ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ Μ. ΧΡΙΣΤΟΦΙΔΟΥ, 19/3/2015 ΕΡΓ. ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ, 4 ΟΥ ΕΞΑΜΗΝΟΥ

Transcript

1 ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ Μ. ΧΡΙΣΤΟΦΙΔΟΥ, 19/3/2015 ΕΡΓ. ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ, 4 ΟΥ ΕΞΑΜΗΝΟΥ

2

3

4

5

6

7

8 ΑΝΤΙΓΟΝΟ ΑΝΤΙGEN Αg ΜΕΓΑΛΟΜΟΡΙΑΚΗ ΧΗΜΙΚΗ ΕΝΩΣΗ ΧΗΜΙΚΗ ΣΥΣΤΑΣΗ ΠΡΩΤΕΪΝΗ Ή ΠΟΛΥΣΑΚΧΑΡΙΤΗΣ

9 ΑΝΟΣΟΓΟΝΟ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΕΙΔΙΚΩΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΕΙΔΙΚΩΝ Τ-ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑ EIΔΙΚΑ ΜΕ ΠΡΟΪΟΝΤΑ ΤΗΣ ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΚΗΣ ΑΠΟΚΡΙΣΗΣ

10 «ΞΕΝΟ» ΜΕΓΑΛΟΟΡΓΑΝΙΣΜΟ ΚΑΘΟΡΙΣΤΙΚΕΣ ΟΜΑΔΕΣ 3-7 ΣΑΚΧΑΡΑ 4-8 ΑΜΙΝΟΞΕΑ ΑΝΟΣΟΫΠΕΡΕΧΟΥΣΑ ΟΜΑΔΑ ΤΕΛΙΚΟ ΣΑΚΧΑΡΟ ΤΕΛΙΚΟ ΑΜΙΝΟΞΥ

11 ΑΝΤΙΣΩΜΑ ANTIBODY - Ab ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ γ - ΣΦΑΙΡΙΝΕΣ ΑΝΟΣΟΣΦΑΙΡΙΝΕΣ IMMUNOGLOBULINS - Igs ΑΝΤΙΔΡΟΥΝ ΕΙΔΙΚΑ ΜΕ ΤΟ Αg ΠΟΥ ΠΡΟΚΑΛΕΣΕ ΤΗΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΤΟΥΣ

12

13 ΜΟΡΙΑΚΗ ΔΟΜΗ ΑΝΟΣΟΣΦΑΙΡΙΝΩΝ 4 ΠΟΛΥΠΕΠΤΙΔΙΚΕΣ ΑΛΥΣΙΔΕΣ 2 όμοιες ΒΑΡΕΙΕΣ - HEAVY CHAINS 2 όμοιες ΕΛΑΦΡΙΕΣ - LIGHT CHAINS 5 ΤΥΠΟΥΣ ΒΑΡΕΙΩΝ ΑΛΥΣΙΔΩΝ γ, α, μ, δ, ε 2 ΤΥΠΟΥΣ ΕΛΑΦΡΙΩΝ ΑΛΥΣΙΔΩΝ κ, λ ΒΑΡΕΙΑ ΑΛΥΣΙΔΑ 450 ΑΜΙΝΟΞΕΑ ΜΒ d ΕΛΑΦΡΙΑ ΑΛΥΣΙΔΑ 220 ΑΜΙΝΟΞΕΑ ΜΒ d

14 ΑΝΘΡΩΠΟΣ 5 ΤΑΞΕΙΣ ΑΝΟΣΟΣΦΑΙΡΙΝΩΝ IgG γ2κ2 ή γ2λ2 IgΑ α2κ2 ή α2λ2 IgΜ μ2κ2 ή μ2λ2 IgD δ2κ2 ή IgΕ ε2κ2 ή δ2λ2 ε2λ2

15

16

17

18

19 ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΣΩΜΑΤΙΔΙΑΚΟ ΑΝΤΙΓΟΝΟ +ΟΜΟΛΟΓΟ ΑΝΤΙΣΩΜΑ Αg:Ab Ερυθρό, βακτήριο, latex ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΕΙΣ Αg ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΓΟΝΟ Ab ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΕΣ IgG, IgM

20 2 ΣΤΑΔΙΑ 1o Αg : Ab Ag + Ab ΗΛΕΚΤΡΙΚΕΣ ΔΥΝΑΜΕΙΣ ΔΕΣΜΟΙ ΥΔΡΟΓΟΝΟΥ Ηλεκτρο - φορτίο ΥΔΡΟΦΟΒΟΙ ΔΕΣΜΟI απωθούνται Van der Waals 2o ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ Αgs:Abs συγκολλήσεις ΗΛΕΚΤΡΟΛΥΤΗΣ 0.15Μ NaCl περιέχει ελεύθερα + ιόντα ΘΕΩΡΙΑ ΔΥΚΤΙΩΤΟΥ ΠΛΕΓΜΑΤΟΣ

21 2 θέσεις σύνδεσης των abs Πολλές όμοιες καθοριστικές ομάδες Αg γέφυρες δίκτυο

22

23 ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ ΠΟΙΟΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΗΜΙΠΟΣΟΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΤΙΤΛΟΣ Abs

24 ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ ΑΜΕΣΗ ΣΩΜΑΤΙΔΙΑΚΟ + ΟΜΟΛΟΓΟ ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ ΑΝΤΙΓΟΝΟ Ag ΑΝΤΙΣΩΜΑ Ab

25 ΑΜΕΣΗ ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ Ομάδες αίματος ΑΒΟ RHESUS Anti-A Anti-B ΑΒΟ , μόρια /ερυθρό Anti-Rhesus RHESUS >>

26 ΑΜΕΣΗ ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ

27 ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ ΣΩΜΑΤΙΔΙΑΚΟ + ΟΜΟΛΟΓΟ ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ ΑΝΤΙΓΟΝΟ Ag ΑΝΤΙΣΩΜΑ Ab ΙΖΗΜΑΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ ΔΙΑΛΥΤΟ + ΟΜΟΛΟΓΟ ΙΖΗΜΑ ΑΝΤΙΓΟΝΟ Ag ΑΝΤΙΣΩΜΑ Ab

28 ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ 0,01 μg Ab/ml ορού ΙΖΗΜΑΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ ΣΕ ΑΓΑΡ 60 mg Ab/ml ορού

29 ΕΜΜΕΣΗ ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ

30 ΕΜΜΕΣΗ ΔΙΑΛΥΤΟ Ag + ΟΜΟΛΟΓΟ Ab ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ + ΕΡΥΘΡΑ + LATEX - πολυστερίνη

31 Latex-STO + A-STO ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ? ΟΡΟΣ Abs ΜΕΘΟΔΟΣ LATEX Eρυθρά-STO + A-STO ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ? ΟΡΟΣ Abs ΜΕΘΟΔΟΣ ΠΑΘΗΤΙΚΗ ΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ

32 Ανίχνευση αντισώματος έναντι στρεπτολυσίνης «ο», ASTO με συγκολλητινοαντίδραση Latex Mάρτυρες, Controls + _??? ASTO

33 ΑΝΑΣΤΡΟΦΗ

34 ΑΝΑΣΤΡΟΦΗ Latex Ab + Ag ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ? OΡΟ Ερυθρά Ab + Ag >>? OΡΟ Latex anticrp + CRP >> ΟΡΟΥ

35 ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΕΩΝ ΑΜΕΣΗ ΒΑΚΤΗΡΙΑΚΗ ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ Ανίχνευση συγκολλητινών επί πυρετού αγνώστου αιτιολογίας ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΛΟΙΜΩΞΕΩΝ

36 ΣΑΛΜΟΝΕΛΛΕΣ Α Β ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ WIDAL Salmonella typhie, paratyphi A,B ΒΡΟΥΚΕΛΛΕΣ Α Β ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ WRIGHT Brucella spp. ΡΙΚΕΤΣΙΕΣ Ricketsia spp. Α Β ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ WEIL FELIX

37 ΕΜΜΕΣΗ ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΡΕΥΜΑΤΟΕΙΔΟΥΣ ΠΑΡΑΓΟΝΤΑ (PΠ) ΣΤΟΝ ΟΡΟ

38 RA-TEST ΣΥΓΚΟΛΛΗΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ LATEX Latex + ΟΡΟΣ? ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΕΙΣ ΙgG αυτο-ab? Ρ.Π + Ρ.Π WAALER ROSE ΠΑΘΗΤΙΚΗ ΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ Ερυθρά προβάτου + ΟΡΟΣ? ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΕΙΣ IgG αυτό-ab? Ρ.Π + Ρ.Π

39 ??? RA test

40 Ανίχνευση πολυσακχαριδικού Ag ελύτρου, C. neoformans (μύκητας) N. meningitidis, H. influenjae, S. pneumoniae (βακτήρια) ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΕΝΥ LATEX με Abs ΕΛΥΤΡΟΥ ΕΝΥ (Ag) Ανάμειξη Ανακίνηση Θετικό Αρνητικό Διάγνωση βακτηριακής μηνιγγίτιδος με έμμεση συγκολλητινοαντίδραση

41

42 ΦΑΙΝΟΜΕΝΟ ΠΡΟΖΩΝΗΣ ΥΨΗΛΟΣ ΤΙΤΛΟΣ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ( Abs) ΠΑΡΟΥΣΙΑ ΑΤΕΛΩΝ η ΔΕΣΜΕΥΤΙΚΩΝ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ Abs (IgG, IgA) ΑΤΕΛΗ Abs ΧΡΟΝΙΑ ΒΡΟΥΚΕΛΛΩΣΗ ΑΝΤΙ-RHESUS

43 ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΤΕΛΩΝ Abs IN VITRO ΜΕΓΑΛΕΣ ΑΡΑΙΩΣΕΙΣ ΟΡΟΥ *ΛΕΥΚΩΜΑΤΙΝΗ *ΠΡΩΤΕΟΛΥΤΙΚΑ ΕΝΖΥΜΑ *ΑΝΤΙ ΑΝΘΡΩΠΕΙΟΣ γ-σφαιρινη

44 ΛΕΥΚΩΜΑΤΙΝΗ ΔΙΗΛΕΚΤΡΙΚΗ ΣΤΑΘΕΡΑ ΜΕΣΟΥ ΕΝΑΙΩΡΗΣΕΩΣ ΕΡΥΘΡΩΝ ΠΡΩΤΕΟΛΥΤΙΚΑ ΕΝΖΥΜΑ ΘΡΥΨΙΝΗ ΗΛΕΚΤΡΙΚΟ ΦΟΡΤΙΟ ΕΠΙΦΑΝΕΙΑΣ ΕΡΥΘΡΩΝ ΜΕΙΩΝΟΥΝ ΑΠΟΣΤΑΣΗ ΑΝΤΙ ΑΝΘΡΩΠΕΙΟΣ γ-σφαιρινη Anti-Rh=IgG + ΓΕΦΥΡΩΣΗ anti IgG +

45 ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΤΕΛΩΝ Abs ΑΜΕΣΗ COOMBS ΑΤΕΛΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΑ ΣΤΗΝ ΕΠΙΦΑΝΕΙΑ ΕΡΥΘΡΩΝ (IN VITRO) - ΑΙΜΟΛΥΤΙΚΗ ΝΟΣΟΣ ΝΕΟΓΝΟΥ - ΑΝΤΙ ΑΝΘΡΩΠΕΙΟΣ γ-σφαιρινη anti-igg

46 ΕΜΜΕΣΗ COOMBS ΑΤΕΛΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΑ ΣΤΟΝ ΟΡΟ (ΙΝ VITRO) Rh ΕΓΚΥΟΣ ΠΑΡΑΚΟΛΟΥΘΗΣΗ (Ι) Eρυθρά O+ + ορός με anti Rhesus +? (II) Eρυθρά-antiRh + anti ανθρώπειος γ- σφαιρίνη + IgG anti-igg

47