙΟΤΙΚΟΥ ΕΛΕΓΧΟΥ I II ΕΙΣΑΓΩΓΗ Το Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar είναι ένα εμπλουτισμένο υλικό καλλιέργειας για την εκλεκτική απομόνωση και καλλιέργεια των ειδών Neisseria. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ 1. Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τις καλλιέργειες που παρατίθενται παρακάτω. α. Προσθέστε 0,1 ml διαλύματος αραίωσης που περιέχει 30 έως 300 CFU/0,1 ml σε κάθε τρυβλίο και ενοφθαλμίστε διασπείροντας με χρήση αποστειρωμένου γυάλινου διασπορέα. β. Επωάστε τα τρυβλία στους 35 ± 2 C σε αερόβια ατμόσφαιρα που περιέχει διοξείδιο του άνθρακα. γ. Συμπεριλάβετε τρυβλία Chocolate II Aarοκολατούχο άγαρως μη εκλεκτικούς μάρτυρες για όλους τους μικροοργανισμούς. 2. Εξετάστε τα τρυβλία μετά από 18 έως 24 και 48 h για ανάπτυξη, μέγεθος αποικιών και εκλεκτικότητα. 3. Αναμενόμενα αποτελέσματα Μικροοργανισμοί ελέγχου της CLSI (στελέχη ATCC) *Neisseria onorrhoeae...ανάπτυξη (43069) *Proteus mirabilis...αναστολή (μερική) (43071) *Staphylococcus epidermidis...αναστολή (μερική) (12228) Neisseria meninitidis...ανάπτυξη (13090) Neisseria sicca...αναστολή (μερική) (9913) Candida albicans...αναστολή (μερική) (60193) Escherichia coli...αναστολή (μερική) (25922) Επιπλέον στελέχη που χρησιμοποιούνται Neisseria onorrhoeae (2 στελέχη) ATCC ATCC Αποικίες μικρές, αδιαφανείς, γκριζωπές-λευκές έως άχρωμες, ανυψωμένες, γυαλιστερές και λείες *Συνιστώμενο στέλεχος μικροοργανισμού για ποιοτικό έλεγχο χρήστη. ª πø : Ο ποιοτικός έλεγχος χρήστη για N. onorrhoeae στα εξαιρούμενα ελέγχου μέσα συνίσταται έντονα απο το έγγραφο M22-A3 της CLSI. III ΕΠΙΠΛΕΟΝ ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ 1. Εξετάστε τα τρυβλία όπως περιγράφεται στην ενότητα Αλλοίωση του προϊόντος. 2. Εξετάστε αντιπροσωπευτικά τρυβλία οπτικώς για να βεβαιωθείτε ότι τυχόν υπάρχοντα φυσικά ελαττώματα δε θα επηρεάσουν δυσμενώς κατά τη χρήση. 3. Προσδιορίστε το ph ποτενσιομετρικά σε θερμοκρασία δωματίου για την τήρηση της προδιαγραφής των 7,2 ± 0,2. 4. Σημειώστε τη στερεότητα των τρυβλίων κατά τη διάρκεια της διαδικασίας ενοφθαλμισμού. 5. Επωάστε μη ενοφθαλμισμένα αντιπροσωπευτικά τρυβλία στους 35 ± 2 C επί 72 h και εξετάστε για τυχόν μικροβιακή μόλυνση. 1

2 ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ IV ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar χρησιμοποιείται για την απομόνωση των παθογόνων Neisseria από δείγματα που περιέχουν μεικτή χλωρίδα βακτηριδίων και μυκήτων. V ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ Οι Carpenter και Morton περιέγραψαν ένα βελτιωμένο υλικό καλλιέργειας για την απομόνωση του γονόκοκκου σε 24 h. 1 Η αποτελεσματικότητα αυτού του υλικού καλλιέργειας, GC Aar συμπληρωμένου με αιμοσφαιρίνη και συμπύκνωμα ζυμομυκήτων, καταδείχθηκε σε μια μελέτη δώδεκα υλικών καλλιέργειας και κατόπιν κατά τη χρήση για την απομόνωση του μικροοργανισμού αυτού. 2 Το υλικό καλλιέργειας βελτιώθηκε με αντικατάσταση του συμπυκνώματος ζυμομυκήτων με το BBL IsoVitaleX Enrichment, ένα χημικώς καθορισμένο συμπλήρωμα που αναπτύχθηκε ειδικά για βοήθεια στην ανάπτυξη των γονόκοκκων, παρότι έχει ευρεία εφαρμογή και για άλλους μικροοργανισμούς, π.χ., Haemophilus. 3-5 Το Thayer-Martin Selective Aar αναπτύχθηκε για την πρωτογενή απομόνωση του N. onorrhoeae και του N. meninitidis από δείγματα που περιέχουν μεικτή χλωρίδα, τα οποία λαμβάνονται από το φάρυγγα, τον κόλπο, το ορθό και την ουρήθρα. 4,6,7 Αποτελούμενο από Chocolate II Aar με βανκομυκίνη, κολιστίνη και νυστατίνη, η ειδική του σύνθεση διασφαλίζει την ελαχιστοποίηση της υπερβολικής ανάπτυξης των γονόκοκκων και των μηνιγγόκοκκων από μολυσματικές ουσίες, την καταστολή της ανάπτυξης των σαπροφυτικών ειδών Neisseria και την ενίσχυση της ανάπτυξης των παθογόνων Neisseria. Οι Martin et al. τροποποίησαν το Thayer-Martin Selective Aar με προσθήκη τριμεθοπρίμης για την παραγωγή του Modified Thayer-Martin Aar. 8 Αναφέρθηκε σημαντικά μεγαλύτερος αριθμός θετικών γονοκοκκικών απομονωμένων στελεχών από κλινικά δείγματα, σε σύγκριση με το Thayer-Martin Selective Aar, λόγω της αναστολής των συρρεόντων ειδών Proteus Λόγω της βελτιωμένης του απόδοσης, συνιστάται έναντι παλαιότερων σκευασμάτων για την απομόνωση του N. onorrhoeae. 11,12 Η αρχική σύνθεση περιείχε 20 /L άγαρ και 1,5 /L δεξτρόζης (εκτός της δεξτρόζης που περιέχεται στο IsoVitaleX Enrichment). Η συγκέντρωση του άγαρ έχει μεταβληθεί σε 12 /L περίπου. Τα επιπλέον 1,5 /L της δεξτρόζης έχουν εξαλειφθεί επειδή η χαμηλότερη περιεκτικότητα σε δεξτρόζη διαπιστώθηκε ότι βελτιώνει την ανάπτυξη του N. onorrhoeae. Το BBL MTM II αναπτύχθηκε με προσεκτική επιλογή και προκαταρκτική εξέταση των πρωτογενών υλικών για την παροχή ενισχυμένης ανάπτυξης των γονόκοκκων, καθώς και βελτιωμένη αναστολή των ειδών Candida. Gono-Pak είναι το όνομα που δίνεται σε ένα εκλεκτικό υλικό καλλιέργειας, επανασφραγιζόμενη σακούλα πολυαιθυλενίου και ένα δισκίο παραγωγής CO 2, το οποίο περιγράφεται από τον Holston, et al. για την απομόνωση του N. onorrhoeae. Διαπιστώθηκε ότι είναι συγκρίσιμο με τη μέθοδο δοχείου με κερί για την απομόνωση του N. onorrhoeae από κλινικά δείγματα. 13,14 Το σύστημα Gono-Pak εξαλείφει την ανάγκη τόσο για ένα ξεχωριστό σύστημα διοξειδίου του άνθρακα όσο και για τη μεταφορά του δείγματος από το σύστημα μεταφοράς σε ένα τρυβλίο καλλιέργειας. Έχει αναφερθεί ότι είναι ανώτερο από το Transrow (Modified Thayer-Martin Aar με ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με CO 2 σε φιάλη) ως σύστημα μεταφοράς. 15 Το τρυβλίο τύπου JEMBEC αναπτύχθηκε από τον John E. Martin, Jr., των Centers for Disease Control σε συνεργασία με την Ames Laboratories, και σχεδιάστηκε για την παροχή ενός αυτοδύναμου περιβάλλοντος CO 2 μέσω της χρήσης ενός δισκίου δημιουργίας CO 2, το οποίο τοποθετείται σε μια ειδικά σχεδιασμένη υποδοχή που έχει προβλεφθεί στο τρυβλίο. 16 Το σύστημα JEMBEC συνιστάται για την ανάπτυξη και τη μεταφορά του Neisseria onorrhoeae και, όπως το σύστημα Transrow, διαθέτει το πλεονέκτημα έναντι άλλων συστημάτων μεταφοράς ότι εξαλείφει την αναγκαιότητα μεταφοράς του δείγματος από το σύστημα μεταφοράς σε ένα τρυβλίο καλλιέργειας. VI ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar βασίζεται στο Chocolate II Aar, το οποίο περιέχει μια βελτιωμένη βάση GC Aar, βόεια αιμοσφαιρίνη και IsoVitaleX Enrichment. Η βάση GC περιέχει αζωτούχα θρεπτικά συστατικά με τη μορφή καζεΐνης και πεπτονών κρέατος, ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών για τη διατήρηση του ph και άμυλο αραβοσίτου, το οποίο εξουδετερώνει τα τοξικά λιπαρά οξέα που ενδέχεται να υπάρχουν στο άγαρ. Η αιμοσφαιρίνη παρέχει τον παράγοντα X (αιμίνη) για τα είδη Haemophilus. Το IsoVitaleX Enrichment είναι ένα καθορισμένο συμπλήρωμα που παρέχει τον παράγοντα V (νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο, NAD) για τα είδη Haemophilus, καθώς και βιταμίνες, 2

3 αμινοξέα, συνένζυμα, δεξτρόζη, ιόντα σιδήρου(ιιι) και άλλους παράγοντες που βελτιώνουν την ανάπτυξη των παθογόνων Neisseria. Αυτό το εκλεκτικό υλικό καλλιέργειας περιέχει τους αντιμικροβιακούς παράγοντες: βανκομυκίνη, κολιστίνη, νυστατίνη, (αναστολέας V-C-N) και τριμεθοπρίμη, για την καταστολή της φυσιολογικής χλωρίδας. Η βανκομυκίνη είναι δραστική κυρίως έναντι των ram-θετικών βακτηριδίων. Η κολιστίνη αναστέλλει τα ram-αρνητικά βακτηρίδια, συμπεριλαμβανομένων των ειδών Pseudomonas, αλλά δεν είναι δραστική έναντι των ειδών Proteus. Η νυστατίνη αναστέλλει τους μύκητες. Η τριμεθοπρίμη αναστέλλει τα είδη Proteus. Στο σύστημα Gono-Pak, ένα δισκίο που αποτελείται από ένα μείγμα κιτρικού οξέος και διττανθρακικού νατρίου ενεργοποιείται από την υγρασία που παράγεται από το υλικό καλλιέργειας εντός της σφραγισμένης πλαστικής σακούλας και δημιουργεί επίπεδα CO 2, τα οποία επαρκούν για την ανάπτυξη του Neisseria onorrhoeae πάνω στα εκλεκτικά υλικά καλλιέργειας που παρέχονται με το σύστημα. 14 Στο σύστημα JEMBEC, ένα δισκίο που αποτελείται από μείγμα κιτρικού οξέος και διττανθρακικού νατρίου τοποθετείται σε μια υποδοχή εντός του τρυβλίου και ενεργοποιείται από την υγρασία που παράγεται από το υλικό καλλιέργειας εντός της σφραγισμένης πλαστικής σακούλας. Τα επίπεδα CO 2 που δημιουργούνται επαρκούν για την ανάπτυξη του Neisseria onorrhoeae στα εκλεκτικά υλικά καλλιέργειας που παρέχονται με το σύστημα. 16 VII ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar Σύνθεση* κατά προσέγγιση ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Παγκρεατικό αφομοίωμα καζεΐνης... 7,5 Επιλεγμένη πεπτόνη κρέατος... 7,5 Άμυλο αραβοσίτου... 1,0 Όξινο φωσφορικό κάλιο... 4,0 Δισόξινο φωσφορικό κάλιο... 1,0 Χλωριούχο νάτριο... 5,0 Άγαρ... 12,0 Αιμοσφαιρίνη... 10,0 IsoVitaleX Enrichment...10,0 Αναστολέας V-C-N... 10,0 Γαλακτική τριμεθοπρίμη... 5,0 ml ml m *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. IsoVitaleX Enrichment Σύνθεση* κατά προσέγγιση ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού Βιταμίνη B ,01 L-γλουταμίνη...10,0 Αδενίνη... 1,0 Υδροχλωρική γουανίνη...0,03 π-αμινοβενζοϊκό οξύ...0,013 Νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο...0,25 Πυροφωσφορική θειαμίνη... 0,1 Νιτρικός σίδηρος(ιιι)...0,02 Υδροχλωρική θειαμίνη...0,003 Υδροχλωρική L-κυστεΐνη...25,9 L-κυστίνη... 1,1 Δεξτρόζη...100,0 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. Αναστολέας V-C-N Σύνθεση* κατά προσέγγιση ανά ένα χιλιοστόλιτρο αποκατασταθέντος διαλύματος Βανκομυκίνη µ Κολιστίνη µ Νυστατίνη μονάδες *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. Σύστημα Gono-Pak Το σύστημα Gono-Pak περιέχει τρυβλία MTM II Aar, επανασφραγιζόμενες σακούλες πολυαιθυλενίου και δισκία παραγωγής CO 2 (διττανθρακικό νάτριο και κιτρικό οξύ). Σύστημα JEMBEC Εκτός από το υλικό καλλιέργειας σε τρυβλία, το σύστημα JEMBEC αποτελείται από μια επανασφραγιζόμενη σακούλα πολυαιθυλενίου και ένα δισκίο παραγωγής CO 2 (διττανθρακικό νάτριο και κιτρικό οξύ). 3

4 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Εάν παρατηρήσετε υπερβολική υγρασία, τοποθετήστε ανάποδα και έκκεντρα το κάτω τμήμα του τρυβλίου πάνω από ένα καπάκι και αφήστε το να στεγνώσει στον αέρα προκειμένου να αποτραπεί τυχόν σχηματισμός στεγανοποίησης μεταξύ του άνω και του κάτω τμήματος του τρυβλίου κατά τη διάρκεια της επώασης. Σε κλινικά δείγματα ενδέχεται να υπάρχουν παθογόνοι μικροοργανισμοί, συμπεριλαμβανομένων των ιών της ηπατίτιδας και του ιού της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου. Κατά το χειρισμό όλων των ειδών που είναι μολυσμένα με αίμα και άλλα σωματικά υγρά, θα πρέπει να ακολουθούνται οι Τυπικές προφυλάξεις και οι κατευθυντήριες οδηγίες των ιδρυμάτων. Μετά τη χρήση, τα παρασκευασμένα τρυβλία, τα δοχεία δείγματος και άλλα μολυσμένα υλικά πρέπει να αποστειρώνονται σε αυτόκαυστο πριν από την απόρριψη. Οδηγίες φύλαξης Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκότος στους 2 8 C. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Μην ανοίγετε παρά μόνον όταν είστε έτοιμοι για χρήση. Ελαχιστοποιήστε την έκθεση στο φως. Τα παρασκευασμένα τρυβλία που φυλάσσονται στο αρχική συσκευασία τους στους 2 έως 8 C έως ακριβώς πριν από τη χρήση, είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης και να επωαστούν για τους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Αφήστε το υλικό καλλιέργειας να θερμανθεί σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τον ενοφθαλμισμό. Τα δισκία CO 2 και οι σακούλες των συστημάτων JEMBEC και Gono-Pak είναι δυνατό να φυλάσσονται μαζί με τα τρυβλία στους 2 έως 8 C ή ξεχωριστά από τα τρυβλία σε θερμοκρασία δωματίου. Αλλοίωση των προϊόντων Μη χρησιμοποιείτε τα τρυβλία εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Μη χρησιμοποιείτε τις σακούλες των συστημάτων JEMBEC και Gono-Pak εάν είναι διάτρητες ή ελαττωματικές ή τα δισκία εάν φαίνονται(σπασμένο δισκίο ή σχισμένη μεμβράνη). VIII ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΧΕΙΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Για τη συλλογή δειγμάτων έχει επινοηθεί μια ποικιλία στειλεών και δοχείων. Τα δείγματα θα πρέπει να λαμβάνονται πριν από τη χορήγηση αντιμικροβιακής θεραπείας. Πρέπει να λαμβάνονται μέτρα για την άμεση μεταφορά στο εργαστήριο. Έχουν επινοηθεί αρκετά μέσα συγκράτησης ή συστήματα μεταφοράς, όπως προϊόντα συλλογής και μεταφοράς δειγμάτων BBL, για την παράταση της επιβίωσης των μικροοργανισμών όταν αναμένεται σημαντική καθυστέρηση μεταξύ της συλλογής και της οριστικής καλλιέργειας. Ανατρέξτε στα κατάλληλα κείμενα για λεπτομέρειες σχετικά με τις διαδικασίες συλλογής και χειρισμού των δειγμάτων. 21,22 IX ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενο υλικό Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια, μικροοργανισμοί ποιοτικού ελέγχου και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Διαδικασία της εξέτασης Η επιφάνεια του άγαρ θα πρέπει να είναι λεία και υγρή, αλλά χωρίς υπερβολική υγρασία. Επιστρώστε γραμμωτά το δείγμα το συντομότερο δυνατό αφού παραληφθεί στο εργαστήριο. Εναλλακτικά, εάν το υλικό καλλιεργείται απευθείας από έναν στειλεό, προχωρήστε ως εξής: Κυλήστε το στειλεό απευθείας πάνω στο υλικό καλλιέργειας σχηματίζοντας ένα μεγάλο Z για την επίτευξη επαρκούς έκθεσης του στειλεού στο υλικό καλλιέργειας για τη μεταφορά των μικροοργανισμών. 2. Επιστρώστε σταυρωτά το σχήμα Z με έναν αποστειρωμένο συρμάτινο κρίκο, κατά προτίμηση στην κλινική. Εάν δεν έχει γίνει προηγουμένως η σταυρωτή γραμμωτή επίστρωση, αυτή θα πρέπει να γίνεται στο εργαστήριο. 4

5 3. Τοποθετήστε την καλλιέργεια το συντομότερο δυνατό σε αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με διοξείδιο του άνθρακα. α. Με το σύστημα Gono-Pak: Τοποθετήστε ενοφθαλμισμένα τρυβλία στη σακούλα πολυαιθυλενίου που παρέχεται (ένα ή δύο τρυβλία ανά σακούλα). Κόψτε τη γωνία της συσκευασίας ενός δισκίου CO 2 τυλιγμένου σε μεμβράνη, για να αποκαλύψετε το δισκίο και κατόπιν τοποθετήστε το δισκίο στη σακούλα. ΜΗΝ ΠΡΟΣΘΕΤΕΤΕ ΝΕΡΟ ΣΤΟ ΔΙΣΚΙΟ. Για να σφραγίσετε τη σακούλα, απλά πιέστε προς τα κάτω πάνω στο φερμουάρ στην άκρη της σακούλας με τα δάκτυλά σας και σύρετε κατά μήκος έως την αντίθετη άκρη. Βεβαιωθείτε ότι η σακούλα έχει σφραγιστεί εντελώς. Αφού σφραγιστεί η σακούλα, επωάστε σε ανεστραμμένη θέση (με την κοίτη του άγαρ προς τα επάνω) στους 35 C επί 18 έως 48 hώρες. 11,24 Για τη μεταφορά της καλλιέργειας μετά την επώαση, τοποθετήστε το σφραγισμένο σύστημα Gono-Pak σε κατάλληλο δοχείο ταχυδρόμησης ή αποστολής. Πρέπει να δίνεται προσοχή για την προστασία της καλλιέργειας από τυχόν υπερβολική θερμότητα ή υπερβολικό ψύχος και για τη διασφάλιση της παράδοσης στο εργαστήριο εξετάσεων, το ταχύτερο δυνατόν. β. Με το σύστημα JEMBEC: Με αποστειρωμένη λαβίδα, αφαιρέστε ένα δισκίο παραγωγής CO 2 από το μεμβρανώδες περιτύλιγμά του και τοποθετήστε το στην ειδικά σχεδιασμένη υποδοχή του τρυβλίου. Τοποθετήστε ενοφθαλμισμένα τρυβλία στη σακούλα πολυαιθυλενίου που παρέχεται (ένα τρυβλίο ανά σακούλα). ΜΗΝ ΠΡΟΣΘΕΤΕΤΕ ΝΕΡΟ ΣΤΟ ΔΙΣΚΙΟ. Για να σφραγίσετε τη σακούλα, πιέστε προς τα κάτω πάνω στο φερμουάρ στην άκρη της σακούλας με τα δάκτυλά σας και σύρετε κατά μήκος έως την αντίθετη άκρη. Βεβαιωθείτε ότι η σακούλα έχει σφραγιστεί εντελώς. Αφού σφραγιστεί η σακούλα, επωάστε σε ανεστραμμένη θέση (με την κοίτη του άγαρ προς τα επάνω) στους 35 C επί 18 έως 48 ώρεςh. 11,24 Για τη μεταφορά της καλλιέργειας μετά την επώαση, τοποθετήστε το σφραγισμένο σύστημα JEMBEC σε κατάλληλο δοχείο ταχυδρόμησης ή αποστολής. Πρέπει να δίνεται προσοχή για την προστασία της καλλιέργειας από τυχόν υπερβολική θερμότητα ή υπερβολικό ψύχος και για τη διασφάλιση της παράδοσης στο εργαστήριο εξετάσεων, το συντομότερο δυνατόν. 4. Επωάστε στους 35 ± 2 C και εξετάστε μετά από ολονύκτια επώαση και πάλι μετά από 48 ώρεςh περίπου. 5. Η ανακαλλιέργεια για την ταυτοποίηση του N. onorrhoeae πρέπει να γίνεται εντός 18 έως 24 hωρών. Εάν η αποστολή γίνει μετά την επώαση, οι αποικίες πρέπει να ανακαλλιεργούνται πριν από την εκτέλεση βιοχημικών εξετάσεων ταυτοποίησης, προκειμένου να διασφαλιστεί ότι θα επιτευχθεί επαρκής βιωσιμότητα. Ποιοτικός έλεγχος χρήστη Δείτε την ενότητα Διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου. Πρέπει να τηρούνται οι απαιτήσεις ποιοτικού ελέγχου σύμφωνα με τους ισχύοντες τοπικούς, πολιτειακούς ή/και ομοσπονδιακούς κανονισμούς ή τις απαιτήσεις πιστοποίησης και τις πρότυπες διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου του εργαστηρίου σας. Συνιστάται ο χρήστης να ανατρέχει στις σχετικές κατευθυντήριες οδηγίες της CLSI και τους κανονισμούς του CLIA για τις κατάλληλες πρακτικές ποιοτικού ελέγχου. X ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Η τυπική μορφολογία αποικιών στο Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar έχει ως εξής: Neisseria onorrhoeae...μικρές, γκριζωπές-λευκές έως άχρωμες, βλεννώδεις Neisseria meninitidis...μεσαίου έως μεγάλου μεγέθους, κυανές-γκρι, βλεννώδεις Οι αποικίες είναι δυνατό να επιλέγονται για χρώση κατά Gram, ανακαλλιέργεια ή άλλες διαγνωστικές διαδικασίες. XI ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Τα εκλεκτικά υλικά καλλιέργειας για παθογόνα είδη Neisseria ενδέχεται να αναστείλουν άλλα παθογόνα βακτηρίδια, π.χ. Haemophilus. Έχει αναφερθεί η ύπαρξη στελεχών του N. onorrhoeae που αναστέλλονται από τα συστατικά του αναστολέα V-C-N και τη γαλακτική τριμεθοπρίμη. 25,26 5

6 Μερικά στελέχη των ειδών Capnocytophaa ενδέχεται να αναπτύσσονται σε αυτό το εκλεκτικό υλικό καλλιέργειας όταν ενοφθαλμίζονται με στοματοφαρυγγικά δείγματα. 27 Ενώ τα συστήματα Gono-Pak και JEMBEC αποτελούν βελτίωση έναντι προηγούμενων συστημάτων μεταφοράς, βέλτιστη ανάκτηση του N. onorrhoeae θα επιτευχθεί με άμεσο ενοφθαλμισμό των υλικών καλλιέργειας με το δείγμα και άμεση επώαση σε ατμόσφαιρα εμπλουτισμένη με CO 2 στους 35 C. XII ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Σε μια κλινική μελέτη που διεξήχθη σε μια κλινική σεξουαλικά μεταδιδόμενων νοσημάτων, το BBL Modified Thayer Martin Aar συγκρίθηκε με ένα νέο εκλεκτικό υλικό καλλιέργειας BBL. Το Neisseria onorrhoeae ανακτήθηκε σε ένα ή και τα δύο υλικά καλλιέργειας από 175 (29%) επί συνόλου 607 δειγμάτων γεννητικών οργάνων, 3 (3%) επί συνόλου 88 στοματικών δειγμάτων και 6 (29%) επί συνόλου 21 δειγμάτων ορθού. Συνολικά, 166 καλλιέργειες ήταν θετικές σε MTM για συνολική ευαισθησία 90% (166/184). 27 XIII ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ Αρ. κατ. Περιγραφή BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar, συσκευασία των 20 τρυβλίων BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar, συσκευασία των 30 τρυβλίων BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar, δοχείο των 100 τρυβλίων BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar, Gono-Pak, συσκευασία των 20 τρυβλίων BBL Modified Thayer-Martin (MTM II) Aar, JEMBEC, συσκευασία των 10 τρυβλίων XIV ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the onococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the onococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbioloy Systems, Cockeysville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billins, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. onorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonea, T. Dahfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Thayer, J.D., and J.E. Martin, Jr Improved medium selective for cultivation of N. onorrhoeae and N. meninitidis. Pub. Health Rep. 81: Mitchell, M.S., D.L. Rhoden, and B.B. Marcus Immunofluorescence techniques for demonstratin bacterial pathoens associated with cerebrospinal meninitis. III. Identification of meninococci from the nasopharynx of asymptomatic carriers. Am. J. Epidem. 83: Martin, J.E., J.H. Armstron, and P.B. Smith New system for cultivation of Neisseria onorrhoeae. Appl. Microbiol. 27: Center for Disease Control. January 2, Memorandum: recommendation to use the same medium, Modified Thayer-Martin (MTM), in both plates and bottles for the GC culture screenin proram. U.S. Public Health Service, Atlanta. 10. Seth, A., Use of trimethoprim to prevent overrowth by Proteus in the cultivation of N. onorrhoeae. Br. J. Vener. Dis. 46: Evanelista, A.T., and H.R. Beilstein Cumitech 4A, Laboratory dianosis of onorrhea. Coordinatin ed., C. Abramson. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 12. Knapp, J.S., and E.H. Koumans Neisseria and Branhamella, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbioloy, 7th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 13. Holston, J.L., Jr., T.S. Hosty, and J.E. Martin, Jr Evaluation of the ba-co 2-eneratin tablet method for isolation of Neisseria onorrhoeae. Am. J. Clin. Pathol. 62: DeVaux, D.L., G.L. Evans, C.W. Arndt, and W.M. Janda Comparison of the Gono-Pak system with the candle extinction jar for recovery of Neisseria onorrhoeae. J. Clin. Microbiol. 25: Lewis, J.S., and P.J. Weisner Gonorrhea: current laboratory methods. Lab Manaement. 18: Martin, J.E., Jr., and R.L. Jackson A bioloical environmental chamber for the culture of Neisseria onorrhoeae. J. Am. Ven. Dis. Assoc. 2: National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 18. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbioloical and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printin Office, Washinton, D.C. 20. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to bioloical aents at work (seventh individual directive within the meanin of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Isenber, H.D., FD. Schoenknecht, and A. von Graevenitz Cumitech 9, Collection and processin of bacterioloical specimens. Coordinatin ed.,s.j. Rubin. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 22. Miller, J.M. and H.T. Holmes Specimen collection, transport, and storae, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbioloy, 7th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 23. Center for Disease Control Criteria and techniques for the dianosis of onorrhea. U.S. Public Health Service, Atlanta. 24. Lewis, B Identification of aerobic bacteria from enital specimens, p In H.D. Isenber (ed.), Clinical microbioloy procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 25. Cross, R.C., M.B. Hoer, R. Neibaur, B. Pasternack, and F.J. Brady VCN-inhibited strains of Neisseria onorrhoeae. HSMHA Health Rep. 86: Phillips, I., D. Humphrey, A. Middleton, and C.S. Nicol Dianosis of onorrhea by culture on a selective medium containin vancomycin, colistin, nystatin, and trimethoprim (VCNT). A comparison with ram-stainin and immunofluorescence. Br. J. Vener. Dis. 48:

7 7 27. Reichart, C.A., L.M. Rupkey, W.E. Brady, and E.W. Hook III Comparison of GC-Lect and modified Thayer-Martin media for isolation of Neisseria onorrhoeae. J. Clin. Microbiol. 27: Becton, Dickinson and Company BENEX Limited 7 Loveton Circle Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Sparks, Maryland USA Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: = ^q``=áë=~=íê~çéã~êâ=çñ=íüé=^ãéêáå~å=qóéé=`ìäíìêé=`çääéåíáçåk= bj_b`=áë=~=íê~çéã~êâ=çñ=jáäéë=påáéåíáñáåk= _ai=_a=içöçi= i=~åç=fëçsáí~äéu=~êé=íê~çéã~êâë=çñ=_éåíçåi=aáåâáåëçå=~åç=`çãé~åók=«ommt=_ak=