P R O S P E C T. Pentru diagnosticare In Vitro.

Transcript

1 Immucor Transplant Diagnostics, Inc. 550 West Avenue, Stamford, Connecticut SUA (USA) Tel: +1 (203) sau linia gratuită (888) în S.U.A., Canada şi Puerto Rico, Fax: +1 (203) Documentaţie despre produs şi traduceri disponibile la: LIFECODES LifeScreen Deluxe (LMX) este un test screening Luminex pentru detectarea anticorpilor IgG la molecule de origine umană HLA Clasa I şi HLA Clasa a II-a. Pentru diagnosticare In Vitro. Definiţia simbolurilor Domeniu de utilizare Sumar şi explicaţie Principiile procedurii Reactivi. 2 A. Identificare B. Avertismente şi precauţii... 2 C. Instrucţiuni de depozitare.. 2 D. Purificare sau tratare pentru utilizare.. 2 E. Indicaţii de instabilitate Cerinţe pentru instrument P R O S P E C T CUPRINS Colectarea şi prepararea probelor... 3 Procedură A. Materiale prevăzute B. Materiale necesare, dar neprevăzute... 3 Instrucţiuni de utilizare... 3 Controlul calităţii Rezultate.. 4 Restricţii ale procedurii Depanare Caracteristici specifice de performanţă Referinţe DEFINIŢIA SIMBOLURILOR (Etichetele Produsului şi Documente Suplimentare) C od lot Număr catalog D ata expir ării Interval de temperatură (depozitare) Diluaţi înainte de utilizare DIL Sensibil la lumină (Feriţi de lumină) Suficient pentru N teste C onsultați instrucţiunile de utilizare Numele pacientului NAME Număr de identificare ID# Data DATE Tehnician TECH Microsferă BEAD Etnicitate ETHN Donator DONOR Factor de ajustare fond BAF Intensitate medie a fluorescenţei MFI Scor (vezi secţiunea Rezultate) SCORE Interpretare INTRP Microsferă control negativ CON Microsferă control pozitiv (Imunoglobulină G) IgG Clasa I CLI Clasa a II-a CLII Probă SAMPLE Data sângerării Intervale observate BDT Observed Ranges Număr de microsfere posesoare de antigen Controale Controls Producător Riscuri biologice R eprezentant autorizat în C omunitatea Europeană Atenţie! Vezi documentele însoţitoare Număr de lot amestec de microsfere Bead Mix Lot # Avertizare Pagina 1 din 6

2 DOMENIU DE UTILIZARE LIFECODES LifeScreen Deluxe sunt analize imunologice pe bază de microsfere, folosite pentru a detecta anticorpii IgG la molecule HLA Clasa I şi Clasa a II-a. SUMAR ŞI EXPLICAŢIE Antigenii leucocitari umani (HLA) reprezintă un sistem de glicoproteine care au rol funcţional în prezentarea peptidelor sistemului imunitar. 1,2 Cu toate acestea, fiind un sistem preponderent polimorf, moleculele HLA pot deveni ţinta răspunsurilor anticorpilor la om în timpul sarcinii, al transfuziei de produse sanguine sau al respingerii transplantului de organe. Ȋn general, aloimunizarea duce la producerea de anticorpi HLA la aproximativ 33% din persoanele expuse. 3 Prezenţa sau absenţa acestor anticorpi specifici HLA are un rol în determinarea supravieţuirii alotransplantelor. 4 Microsferele LIFECODES LifeScreen Deluxe sunt destinate detectării anticorpilor IgG pentru antigeni HLA Clasa I şi Clasa a II-a. LifeScreen Deluxe sunt compuse din Microsfere Luminex unice la care sunt conjugate glicoproteine HLA Clasa I şi HLA Clasa a II-a purificate prin afinitate. PRINCIPIILE PROCEDURII O parte alicotă a microsferelor este permisă la incubarea cu un volum mic de probă de ser pentru test. Microsferele sensibilizate sunt apoi spălate pentru a înlătura anticorpii liberi. După aceea, este adăugat un anticorp anti-uman IgG conjugat cu ficoeritrină. După o altă incubare, proba de testare este diluată şi analizată pe instrumentul Luminex. Intensitatea semnalului fiecărei microsfere este comparată cu intensitatea semnalului unei microsfere cu control negativ, inclusă în prepararea microsferei, pentru a se determina dacă microsfera este pozitivă sau negativă la aloanticorpul legat. REACTIVI A. Identificare : LMX LIFECODES LifeScreen Deluxe cuprinde cinci (5) componente. Următoarele sunt furnizate în cantităţi suficiente pentru 96 de teste. 1. LMXB Microsferele LifeScreen Deluxe (480 µl): Un amestec de microsfere conjugat cu glicoproteine HLA Clasa I sau HLA Clasa II plus patru (4) microsfere de control. Tamponul de depozitare este un tampon pe bază de fosfat ce conţine NaCl, Tween-20, ProClin300 şi albumină din ser de bovine. SENSIBIL LA LUMINĂ. Expunerea obişnuită la lumină nu trebuie să depăşească trei ore. A se păstra la 2-8 C la întuneric. 2. LMCJS Conjugat concentrat (550 µl): 10x rezervă de IgG anti-uman de capră conjugat cu ficoeritrină într-un tampon de depozitare pe bază de fosfat ce conţine NaCl, Tween-20, azidă de sodiu şi albumină din ser de bovine. DIL A SE DILUA 1 la 10 în soluţie-tampon de Spălare înainte de utilizare. SENSIBIL LA LUMINĂ. Expunerea obişnuită la lumină nu trebuie să depăşească trei ore. A se păstra la 2-8 C la întuneric. 3. LMWB Soluţie-tampon de spălare (150 ml): Un tampon pe bază de fosfat ce conţine NaCl, Tween-20, azidă de sodiu şi albumină din ser de bovine. Pregătit pentru utilizare. A se păstra la 2-8 C şi a se echilibra la temperatura camerei (20-24 o C) înainte de întrebuinţare. Următoarele sunt furnizate în cantităţi suficiente pentru şase (6) serii de analize. 4. LMPC Ser control pozitiv (80 µl): Acest ser sau amestec de seruri este obţinut de la o persoană(e) pentru care s-a demonstrat că a(au) fost aloimunizată(ţi) la antigeni HLA. Conţine azidă de sodiu. Pregătit pentru utilizare. A se păstra la 2-8 C. 5. LMNC Ser control negativ (80 µl): Acest ser sau amestec de seruri este obţinut de la o persoană(e) despre care se ştie că nu are(au) anticorpi la antigeni HLA. Conţine azidă de sodiu. Pregătit pentru utilizare. A se păstra la 2-8 C. B. Avertismente şi precauţii 1. Pentru întrebuinţare la diagnosticarea In Vitro 2. Materialul din sursă umană, folosit la producerea acestui kit, a fost testat şi găsit negativ pentru anticorpi HIV, HCV şi HBsAg prin metode aprobate de FDA. Cu toate acestea, nicio metodă de testare nu poate oferi o asigurare completă că agenţii infecţioşi sunt absenţi. Ca urmare, luaţi măsuri de precauţie universale atunci când lucraţi cu aceste materiale. 3. Substituirea componentelor, altele decât cele furnizate în acest sistem, poate duce la rezultate eronate. 4. Unii reactivi conţin 0,1% azidă de sodiu ca şi conservant, care poate reacţiona ţevile din plumb sau cupru pentru a forma azide explozive de metal. Folosiţi cantităţi mari de apă atunci când aruncaţi materialele în chiuvetă. 5. Contaminarea bacteriană a probelor sau prezenţa complexelor imune sau a altor aglomerări de imunoglobulină poate duce la legarea nespecifică crescută şi la rezultate eronate. 6. Acest produs detectează anticorpii IgG care pot fi sau nu limfocitotoxici. 7. Nu se anticipează ca acest produs să detecteze anticorpii clasei de imunoglobulină IgA sau IgM. 8. Aceste produse sunt destinate a fi folosite împreună cu instrumentul Luminex, în conformitate cu recomandările producătorului. 9. După întrebuinţare, aruncaţi toate materialele în conformitate cu regulamentele locale. 10. Pentru mai multe informaţii, vezi Fişa Tehnică de Securitate. C. Instrucţiuni de depozitare 1. Consultaţi etichetele produsului pentru indicaţii privind depozitarea. 2. Microsferele LifeScreen Deluxe şi Conjugatul concentrat sunt SENSIBILE LA LUMINĂ. Expunerea obişnuită la lumină nu trebuie să depăşească trei ore. D. Tratare necesară pentru utilizare 1. LMCJS Conjugat concentrat: DIL A SE DILUA 1 parte adăugată la 9 părţi de soluţie-tampon de spălare înainte de întrebuinţare. Preparaţi conjugatul diluat adăugând 5 μl de LMCJS la 45 μl de soluţie-tampon de spălare pentru fiecare alveolă de testare. Acoperiţi cu folie şi/sau păstraţi la întuneric la temperatura camerei (20-24 o C) până la utilizare. Returnaţi porţiunea nefolosită de LMCJS spre depozitare la 2-8 C la întuneric, pentru o întrebuinţare ulterioară. 2. LMWB Soluţie-tampon de spălare: Echilibraţi la temperatura camerei (20-24 C) înainte de întrebuinţare. E. Indicaţii de instabilitate 1. Nu folosiţi componente sau substanţe de control care sunt tulburi sau expirate. Pagina 2 din 6

3 2. Aruncaţi toate substanţele de control pozitiv şi negativ diluate nefolosite, precum şi conjugaţii, după utilizare. CERINŢE PENTRU INSTRUMENT Instrument Luminex (Lifecodes, Numărul produsului /888302) COLECTAREA ŞI PREPARAREA PROBELOR Sângele trebuie colectat fără anticoagulant, folosind tehnici aseptice şi trebuie analizat cât timp este încă proaspăt pentru a minimaliza posibilitatea de a obţine reacţii fals-pozitive sau fals-negative datorită depozitării incorecte sau a contaminării probei. Serul trebuie păstrat la 2-8 C cel mult 48 de ore. Dacă serul trebuie păstrat mai mult de 48 de ore, trebuie congelat la cel puţin 20 C sau -80 C până la 2 ani. Laboratoarele individuale trebuie să stabilească şi să valideze metode pentru păstrarea serului pe o perioadă de peste ani. Serul trebuie să fie separat de globulele roşii atunci când este depozitat sau expediat. Evitaţi congelarea şi dezgheţarea repetată a probelor de ser. Nu folosiţi ser contaminat microbiologic, hemolizat, lipemic sau neactivat la căldură, deoarece aceste probe pot să dea rezultate inconsecvente. Ȋnainte de testare, toate probele trebuie agitate (30 secunde) şi centrifugate pe termen scurt (4-5 minute la rcf) pentru a micşora orice particule ce ar putea fi prezente. PROCEDURĂ A. Materiale Prevăzute (Pentru mai multe informaţii detaliate, vezi REACTIVI la pagina 2) Microsfere HLA Ser control negativ Conjugat concentrat Fişă de înregistrare Soluţie-tampon de spălare Fişă format placă Ser control pozitiv B. Materiale, reactivi şi echipamente necesare, dar neprevăzute (după cum este indicat sau echivalent) Pipete ajustabile de 5 µl 50 µl cu vârfuri corespunzătoare Rotor sau agitator cu adaptor cu placă Pipetă multicanal de 250 µl cu vârf corespunzător şi canal tampon Plăci filtrante cu ecrane multiple Millipore (Cat # MSBVN 1210, Lifecodes #888633) Eprubete pentru microcentrifugă de 1,5 2,0 ml pentru diluare Plăci de etanşare adezive (Lifecodes #888631) Colector cu vid cu ecrane multiple (Millipore Cat #MAVM 0960R Eprubete de testare pentru pacient şi probe de control sau Qiagen Cat#19504, Lifecodes Cat# ) Temporizator Peliculă de fluid Luminex (1x or 20x Lifecodes , ) Stilou marcant Microsfere de calibrare Luminex (CAL 1, CAL 2,MCN 1, MCN 2; Lifecodes , , , ) Apă distilată Micro-centrifugă INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE PRECAUŢII: TREBUIE acordată o atenţie deosebită pentru a se evita contaminarea soluţiei-tampon de spălare şi a reactivului conjugat concentrat (anti-uman IgG). Contaminarea accidentală a acestor reactivi cu ser uman va duce la neutralizarea IgG anti-uman, iar ulterior va duce la eşecul testului. Trebuie acordată o atenţie deosebită verificării puterii colectorului cu vid. Presiunea puternică a colectorului poate duce la lipirea microsferelor de membrană ceea ce determină numărarea incorectă a acestora. Trebuie acordată o atenţie deosebită în timpul pipetării în placa filtrantă. Aveţi grijă să nu atingeţi membrana cu vârful pipetei. Atingerea membranei cu vârful pipetei poate duce la perforarea membranei şi ulterior la eşecul testului. Trebuie acordată o atenţie deosebită pentru a se asigura, în timpul incubării, că microsferele nu se împrăştie şi nu se lipesc pe laturile alveolelor. Ȋn timpul realizării testului pentru prima dată, efectuaţi câteva controale pozitive şi/sau negative pentru a determina viteza optimă a platformei rotative sau a agitatorului vortex. S-a demonstrat că o viteză de aproximativ 200 de rotaţii pe minut este eficace la unele instrumente. Prezenţa unor nivele semnificative de anticorpi liberi, fie datorită excesului de ser, fie datorită spălării insuficiente, poate reduce capacitatea testului de a detecta IgG-ul legat de microsferele sensibilizate şi poate duce la rezultate eronate O probă de ser de control pozitiv şi negativ trebuie inclusă cu fiecare test pentru a ajuta la determinarea unor posibile erori tehnice sau eşecuri ale reactivilor. Nu amestecaţi componente din loturi diferite. Procedura testului: 1. Lăsaţi celelalte componente la 2-8 C la întuneric până când sunt necesare. Aduceţi soluţia-tampon de spălare la temperatura camerei (20-24 C) înainte de utilizare. În acest timp, folosiţi Fişa format placă pentru a stabili o poziţie pe placă pentru fiecare dintre serurile şi substanţele de control de analizat. Serurile de control prevăzute în kit sunt folosite la ilustrarea unui antiser alogen pozitiv cu reactivitate crescută şi a unui ser negativ. 2. Acoperiţi alveolele nedesemnate ale plăcii filtrante cu o peliculă de plastic adeziv. Umeziţi apoi alveolele care trebuiesc folosite cu µl de apă distilată. După 2-5 minute, scoateţi apa prin aspiraţie uşoară folosind colectorul cu vid. (Pentru o utilizare corectă, vezi recomandările producătorului.) 3. Pregătiţi microsferele HLA (30 secunde) centrifugând rapid eprubeta (30 secunde) la x g pentru a înlătura orice microsferă sau lichid din capacul sau de pe pereţii eprubetei. Agitaţi bine (~1 minut) pentru resuspendare uniformă a microsferelor. 4. Adăugaţi 40 µl de soluţie-tampon de spălare la fiecare alveolă de testare de pe placa filtrantă, apoi 12,5 µl din serul pacientului sau din serul de control şi amestecaţi. Pagina 3 din 6

4 5. Adăugaţi 5 µl de microsfere HLA la fiecare alveolă stabilită. Agitaţi din nou eprubeta cu microsfere HLA o dată la 2 minute pentru a menţine microsferele în suspensie, în timp ce le distribuiţi. 6. Acoperiţi placa cu o peliculă de plastic adeziv, apoi acoperiţi-o cu folie sau puneţi-o într-o cutie pentru a o proteja de lumină. Incubaţi ATENŢIE: Este important s ă menţineţi microsf erele res uspendate pentru a vă as igura c ă s unt alic otate s uficiente microsf ere în alveole ş i pentru a as igura o numărare rapidă. D ac ă microsf erele nu sunt agitate intermit ent ac estea s e vor depune pe fundul eprubetei. Ac easta va duc e la distribuţia dif erenţiată a microsf erelor în alveole, c eea c e poate afecta în timp de 30 de minute la temperatura camerei (20-24 C), la întuneric, pe o platformă rotativă (200 rotaţii pe minut). Returnaţi porţiunile nefolosite de ser de control şi microsfere spre depozitare la 2-8 C la întuneric, pentru o întrebuinţare ulterioară. 7. Diluaţi conjugatul cu soluţie-tampon de spălare şi depozitaţi la întuneric (5 µl conjugat la 45 µl soluţie-tampon de spălare per probă). Pentru a compensa pierderile prin pipetare, este de dorit a se pregăti un (1) volum suplimentar de conjugat diluat. Acoperiţi cu folie şi/sau depozitaţi la întuneric, la temperatura camerei până la utilizare. Returnaţi porţiunea nefolosită de Conjugat concentrat spre depozitare la 2-8 C la întuneric, pentru o întrebuinţare ulterioară. 8. După 30 de minute de incubare, înlăturaţi pelicula de plastic adeziv şi adăugaţi 100 µl de soluţie-tampon de spălare în fiecare alveolă. Amestecaţi lovind uşor latura plăcii, iar apoi aspiraţi încet placa. ATENŢIE: Folosirea unei presiuni mari de evacuare va face ca micro sferele să se lipească de membrană şi poate duce la eşecul probei. Folosiţi presiunea minimă de evacuare necesară aspirării probelor. 9. Adăugaţi 250 µl de soluţie-tampon de spălare în fiecare alveolă, aspiraţi şi repetaţi de încă două ori pentru un total de trei spălări. ATENŢIE: O spălare incompletă poate reduce capacitatea conjugatului de a detecta IgG -ul legat de microsferele sensibilizate şi poate duce la rezultate negative false. 10. Adăugaţi 50 µl de conjugat diluat în fiecare alveolă. Acoperiţi placa cu folie sau puneţi-o într-o cutie pentru a o proteja de lumină. Puneţi-o pe o platformă rotativă (setată la 200 rotaţii pe minut) sau agitaţi uşor la fiecare 5-10 minute. Incubaţi timp de 30 de minute la temperatura camerei (20-24 C). 11. Folosind un vârf curat de pipetă, adăugaţi 150 µl de soluţie-tampon de spălare în fiecare alveolă şi agitaţi pentru a resuspenda microsferele. 12. Colectaţi datele cu ajutorul instrumentului Luminex, urmând recomandările producătorului. Întârzierile de mai mult de 3 ore pot spori posibilitatea obţinerii de reacţii fals-pozitive sau fals-negative. Returnaţi porţiunea nefolosită de soluţie-tampon de spălare spre depozitare la 2-8 C, pentru o întrebuinţare ulterioară. CONTROLUL CALITĂŢII Controlul calităţii testului LMX este integrat în sistemul de testare prin includerea a patru microsfere de control (o microsferă de control pozitiv şi trei microsfere de control negative). Microsferele de control negative (CON) măsoară fondul testului şi sunt folosite la normalizarea semnalului microsferelor HLA. Aceste microsfere trebuie să indice valori IMF scăzute. Consultaţi fişa de înregistrare specifică lotului pentru intervalele observate de valori ale microsferelor de control negativ. Datele din afara intervalului trebuie examinate atent. Microsfera de control pozitiv (Proba 77) este acoperită cu IgG uman şi trebuie să determine valori IMF > cu serul de control pozitiv sau serul de control negative. Dacă obţineţi valori mai mici de IMF, s-ar putea ca proba să fie insuficient spălată sau conjugatul compromis. Probele pacienţilor pot indica o gamă largă de reactivitate cu microsfera de control pozitiv (Sonda 77), însă trebuie să producă un semnal > IMF. În lipsa serurilor, Sonda 77 va indica un semnal puternic, în timp ce restul microsferelor vor avea valori medii de aproximativ 50 IMF sau mai mici. Dacă o probă de testare produce valori similare, atunci proba ar putea să fi fost omisă accidental. Aceste probe trebuie să fie repetate. Serurile de control pozitiv şi negativ sunt furnizate cu fiecare trusă pentru a servi drept control extern al testului şi trebuie incluse în fiecare serie de analize. Serul de control pozitiv trebuie să aibă un rezultat raportat pozitiv pentru Sonda I-01 şi Sonda II-01. Serul de control negativ trebuie să aibă un rezultat raportat negativ pentru toate microsferele. Testul trebuie efectuat după cum este recomandat în prospectul din pachet, precum şi efectuat cu orice alte proceduri de control al calităţii care sunt în conformitate cu cerinţele agenţiilor locale, statale, federale şi/sau de acreditare. REZULTATE Pentru a determina dacă o probă de testare este pozitivă pentru Clasa I sau Clasa a II-a de anticorpi specifici HLA, fiecare microsferă HLA este evaluată iniţial pentru a se determina dacă este pozitivă sau negativă pentru anticorpii IgG. Pentru a determina dacă o microsferă HLA este pozitivă, împărţiţi mai întâi IMF-ul microsferei la IMF pentru fiecare microsferă de control negativ (CON1, CON2, CON3). Din aceşti coeficienţi, scădeţi Factorul de Ajustare de Fond (BAF) pentru combinaţia corespunzătoare microsferă/con. BAF este un raport IMF predeterminat pentru fiecare combinaţie microsferă/con pentru a compensa zgomotul de fundal datorat variaţiei microsferei. Pentru valori BAF, vezi Fişa de Ȋnregistrare specifică lotului, prevăzută în kit. Exemplu: IMF Microsferă Individuală - (BAF) = Proporţie ajustată 1 IMF Microsferă Control Negativ 1 (CON1) IMF Microsferă Individuală - (BAF) = Proporţie ajustată 2 IMF Microsferă Control Negativ 2 (CON2) IMF Microsferă Individuală - (BAF) = Proporţie ajustată 3 IMF Microsferă Control Negativ 3 (CON3) Pagina 4 din 6

5 Pentru SONDA I-01 şi SONDA II-01, o valoare pozitivă a fiecărui calcul indică o reacţie pozitivă a microsferei. Pentru toate microsferele rămase, o valoare pozitivă pentru oricare două calcule indică o reacţie pozitivă a microsferei. O valoare negativă pentru toate cele trei calcule indică o reacţie negativă a microsferei. Evaluarea probei de testare- O probă este considerată pozitivă pentru clasa I de anticorpi specifici HLA dacă cel puţin una dintre cele şapte (7) microsfere HLA clasa I este pozitivă. O probă este considerată pozitivă pentru clasa a II-a de anticorpi specifici HLA dacă cel puţin una dintre cele cinci (5) microsfere HLA clasa a II-a este pozitivă. O probă este considerată negativă pentru anticorpii IgG specifici HLA dacă toate microsferele HLA sunt negative. RESTRICŢII ALE PROCEDURII Rezultatele acestui test nu trebuiesc folosite ca singura bază pentru luarea unei decizii clinice. Pot apărea rezultate eronate datorită contaminării bacteriene a materialelor de testare, a perioadelor inadecvate de incubare, a spălării sau decantării inadecvate a microsferelor, a expunerii conjugatului la reflecţie parazitară sau a omiterii unor etape sau reactivi de testare. Prezenţa complexelor imune sau a aglomerărilor de imunoglobulină în proba unui pacient poate provoca o legătură nespecifică ridicată şi produce rezultate eronate în acest test. Acest produs detectează anticorpii IgG care pot fi sau nu limfocitotoxici. Anticorpii detectaţi sunt aceia care sunt reactivi în populaţia de antigeni disponibili menţionaţi în Fişa de înregistrare. Capacitatea de a detecta un anticorp (IgG) se bazează pe afinitatea și titrul anticorpului, și pe frecvența relativă a epitopului țintă prezent pe microsferă. Anticorpii (IgG) cu afinitate redusă și/sau titru redus care sunt specifici pentru epitopi cu frecvență joasă s-ar putea să nu fie detectați cu testul LIFECODES LifeScreen Deluxe. LifeScreen Deluxe cuprinde microsfere Luminex unice conjugate cu glicoproteine HLA Clasa I şi Clasa a II-a purificate pentru afinitate. Pentru SONDA I-01, sunt obţinute glicoproteine HLA Clasa I purificate pentru afinitate din trombocite de la următorii donatori de sânge: 100 caucazieni, 100 afro-americani şi 100 hispanici. Glicoproteinele HLA Clasa I purificate pentru afinitate din limfocite B transformate EBV şi ataşate la SONDA I-02 prin I-07 sunt menţionate pe Fişa de înregistrare specifică lotului. Pentru SONDA II-01, glicoproteinele HLA Clasa II purificate pentru afinitate folosite la producerea acestui produs sunt derivate din limfocite B transformate EBV, reprezentând următorii antigeni HLA clasa a-ii-a: DR1, DR4, DR7, DR8, DR9, DR10, DR11, DR12, DR13, DR14, DR15, DR16, DR17, DR18, DR103, DR51, DR52 şi DR53. Glicoproteinele HLA Clasa II din limfocite B transformate EBV şi ataşate la SONDA II-02 prin II-05 sunt menţionate pe Fişa de înregistrare specifică lotului. Determinarea reactivității anticorpului pentru o probă se bazează pe existența a cel puțin unei microsfere pozitive. Reactivitatea fiecărei microsfere se bazează pe realizarea unui număr minim de proporții ajustate pozitive. Unele probe pot produce proporții ajustate care se află la sau în apropierea valorilor limită și o reactivitate pozitivă atribuită pe baza unei proporții ajustate pozitive. Ulterior, determinarea reactivității anticopului pentru o probă testată cu LIFECODES LifeScreen Deluxe trebuie să ia în considerare rezultatele specifice ale tuturor microsferelor, numărul de proporții ajustate pozitive care sunt necesare pentru fiecare microsferă și dacă fiecare dintre cele trei proporții ajustate pentru fiecare microsferă se află la sau în apropierea valorii limită. Datorită naturii complexe a testării HLA, datele interpretate trebuie să fie revizuite de către personal calificat. Cunoaşterea antecedentelor pacientului precum şi înţelegerea grupurilor cu reactivitate încrucişată pot fi folositoare la atribuirea reactivităţii anticorpilor unui ser specific. DEPANARE PROBLEMA CAUZA POSIBILĂ SOLUŢIA Amestecul de microsfere nu este bine suspendat Pulsaţi agitatorul pentru a resuspenda complet Instrument defect nu este calibrat Vezi Manualul instrumentului Număr redus de microsfere Instrument defect debit probă blocat Vezi Manualul instrumentului Microsfere foto-decolorate Folosiţi un kit nou Presiunea colectorului prea mare/microsfere lipite pe membrană Reduceţi puterea colectorului Prag de control depăşit Spălare insuficientă Repetaţi şi monitorizaţi spălările Calitate slabă a probei Re-extrageţi Conjugat foto-decolorat Folosiţi un kit nou Eşec prag de control pozitiv Spălare insuficientă Repetaţi şi monitorizaţi spălările CARACTERISTICI SPECIFICE DE PERFORMANŢĂ Atunci când kiturile LIFECODES LifeScreen Deluxe sunt folosite în conformitate cu procedura descrisă, rezultatele dezvăluie prezenţa sau absenţa anticorpilor HLA IgG. Pentru detectarea anticorpilor specifici HLA Clasa I, kiturile LifeScreen Deluxe au indicat 100% copozitivitate (97,6-100%), 91% co-negativitate (87,3-94,1%) şi 95% concordanţă pentru 417 probe de ser evaluate în comparaţie cu rezultatele obţinute prin metoda LifeScreen (95% limite de încredere). Pentru detectarea anticorpilor specifici HLA Clasa II, kiturile LifeScreen Deluxe au indicat 100% co-pozitivitate (97,8-100%), 93% co-negativitate (89,5-95,8%) şi 96% concordanţă pentru 424 probe de ser evaluate în comparaţie cu rezultatele obţinute prin metoda LifeScreen (95% limite de încredere). Pagina 5 din 6

6 Următorii reactivi au fost evaluaţi în testele de laborator şi nu au interferat cu LIFECODES LifeScreen Deluxe: Remicade (Centocor), Rituxin (Genentech), Zenapax (Roche), Campath (Genzyme) şi Gammaguard (Baxter). Pe de altă parte, s-a demonstrat că Thymoglobulin (Genzyme) duce la rezultate pozitive false. probele care conţin Thymoglobulin pot duce la rezultate incorecte. REFERINŢE 1. Klein, J, Sato, A. The HLA System. N. Engl. J. Med. 2000; 343:702 şi 343: Parham, P. The Immune System. Garland Publishing, N.Y. şi London. 2000; Rodey, GE. HLA Beyond Tears (2 nd Edition). DeNovo, Inc. Durango, CO. 2000; McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies after Solid Organ Transplantation. Transplantation 2000; 69:319. PRODUCĂTOR ŞI REPREZENTANT AUTORIZAT Producător: Immucor Transplant Diagnostics, Inc., 550 West Avenue, Stamford, Connecticut S.U.A. (USA) Telefon: , sau linia gratuită pentru S.U.A., Canada şi Puerto Rico , Fax: Reprezentant autorizat: Immucor Medizinische Diagnostik GmbH, Adam-Opel-Strasse 26A Rodermark 63322, Germania Telefon: (+49) , Fax: (+49) Serviciul Tehnic din Europa: Telefon: +32/ Emis: Rev.16; Pagina 6 din 6