Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2

Transcript

1 Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 1 πλάκα πλάκες ΚΙΤ ΣΥΝΔΥΑΣΤΙΚΟΥ ΕΛΕΓΧΟΥ ΓΙΑ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΑ ΑΝΤΙ-HCV ΚΑΙ ΤΟ ΙΟΓΕΝΕΣ ΑΝΤΙΓΟΝΟ ΤΟΥ ΙΟΥ ΤΗΣ ΗΠΑΤΙΤΙΔΑΣ C ΣΕ ΟΡΟ Ή ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΠΛΑΣΜΑ ΜΕΣΩ ΑΝΟΣΟΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΤΕΧΝΙΚΗΣ / [GR]

2 ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ 1. ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ... 5 Μην αλλάζετε τη διαδικασία της δοκιμασίας ΔΕΙΓΜΑΤΑ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ [GR]

3 1. ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 είναι μια ποιοτική ανοσοενζυμική δοκιμασία για την ανίχνευση της μόλυνσης από τον ιό της ηπατίτιδας C (HCV), βάσει της ανίχνευσης των αντισωμάτων και του καψιδικού αντιγόνου αντί-hcv σε ορό ή σε ανθρώπινο πλάσμα. Αυτή η εξέταση ελέγχου της ηπατίτιδας C μπορεί να χρησιμοποιηθεί από διαγνωστικά εργαστήρια και τράπεζες αίματος. 2. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Ο ιός της ηπατίτιδας C (HCV) είναι ένας ιός θετικής κατεύθυνσης RNA (9,5 kb) με περίβλημα, ο οποίος ανήκει στην οικογένεια των ιών Flaviviridae, από την οποία ταυτοποιούνται έξι κύριοι γονότυποι. Ο HCV αναγνωρίζεται ως η κύρια αιτία της ιογενούς ηπατίτιδας των τύπων εκτός A και B. Η μόλυνση από τον HCV χαρακτηρίζεται από μια οξεία και χρόνια μορφή που μπορεί να οδηγήσει σε κίρρωση και ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα. Τα ορολογικά ευρήματα της μόλυνσης από τον HCV μπορούν να συγκεντρωθούν μέσω αιματολογικών εξετάσεων, επιτρέποντας τον έλεγχο για αντιγόνα HCV και/ή αντισώματα και/ή RNA. Σε σύγκριση με μια εξέταση μεμονωμένου ελέγχου για αντισώματα αντί-hcv, η μιας συνδυαστικής εξέτασης ελέγχου για αντισώματα αντί-hcv και για καψιδικό αντιγόνο HCV μπορεί να μειώσει το ορολογικό χρονικό περιθώριο και να βελτιώσει την ανίχνευση της μόλυνσης. 3. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 βασίζεται στη μιας στερεάς φάσης προετοιμασμένης με κεκαθαρμένα αντιγόνα: δύο ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες από τη μη δομημένη περιοχή (NS3 και NS4) και ένα πεπτίδιο από τη δομημένη περιοχή (καψίδιο) του ιού της ηπατίτιδας C, και ένα μονοκλωνικό αντίσωμα κατά του καψιδίου της ηπατίτιδας C. Η υγρή φάση αποτελείται από δύο συζυγή. Το πρώτο συζυγές (R6) αποτελείται από ένα βιοτινυλικό μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού κατά του καψιδίου της ηπατίτιδας C. Αυτό το μονοκλωνικό αντίσωμα δεν αντιδρά κατά του καψιδικού πεπτιδίου που χρησιμοποιείται κατά τη στερεά φάση. Το δεύτερο συζυγές (R7) είναι ένα μίγμα αντί-ανθρώπινων αντισωμάτων IgG ποντικού σημασμένων με υπεροξειδάση και στρεπταβιδίνης σημασμένης με υπεροξειδάση. Η διαδικασία της δοκιμασίας περιλαμβάνει τα ακόλουθα στάδια αντιδράσεων: 1) Το συζυγές 1, τα προς εξέταση δείγματα και οι οροί ελέγχου κατανέμονται στις κοιλότητες της μικροπλάκας. Εάν υπάρχουν αντισώματα για τον HCV, αυτά δεσμεύονται στα αντιγόνα που συνελήφθησαν κατά τη στερεά φάση. Εάν υπάρχει καψιδικό αντιγόνο της ηπατίτιδας C, το αντιγόνο αυτό δεσμεύεται από τα μονοκλωνικά αντισώματα που επικαλύφθηκαν κατά τη στερεά φάση και τα βιοτινυλικά μονοκλωνικά αντισώματα κατά του καψιδικού αντιγόνου της ηπατίτιδας C (συζυγές 1). 2) Μετά από επώαση 90 λεπτών στους 37 C και μια έκπλυση, σε κάθε κοιλότητα της μικροπλάκας προστίθεται το συζυγές 2 που περιέχει τα σημασμένα με υπεροξειδάση αντί-ανθρώπινα αντισώματα IgG και τη σημασμένη με υπεροξειδάση στρεπταβιδίνη. Εάν υπάρχει ανθρώπινη IgG που αντέδρασε κατά τη στερεά φάση, τότε το συζυγές αντί-ανθρώπινης IgG δεσμεύεται στα ανθρώπινα αντισώματα. Εάν στο δείγμα υπάρχει καψιδικό αντιγόνο του HCV, τότε το συζυγές υπεροξειδάση/στρεπταβιδίνη δεσμεύεται στη βιοτίνη του συζυγούς 1. 3) Μετά από επώαση διάρκειας 30 λεπτών στους 37 C, το μη δεσμευμένο ενζυμικό συζυγές απορρίπτεται μέσω έκπλυσης και η παρουσία συμπλόκων αντιγόνου-αντισώματος-υπεροξειδάσης καταδεικνύεται μέσω της προσθήκης του υποστρώματος. 4) Μετά από επώαση διάρκειας 30 λεπτών σε θερμοκρασία εργαστηριακού περιβάλλοντος (18-30 C) και διακοπή της αντίδρασης, διεξάγεται ανάγνωση με φασματοφωτομετρική συσκευή στα 450/ nm. Η μετρούμενη απορροφητικότητα ενός δείγματος επιτρέπει την ανίχνευση παρουσίας ή απουσίας αντισωμάτων HCV και/ή καψιδικών αντιγόνων της ηπατίτιδας C στο δείγμα. Η ένταση του χρωματισμού είναι ανάλογη της ποσότητας των αντισωμάτων HCV και/ή του καψιδικού αντιγόνου της ηπατίτιδας C που δεσμεύτηκαν στη στερεά φάση. 3 [GR]

4 4. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ 4.1. Περιγραφή Αναγνωριστικά στοιχεία ετικέτας Περιγραφή Παρουσίαση Προετοιμασία Παρουσίαση Προετοιμασία R1 MICROPLATE Μικροπλάκα 12 ταινίες των 8 κοιλοτήτων η καθεμία, επικαλυμμένες με μονοκλωνικό αντικαψιδικό αντίσωμα του VHC, με κεκαθαρμένα ανασυνδυασμένα αντιγόνα ηπατίτιδας C (NS3, NS4), καθώς και με ένα καψιδικό πεπτίδιο του HCV. Ειδικός αναγνωριστικός αριθμός = 93 1 πλάκα 5 πλάκες R2 CONCENTRATED WASHING SOLUTION (20X) Συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης (20X) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris NaCl ph 7,4 Συντηρητικό: ProClin 300 (0,04%) 70 ml Προς αραίωση 235 ml Προς αραίωση R3 R4 R5a R5b NEGATIVE CONTROL POSITIVE CONTROL ANTIGEN POSITIVE CONTROL ANTIGEN DILUENT R6 CONJUGATE 1 R7 CONJUGATE 2 Δείγμα ελέγχου αρνητικού Ρυθμιστικό διάλυμα Tris HCI, που περιέχει BSA (Αλβουμίνη Βόειου Ορού), Συντηρητικό: ProClin 300 (0,1%) Δείγμα ελέγχου θετικού Ανθρώπινος ορός που περιέχει αντισώματα για τον HCV, αρνητικός στο αντιγόνο HBs και στα αντισώματα αντί- HIV1 και αντί-hiv2, αραιωμένος σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris HCl, το οποίο περιέχει BSA, και ο οποίος κατέστη ανενεργός μέσω φωτοχημικής διαδικασίας. Συντηρητικό: ProClin 300 (0,1%) Δείγμα ελέγχου θετικού αντιγόνου Συνθετικό δείγμα ελέγχου θετικού αντιγόνου που περιέχει ένα λυοφιλιωμένο καψιδικό πεπτίδιο. Αραιωτικό του R5a Απεσταγμένο νερό που περιέχει συντηρητικό: ProClin 300 (0,5 %) Συζυγές 1 Μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού σημασμένα με βιοτίνη κατά του καψιδικού αντιγόνου HCV. Μωβ χρώματος Συντηρητικό: Αζίδιο του νατρίου (< 0,1%), Cosmocil CQ (0,025%) Συζυγές 2 Αντισώματα ποντικού κατά ανθρώπινης IgG/υπεροξειδάσης και στρεπταβιδίνης/υπεροξειδάσης. Πράσινου χρώματος. Συντηρητικό: ProClin 300 (0,5 %) 1 ml 1,5 ml επαρκής ποσότητα 1 ml Προς ανασύσταση 1 ml Προς ανασύσταση 15 ml 15 ml 1 ml 3 ml επαρκής ποσότητα 1 ml Προς ανασύσταση 1 ml Προς ανασύσταση 2 φιαλίδια 2 x 30 ml 2 φιαλίδια 2 x 30 ml 4 [GR]

5 R8 SUBSTRATE BUFFER Υπόστρωμα Διάλυμα κιτρικού οξέως και οξικού νατρίου, ph 4,0, που περιέχει H 2 O 2 (0,015%) και 4% διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO) 60 ml Προς ανασύσταση 2 φιαλίδια 2 x 60 ml Προς ανασύσταση R9 CHROMOGEN: TMB SOLUTION (11X) Χρωμογόνο: Διάλυμα TMB Διάλυμα που περιέχει 3,3, 5,5 τετραμεθυλική βενζιδίνη (TMB) 5 ml Προς αραίωση 2 φιαλίδια 2 x 5 ml Προς αραίωση R10 STOPPING SOLUTION Ανασχετικό διάλυμα Διάλυμα θειικού οξέος (H 2 SO 4 1N) 28 ml 3 φιαλίδια 3 x 28 ml 4.2. Συνθήκες διατήρησης και χειρισμού Το κιτ θα πρέπει να αποθηκεύεται στους +2-8 C. Κάθε στοιχείο του κιτ το οποίο διατηρείται στους +2-8 C μπορεί να χρησιμοποιηθεί έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στη συσκευασία (εκτός εάν υποδεικνύεται κάτι διαφορετικό). Μετά το άνοιγμα και εφόσον δεν υπάρχει επιμόλυνση, τα αντιδραστήρια R2, R3, R4, R6, R7, R8, R9 και R10 που διατηρούνται στους 2-8 C μπορούν να χρησιμοποιηθούν έως την ημερομηνία λήξης που υποδεικνύεται στην ετικέτα. Αναγνωριστικά στοιχεία R1 R2 R5a + R5b R8 + R9 Διατήρηση Μετά το άνοιγμα της σφραγισμένης σε κενό αέρος σακούλας, οι ταινίες με τις μικροκοιλότητες που θα αποθηκευτούν στους +2-8 C μπορούν να χρησιμοποιηθούν για 1 μήνα στην προσεκτικά επανασφραγισμένη αυθεντική σακούλα τους με ταινία. Το αραιωμένο διάλυμα έκπλυσης μπορεί να αποθηκευτεί στους C για 2 εβδομάδες. Το συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης (R2) μπορεί να αποθηκευτεί στους C. Μετά την ανασύσταση, το διάλυμα εργασίας του δείγματος ελέγχου θετικού αντιγόνου (R5) μπορεί να αποθηκευτεί για 1 μήνα στους +2-8 C και για 2 μήνες στους -20 C (έως 5 κύκλους ψύξης/απόψυξης μετά την ψύξη στους -20 C). Μετά την ανασύσταση, τα αντιδραστήρια που έχουν αποθηκευτεί στο σκοτάδι μπορούν να χρησιμοποιηθούν για 6 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). 5. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΚΑΙ ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Για in vitro διαγνωστική από επαγγελματία του κλάδου των υπηρεσιών υγείας Προφυλάξεις υγείας και ασφαλείας Ο χειρισμός του παρόντος κιτ εξέτασης θα πρέπει να διεξάγεται μόνο από ειδικευμένο προσωπικό, καταρτισμένο στις εργαστηριακές διαδικασίες και εξοικειωμένο με τους δυνητικούς κινδύνους τους. Φοράτε κατάλληλο προστατευτικό ρουχισμό, γάντια και προστατευτικά για τα μάτια/το πρόσωπο και χειρίζεστε τον εξοπλισμό σύμφωνα με την απαιτούμενη Ορθή Εργαστηριακή Πρακτική. Το κιτ εξέτασης περιέχει στοιχεία ανθρώπινου αίματος. Το υλικό ανθρώπινης προέλευσης το οποίο χρησιμοποιείται για την προετοιμασία του αντιδραστηρίου R4 (Δείγμα ελέγχου θετικού) δοκιμάστηκε και βρέθηκε μη αντιδραστικό στο επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας B (HBs Ag) και στα αντισώματα κατά των Ιών Ανθρώπινης Ανοσοανεπάρκειας (HIV-1 και HIV-2 Ab) και θετικό στα αντισώματα αντί-hcv. Το δείγμα ελέγχου θετικού R4 καθίσταται ανενεργό μέσω θέρμανσης. Καμία γνωστή μέθοδος εξέτασης δεν μπορεί να εξασφαλίσει την πλήρη απουσία μολυσματικών παραγόντων. Για τον λόγο αυτό, όλα τα παράγωγα του ανθρώπινου αίματος, τα αντιδραστήρια και τα ανθρώπινα δείγματα θα πρέπει να διαχειρίζονται ως ικανά να μεταδώσουν μολυσματικές ασθένειες, ακολουθώντας τις συνιστώμενες Γενικές Προφυλάξεις για μεταδιδόμενα δια του αίματος παθογόνα, όπως αυτές ορίζονται από τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. 5 [GR]

6 Εκχύσεις βιολογικών υλικών: Οι εκχύσεις υλικών ανθρώπινης προέλευσης θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως δυνητικά μολυσματικές. Οι εκχύσεις που δεν περιέχουν οξύ θα πρέπει να απολυμαίνονται άμεσα, καθώς και η περιοχή έκχυσης, τα υλικά και όλες οι μολυσμένες επιφάνειες ή ο εξοπλισμός, με ένα κατάλληλο χημικό απολυμαντικό το οποίο είναι αποτελεσματικό για δυνητικά βιολογικά επικίνδυνα υλικά που σχετίζονται με τα χρησιμοποιούμενα δείγματα (συνήθως χλωρίνη οικιακής ς αραίωσης 1:10, 70-80% αιθανόλη ή ισοπροπανόλη, κάποιο ιωδοφόρο [όπως 0,5% Wescodyne Plus], κλπ.), και να σκουπίζονται καλά. Οι εκχύσεις που περιέχουν οξύ θα πρέπει να απορροφηθούν κατάλληλα (να σκουπιστούν) ή να εξουδετερωθούν, ενώ η περιοχή πρέπει να καθαριστεί καλά με νερό και να σκουπιστεί τελείως. Τα υλικά που χρησιμοποιήθηκαν για την απορρόφηση της έκχυσης ενδεχομένως να πρέπει να απορριφθούν ως βιολογικά επικίνδυνα απόβλητα. Στη συνέχεια η περιοχή θα πρέπει να απολυμανθεί με κάποιο χημικό απολυμαντικό. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μην τοποθετείτε διαλύματα που περιέχουν χλωρίνη μέσα στο αυτόκλειστο! Απορρίπτετε όλα τα δείγματα και τα υλικά που χρησιμοποιούνται για τη διεξαγωγή της εξέτασης θεωρώντας ότι περιέχουν έναν μολυσματικό παράγοντα. Τα εργαστηριακά, τα χημικά και τα βιολογικά επικίνδυνα απόβλητα πρέπει να διαχειρίζονται και να απορρίπτονται σύμφωνα με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Για συστάσεις αναφορικά με τους κινδύνους και τις προφυλάξεις που σχετίζονται με κάποια χημικά συστατικά αυτού του κιτ εξέτασης, ανατρέξτε στα εικονογραφήματα που αναφέρονται στις ετικέτες και στις πληροφορίες που παρέχονται στο τέλος των οδηγιών ς. Το Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας διατίθεται στη διεύθυνση Προφυλάξεις ως προς το πρωτόκολλο Προετοιμασία Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων εξαρτάται από τη σωστή εφαρμογή της παρακάτω Ορθής Εργαστηριακής Πρακτικής: Μην χρησιμοποιείτε αντιδραστήρια που έχουν λήξει. Μην αναμιγνύετε ή συσχετίζετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες σε μία εξέταση. Πριν από τη, περιμένετε για 30 λεπτά μέχρι τα αντιδραστήρια να σταθεροποιηθούν σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Η ονομασία της εξέτασης, καθώς και ο ειδικός αναγνωριστικός αριθμός για την εξέταση, αναγράφονται στο πλαίσιο της κάθε μικροπλάκας. Αυτός ο ειδικός αναγνωριστικός αριθμός είναι επίσης τυπωμένος σε κάθε ταινία. Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2: Ειδικός αναγνωριστικός αριθμός = 93 Επαληθεύστε τον ειδικό αναγνωριστικό αριθμό πριν από τη. Εάν ο αναγνωριστικός αριθμός λείπει, ή είναι διαφορετικός από τον αναγραφόμενο αριθμό που αντιστοιχεί στην προς εξέταση δοκιμασία, η ταινία δεν θα πρέπει να χρησιμοποιείται. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για το διάλυμα έκπλυσης (R2, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: 20Χ: πράσινου χρώματος), το ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος υπεροξειδάσης (R8, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: ρυθμιστικό διάλυμα TMB, μπλε χρώματος), το χρωμογόνο (R9, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: TMB 11X., μωβ χρώματος) και το ανασχετικό διάλυμα (R10, αναγνωριστικό στοιχείο ετικέτας: 1N, κόκκινου χρώματος), είναι δυνατή η άλλων παρτίδων εκτός εκείνων που περιέχονται στο κιτ, με την προϋπόθεση ότι χρησιμοποιείται μόνο η ίδια παρτίδα κατά τη διάρκεια της ίδιας εξέτασης. Αυτά τα αντιδραστήρια μπορούν να χρησιμοποιηθούν και με άλλα προϊόντα της εταιρείας μας. Για περισσότερες πληροφορίες, επικοινωνήστε με την τεχνική εξυπηρέτησή μας. Διεξάγετε προσεκτικά την ανασύσταση των αντιδραστηρίων, αποφεύγοντας τυχόν επιμόλυνση. Χρησιμοποιείτε γυάλινα είδη καλά πλυμένα και ξεπλυμένα με απιονισμένο νερό ή, κατά προτίμηση, υλικά μιας ς. Μην αφήνετε τη μικροπλάκα να στεγνώσει κατά το διάστημα μεταξύ της ολοκλήρωσης της έκπλυσης και της έναρξης κατανομής των αντιδραστηρίων. Η ενζυμική αντίδραση είναι εξαιρετικά ευαίσθητη στα ιόντα μετάλλων. Κατά συνέπεια, κανένα μεταλλικό στοιχείο δεν πρέπει να έρχεται σε επαφή με τα διάφορα διαλύματα που περιέχουν συζυγή ή υπόστρωμα. 6 [GR]

7 Το διάλυμα ανάπτυξης (ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος + χρωμογόνο) πρέπει να χρωματιστεί ροζ. Η αλλαγή αυτού του ροζ χρώματος λίγα λεπτά μετά την ανασύσταση υποδεικνύει ότι το αντιδραστήριο δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί και πρέπει να αντικατασταθεί. Η προετοιμασία του διαλύματος ανάπτυξης μπορεί να πραγματοποιηθεί σε ένα καθαρό πλαστικό υποδοχέα ή γυάλινο δοχείο μίας ς που έχει προηγουμένως πλυθεί με 1N HCl, ξεπλυθεί με απεσταγμένο νερό και στεγνωθεί. Αυτό το αντιδραστήριο θα πρέπει να φυλάσσεται μακριά από το φως. Ποτέ μην χρησιμοποιείτε το ίδιο δοχείο για να κατανείμετε το συζυγές και το διάλυμα ανάπτυξης Επεξεργασία Μην αλλάζετε τη διαδικασία της δοκιμασίας. Μην διεξάγετε την εξέταση παρουσία αντιδραστικών υδρατμών (οξέα, αλκαλικά, αλδεΰδες) ή κόνεων που θα μπορούσαν να αλλοιώσουν την ενζυμική δραστηριότητα του συζυγούς. Χρησιμοποιείτε νέο ρύγχος κατανομής για κάθε δείγμα. Η έκπλυση των κοιλοτήτων αποτελεί βασικό στάδιο της διαδικασίας: τηρείτε τον συνιστώμενο αριθμό κύκλων έκπλυσης και βεβαιωθείτε ότι όλες οι κοιλότητες γεμίζουν πλήρως και, στη συνέχεια, εκκενώνονται πλήρως. Μια ανεπαρκής έκπλυση μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα. Ακολουθήστε προσεκτικά τις διαδικασίες έκπλυσης που περιγράφονται για να εξασφαλίσετε τη βέλτιστη απόδοση της εξέτασης. Με κάποια όργανα, ενδέχεται να απαιτείται η βελτιστοποίηση της διαδικασίας έκπλυσης (αύξηση του αριθμού των κύκλων του σταδίου της έκπλυσης και/ή του όγκου του ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης για κάθε κύκλο) προκειμένου να επιτευχθεί ένα αποδεκτό επίπεδο φόντου OD για το αρνητικό δείγμα. Για προσαρμογές και ειδικές διαδικασίες, επικοινωνήστε με την εταιρεία μας. 6. ΔΕΙΓΜΑΤΑ Συλλέξτε ένα δείγμα αίματος σύμφωνα με τις τρέχουσες πρακτικές. Οι εξετάσεις πρέπει να πραγματοποιούνται επί μη αραιωμένων δειγμάτων ορού ή πλάσματος (τα οποία έχουν συλλεχθεί με EDTA, κιτρικό νάτριο ή ACD). Η δείγματος που έχει ληφθεί από σωλήνες που περιέχουν ηπαρινικό λίθιο δεν συνιστάται. Χαμηλότερο σήμα παρατηρήθηκε σε δείγματα τα οποία βρέθηκαν θετικά για το αντιγόνο HCV. Τα δείγματα τα οποία περιέχουν συσσωματώματα πρέπει να καθαρίζονται με φυγοκέντρηση πριν από τη διεξαγωγή της εξέτασης. Τα αιωρούμενα ινώδη σωματίδια ή συσσωματώματα πιθανόν να παράγουν ψευδή θετικά αποτελέσματα. Τα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν στους +2-8 C εάν η εξέταση διεξάγεται εντός 7 ημερών, ή μπορούν να διατηρηθούν στην κατάψυξη στους -20 C. Μην επαναλαμβάνετε περισσότερους από 3 κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Τα δείγματα πρέπει να αποψύχονται σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Συνιστάται η ομογενοποίησή τους, ανακινώντας τα πριν από τη. Δείγματα τα οποία περιέχουν έως 120 g/l αλβουμίνης, 50 μg/l βιοτίνης και 200 mg/l χολυρεθρίνης, δείγματα τα οποία περιέχουν έως 33 g/l τριελαΐνης και δείγματα τα οποία περιέχουν έως 2 g/l αιμοσφαιρίνης δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα. Ωστόσο, δεν συνιστάται η μολυσμένων υπερλιπαιμικών δειγμάτων και δειγμάτων που έχουν υποστεί υπεραιμόλυση. Δεν συνιστάται η υποβολή των δειγμάτων σε υψηλή θερμοκρασία, καθώς κάτι τέτοιο μπορεί να μειώσει σημαντικά την ανίχνευση του αντιγόνου HCV. Εάν τα δείγματα πρόκειται να μεταφερθούν, θα πρέπει να συσκευάζονται σύμφωνα με τους κανονισμούς που ισχύουν σχετικά με τη μεταφορά αιτιολογικών παραγόντων και, κατά προτίμηση, να μεταφέρονται κατεψυγμένα. 7. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ 7.1. Απαιτούμενα υλικά που δεν παρέχονται Απεσταγμένο νερό. Υποχλωριώδες νάτριο (χλωρίνη οικιακής ς) και διττανθρακικό νάτριο. Απορροφητικό χαρτί. Αυτοκόλλητες μεμβράνες. Γάντια μίας ς. 7 [GR]

8 Προστατευτικά γυαλιά. Σωλήνες μίας ς. Αυτόματες ή ημιαυτόματες, ρυθμιζόμενες ή σταθερές πιπέτες ή πολυκάναλες πιπέτες που μπορούν να μετρούν και να χορηγούν 50 μl, 80 μl, 100 μl, 200 μl και 1 ml. Βαθμονομημένοι κύλινδροι των 10 ml, 200 ml και ml. Αναμικτήρας με στρόβιλο. Σύστημα έκπλυσης μικροπλακών, αυτόματο, ημιαυτόματο ή χειροκίνητο. Υδατόλουτρο ή αντίστοιχος επωαστήρας μικροπλακών, με ρύθμιση θερμοκρασίας στους 37 C ± 1 C (*). Δοχείο βιολογικά επικίνδυνων αποβλήτων. Αναγνώστης μικροπλακών εξοπλισμένος με φίλτρα 450, 490 nm και nm (*). (*) Επικοινωνήστε μαζί μας για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τον εξοπλισμό που συνιστάται από το τεχνικό μας τμήμα Προετοιμασία αντιδραστηρίων Αντιδραστήρια έτοιμα προς Αντιδραστήριο 1 (R1): Μικροπλάκα Κάθε πλαίσιο στήριξης που περιέχει 12 ταινίες είναι τυλιγμένο σε αεροστεγή συσκευασία. Ανοίξτε τη συσκευασία κόβοντας με το ψαλίδι ή με το νυστέρι 0,5 έως 1 εκ. πάνω από το σημείο σφραγίσματος. Ανοίξτε τη συσκευασία και αφαιρέστε το πλαίσιο. Επανατοποθετήστε τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στη συσκευασία. Κλείστε προσεκτικά τη συσκευασία με ταινία και επανατοποθετήστε τη στη φύλαξη στους +2-8 C. Αντιδραστήριο 6 (R6): Συζυγές 1 Ανακινήστε πριν από τη για να ομογενοποιήσετε. Αντιδραστήριο 7 (R7): Συζυγές 2 Ανακινήστε πριν από τη για να ομογενοποιήσετε Αντιδραστήρια προς ανασύσταση Αντιδραστήριο 2 (R2): Συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης (20X) Αραιώστε το διάλυμα έκπλυσης σε αναλογία 1:20 σε απεσταγμένο νερό για να δημιουργήσετε έτοιμο προς ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης. Προετοιμάστε 800 ml για μία πλάκα των 12 ταινιών. Αντιδραστήριο 8 (R8) + Αντιδραστήριο 9 (R9): Διάλυμα ενζυμικής ανάπτυξης Αραιώστε το χρωμογόνο (R9) στο ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος σε αναλογία 1:11 (π.χ. 1 ml αντιδραστηρίου R ml αντιδραστηρίου R8) λαμβάνοντας υπόψη ότι τα 10 ml είναι αναγκαία και επαρκή για την επεξεργασία 12 ταινιών. Ομογενοποιήστε. Αντιδραστήριο 5a (R5a) + Αντιδραστήριο 5b (R5b): Διάλυμα εργασίας (R5). Αδειάστε το περιεχόμενο του αραιωτικού R5b στο φιαλίδιο λυοφιλιωμένου Ag R5. Επανατοποθετήστε το πώμα στο φιαλίδιο και αφήστε να σταθεί για 10 λεπτά σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (18-30 C) ανακινώντας το φιαλίδιο κατά διαστήματα για να διευκολύνετε τη διάλυση Διαδικασία δοκιμασίας Ακολουθήστε αυστηρά τη διαδικασία. Χρησιμοποιήστε ορούς δειγμάτων ελέγχου αρνητικού και θετικού σε κάθε εξέταση προκειμένου να επικυρώσετε την ποιότητά της. Ακολουθήστε την Ορθή Εργαστηριακή Πρακτική: 1) Εξετάστε με προσοχή τη διαδικασία κατανομής και αναγνώρισης των δειγμάτων που θα ακολουθήσετε. 2) Προετοιμάστε το αραιωμένο διάλυμα έκπλυσης R2 και το διάλυμα εργασίας του δείγματος ελέγχου θετικού αντιγόνου (R5a + R5b). (ανατρέξτε στην παράγραφο 7.2) 3) Βγάλτε το πλαίσιο στήριξης και τον απαιτούμενο αριθμό ταινιών (R1) από την προστατευτική συσκευασία. Επανατοποθετήστε τις μη χρησιμοποιημένες ταινίες στη συσκευασία τους. Κλείστε τη συσκευασία και επανατοποθετήστε τη στη φύλαξη στους +2-8 C. 4) Κατανείμετε στην κοιλότητα με την ακόλουθη σειρά (συνιστώμενη κατανομή πλάκας): 100 μl του συζυγούς 1 (R6) σε κάθε κοιλότητα, στη συνέχεια 8 [GR]

9 50 μl δείγματος ελέγχου αρνητικού (R3) στην κοιλότητα A1, 50 μl δείγματος ελέγχου θετικού (R4) στις κοιλότητες B1, C1, D1, 50 μl του διαλύματος εργασίας του δείγματος ελέγχου θετικού αντιγόνου (R5a + R5b) στην κοιλότητα E1, 50 μl του πρώτου δείγματος στην κοιλότητα F1, 50 μl του δεύτερου δείγματος στην κοιλότητα G1, κλπ. Ομογενοποιήστε το μίγμα με 3 τουλάχιστον αναρροφήσεις ή μέσω ενός αναδευτήρα μικροπλάκας επί 5 δευτερόλεπτα. Εάν η διαδικασία κατανομής των δειγμάτων διαρκέσει περισσότερο από 10 λεπτά, τότε συνιστάται η κατανομή των δειγμάτων ελέγχου αρνητικού και θετικού μετά από τα προς εξέταση δείγματα. Ανάλογα με το σύστημα που χρησιμοποιείται, είναι δυνατή η αλλαγή της θέσης των δειγμάτων ελέγχου ή της σειράς κατανομής. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μετά από την κατανομή των δειγμάτων, η κοιλότητα που περιέχει το δείγμα (ή τα δείγματα ελέγχου) αποκτά μωβ προς μπλε χρώμα. Η παρουσία (δείγματος + συζυγούς 1) στις κοιλότητες μπορεί να επαληθευτεί με φασματοφωτομετρική ανάγνωση στα 620 nm (ανατρέξτε στην παράγραφο 7.7). 5) Εάν είναι εφικτό, καλύψτε την πλάκα με νέα αυτοκόλλητη μεμβράνη. 6) Επωάστε τη μικροπλάκα για 90 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 C ± 1 C. 7) Εάν απαιτείται, αφαιρέστε την αυτοκόλλητη μεμβράνη. Αναρροφήστε τα περιεχόμενα όλων των κοιλοτήτων σε ένα δοχείο υγρών αποβλήτων και προσθέστε σε κάθε κοιλότητα τουλάχιστον 370 μl διαλύματος έκπλυσης. Αναρροφήστε ξανά και επαναλάβετε την έκπλυση για τουλάχιστον 5 φορές. Ο υπολειπόμενος όγκος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 10 μl (εάν είναι απαραίτητο, στεγνώστε τις ταινίες αναποδογυρίζοντάς τις επάνω σε απορροφητικό χαρτί). Εάν διαθέτετε αυτόματο πλυντήριο, ακολουθήστε τον ίδιο κύκλο λειτουργιών. 8) Κατανείμετε αμέσως 100 μl διαλύματος συζυγούς 2 (R7) μέσα σε κάθε κοιλότητα της πλάκας. Το συζυγές πρέπει να αναδευτεί ελαφρώς πριν από τη του. Καλύψτε, εάν είναι εφικτό, με μια νέα αυτοκόλλητη μεμβράνη και επωάστε για 30 λεπτά (± 5 λεπτά) στους 37 C ± 1 C. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το συζυγές χρωματίζεται πράσινο. Η παρουσία του συζυγούς στις κοιλότητες μπορεί να επαληθευτεί με φασματοφωτομετρική ανάγνωση στα 620 nm (ανατρέξτε στην παράγραφο 7.7). 9) Αφαιρέστε την αυτοκόλλητη μεμβράνη, αδειάστε όλες τις κοιλότητες με αναρρόφηση και πλύνετε τουλάχιστον 5 φορές όπως περιγράφηκε παραπάνω. 10) Προετοιμάστε το ενζυμικό διάλυμα ανάπτυξης (αντιδραστήριο R8 + R9). 11) Κατανείμετε αμέσως 80 μl από το προετοιμασμένο ενζυμικό διάλυμα ανάπτυξης (R8 + R9) σε όλες τις κοιλότητες. Αφήστε την αντίδραση να εξελιχθεί στο σκοτάδι για 30 λεπτά (± 5 λεπτά) και σε θερμοκρασία δωματίου (18-30 C). Μην χρησιμοποιείτε αυτοκόλλητη μεμβράνη κατά τη διάρκεια αυτής της επώασης. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η κατανομή του διαλύματος ανάπτυξης, το οποίο χρωματίζεται ροζ, μπορεί να ελεγχθεί οπτικά σε αυτό το στάδιο διαχείρισης. Υπάρχει σαφής διαφορά χρωματισμού μεταξύ μιας άδειας κοιλότητας και μιας κοιλότητας που περιέχει διάλυμα υποστρώματος με ροζ χρώμα. (Ανατρέξτε στην παράγραφο 7.7). 12) Προσθέστε 100 μl ανασχετικού διαλύματος (R10) ακολουθώντας την ίδια αλληλουχία και τον ίδιο ρυθμό κατανομής όπως εφαρμόστηκε στο διάλυμα ανάπτυξης. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η κατανομή του άχρωμου ανασχετικού διαλύματος μπορεί να ελεγχθεί οπτικά σε αυτό το στάδιο διαχείρισης. Ο χρωματισμός του υποστρώματος ροζ (για τα αρνητικά δείγματα) ή μπλε (για τα θετικά δείγματα) χάνεται από τις κοιλότητες οι οποίες γίνονται άχρωμες (για τα αρνητικά δείγματα) ή κίτρινες (για τα θετικά δείγματα) μετά από την προσθήκη ανασχετικού διαλύματος. 13) Σκουπίστε προσεκτικά το κάτω μέρος κάθε πλάκας. Περιμένετε τουλάχιστον 4 λεπτά μετά την προσθήκη του ανασχετικού διαλύματος και, εντός 30 λεπτών από τη διακοπή της αντίδρασης, πραγματοποιήστε ανάγνωση της οπτικής πυκνότητας στα 450/ nm μέσω του αναγνώστη πλακών. 14) Ελέγξτε εάν συμφωνούν οι φασματοφωτομετρικές και οπτικές μετρήσεις, και η κατανομή των πλακών και των δειγμάτων με τη διαδικασία αναγνώρισης. 9 [GR]

10 7.4. Ποιοτικός έλεγχος Χρησιμοποιήστε τα δείγματα ελέγχου θετικού (R4 και R5) και το δείγμα ελέγχου αρνητικού (R3) σε κάθε εκτέλεση εξέτασης για να επικυρώσετε τη δοκιμασία. (Ανατρέξτε στην παράγραφο 7.5) 7.5. Κριτήρια επικύρωσης εξέτασης Η εξέταση επικυρώνεται όταν πληρούνται οι ακόλουθες συνθήκες: 1) Για το δείγμα ελέγχου αρνητικού R3: Η τιμή της μετρούμενης απορροφητικότητας πρέπει να είναι μικρότερη από το 60% επί της οριακής τιμής: O.D. < οριακή τιμή x 0,6 2) Για το δείγμα ελέγχου θετικού R4 των αντισωμάτων: 0,800 Μέση τιμή O.D. R Εάν μία από τις επιμέρους τιμές του δείγματος ελέγχου θετικού R4 αποκλίνει περισσότερο από 30% από τη μέση τιμή, αγνοήστε την τιμή και συνεχίστε επαναλαμβάνοντας τον υπολογισμό με τις δύο υπόλοιπες τιμές του δείγματος ελέγχου θετικού. 3) Για το διάλυμα εργασίας R5: O.D. > 0, Υπολογισμός/Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Η οριακή τιμή προσδιορίζεται με το δείγμα ελέγχου θετικού R4: Υπολογίστε τη μέση τιμή της μετρούμενης απορροφητικότητας για το δείγμα ελέγχου θετικού R4. Υπολογίστε την οριακή τιμή: Μέση τιμή OD R4 CO = Η παρουσία ή απουσία αντισωμάτων αντί-hiv1 και/ή καψιδικού αντιγόνου HCV προσδιορίζεται συγκρίνοντας την απορροφητικότητα που καταγράφηκε με την υπολογισμένη οριακή τιμή για κάθε δείγμα. Για κάθε δείγμα υπολογίζεται η ακόλουθη αναλογία: Αναλογία = OD δείγματος / τιμή CO Σύμφωνα με το Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2, τα δείγματα με οπτική πυκνότητα χαμηλότερη από την οριακή τιμή θεωρούνται αρνητικά (αναλογία < 1). Τα αποτελέσματα τα οποία κυμαίνονται ακριβώς κάτω από την οριακή τιμή (CO-10 % < O.D. < CO, αναλογία μεταξύ 0,9 και 1) θα πρέπει, ωστόσο, να ερμηνεύονται με προσοχή. Συνιστάται να πραγματοποιείται επανεξέταση εις διπλούν των αντίστοιχων δειγμάτων, εφόσον το επιτρέπουν τα συστήματα και οι εργαστηριακές διαδικασίες. Σύμφωνα με το Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2, τα δείγματα με οπτική πυκνότητα μεγαλύτερη ή ίση με την οριακή τιμή (αναλογία 1) θεωρούνται αρχικά θετικά. Αυτά θα πρέπει να επανεξετάζονται εις διπλούν πριν από την τελική ερμηνεία. Εάν μετά την επανεξέταση της τιμής αναλογίας, μία τουλάχιστον από τις 2 επαναλήψεις είναι ίση ή μεγαλύτερη από 1, το αρχικό αποτέλεσμα μπορεί να επαναληφθεί και το δείγμα ορίζεται ως θετικό από το Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2. Εάν οι τιμές αναλογίας των 2 επαναλήψεων είναι μικρότερες από 1, το αρχικό αποτέλεσμα δεν μπορεί να επαναληφθεί και το δείγμα ορίζεται αρνητικό. Τα δείγματα τα οποία έχουν επανεξεταστεί δύο φορές και έχουν βρεθεί αρνητικά με το Monolisa HCV Ag- Ab ULTRA V2, αλλά με μία μόνο τιμή κοντά στην οριακή τιμή (αναλογία μεταξύ 0,9 και 1) θα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Συνιστάται η επανεξέταση του ασθενούς με μια άλλη μέθοδο ή με ένα άλλο δείγμα. Σε περίπτωση πολύ χαμηλής οπτικής πυκνότητας για τα εξετασμένα δείγματα (αρνητική OD) και όταν η παρουσία των δειγμάτων καθώς και του αντιδραστηρίου ελέγχεται, τα αποτελέσματα μπορούν να ερμηνευτούν ως αρνητικά. 10 [GR]

11 Συνιστάται να επιβεβαιώνετε τα θετικά δείγματα σύμφωνα με τις τρέχουσες συστάσεις της εκάστοτε χώρας και τους αλγόριθμους Φασματοφωτομετρική επαλήθευση μεταφοράς δείγματος και συζυγούς με πιπέτα (προαιρετικά) Επαλήθευση μεταφοράς δείγματος και συζυγούς 1 (R6) με πιπέτα Η παρουσία του συζυγούς 1 (R6) και του δείγματος στην κοιλότητα μπορεί να επαληθευτεί μέσω αυτόματης ανάγνωσης στα 620 nm. Κάθε κοιλότητα που περιέχει δείγμα και συζυγές 1 (R6) πρέπει να εμφανίζει οπτική πυκνότητα μεγαλύτερη από 0,800. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μετά την προσθήκη του δείγματος, το συζυγές 1 (R6) αλλάζει χρώμα, από μωβ σε μπλε. Επαλήθευση μεταφοράς συζυγούς 2 (R7) με πιπέτα Το συζυγές 2 (R7) χρωματίζεται πράσινο. Η παρουσία του συζυγούς 2 (R7) στις κοιλότητες μπορεί να ελεγχθεί μέσω αυτόματης ανάγνωσης στα 620 nm: Η τιμή της οπτικής πυκνότητας σε κάθε κοιλότητα θα πρέπει να είναι μεγαλύτερη από 0,300 (τιμή χαμηλότερη από αυτή συνήθως υποδεικνύει ανεπαρκή χορήγηση του συζυγούς). Επαλήθευση μεταφοράς διαλύματος ανάπτυξης με πιπέτα Η παρουσία του ροζ διαλύματος ανάπτυξης στην κοιλότητα μπορεί να επαληθευτεί μέσω αυτόματης ανάγνωσης στα 490 nm. Μια κοιλότητα που περιέχει διάλυμα ανάπτυξης πρέπει να έχει οπτική πυκνότητα μεγαλύτερη από 0,100 (μικρότερη οπτική πυκνότητα υποδεικνύει ανεπαρκή χορήγηση του διαλύματος ανάπτυξης). Υπάρχει σαφής διαφορά χρώματος στις άδειες κοιλότητες, οι οποίες γίνονται ροζ από άχρωμες, μετά την προσθήκη ενός προετοιμασμένου διαλύματος χρωμογόνου υποστρώματος. 8. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΣ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Λόγω των ποικίλων ανοσολογικών αποκρίσεων των ασθενών που έχουν προσβληθεί από τον ιό της ηπατίτιδας C (ειδικότερα κατά τις ορομετατροπές), ενδέχεται να παρατηρηθούν κάποιες διαφορές ανίχνευσης μεταξύ των εξετάσεων, ανάλογα με τον τύπο αντιγονικών πρωτεϊνών που χρησιμοποιείται. Κατά συνέπεια, ένα αρνητικό αποτέλεσμα κατά την εξέταση ελέγχου δεν αποκλείει την πιθανότητα έκθεσης σε ή μόλυνσης από τον ιό της ηπατίτιδας C. Σύμφωνα με την καταγεγραμμένη εμπειρία, οι φορείς HCV που υποβάλλονται σε θεραπεία ανοσοκαταστολής ή που παρουσιάζουν συλλοίμωξη με HIV-HCV ενδέχεται να έχουν ειδικότερα χαμηλά επίπεδα αντισωμάτων, κάτω από το όριο ανίχνευσης των εξετάσεων HCV. Οποιαδήποτε τεχνική ELISA ενδέχεται να προκαλέσει ψευδώς θετικές αντιδράσεις. Συνιστάται ο έλεγχος της προσδιοριστικότητας της αντίδρασης οποιουδήποτε δείγματος έχει βρεθεί επαναλαμβανόμενα θετικό, σύμφωνα με τα κριτήρια ερμηνείας του κιτ Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2, χρησιμοποιώντας την κατάλληλη μέθοδο: χρησιμοποιώντας μεμονωμένα μια εξέταση ελέγχου αντισωμάτων ELISA αντί-hcv ή σε συνδυασμό με μια εξέταση ανίχνευσης αντισωμάτων αντί-hcv ανοσοαποτύπωσης, ώστε να αποδειχθεί η παρουσία αντισωμάτων αντί-hcv. Εάν απαιτείται, χρησιμοποιήστε μια εξέταση μοριακής βιολογίας για το γονιδίωμα HCV. Η χρωματομετρική μέθοδος για τον έλεγχο της απόθεσης των δειγμάτων και/ή των συζυγών και/ή του διαλύματος ανάπτυξης δεν επιτρέπει τον έλεγχο της ακρίβειας των κατανεμημένων όγκων και αποκαλύπτει μόνο την παρουσία του δείγματος και/ή των συζυγών και/ή του διαλύματος ανάπτυξης. Ο ρυθμός των λανθασμένων απαντήσεων με αυτήν τη μέθοδο σχετίζεται άμεσα με την ακρίβεια του χρησιμοποιούμενου συστήματος (ο αθροιστικός συντελεστής διακύμανσης της χορήγησης και της ανάγνωσης άνω του 10% μειώνει σημαντικά την ποιότητα της επαλήθευσης). Η της εξέτασης Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 δεν είναι εγκεκριμένη για σειρές δειγμάτων ή για αραιωμένα δείγματα. Κατ' εξαίρεση, στο συζυγές 1 (R6) ενδέχεται να παρατηρηθούν σωματίδια, η παρουσία των οποίων σε καμία περίπτωση δεν μεταβάλλει την ποιότητα του αντιδραστηρίου. 9. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ 9.1. Μέτρηση ακρίβειας Η αναπαραγωγιμότητα και η ενδιάμεση ακρίβεια έχουν προσδιοριστεί με τη δειγμάτων με διαφορετικές συγκεντρώσεις αντισωμάτων αντί-hcv και αντιγόνων HCV. Τα δείγματα εξετάστηκαν 30 φορές κατά τη διάρκεια της ίδιας σειράς εξετάσεων προκειμένου να προσδιοριστεί η επαναληψιμότητα. 11 [GR]

12 Η ενδιάμεση ακρίβεια αξιολογήθηκε με την εξέταση των δειγμάτων εις διπλούν κατά τη διάρκεια 20 ημερών σε 2 ανεξάρτητες εκτελέσεις κάθε μέρα. Η αναλογία σημαίνει ότι υπολογίστηκαν οι τυπικές αποκλίσεις και οι συντελεστές διακύμανσης (CV) Επαναληψιμότητα Δείγματα Αρ. Μέση τιμή αναλογιών Τυπική απόκλιση Συντελεστή ς διακύμανσ ης % Αρνητικό S1 30 0,23 0,024 10,4 Αντιγόνο HCV θετικό Αντισώματ α αντί-hcv θετικά S2 30 1,21 0,048 4,0 S3 30 1,43 0,053 3,7 S6 30 7,18 0,166 2,3 S4 30 1,42 0,046 3,2 S5 30 1,35 0,083 6,1 S7 30 6,73 0,153 2,3 Οι συντελεστές διακύμανσης που αποκτήθηκαν σε 6 θετικά δείγματα ήταν <10% Ενδιάμεση ακρίβεια Δείγματα Αρνητι κό Αντιγό νο HCV θετικό Αντισ ώματα αντί- HCV θετικά S1 S2 bis S3 S6 S4 S5 S7 Α ρ Μέση τιμή αναλο γιών Εντός δοκιμασίας Τυπι κή απόκ λιση Συντελ εστής διακύμ ανσης % Μεταξύ δοκιμασιών / χειριστών Τυπι κή απόκ λιση Συντελ εστής διακύμ ανσης % Μεταξύ ημερών Τυπι κή απόκ λιση Συντελ εστής διακύμ ανσης % Συνολική αναπαραγωγιμ ότητα Τυπι κή απόκ λιση Συντελ εστής διακύμ ανσης % 0,22 0,017 7,5 0,028 12,5 0,029 12,7 0,043 19,4 2,80 0,143 5,1 0,277 9,9 0,283 10,1 0,421 15,0 1,56 0,124 7,9 0,129 8,2 0, ,197 12,6 6,69 0,500 7,5 0,621 9,3 0,557 8,3 0,973 14,5 1,57 0,062 3,9 0,125 8,0 0* 1,75 0,075 4,3 0,164 9,3 0* 7,69 0,285 3,7 0,531 6,9 0* *: Η αρνητική τιμή διακύμανσης υπολογίζεται ως 0. Δεν διατίθετ αι Δεν διατίθετ αι Δεν διατίθετ αι Οι συντελεστές διακύμανσης που αποκτήθηκαν σε 6 θετικά δείγματα δεν υπερβαίνουν το 15%. 0,140 8,9 0,181 10,3 0,603 7, Κλινική απόδοση Η απόδοση του Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 έχει προσδιοριστεί από την εξέταση δειγμάτων από τυχαίους αιμοδότες, νοσηλευόμενους ασθενείς, ασθενείς με οξείες και χρόνιες λοιμώξεις από τον ιό της ηπατίτιδας C, και ασθενείς με κλινικές ενδείξεις που δεν σχετίζονται με μόλυνση από τον ιό της ηπατίτιδας C. Οι μελέτες διεξήχθησαν σε 2 τοποθεσίες αιμοδοσίας, σε ένα νοσοκομείο και στις εγκαταστάσεις της Bio-Rad Διαγνωστική προσδιοριστικότητα Η μελέτη διεξήχθη σε δείγματα ορού και πλάσματος EDTA τα οποία συλλέχθηκαν σε 2 κέντρα δοτών από τυχαίους δότες. Διεξήχθη επίσης μελέτη προσδιοριστικότητας σε δείγματα από νοσηλευόμενους ασθενείς. 12 [GR]

13 Όλα τα δείγματα εξετάστηκαν με μια εξέταση αντί-hcv με πιστοποίηση CE. Πληθυσμός Αιμοδότες Τοποθεσία Αρ.1 Τύπος δείγματος Αριθμός Aντιδραστικά δείγματα που έχουν επαναληφθεί (RR) Προσδιοριστικότητα (%) ορός /537 πλάσμα /2002 Αρ.2 ορός /2638 Διάστημα αξιοπιστίας 95% Αρ.1 + Αρ ,94% 5174/ ,83% 99,99% Νοσηλευόμενοι ασθενείς Αρ.3 ορός ,80% 501/502 98,92% - 100,00% *: 3 δότες με ακαθόριστο αποτέλεσμα μετά από εξέταση αναφοράς αφαιρέθηκαν από τους υπολογισμούς Διαγνωστική ευαισθησία Η διαγνωστική ευαισθησία μελετήθηκε σε 575 δείγματα από ασθενείς προσβεβλημένους από τον ιό της ηπατίτιδας C. Μεταξύ αυτών των δειγμάτων, 25 προήλθαν από ασθενείς από τους οποίους ελήφθη δείγμα εντός 24 ωρών πριν από την ανάλυση. Εξετάστηκαν 481 διαφορετικά γονοτυποποιημένα δείγματα (1, 2, 3, 4, 5, 6). Πίνακας 1: Εξετασμένοι γονότυποι Γονότυποι Σύνο (2 2a/c, 2a, (4, 4a, 4a/c, 4a/c/d, (1, 1a, 1b, 1a/b) (3, 3a, 3b, 3c) (5, 5a) (6, 6a, 6a/b, 6n) λο 2b, 2b/3) 4c, 4e, 4h, 4n, 4r) Αρ Η διαγνωστική ευαισθησία επί του συνόλου των εξετασμένων δειγμάτων είναι 100% (575/575) με ένα διάστημα αξιοπιστίας της τάξεως του 95% από [99,4-100,0]. Δείγματα από ασθενείς με οξεία λοίμωξη: 39 πάνελ ορομετατροπής (10 καψιδικά προφίλ, 10 προφίλ NS3 και 19 πολλαπλά προφίλ) εξετάστηκαν με τη δοκιμασία Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 και συγκρίθηκαν με μια συνδυαστική δοκιμασία αντιγόνων/αντισωμάτων και με μια δοκιμασία αντισωμάτων αντί-hcv, και τα δύο με πιστοποίηση CE. Η πρωιμότητα της ανίχνευσης μετρήθηκε για όλα τα πάνελ. Μεταξύ αυτών των 39 πάνελ, ένα πάνελ δεν ανιχνεύθηκε από το Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 και τρία πάνελ δεν ανιχνεύθηκαν από τη συνδυαστική δοκιμασία Ag-Ab που εκτελέστηκε για σύγκριση. Από τα 38 πάνελ που ανιχνεύθηκαν από το Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2, 5 παρουσίασαν προγενέστερη ανίχνευση, 27 παρουσίασαν ισοδύναμη ανίχνευση και 6 παρουσίασαν μεταγενέστερη ανίχνευση σε σύγκριση με τη συνδυαστική δοκιμασία Ag-Ab. Σε σύγκριση με μια εξέταση αντισωμάτων αντί- HCV, 28 πάνελ παρουσίασαν προγενέστερη ανίχνευση, 9 παρουσίασαν ισοδύναμη ανίχνευση και 1 παρουσίασε μεταγενέστερη ανίχνευση. Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 έναντι συνδυαστικής δοκιμασίας Ag-Ab HCV Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2 έναντι δοκιμασίας Αντί-HCV Αριθμός πάνελ Προγενέστερη ανίχνευση 5 28 Ισοδύναμη ανίχνευση 27 9 Μεταγενέστερη ανίχνευση [GR]

14 9.3. Αναλυτική προσδιοριστικότητα / μελέτη διασταυρούμενης αντιδραστικότητας Με την εξέταση Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2, εξετάστηκαν 365 δείγματα δυνητικής παρεμβολής τα οποία περιείχαν αντισώματα κατά παθογόνων που θα μπορούσαν να οδηγήσουν σε μολυσματικές ασθένειες (Κυτταρομεγαλοϊός, ιός Epstein Barr, VZV, ιός ιλαράς, ιός ερυθράς, ιός παρωτίτιδας, ιός έρπητα, ιός γρίπης, ιός ηπατίτιδας A, ιός ηπατίτιδας B, HIV 1/2, HTLV 1/2, Σύφιλη, Toxoplasma gondii, Δάγγειος πυρετός, Chagas), δείγματα από ομάδες κινδύνου (ασθενείς που υποβάλλονται σε αιμοκάθαρση, που πάσχουν από μη ηπατική κίρρωση, έγκυες γυναίκες, πολύτοκες γυναίκες) ή δείγματα από ασθενείς με διαταραχές του ανοσοποιητικού (αυτοαντισώματα, ρευματοειδής παράγοντας, αντισώματα έναντι ποντικών, και μυελώματα). Δύο δείγματα βρέθηκαν θετικά μετά από επανάληψη με την εξέταση Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA V2. Η προσδιοριστικότητα που παρατηρήθηκε σε αυτόν τον πληθυσμό-στόχος της τάξεως του 99,45% (363/365) ήταν παρόμοια με την προσδιοριστικότητα των κλινικών δειγμάτων Φαινόμενο «αγκίστρου» Η πιθανή εμφάνιση του φαινομένου του «αγκίστρου» μελετήθηκε με την εξέταση 5 δειγμάτων υψηλής τιτλοδότησης σε διαφορετικές αραιώσεις. Η ισοδυναμία των αποτελεσμάτων που παρατηρήθηκε μεταξύ μη αραιωμένων και αραιωμένων δειγμάτων υποδεικνύει την απουσία του φαινομένου του «αγκίστρου». 10. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ Bhartia A.R., Letendrea S.L., Wolfsona T. Clinical variables identify seronegative HCV co-infection in HIV-infected individuals. J. of Clin. Virol. 2011, 52 : Bouvier-Alias M, Patel K, Dahari H, Beaucourt S, Larderie P, Blatt L, Hezode C, Picchio G et al. Clinical utility of total HCV core antigen quantification: a new indirect marker of HCV replication. Hepatology. 2002, 36 : Choo Q.L., Richman K.H., Han J.H., Berger K., Lee C., Dong C., Gallegos C., Coit D., Medina-Selby A., Barp P.J., Weiner A.J., Bradley D.W., Kuo G. and Houghton M. Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1991, 88: EASL EASL Clinical Practice Guidelines: Management of hepatitis C virus infection. Journal of Hepatology. 2011, 55(2): Jackson BR, Busch MP, Stramer SL, AuBuchon JP. The cost-effectiveness of NAT for HIV, HCV and HBV in whole blood donations. Transfusion. 2003, 43: Lambert N. Value of HCV Antigen-Antibody Combined HCV Assay in Hepatitis C Diagnosis. Dev. Biol. (Basel), 2007, 127: Laperche S., Le Marrec N., Girault A., Bouchardeau F., Servant-Delmas A., Maniez-Montreuil M., Gallian P., Levayer T., Morel P., Simon N. Simultaneous detection of hepatitis C virus (HCV) core antigen and anti-hcv antibodies improves the early detection of HCV infection. J. Clin. Microbiol. 2005, 43(8): Nübling CM, Unger G, Chudy M, Raia S, Löwer J. Sensitivity of HCV core antigen and HCV RNA detection in the early infection phase. Transfusion : Rider P.J. and Liu F. Crosstalk between HIV and hepatitis C virus during co-infection. BMC Medicine. 2012, 10: 32. Schnuriger A., Dominguez S., Valantin M.A., Tubiana R., Duvivier C., Ghosn J., Simon A., Katlama C. and Thibault V. Early Detection of Hepatitis C Virus Infection by Use of a New Combined Antigen-Antibody Detection Assay : Potential Use for High-Risk Individuals. J. Clin. Microbiol. 2006, [GR]

15 Strader DB, Wright T, Thomas DL, Seeff LB. Diagnosis, management and treatment of Hepatitis C. AASLD Practice Guideline. Hepatology. 2004, 39 : Widell A., Busch M. Exposed or not exposed - that is the question: evidence for resolving and abortive hepatitis C virus infections in blood donors. Transfusion. 2009, 49: [GR]

16 16 [GR]

17 17 [GR]

18 18 [GR]

19 19 [GR]

20 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare Marnes-la-Coquette - Γαλλία Τηλ.: +33 (0) /2014 Φαξ: +33 (0) [GR]