Προσδιορισμός MIC, MBC

Ελληνική Μικροβιολογική Εταιρεία Προσδιορισμός MIC, MBC Γεωργία Βρυώνη Ιατρός Βιοπαθολόγος, Λέκτορας Μικροβιολογίας, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Αθηνών gvrioni@med.uoa.gr 1

Έλεγχος ευαισθησίας με τη μέθοδο αραιώσεων των αντιβιοτικών Αρχή: Έκθεση μικροβιακού εναιωρήματος σε διαφορετικές συγκεντρώσεις αντιβιοτικού Η μικρότερη συγκέντρωση αντιβιοτικού που δεν επιτρέπει την ανάπτυξη του μικροοργανισμού in vitro Ελάχιστη Ανασταλτική Πυκνότητα του φαρμάκου (ΕΑΠ) Minimun Inhibitory Concentration (MIC) 2

Ελάχιστη Ανασταλτική Πυκνότητα Minimum Inhibitory Concentration (MIC) Όχι απόλυτη τιμή Η αληθινή τιμή μεταξύ της MIC που αναστέλλει τη μικροβιακή ανάπτυξη και της αμέσως υποδιπλάσιας αραίωσης που επιτρέπει τη μικροβιακή ανάπτυξη Αραιώσεις αντιβιοτικού υποδιπλάσιες (5-7): 1, 2, 4, 8, 16μg/mL 3 Κρίσιμες συγκεντρώσεις αντιβιοτικού (1-3) [ Breakpoint MIC ] : Π.χ. 4, 6, 8, 12, 16 μg/ml

Ελάχιστη Ανασταλτική Πυκνότητα Minimum Inhibitory Concentration (MIC) MIC 50 Η ελάχιστη συγκέντρωση του αντιβιοτικού που αναστέλλει την ανάπτυξη 50% των υπό έλεγχο στελεχών (εντός του ίδιου είδους) 4 MIC 90 Η ελάχιστη συγκέντρωση του αντιβιοτικού που αναστέλλει την ανάπτυξη 90% των υπόέλεγχοστελεχών(εντός του ίδιου είδους)

Ελάχιστη Ανασταλτική Πυκνότητα Minimum Inhibitory Concentration (MIC) Ερμηνεία: 3 κατηγορίες ευαισθησίας μικροοργανισμών Ευαίσθητοι (Susceptible) Μέτρια ευαίσθητοι (Intermediate) Ανθεκτικοί (Resistant) 5

Κριτικές συγκεντρώσεις δύο συγκεντρώσεις c c : χαμηλή C : υψηλή C S I R MIC c c < MIC C MIC > C 6

Έλεγχος ευαισθησίας με τη μέθοδο αραιώσεων των αντιβιοτικών Είδη: Μέθοδος αραιώσεων σε ζωμό (broth dilution method) Μακρο-μέθοδος (macrodilution) Μικρο-μέθοδος (microdilution) Μέθοδος αραιώσεων σε άγαρ (agar dilution method) Μέθοδοι αναφοράς (Standard Reference Methods) Μέθοδοι προτυποποιημένες 7

8 Αντιβιοτικά Πρότυπες ουσίες περιεκτικότητα σε δραστική ουσία ή ενεργότητα (μg/mg ή IU/mg) ημερομηνία λήξης διατήρηση: </= -20 ο C Παρασκευή μητρικού διαλύματος (stock solution) άνοιγμα αφού πάρουν θ ο C δωματίου (υδρατμοί) καταστροφή β-λακταμικών αντιβιοτικών αύξηση βάρους υγροσκοπικών ουσιών (αμινογλυκοσίδες) προστασία από μεγάλη έκθεση στο φως ριφαμπικίνη, πολυμιξίνη Β σκοτάδι συγκέντρωση (1000 μg/ml ή 10 χ μεγαλύτερης συγκέντρωσης) γνωστό το ακριβές βάρος της ουσίας επιλογή / υπολογισμός διαλύτη (Table 4, M7-MIC)

Αντιβιοτικά ποσότητα που ζυγίστηκε (mg) X ενεργότητα (μg/mg) Όγκος (ml)= --------------------------------------------- επιθυμητή συγκέντρωση (μg/ml) όγκος (ml) X συγκέντρωση (μg/ml) Βάρος (mg)= ------------------------------- ενεργότητα (μg/mg) 9

10 Αντιβιοτικά ιατήρηση μητρικού διαλύματος (stock solution) όχι απαραίτητη η αποστείρωση αν ναι: διήθηση με ειδικά φίλτρα διαμοίραση σε μικρές ποσότητες σωλην. πολυ-προπυλενίου, -αιθυλενίου, -στυρενίου Θερμοκρασία </= -60 o C για ~ 6 μήνες ποτέ > -20 ο C Ιμιπενέμη, κεφακλόρη, κλαβουλανικό οξύ, ριφαμπικίνη: </= -70 o C για 1 μήνα Αμπικιλλίνη, τριμεθοπρίμη και άλλα σε διαλύματα φωσφορικών: ίζημα (καλή ανάδευση) Αποφυγή απόψυξης / ψύξης

Επιλογή αντιβιοτικών Είδος αντιβιοτικού ανάλογα μικροβιακού είδους Μη απαιτητικά Εντεροβακτηριακά Pseudomonas aeruginosa και άλλα μη-εντεροβακτηριακά Staphylococcus spp. Enterococcus spp. Acinetobacter spp. Burkolderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia Απαιτητικά Haemophilus spp. Neisseria gonorrhoeae Streptococcus pneumoniae Streptococcus spp. εκτός από S. pneumoniae Table 1, M100-S18, Vol.28 No.1

Επιλογή συγκεντρώσεων αντιβιοτικών Κριτικές συγκεντρώσεις (Breakpoints) Tables 2A έως 2L (M100-S18, Vol.28, CLSI) Συνολικός αριθμός απόφαση του εργαστηρίου τέτοιος ώστε ένας τουλάχιστον μικροοργανισμός ποιοτικού ελέγχου να έχει όλες τις διαδοχικές τιμές συγκεντρώσεων ασυνήθεις συγκεντρώσεις σε επιλεγμένες περιπτώσεις, όπως υψηλές για Έλεγχος υψηλού επιπέδου αντοχής σε γενταμυκίνη / στρεπτομυκίνη στους εντεροκόκκους (High-Level Aminoglycoside Resistance, HLAR)

Μικροβιακό εναιώρημα Θολερότητα: 0.5 κλίμακας McFarland 1-2 x 10 8 CFU/mL για E. coli ATCC 25922 Μέθοδος άμεσο εναιώρημα αποικίας (direct colony suspension m.) Η πιο εναιώρημα κατάλληλη λογαριθμικής φάσης ανάπτυξης (growth Η μόνη method) για: Staphylococcus spp., Haemophilus spp., N. gonorrhoeae, N. meningitidis και στρεπτοκόκκους Τρόπος: εναιώρημα σε ζωμό ή φ.ο. τρυβλίο μη εκλεκτικού υλικού (αιματούχο άγαρ) μετά18-24 h επώασης 13

14 Μικροβιακό εναιώρημα Θολερότητα: 0.5 κλίμακας McFarland 1-2 x 10 8 CFU/mL για E. coli ATCC 25922 Μέθοδος άμεσο εναιώρημα αποικίας (direct colony suspension m.) εναιώρημα λογαριθμικής φάσης ανάπτυξης (growth method) Εναλλακτικά, ιδίωςανδενείναιδυνατήηδημιουργία ομοιόμορφου εναιωρήματος Σε μη απαιτητικά μικρόβια (εκτός Staphylococcus) όταν δεν υπάρχει πρόσφατο καλλιέργημα Τρόπος: 3-5 αποικίες σε 4-5mL ζωμού (tryptic soy broth) επώαση 35 ο C έως θολερότητα =/>0.5 McFarland (2-6h) θολερότητα 0.5 με ζωμό ή φ.ο.

Παρασκευή μικροβιακού εναιωρήματος (inoculum) Θολερότητα 0.5 κλίμακας McFarland ( 1-2 Χ 10 8 CFU/ml E.coli ATCC 25922 ) ή με φωτόμετρο 15 0.5McF E.coli ATCC 25922 ΜαθήματαE.coli Ειδικευομένων, 8η

Μέθοδος αραιώσεων σε ζωμό Μακρομέθοδος: σωληνάρια Μικρομέθοδος: πλάκα μικροτιτλοποίησης 16

17 Μέθοδος αραιώσεων σε ζωμό Υλικό: Mueller-Hinton broth (MHΒ) ph 7.2 7.4 σε θ ο C περιβάλλοντος (25 ο C) Ιόντα: αμινογλυκοσίδες & Pseudomonas, τετρακυκλίνες, δαπτομυσίνη & gram(+) Ca ++ : 20-25 mg/l (50 για daptomycin) Mg ++ : 10-12.5 mg/l HTM για Haemophilus spp. 2% NaCl για οξασιλλίνη, μεθικιλλίνη, ναφκιλλίνη (σταφυλόκοκκοι) 2.5-5% aίμα (LHB): για S. pneumoniae, N. meningitis στρεπτοκόκκους Ενοφθαλμισμός Επώαση: 35±2 ο C για 16-20 h 20-24h για Acinetobacter spp., B. cepacia, S. maltophilia, Haemophilus spp S. pneumoniae, λοιποί στρεπτόκοκκοι 24h για oxacillin σε Staphylococcus, βανκομυκίνη σε Enterococcus και γενταμυκίνη / στρεπτομυκίνη HLAR σε Enterococcus 5% CO2 για N. meningitis (20-24h) Εμπλουτισμένο ΜΗΒ Caution-adjusted adjusted ΜΗΒ (CAMHB)

Μέθοδος αραιώσεων σε ζωμό Διαφορές από Κ-Β: Υλικό: CAMHB (με 50 μg/ml Ca ++ αν δαπτομυσίνη) Προσθήκη αίματος: αλόγου LHB (όχι προβάτου) σε N. meningitis, S. pneumoniae και λοιπούς στρεπτοκόκκους Χρόνος επώασης έως 20h (όχι 18h) Περιβάλλον επώασης: ΌΧΙ 5% CO2 για Haemophilus spp., S. pneumoniae 18

Μέθοδος αραιώσεων σε ζωμό Μέθοδος αναφοράς για CLSI 1 ml 10 8 CFU Mueller Hinton Broth 1 ml 0 0.5 1 2 4 8 16 µg/ml 35 C για 16-20 h MIC = 4 19 0 0.5 1 2 4 8 16 µg/ml

Μακρομέθοδος Ανάγνωση αποτελεσμάτων Μακρομέθοδος: S. aureus και τετρακυκλίνη Ανάπτυξη φαίνεται στη συγκέντρωση τετρακυκλίνης 0.8 μg/ml αλλά όχι στην 1.6 μg/ml. 20 MIC είναι 1.6 μg/ml

Μικρομέθοδος Ανάγνωση αποτελεσμάτων MIC είναι 8 μg/ml 21 Ceftizoxime (C.III)

Μικρομέθοδος Ανάγνωση αποτελεσμάτων 22

Ελάχιστη Βακτηριοκτόνος Πυκνότητα Minimal Bactericidal Concentration MBC 23 η ελάχιστη συγκέντρωση του αντιβιοτικού που επιτρέπει την επιβίωση 1/10.000 βακτήρια ή 0.01% του αρχικού εναιωρήματος για πολλές σύγχρονες ουσίες είναι πλησίον της MIC κύρια επιδίωξη γιατη θεραπευτική επιτυχίασε βαριές λοιμώξεις: ενδοκαρδίτιδα οστεομυελίτιδα λοιμώξειςσε ανοσοκατεσταλμένους (ουδετεροπενικοί)

Ελάχιστη Βακτηριοκτόνος Πυκνότητα Minimal Bactericidal Concentration MBC Μέθοδος 24 Προσδιορισμός MIC (μακρο-/μικρο-μέθοδος) Αραιώσεις αντιβιοτικού από 8χ έως½ ή ¼x MIC 128-0.06 μg/ml Ανακαλλιέργεια σε στερεό θρεπτικό υλικό από τα σωληνάρια ή πηγαδάκια χωρίς ορατή μικροβιακή ανάπτυξη Προσδιορισμός MBC ως την ελάχιστη πυκνότητα Μέθοδος όχι του αντιβιοτικού προτυποποιημένη που προκαλεί θάνατο στα 99,9% Κατάλληλη για την αξιολόγηση νέων αντιβιοτικών των μικροβιακών κυττάρων και για ερευνητικούς σκοπούς

Μέθοδος προσδιορισμού MBC 0 0.5 1 2 MIC = 4 8 16 µg/ml 35 ± 2 C για 24h Gram(-) βακτηρίδια 48h Staphylococcus Enterococcus 72h άλλα βακτήρια 10 µl 0 µg/ml 4 µg/ml 8 µg/ml 16 µg/ml MBC =?

26 Μέθοδος προσδιορισμού MBC Καθορισμός του κρίσιμου αριθμού αποικιών για προσδιορισμό MBC Υπολογισμός εναιωρήματος (CFU/mL) του σωληναρίου χωρίς αντιβιοτικό 1.Αραίωση εναιωρήματος 2.Ενοφθαλμισμός συγκεκριμένης ποσότητας σε τρυβλίο 3.Υπολογισμός (CFU/mL): αριθμός αποικιών x ποσότητα ενοφθαλμισμού x αραίωση

Μέθοδος προσδιορισμού MBC Καθορισμός του κρίσιμου αριθμού αποικιών για προσδιορισμό MBC Τελικό εναιώρημα (CFU/mL) Κρίσιμος αριθμός αποικιών Ευαισθησία (%) Ειδικότητα (%) 1 x 10 5 4 77 97 2 x 10 5 8 89 99 3 x 10 5 15 99 99 4 x 10 5 20 99 99 5 x 10 5 25 99 99 27 6 x 10 5 29 99 99

Μέθοδος προσδιορισμού MBC Καθορισμός του κρίσιμου αριθμού αποικιών για προσδιορισμό MBC Σωληνάριο Συγκέντρωση αντιβιοτικού μg/ml Αριθμός αποικιών CFU 99.9% Θάνατος 1 128 2 ΝΑΙ 2 64 11 ΝΑΙ 3 32 18 ΝΑΙ 4 16 33 ΌΧΙ 5 8 Μη μετρούμενες ΌΧΙ 28 MBC = 32 μg/ml

(+) μάρτυρας ανάπτυξης Συγκέντρωση αντιβιοτικού σε μg/ml Αν MΒC/MΙC < 4 τότε το αντιβιοτικό είναι βακτηριοκτόνο MIC = 0.125μg/mL Επώαση για 16-20h Τελευταίο σωληνάριο με ορατή ανάπτυξη Ανακαλλιέργεια σε τρυβλία 29 Επιβίωση 0.01% MIC=0.125μg/mL MBC=0.25μg/mL MΒC /MΙC=2 < 4 Αντιβιοτικό = βακτηριοκτόνο CFU / ml

MIC - MBC MIC MBC 1 2 4 8 16 32 64 128 Βακτηριοκτόνο Bactericidal(MBC/MIC < 4) MIC MBC 1 2 4 8 16 32 64 128 Βακτηριοστατικό- Bacteriostatic (MBC/MIC > 4) 30

Gentamicin 0.1 0.2 0.4 0.8 1.6 3.1 Ηγενταμυκίνηείναιβακτηριοκτόνο αντιβιοτικό γιατί: MIC = 0.8 μg/ml (ανάπτυξη 0.4, όχι 0.8) και MBC = 0.8. Άρα MBC = MIC. Η τετρακυκλίνη είναι βακτηριοστατικό αντιβιοτικό γιατί: MIC = 1.6 μg/ml, και ανάπτυξη σε 3.1, 6.3, και ίχνη σε 12.5 μg/ml, Άρα MBC 4 αραιώσεις υψηλότερη στα 25 μg/ml. 31 Tetracycline 0.1 0.2 0.4 0.8 1.6 3.1 6.3 12.5

Μέθοδος αραιώσεων σε άγαρ Tρυβλία με αντιβιοτικό (το κάθε ένα με διαφορετική συγκέντρωση) Πολλές κηλίδες από διαφορετικά στελέχη που ελέγχονται ταυτόχρονα (30-35 / τρυβλίο 100 mm) Καταγραφή της MIC 32

Μέθοδος αραιώσεων σε άγαρ Υλικό: Mueller-Hinton Agar (MHA) ph 7.2 7.4 σε θ ο C περιβάλλοντος αφού πήξει Όχι ιόντα Mg ή Ca NaCl 2% w/v για οξασιλλίνη, μεθικιλλίνη, ναφκιλλίνη (σταφυλόκοκκοι) 5% αίμα προβάτου για N. meningitis και στρεπτοκόκκους πλην S. pneumoniae, ή αλόγου(lhb) για σουλφοναμίδες σε στρεπτοκόκκους και για λιστέρια Ενοφθαλμισμός Συγκεκριμένη ποσότητα 33 Τοποθέτηση ως κηλίδα 5-8 mm στο ΜΗΑ (10 4 CFU/κηλίδα) Επώαση: 35±2 ο C για 16-20 h 20-24h για Acinetobacter spp., B. cepacia, S. maltophilia, 24h για oxacillin σε Staphylococcus, βανκομυκίνη σε Enterococcus και γενταμυκίνη / στρεπτομυκίνη HLAR σε Enterococcus 5% CO2 για N. meningitis, N. gonorrhoeae (36±1 o C) και στρεπτοκόκκους (20-24h)

Μέθοδος αραιώσεων σε άγαρ Όχι για δαπτομυσίνη [λιποπεπτίδιο για gram(+)] Όχι για H. influenzae και H. parainfluenzae Όχι για S. pneumoniae N. gonorrhoae: GC άγαρ, 5% CO2, 36±1 o C 34

Έτοιμα συστήματα προσδιορισμού MIC Χειροκίνητα Ημιαυτοματοποιημένα Etest MicroScan Autoscan 4 Wider I ATB system Αυτοματοποιημένα 35 Vitek System Phoenix System MicroScan WalkAway

36 Έτοιμα συστήματα προσδιορισμού MIC Σύγκριση αποτελεσμάτων AST panels με μέθοδο αραιώσεων σε ζωμό (μέθοδος αναφοράς) τουλάχιστον 100 κλινικά στελέχη ίδιου γένους ή είδους Πολύ μεγάλα σφάλματα (very major errors) ψευδώς ευαίσθητα: < 1.5% Μεγάλα σφάλματα (major errors) ψευδώς ανθεκτικά: < 3% Συμφωνία με μέθοδο αναφοράς (± (± 1 αραίωση): 90%

Μέθοδος κλιμακωτής (gradient) διάχυσης Ταινίες Εtest (strips): διαβαθμισμένες συγκεντρώσεις αντιβιοτικού Συγκεκριμένο εναιώρημα σε ΜΗΑ Μετά επώαση, αναστολή ανάπτυξης σε σχήμα έλλειψης MIC: σημείο που η έλλειψη συναντά την ταινία 37

Εtest Μέθοδος (σύμφωνα με οδηγίες κατασκευαστού) Υλικό: ΜΗΑ Εναιώρημα - ενοφθαλμισμός: όπως Κ-Β Τοποθέτηση ταινιών Εtest Επώαση (όπως Κ-Β) Ανάγνωση αποτελεσμάτων Οδηγίες κατασκευαστού Προσδιορισμός MIC (CLSI κριτήρια) 38

Εtest Ανάγνωση αποτελεσμάτων MIC: όπου η έλλειψη συναντά την ταινία Προσοχή στον ερπυσμό, στην αιμόλυση Αν μεταξύ αραιώσεων: MIC η μεγαλύτερη αραίωση 39 Σύμφωνα με οδηγίες κατασκευαστή

Εtest Ανάγνωση αποτελεσμάτων Στα βακτηριοκτόνα αντιβιοτικά: πλήρης αναστολή ανάπτυξης (όχι μικροαποικίες και θόλωση (haze)) 40 Σύμφωνα με οδηγίες κατασκευαστή

Εtest Ανάγνωση αποτελεσμάτων Στα βακτηριοστατικά αντιβιοτικά: 80% αναστολή ανάπτυξης MIC Linezolid S. aureus ATCC 29213 41 Σύμφωνα με οδηγίες κατασκευαστή

42 MICROSCAN Ημιαυτόματο ή αυτόματο σύστημα για: 1. ταυτοποίηση 2. εύρεση της MIC ή BP των gram ( - ) και gram ( + ) μικροβίων Το σύστημα: εξασφαλίζει πραγματικές MIC ή ΒΡ τιμές ανεξάρτητες από την ταυτοποίηση του μικροβίου έχει δυνατότητα ταυτόχρονης ταυτοποίησης και ΜICή BP σε ένα panel ( COMBO PANEL ) ελαχιστοποιεί την ανάγκη για off line tests δίνει αποτελέσματα ταυτοποίησης και MIC ήβρσε 16 18 ώρες για τα gram(-) και gram(+) έχει εύκολο και γρήγορο εμβολιασμός κάθε panel με μία μόνο κίνηση με τη βοήθεια ειδικού εξαρτήματος ( RENOK ) δίνει δυνατότητα διαβάσματος των panels με το μάτι διαθέτει ένα εξαιρετικά ανεπτυγμένο software για τη διαχείριση και την αποθήκευση των πληροφοριών (LABPRO-ALERT) AUTOSCAN 4 SYSTEM WALKAWAY SI 40/96

43

Wider I σύστημα Ημιαυτόματο σύστημα επεξεργαστή εικόνας για: 1. ταυτοποίηση 2. έλεγχο ευαισθησίας με πλάκες με συγκεκριμένες αραιώσεις αντιβιοτικών σύμφωνα με τη CLSI Το σύστημα διαθέτει: λογισμικό για την ψηφιακή επεξεργασία των απεικονίσεων και μετατροπή τους σε αριθμητικές τιμές εξελιγμένο πρόγραμμα expert rules σύμφωνα με τους κανόνες της CLSI με δυνατότητα συνεχούς ενημέρωσης με τα νεώτερα δεδομένα (update) προγράμματα αρχειοθέτησης, αναζήτησης, ελέγχου ποιότητας των αποτελεσμάτων 44

Vitek 2 σύστημα Μέθοδος μικροαραίωσης Κάρτα 64-μικροϋποδοχών Μια υποδοχή ελέγχου Υποδοχές προμετρημένων ποσοτήτων 19-20 αντιμικροβιακών παραγόντων σε συνδυασμό με υλικό καλλιέργειας Πλήρωση, σφράγισμα της κάρτας και τοποθέτησή της στην μονάδα επώασης/ανάγνωσης του οργάνου Παρακολούθηση ανάπτυξης σε κάθε υποδοχή της κάρτας ανά 15min (φθορισμός, θολερότητα, χρώμα) Προσδιορισμός MIC σε 4-18 ώρες Επαγωγή αποτελεσμάτων για 4-10 επιπλέον αντιβ. Αποτελέσματα για 23-30 αντιβιοτικά/κάρτα Advanced EXPERT System (AES) 45

60 & XL 46 Εναιώρημα σε: 3mL 0.45-0.50% NaCl 0.50-0.63 McF

Advanced EXPERT System (AES) 200 μηχανισμοί αντοχής Περισσότεροι από 2.400 φαινότυποι ~ 20.000 κατανομές MIC 100,000 βιβλιογραφικές αναφορές 47

Advanced EXPERT System (AES) Τυπικό στέλεχος Οριακή MIC (εντός) Οριακή MIC (εκτός) 0.25 8 MIC 48 Αναμενόμενη MIC στην Ampicillin για E.coli / Άγριο τύπο

Αποτελέσματα ευαισθησίας και φαινότυπος αξιολογούνται και επιβεβαιώνονται E.coli Ampicillin Cephalotin Cefotaxime Wild Penicillinase ESBL 49 Observed Αποτέλεσμα result ευαισθησίας MIC

Phoenix σύστημα Μικρομέθοδος Panels ταυτοποίησης και αντιβιογράμματος 50 Ταυτοποίηση Αντιβιόγραμμα 84 πηγαδάκια + 1 μάρτυρας ανάπτυξης τουλάχιστον 3 αραιώσεις / αντιβιοτικό Προσδιορισμός MIC όχι υπολογιζόμενη MIC Διπλός τρόπος ανάγνωσης Θολερότητα σαν δείκτης ανάπτυξης Χρώμα ως αντίδραση μικροβιακού μεταβολισμού Μέτρηση ανάπτυξης κινητικής μορφής / 20 min

51

BDXpert TM -System MIC ID Ερμηνεία (CLSI Standard) SIR Κανόνες expert ID Τελική ερμηνεία και διόρθωση αποτελεσμάτων 52

Πότε συνιστάται να γίνεται MIC? Αν στην μέθοδο διάχυσης των δίσκων (Κ-Β) δίσκος cefoxitine προτιμότερος S. aureus: oxacillin I, Staphylococcus: vancomycin =/< 14mm (S>/=15) Enterococcus: vancomycin I gentamicin, streptomycin (HLAR) I Haemophilus: cephems, carbapenems, monobactams, macrolides, fluoroquinolones όχι S N. meningitidis: ampicillin, penicillin cefotaxime, ceftriaxone, meropenem, azithromycin, minocycline όχι S N. gonorrhoeae: penicillin (χρωμοσωμιακή αντοχή) cefotaxime, cefepime, ceftazidime, cefixime όχι S

Πότε συνιστάται να γίνεται MIC? Αν στην μέθοδο διάχυσης των δίσκων (Κ-Β) S. pneumoniae: penicillin & cefotaxime ή ceftriaxone ή meropenem (CSF, OX</=19) vancomycin (CSF, όχι S) ampicillin, amoxicillin, cefepime, cefotaxime, ceftriaxone, cefuroxime, imipenem, meropenem linezolid όχι S Streptococci: πρασινίζοντες από στείρες περιοχές (CSF, οστά, αίμα) β-αιμολυτικοί penicillin, ampicillin, παρεντερικά χορηγούμενες cephems, vancomycin, linezolid όχι S

Επιλογή αντιβιοτικών Προτεινόμενα από την επιτροπή CLSI Ανάλογα με το είδος του μικροβίου Ανάλογα με τη θέση της λοίμωξης 55

Επιλογή αντιβιοτικών Εστίας λοίμωξης, αντοχής, αλλεργίας, κλπ Ομάδα Α: υποχρεωτικά (primary testing) Ομάδα Β: αντοχή στην ομάδας Α περιοχή λοίμωξης: SXT και ουρολοίμωξη, 3 η γενιάς κεφαλοσπορίνες και CSF πολυμικροβιακή λοίμωξη,πολλές εστίες λοίμωξης, αλλεργία, μη απάντηση σε Ομ. Α επιδημιολογικοί λόγοι Ομάδα C: εναλλακτική ή επιπλέον αγωγή Ομάδα U: θεραπεία ουρολοίμωξης Ομάδα Inv. Investigational

Αντιβιοτικά στον έλεγχο ευαισθησίας Gram αρνητικών (Α) Έλεγχος και αναφορά Αμπικιλλίνη Κεφαζολίνη Κεφουροξίμη Γενταμικίνη (Ο) Επιπλέον για τα ούρα Ναλιδιξικό οξύ Νορφλοξασίνη ή οφλοξασίνη Νιτροφουράνια Κο-τριμοξαζόλη 57 (Β) Έλεγχος και επιλεκτική αναφορά Πιπερακιλλίνη (Εμπορικά δεν υπάρχει) Τικαρκιλλίνη (Εμπορικά δεν υπάρχει) Αμοξυκιλλίνη+κλαβ. ή αμπικιλλίνη+σουλμπ. Πιπερακιλλίνη+ταζομπακτάμη Τικαρκιλλίνη+κλαβουλανικό Κεφοξιτίνη Κεφοταξίμη ή κεφτριαξόνη Κεφταζιδίμη Κεφεπίμη Αζτρεονάμη Ιμιπενέμη ή μεροπενέμη Ερταπενέμη Σιπροφλοξασίνη ή λεβοφλοξασίνη Κο-τριμοξαζόλη Αμικασίνη Νετιλμικίνη Τομπραμυκίνη Τετρακυκλίνη Χλωραμφαινικόλη

Αντιβιοτικά στον έλεγχο ευαισθησίας σταφυλοκόκκων (Α) Έλεγχος και αναφορά Κεφοξιτίνη (30μg) ή Oxacillin (1 μg) Πενικιλλίνη (10 u) Ερυθρομυκίνη (15μg) Κλινδαμυκίνη (2μg) Φουσιδικό οξύ (10μg) Σουλφαμεθοξαζόλη- Τριμεθοπρίμη (1,25/23,75μg) (Ο) Επιπλέον για τα ούρα Νορφλοξασίνη (10μg) Νιτροφουραντοΐνη (300μg) (Β) Έλεγχος και επιλεκτική αναφορά Γενταμικίνη (10μg) Καναμυκίνη (30μg) Νετιλμικίνη (30μg) [Τομπραμυκίνη] (10μg) Βανκομυκίνη (30μg) Τεϊκοπλανίνη (30μg) Σιπροφλοξασίνη (5μg) Ριφαμπικίνη (5μg) Τετρακυκλίνη (30μg) Λινεζολίδη (30μg) Κινοπριστίνη/ αλφοπριστίνη (15μg) 58

59

2 4 Κεφαμυσίνη 3 60

61

62 Group C

63

64

65

66

Πότε δεν δίνονται τα αποτελέσματα MIC? 1 η & 2 η γενιά κεφαλοσπορίνες και αμινογλυκοσίδες για Salmonella /Shigella β-λακτάμες σε methicillin ανθεκτικούς σταφυλοκόκκους Κεφαλοσπορίνες, αμινογλυκοσίδες (εκτός των HLRA), clindamycin, SXT για εντεροκόκκους Κεφαλοσπορίνες και aztreonam για ESBL K. pneumoniae, K. oxytoca, E. coli, P. mirabilis 67

Πότε δεν δίνονται τα αποτελέσματα MIC? 68