Efficiancy of Some Serological Test Used in Diagnosis of Toxoplasmosis Among Women in Child Bearing Age in Nenava Governorate

Transcript

1 مجلة علوم الرافدين المجلد 16 العدد 6 خاص بعلوم الحياة ص كفاءة بعض الاختبارات المصلية المستخدمة في تشخيص داء المقوسات القطط) (داء للنساء بسن الانجاب في محافظة نينوى فرح حازم الخفاف فرع الادوية كلية الصيدلة جامعة الموصل باسمة احمد عبداالله قسم علوم الحياة كلية العلوم جامعة الموصل (تاريخ الاستلام 2002/8/24 تاريخ القبول 2002/11/6) الملخص قورنت في هذه الدراسة كفاءة بعض الاختبارات المصلية المستخدمة في تشخيص داء المقوسات لدى النساء بسن الانجاب واللاتي تراوحت اعمارهن بين - 45) سنة في محافظة نينوى. اذ فحص Flourescent 20 ) (50) نموذجا مصليا بالاختبارات المصلية الثلاثة اختبار تا لق الضد غير المباشر Enzyme-Linked واختبار ارتباط الانزيم للادمصاص المناعي Antibody Test (IFAT).Latex Agglutination Test (LAT) واختبار تلازن اللاتكس Immunosurbent Assay (ELISA) اعطى اختبار تلازن اللاتكس (LAT) اعلى عدد للحالات الموجبة وفي جميع الفي ات العمرية قيد الدراسة. اذ بلغت (33) حالة موجبة شكلت نسبة (%66) يليه اختبار ارتباط الانزيم للادمصاص المناعي (IgG-ELISA) وبنسبة (%52) ثم اختبار تالق الضد غير المباشر وبنسبة (%42) كما ان اختبار (LAT) كان اكثر كفاءة في الكشف عن الاصابة في النساء الحوامل وبنسبة (%86.6). Efficiancy of Some Serological Test Used in Diagnosis of Toxoplasmosis Among Women in Child Bearing Age in Nenava Governorate Farah H. Al-Khaffaf Department of Pharmacology College of Pharmacy Mosul University Basima A. Abdullah Department of Biology College of Science Mosul University ABSTRACT In this study we compared the efficiency of some serological tests which used for diagnosis of Toxoplasmosis among women in child bearing age, there ages ranging 202

2 203 فرح حازم الخفاف و باسمة احمد عبد االله between (45-20 ) years in Nenava Governorate. Fifty serum samples were examined using the three serological tests Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT), Enzyme- Linked Immunosorbent Assay (ELISA) and Latex Agglutination Test (LAT). The results shows that the LAT gives the highest positive number among all age group in this study, which reach (32) cases (66%) followed by IgG-ELISA (52%) and IFAT (42%). The results also shows that the LAT is more efficient in detection the infective pregnant women (86.6%). المقدمة تعتبر المقوسات الكونيدية Toxoplasma gondii من الاوالي الطفيلية التي تستطيع ان تخمج العديد من الحيوانات ذوات الدم الحار وبضمنها الانسان مسببة المرض المسمى بداء المقوسات.(Mcleod and Remington, 2000) Toxoplasmosis لايعتمد على الاعراض السريرية في تشخيص هذا الداء بل يتم التشخيص عن طريق عزل الطفيلي م ن ال سواي ل الج سمية كال دم والان سجة كالم شيمة بع د الحق ن ف ي الفي ران الختبري ة (AT) بالاضافة الى الفحوصات المصلية مثل فحص التلازن (Wilson and McAuley, (1999 وفحص ارتباط الخميرة للادمصاص المناعي (IgG-ELISA) واختبار تالق الضد غير المباشر (IFAT) والتي تعتبر من الطرق الشاي عة في تشخيص هذا الداء للتحري عن الاضداد المضادة له.(Wilson et al., 1990) يتضمن فحص تلازن اللاتكس (LAT) ا ستخدام حبيبات اللاتكس الخاملة المصنوعة من متعدد الستيرين (Polystyrene) والمغطاة بمستضد الطور سريع التكاثر الذي يعطي شبكة من معقدات الضد والمستضد عند وجود الاضداد المتخصصة له في المصل والتي تتلازن وتترسب خارج المحلول (Walls (1983 Remington,.and ويتميز هذا الفحص بسهولة اجراي ه وكلفته المناسبة وقلة الوقت والجهد اللازمين لاجراي ه (1990 al.,.(wilson et اما فحص ارتباط الخميرة للادمصاص المناعي IgG- ELISA فيعتمد على معاملة الاضداد الموجودة في مصول المرضى والمرتبطة مع المستضدات الملتصقة في قاع صفاي ح المعيارية بالكلوبيولينات المضادة المعلمة بالانزيم ويتم القياس الكمي للانزيم عن طريق اضافة المادة الاساس وتفاعلها معه ليعطي اللون الذي يمكن قياس شدته التي تتناسب مع كمية الاضداد المرتبطة 1980) al.,.(balsari et al., 1980; Lin et ان حساسية هذا الفحص مرتفعة في كشف الخمج في طوره المزمن اذ يعتمد على استخدام المستضدات الذاي بة في الماء ويستطيع الكشف عن الكلوبيولين المناعي الاصابة IgG في مراحل متاخرة من (1982.(Woodward, ان فحص تا لق الضد غير المباشر فيعتمد على ارتباط المستضدات مع الاضداد النوعية الموجودة في مصول المرضى وبعد التحضين يتم الكشف عن هذا الارتباط باضافة مضاد الكلوبيولين المناعي المعلم بالفلورسين (2000 al., (Benjamini et وعند فحص الشريحة تحت

3 204 كفاءة بعض الاختبارات المصلية المستخدمة في المجهر التالقي يظهر الطفيلي متالقا بلون اخضر مصفر ساطع مشيرا الى نتيجة موجبة للفحص وبلون احمر معتم عندما يكون الفحص سالبا (2000 al.,.(remington et ان تشخيص داء المقوسات في النساء بسن الانجاب في محافظة نينوى يعتمد بدرجة اساس على اجراء الفحوصات المصلية ا نفة الذكر لذا حاولت دراستنا الحالية مقارنة كفاءة الفحوصات المصلية LAT و IFAT IgG-ELISA المستخدمة في تشخيص هذا الداء. المواد وطراي ق العمل شملت الدراسة (50) منوذجا مصليا ماخوذ من النساء المشكوك باصابتهن بداء المقوسات اللاتي تراوحت اعمارهن بين ( 20-45) سنة والمراجعات لمستشفى صدام العام في محافظة نينوى اذ اجريت اختبارات تلازن اللاتكس (LAT) وارتباط الخميرة للادمصاص المناعي (IgG-ELISA) واختبار تالق الضد غير المباشر (IFAT) على هذه النماذج المصلية. 1- اختبار تلازن اللاتكس LAT ا ستخدم في هذا الاختبار عدة (Kit) من انتاج شركة (Biokit-SA) الاسبانية تسمى cell- (Toxo Latex) للكشف عن وجود الاضداد المتخصصة ضد طفيلي المقوسات الكونيدية. اشتمل الاختبار على نوعين من الفحوصات: ا -الفحص النوعي Qualitative test يستدل منه على وجود الاصابة بملاحظة التلازن بالعين المجردة او تحت المجهر بقوة تكبير (x10). ا جري الفحص بوضع (0.05) سم 3 من المصل المطلوب فحصه على شريحة زجاجية نظيفة ومعقمة ووضع بجانبها حجم مماثل من كاشف اللاتكس بوساطة الماصة الدقيقة (Micropipette) م زجت القطرتان معا بعود خشبي معقم لكي يتجانس المصل مع الكاشف وفرشت الكمية الناتجة على الشريحة وح ركت الشريحة بعدها حركة داي رية خفيفة باليد لمدة خمس دقاي ق و قرا ت النتاي ج بعد ذلك بوساطة العين المجردة او تحت المجهر باستخدام العدسة الصغرى (x10). ب- الفحص الكمي Quantitative test النتاي ج الموجبة في الفحص الاول اجري لها الفحص الكمي بتحضير ثمان تخافيف مضاعفة للمصل. اضيف ( 0.05 )سم 3 من كاشف اللاتكس لكل تخفيف ومزج جيدا مع التحريك المستمر لمدة خمس دقاي ق ولوحظ وجود او عدم وجود التلازن. س ج لت معيارية الاضداد في العينة المفحوصة وهي مقلوب اعلى تخفيف اعطى تلازنا واضحا مري يا.

4 205 فرح حازم الخفاف و باسمة احمد عبد االله 2- اختبار تالق الضد غير المباشرIFAT استخدمت لاجراء هذا الاختبار عدة الفحص من انتاج شركة Bio merienx الفرنسية والتي تتكون من مستضد المقوسات الكونيدية Antigen Toxo.If والمقترن المضاد لمصل الانسان IgM و IgG المعلم بالفلورسين بالاضافة الى صبغة Evan s الزرقاء كما استخدم المجهر المتالق نوع Olympus الماني المنشا والحاوي على المكثف ذي المجال المعتم وتم اجراء الفحص حسب تعليمات الشركة المنتجة والمجهزة مع العدة. 3- اختبار ارتباط الانزيم للادمصاص المناعي IgG-ELISA استخدمت لاجراء هذا الاختبار عدة تجارية مسماة Medic s-ela من صنع شركة (Pavone- Torini) الايطالية للكشف عن الاضداد المتخصصة نوع (IgG) في المصول قيد الدراسة وتتالف العدة من صفيحة قياس المعيارية الدقيقية Microtiter Plate ومادة الاقتران Anti-IgG Peroxidase congugated antibody ومحلول المادة الاساس ومنشي الصبغة Chromogen بالاضافة الى مجموعة تحتوي على اربعة محاليل قياسية متدرجة Calbrators استخدمت لرسم المنحني القياسي وتم اجراء الاختبار تبعا للطريقة الموجودة في عدة الفحص. النتاي ج تم فحص (50) نموذجا مصليا بالاختبارات المصلية الثلاثة IgG-ELISA LAT IFAT لمعرفة ا ي من الاختبارات الثلاث اكثر حساسية في الكشف عن الاصابة بداء المقوسات. كان عدد الحالات الموجبة باختبار (%46) 23 IFAT باختبار (%52) 26 IgG-ELISA وباختبار (%66) 33 LAT كما شخصت (21) حالة موجبة ا ي بنسبة (%42) في جميع الاختبارات المصلية المستخدمة. توضح الصورة النتيجة الموجبة لاختبار التالق المناعي غير المباشر IFAT بظهور الطور سريع التكاثر باللون الاخضر المشع لمصل مريضة مصابة بعمر (25) سنة اظهرت نتيجة موجبة في فحص IFAT وبمعيار( 64 ). يبين الشكل (1) توزيع الحالات الموجبة للنساء قيد الدراسة وحسب الفي ات العمرية بالاختبارات المصلية الثلاث LAT IgG-ELISA IFAT اذ يوضح الشكل (1) ان اختبار LAT اعطى اعلى عدد للحالات الموجبة وفي جميع الفي ات العمرية قيد الدراسة يليه اختبار IgG-ELISA ثم اختبار.IFAT كما يبين الشكل (1) ان الفي ة العمرية ( )سنة ا ظهرت اعلى نسبة من الحالات الموجبة في الاختبارات المصلية الثلاث في اختبار IFAT كان عدد الحالات الموجبة في هذه الفي ة العمرية (8) حالات وفي اختبار IgG-ELISA كان عدد الحالات الموجبة في نفس الفي ة العمرية (9) حالة اما اختبار LAT فقد اعطى عدد للحالات الموجبة لهذه الفي ة العمرية بلغت (12) حالة. كما يوضح الشكل ان اقل عدد

5 206 كفاءة بعض الاختبارات المصلية المستخدمة في للحالات الموجبة للاصابة في الاختبارات الثلاثة كان عند الفي ة العمرية (20<) سنة. كما لم تسجل اية حالة اصابة للاعمار فوق سن (39) سنة. وباجراء اختبار تحليل التباين الاحصاي ي (ANOVA) تبين انه يوجد فرق معنوي بين نوع الاختبار ونسبة الاصابة في الفي ات العمرية قيد الدراسة (8.78=F) لذلك F>4.46 عند مستوى معنوية 0.05 الى جانب هذا فان هناك فرقا معنويا بين اختلاف الفي ة العمرية ونسبة الاصابة (39.3=F) لذلك فان F>3.84 عند مستوى معنوية (0.05). صورة مجهرية مكبرة تبين النتيجة الموجبة لاختبار IFAT اذ يظهر الطور سريع التكاثر بلون اخضر متا لق بقوة تكبير (X1000). وقد اكد اختبار دنكن ومن خلال المقارنات المتعددة بين متوسطات الاختبارات الثلاثة ان اختبار تلازن اللاتكس LAT قد تفوق في كفاءته على اختباري IFAT و IgG-ELISA ولم يكن هناك فرق معنوي بين اختباري IFAT و IgG-ELISA في الكشف عن الاصابة. يوضح الجدول (1) نسب الحالات الموجبة في النساء الحوامل وغير الحوامل بالاختبارات الثلاثة IFAT و IgG-ELISA و LAT اذ يوضح الجدول ان اختبار تلازن اللاتكس كان اكثر حساسية في الكشف عن الاصابة في النساء الحوامل وبنسبة (%86.6) يليه اختبار IgG-ELISA وبنسبة (%80) ثم اختبار (%70) IFAT كما يبين الجدول ان اختبار تلازن اللاتكس اعطى اعلى عدد للحالات الموجبة في النساء غير الحوامل بنسبة (%21.2) يليه اختبار (%8.7) IFAT ثم اختبار (%7.7). IgG-ELISA كما اوضح التحليل الاحصاي ي باستخدام مربع كاي عدم وجود فرق معنوي بين عدد الحالات الموجبة في النساء الحوامل وغير الحوامل ونوع الاختبار المستخدم في الفحص المصلي. اذ ان قيمة المحسوبة تساوي وقيمة χ 2 الجدولية تساوي 5.99 عند مستوى معنوية χ 2

6 207 فرح حازم الخفاف و باسمة احمد عبد االله عدد الحالات الموجبة لكل اختبار IFAT ELISA LAT 2 0 > الفي ات العمرية (سنة) الشكل 1: توزيع الحالات الموجبة للعينة قيد الدراسة وحسب الفي ات العمرية بالاختبار المصلية.LAT الثلاث IgG-ELISA IFAT IFAT الجدول 1: نسب الحالات الموجبة في النساء الحوامل وغير الحوامل بالاختبارات الثلاث.LAT IgG-ELISA عدد الحالات الموجبة والنسب المي وية (%) الاختبار LAT ELISA IFAT العينات 26 (78.8) 7 (21.2) 24 (92.3) 2 (7.7) 21 (91.3) 2 (8.7) النساء الحوامل 30 النساء غير الحوامل المجموع (86.6) (80) (70) النسبة المي وية لكفاءة الاختبار المناقشة اجريت في هذه الدراسة مقارنة كفاءة ثلاثة انواع من الاختبارات المصلية وذلك بفحص (50) (1) نموذجا مصليا باستخدام اختبارات IgG-ELISA LAT IFAT ويوضح الشكل توزيع الحالات الموجبة للنساء قيد الدراسة حسب الفي ات العمرية بالاختبارات المصلية الثلاثة وان اختبار LAT اعطى

7 208 كفاءة بعض الاختبارات المصلية المستخدمة في اعلى عدد للحالات الموجبة وفي جميع الفي ات العمرية قيد الدراسة يليه اختبار IgG-ELISA ثم اختبار IFAT اذ كان عدد الحالات الموجبة التي تم كشفها باختبار (33) LAT حالة شكلت نسبة (%66) اما عدد الحالات الموجبة التي تم كشفها باستخدام اختبار IgG-ELISA فقد بلغت (%52) مقارنة مع (%46) من الحالات التي تم كشفها بوساطة اختبار IFAT كما توصلت الباحثة الدجيلي في سنة (1998) الى ان فحص IgG-ELISA هو اعلى حساسية من فحص IFAT في الكشف عن الخمج اذ بلغت نسبة الاصابة التي تم الكشف عنها بواسطة اختبار (%20) IgG-ELISA مقارنة مع نسبة الاصابة التي تم التوصل اليها باستخدام اختبار IFAT اذ بلغت (%16.5). ان اختبار LAT هو اختبار سريع الانجاز ينعدم فيه التفاعل التصالبي مع امصال اجسام مضادة مغايرة وتتطابق نتاي جه مع فحص الصبغة (1980 Remington, (Desmonts and كما اظهرت نتاي ج هذه الدراسة ان اختبارLAT هو اكثر حساسية من فحصي IgG-ELISA و IFAT في الكشف عن الاصابة وهذا ما اشار اليه الباحث Mazumder واخرون في سنة (1988) من ان اختبار LAT هو الافضل عند اجراء الدراسات المسحية عن الداء لدى البشر. ان اختبار IFAT يشخص الاجسام المضادة ضد غشاء الخلية (1971 al., (Sulzer et ويعد اختبارا سريعا واسع الاستخدام سهل الانجاز اضافة الى ان استخدام المحلول الماي ي لصبغة ايفانس الزرقاء فيه يسهل رو ية قراءة النتاي ج الا انه يحتاج الى معدات خاصة كالمجهر التا لقي المشع لغرض قراءة النتاي ج وخبرة كافية في قراءة النتاي ج اذ ان التفاعل الموجب يشمل تا لق التركيب الكامل للطفيلي. اثبت الباحث Pappas واخرون في سنة (1986) ان اختبار IgG-ELISA هو اكثر حساسية من اختبار IFAT في الكشف عن الخمج الا انه يحتاج الى معدات خاصة باهضة الثمن كجهاز المطياف الضوي ي لاعطاء قراءة معتمدة النتاي ج ولم تتوفر لدينا دراسة مشابهة لدراستنا من حيث المقارنة بين حساسية الاختبارات المصلية الثلاثة IgG-ELISA LAT و IFAT في ا ن واحد. ان الحساسية العالية لاختبار LAT في الكشف عن الاصابة في النساء الحوامل يوضحها الجدول (1) الذي يبين نسب الحالات الموجبة في النساء الحوامل وغير الحوامل بالاختبارات الثلاثة IgG- LAT ELISA و IFAT اذ بلغت حساسية اختبار LAT في الكشف عن الاصابة في النساء الحوامل (%86.6) يليه اختبار IgG-ELISA وبحساسية (%80) ثم اختبار IFAT اذ بلغت حساسيته في الكشف عن الاصابة في النساء الحوامل (%70) كذلك توصل الباحث Ryu واخرون في سنة (1996) عند دراسته انتشار الاصابة في النساء الحوامل في كوريا وباستخدام اختباري LAT و ELISA اوضح ان اختبار LAT اعطى اعلى حساسية في الكشف عن الاصابة في النساء الحوامل لذا اعتبر الاختبار الافضل لاجراء الدراسات المسحية للتحري عن الاضداد المتخصصة ضد الطفيلي في النساء الحوامل.

8 209 فرح حازم الخفاف و باسمة احمد عبد االله المصادر العربية الدجيلي ختام يحيى عبيد دراسة مصلية وباي ية لداء المقوسات في النساء المجهضات في بغداد. رسالة ماجستير كلية الطب البيطري جامعة بغداد. المصادر الاجنبية Balsari, A., Poli, G., Molina, V., Dovis, M., Petruzzelli, E., Beniolo, A. and Rolleri, E., ELISA for Toxoplasma antibody detection: a comparsion with other serodiagnostic tests. J. Clin. Pathol., Vol.33, pp Desmonts, G. and Rremington, J.S., Direct agglutination test for diagnosis of Toxoplasma infection: method for increasing sensitivity and specificity. J. Clin. Microbiol., Vol.11, pp Lin, T.M., Halbert, S.P. and Oconnor, C.R., Standardised quantitative enzyme linked immunoassay for antibodies to Toxoplasma gondii, J. Clin. Microbiol., Vol.11, pp Mazumder, P., Chuang, H.Y., Wentz, M.W. and Wiedbrauk, D.L., Latex agglutination test for detection to Toxoplasma gendii. J. Clin. Microbiol., pp Mcleod, R. and Remington, J.S., Toxoplasmosis (Toxoplasmoa gondii). In: Nelson, W.E.; Behrmano, R.E.; Kliegman, R.M. and Arvin, A.M. Nelson Textbook of Pediatrics. 16th ed. W.B. Saunders Company, Philadelphia, pp Pappas, M.G., Lunde, M. N., Hajkowski, R. and McMahon, J., Determination of IgM and IgG antibodies to Toxoplasma using IFA tests, ELISA and Dot ELISA Procedures. J. Vet. Parasitol., Vol.20, pp Ryu, J.S., Min, D.Y., Ahn, M.H., Choi, H.G., Rho, S.C.; Shin, Y.J., Choi, B. and Joo, H.D., Toxoplasma antibody titers by ELISA and indirect latex agglutination test in pregnant women. Korean. J. Parasitol., Vol.34, No.4, pp Sulzer, A.J., Wilson, M. and Hall, E.C., Toxoplasma gondii Polar staining in Fluorescent antibody test. J. Exp. Parasitol., Vol.29, pp Walls, K.W. and Remington, J.S., Evaluation of a commerical Latex agglutination method for Toxoplamosis. J. Diagn. Microbiol. Infec. Dis., Vol.1, pp Wilson, M. and McAuley, J.B., Toxoplasma In: Murray, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F.C. and Yolken, R.H. Manual of Clinical Microbiology. 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, pp Wilson, M., Ware, D.A. and Juranek, D.D., Serologic aspects of Toxoplamosis. J. Am. Vet. Med. Asso., Vol.196, No.2, pp Woodward, B.C., Evaluation of an enzyme linked immuno-sorbent assay specific for human immunoglobulin G as a Screening test for detecting anti-toxoplasma antibodies. J. Clin. Microbiol., Vol.16, pp