Ανάπτυξη και επικύρωση μεθόδου ειδικής για τον έλεγχο σταθερότητας (stabilityindicating

Σχετικά έγγραφα
Έλεγχοι. Τη συγκέντρωση του φαρμάκου σε δείγμα ιστού ή βιολογικού υγρού

ΑΝΑΛΥΣΗ ΦΥΣΙΚΩΝ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ

ΒΑΣΙΚΕΣ ΕΝΝΟΙΕΣ ΣΤΗΝ ΕΝΟΡΓΑΝΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

Γεωργικά Φάρμακα ΙΙΙ

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗΝ ΕΝΟΡΓΑΝΗ ΑΝΑΛΥΣΗ. Σινάνογλου Ι. Βασιλεία

" ιαπίστευση εξειδικευµένων διαδικασιών µη υπαγόµενων σε πρότυπα"

Έλεγχος ποιότητας φαρμακευτικών αναλύσεων

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας Ενότητα 5: Επικύρωση / Επαλήθευση αναλυτικών μεθόδων (1)

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας - Διαπίστευση Ενότητα 4: Επικύρωση/Επαλήθευση αναλυτικών μεθόδων (2)

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας - Διαπίστευση Ενότητα 4: Επικύρωση / Επαλήθευση αναλυτικών μεθόδων (1)

Εθνικόν και Καποδιστριακόν Πανεπιστήμιον Αθηνών ΤΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΗΣ Τομέας Φαρμακευτικής Χημείας. Ιωάννης Ντότσικας. Επικ.

Ενόργανη Ανάλυση II. Ενότητα 1: Θεωρία Χρωματογραφίας 7 η Διάλεξη. Θωμαΐδης Νικόλαος Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

Οργανολογία Κινητή φάση αέριο (άζωτο ή ήλιο)

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας

Πέτρος Ταραντίλης- Αναπληρωτής καθηγητής Χρήστος Παππάς -Επίκουρος ρς καθηγητής

ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΣΧΕΤΙΚΕΣ ΜΕ ΝΕΑΣ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΙΧΝΗΘΕΤΕΣ

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗΝ ΕΝΟΡΓΑΝΗ ΧΗΜΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ (INSTRUMENTAL METHODS OF ANALYSIS)

ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ HPLC

Ορισμός Αναλυτικής Χημείας

ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΟΡΓΑΝΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ. Άσκηση 2 η : Φασματοφωτομετρία. ΓΕΩΠΟΝΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ Γενικό Τμήμα Εργαστήριο Χημείας

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας Ενότητα 5: Επικύρωση/Επαλήθευση αναλυτικών μεθόδων (2) Κουππάρης Μιχαήλ Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

ΦΥΤΟΦΑΡΜΑΚΑ ΚΑΙ ΠΟΙΟΤΗΤΑ ΠΟΣΙΜΟΥ ΝΕΡΟΥ. Δρ. Γ. Ε. Μηλιάδης. Μπενάκειο Φυτοπαθολογικό Ινστιτούτο Εθνικό Εργαστήριο Αναφοράς

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας Ενότητα 5: Εκτίμηση αβεβαιότητας στην ενόργανη ανάλυση

Γεωργικά Φάρμακα ΙΙΙ

ΕΠΑΛΗΘΕΥΣΗ ΑΝΑΛΥΤΙΚΩΝ ΜΕΘΟΔΩΝ ΚΛΙΝΙΚΩΝ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΩΝ. Ειρήνη Δ. Λεϊμονή Δρ. Βιολόγος, Υπεύθυνη Ποιότητας, Κεντρικά Εργαστήρια, EUROMEDICA A.E.

Εθνικόν και Καποδιστριακόν Πανεπιστήμιον Αθηνών ΤΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΗΣ Τομέας Φαρμακευτικής Χημείας. Ιωάννης Ντότσικας. Επ. Καθηγητής

ΛΟΗ Β. PDF created with pdffactory trial version

Άσκηση 4 η : Χρωματογραφία

Οργανική Χημεία. Κεφάλαια 12 &13: Φασματοσκοπία μαζών και υπερύθρου

Γεωργικά Φάρμακα ΙΙΙ

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΙΣ ΜΕΘΟΔΟΥΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ:

Η ΑΝΑΓΚΗ ΓΙΑ ΠΟΣΟΤΙΚΟΠΟΙΗΣΗ ΣΤΗΝ ΕΝΟΡΓΑΝΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

Ενόργανη Ανάλυση II. Ενότητα 2: Εισαγωγή στις μεθόδους χρωματογραφίας 1η Διάλεξη. Θωμαΐδης Νικόλαος Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

Χρήστος Παππάς - Επίκουρος καθηγητής

ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΥ

Ενόργανη Ανάλυση Εργαστήριο. Φασματοσκοπία πυρηνικού μαγνητικού συντονισμού Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy, NMR. Πέτρος Α.

1.ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗΝ ΠΟΙΟΤΙΚΗ ΚΑΙ ΠΟΣΟΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

3/12/2014 ΑΜΙΣΟΥΛΠΡΙΔΗ " ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗΣ ΝΕΥΡΟΛΗΠΤΙΚΩΝ (ΑΜΙΣΟΥΛΠΡΙΔΗ)ΣΕ ΑΙΜΑ ΚΑΙ ΟΥΡΑ ΜΕ ΤΗ ΜΕΘΟΔΟ GC/MS " AΜΙΣΟΥΛΠΡΙΔΗ-ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΣ ΔΡΑΣΗΣ

ΑΝΑΛΥΤΙΚΗ ΓΕΩΧΗΜΕΙΑ. Αριάδνη Αργυράκη

Γεωπονικό Πανεπιστήµιο Αθηνών Τµήµα Επιστήµης και Τεχνολογίας Τροφίµων Εργαστήριο Ποιοτικού Ελέγχου και Υγιεινής Τροφίµων

Η ποιότητα συναντά την αποδοτικότητα. Φασματοφωτόμετρο DR6000 UV-VIS

ΜΕΡΟΣ Ι: ΘΕΩΡΗΤΙΚΕΣ ΓΝΩΣΕΙΣ

ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ. Με εφαρμογή υψηλής πίεσης η κινητή φάση διέρχεται μέσα από τη στατική ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΥΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΕΩΣ (HPLC)

Στατικός χαρακτηρισµός οργάνου (τεκµηρίωση που συνοδεύει το όργανο)

ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ 8 (ΦΡΟΝΤΙΣΤΗΡΙΟ) ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

Ενόργανη Ανάλυση II. Ενότητα 1: Θεωρία Χρωματογραφίας 3 η Διάλεξη. Θωμαΐδης Νικόλαος Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

Εθνικόν και Καποδιστριακόν Πανεπιστήμιον Αθηνών ΤΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΗΣ Τομέας Φαρμακευτικής Χημείας. Ιωάννης Ντότσικας. Επ. Καθηγητής

Χημική Τεχνολογία. Ενότητα 1: Στατιστική Επεξεργασία Μετρήσεων. Ευάγγελος Φουντουκίδης Τμήμα Μηχανολόγων Μηχανικών Τ.Ε.

Φασματομετρία ατομικής εκπομπής (φλογοφωτομετρία) & Ατομικής Απορρόφησης

ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΚΑΙ ΕΠΙΚΥΡΩΣΗ ΜΕΘΟΔΩΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ ΚΛΙΟΚΙΝΟΛΗΣ ΚΑΙ ΤΩΝ ΠΡΟΣΜΙΞΕΩΝ ΤΗΣ ΣΕ ΣΚΕΥΑΣΜΑ ΑΛΟΙΦΗΣ

ΤΜΗΜΑ ΧΗΜΕΙΑΣ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΠΑΤΡΩΝ ΕΝΖΥΜΟΛΟΓΙΑ. παράδοση β. Προσδιορισμός της ενζυμικής δραστικότητας ΑΛΕΞΙΟΣ ΒΛΑΜΗΣ ΕΠΙΚΟΥΡΟΣ ΚΑΘΗΓΗΤΗΣ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑΣ

Κυριακή, 23/2/2014 Mainalon Resort, Τρίπολη ΕΠΙΜΟΡΦΩΤΙΚΗ ΗΜΕΡΙΔΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΟΣ ΣΥΛΛΟΓΟΣ ΑΡΚΑΔΙΑΣ _

(YΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ) ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ (HIGH PERFORMANCE) LIQUID CHROMATOGRAPHY ΑΘΗΝΑ, ΔΕΚΕΜΒΡΙΟΣ 2014

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας

ΑΡΧΕΣ ΧΗΜΙΚΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ

ΑΣΚΗΣΗ ΦΑΣΜΑΤΟΜΕΤΡΙΑΣ ΜΑΖΑΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΑΝΑΛΥΤΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ ΙΙ

MAΘΗΜΑ 7 ο MEΘΟ ΟΙ ΙΑΧΩΡΙΣΜΟΥ ΟΡΓΑΝΙΚΩΝ ΕΝΩΣΕΩΝ

ΙΟΝΤΙΚΗ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΤΕΧΝΙΚΗΣ

Σχήμα 1: Εφαρμογές υπερδιακλαδισμένων πολυμερών.

Ο ΡΟΛΟΣ ΤΟΥ ΦΑΡΜΑΚΟΠΟΙΟΥ ΑΝΑΛΥΤΗ ΣΤΗΝ ΑΔΕΙΑ ΚΥΚΛΟΦΟΡΙΑΣ ΝΕΩΝ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΩΝ ΠΡΟΙΟΝΤΩΝ. ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΗ ΒΙΟΜΗΧΑΝΙΑ (Κυρίαρχο Πεδία Ευθύνης)

Ι. Ντότσικας, Επ. Καθηγητής Φαρμακευτικής ΕΚΠΑ. Οι κυκλοδεξτρίνες (cyclodextrins, CDs)

ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΕΝΟΡΓΑΝΗΣ ΑΝΑΛΥΣΗΣ

Εθνικόν και Καποδιστριακόν Πανεπιστήμιον Αθηνών ΤΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΗΣ Τομέας Φαρμακευτικής Χημείας. Ιωάννης Ντότσικας. Επ. Καθηγητής

ISO Πρότυπα σχετικά με τη διασφάλιση της ποιότητας μετρήσεων

ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΥ. ΑΝΝΑ-ΜΑΡΙΑ ΨΑΡΡΑ Τμήμα Βιοχημείας κ Βιοτεχνολογίας

ΑΡΧΕΣ ΥΓΡΗΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑΣ ΥΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΕΩΣ (HPLC)

Εργαστηριακή άσκηση μαθήματος «Σύγχρονες Αναλυτικές Τεχνικές»

Τοξικολογία Τροφίμων. Εισαγωγή στις βασικές έννοιες

Φυσικοχημεία 2 Εργαστηριακές Ασκήσεις

Μέτρηση ph διαλυμάτων καθημερινή χρήσης με την βοήθεια δεικτών και πεχαμετρικού χαρτιού. Μεταβολή του χρώματος των δεικτών

Ενόργανη Ανάλυση II. Ενότητα 1: Θεωρία Χρωματογραφίας 2 η Διάλεξη. Θωμαΐδης Νικόλαος Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

ΕΡΕΥΝΗΤΙΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ. Θεωρία - Πείραμα Μετρήσεις - Σφάλματα

ΜΕΘΟΔΟΙ ΕΛΕΓΧΟΥ ΑΚΡΙΒΕΙΑΣ (ACCURACY)

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας Ενότητα 4: Μελέτη ISO Κουππάρης Μιχαήλ Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

Ενόργανη Ανάλυση Εργαστήριο. Πέτρος Α. Ταραντίλης Χρήστος Παππάς

Φυσικοχημεία 2 Εργαστηριακές Ασκήσεις

Υδρογεωχημεία Αναλυτική Γεωχημεία Ενότητα 4: Τεχνικές ανάλυσης διαλυμάτων

Άσκηση 3η. Μέθοδοι Διαχωρισμού. Τμήμα ΔΕΑΠΤ - Εργαστήριο Γενικής Χημείας

ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΕΝΔΟΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗΣ ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΙΜΟΤΗΤΑΣ (ΕΝΔΙΑΜΕΣΗΣ ΠΙΣΤΟΤΗΤΑΣ, INTERMEDIATE PRECISION)

Κουππάρης Μιχαήλ Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

Αξιοποίηση Φυσικών Αντιοξειδωτικών στην Εκτροφή των Αγροτικών Ζώων για Παραγωγή Προϊόντων Ποιότητας. Γεωπονικό Πανεπιστήμιο Αθηνών

Έλεγχος Ποιότητας Φαρμάκων

ΓΕΩΡΓΙΚΗ ΧΗΜΕΙΑ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ

ΤΟ ΦΩΤΟΜΕΤΡΟ. Διάφοροι τύποι σύγχρονων φωτόμετρων. Βασική αρχή λειτουργίας

ΟΡΓΑΝΟΛΟΓΙΑ ΦΑΣΜΑΤΟΜΕΤΡΙΚΩΝ ΟΡΓΑΝΩΝ ΜΕΤΡΗΣΗΣ: ΑΠΟΡΡΟΦΗΣΗΣ ΦΘΟΡΙΣΜΟΥ, ΦΩΣΦΩΡΙΣΜΟΥ, ΣΚΕΔΑΣΗΣ ΕΚΠΟΜΠΗΣ, ΧΗΜΕΙΟΦΩΤΑΥΓΕΙΑΣ

στο σημείο στόχο, όπου και θα εκδηλώνουν τη δράση τους. Η κατηγορία των αντιμικροβιακών που μελετήθηκε είναι οι κινολόνες: οξολινικό οξύ (ΟΧΑ) και

Γεωργικά Φάρμακα ΙΙ Ενότητα 12

Μέθοδοι ελέγχου φαρμάκων

Κεφάλαιο 15: Επικύρωση Βιοαναλυτικών Μεθόδων

Φασματοφωτομετρία. Φασματοφωτομετρία είναι η τεχνική στην οποία χρησιμοποιείται φως για τη μέτρηση της συγκέντρωσης χημικών ουσιών.

ΜΙΧΑΗΛΚΟΥΠΠΑΡΗΣ ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗΝΕΝΟΡΓΑΝΗΑΝΑΛΥΣΗ ΕΝΟΡΓΑΝΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

Δρ. Νικόλας Φωκιαλάκης. Επίκουρος Καθηγητής. Τομέα Φαρμακογνωσίας και Χημείας Φυσικών Προϊόντων

Ενόργανη Ανάλυση II. Ενότητα 1: Θεωρία Χρωματογραφίας 4 η -5 η Διάλεξη. Θωμαΐδης Νικόλαος Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας

ΦΑΣΜΑΤΑ ΕΚΠΟΜΠΗΣ ΑΠΟΡΡΟΦΗΣΗΣ

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΙΣ ΦΑΣΜΑΤΟΜΕΤΡΙΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ (SPECTROMETRIC TECHNIQUES)

Επίσηµη Εφηµερίδα των Ευρωπαϊκών Κοινοτήτων ΕΠΙΤΡΟΠΗ (2002/657/ΕΚ) (5) Βάσει της οδηγίας 96/23/EΚ λειτουργείένα δίκτυο κοινοτικών

ΟΡΓΑΝΙΚΗ ΧΗΜΕΙΑ ΚΑΙ ΒΙΟΧΗΜΕΙΑ ΠΙΝΑΚΑΣ ΚΑΤΑΝΟΜΗΣ ΛΙΛΑΚΤΙΚΩΝ ΩΡΩΝ

ΜΑΘΗΜΑ: Τεχνολογία Μετρήσεων ΙΙ

Επιλογή Στηλών κατά την Ανάπτυξη Μεθόδων HPLC Μ. ΚΟΥΠΠΑΡΗΣ

ΠΙΣΤΟΠΟΙΗΣΗ ΔΟΚΙΜΑΣΙΩΝ ΚΑΙ ΘΕΜΑΤΑ ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗΣ. Αλεξάνδρα Φλέβα Ph.D Βιολόγος Τμήμα Ανοσολογίας-Ιστοσυμβατότητας Γ.Ν.

Transcript:

Εθνικόν και Καποδιστριακόν Πανεπιστήμιον Αθηνών ΤΜΗΜΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΗΣ Τομέας Φαρμακευτικής Χημείας Ανάπτυξη και επικύρωση μεθόδου ειδικής για τον έλεγχο σταθερότητας (stabilityindicating assay method) Ιωάννης Ντότσικας Επ. Καθηγητής 1

Δεν υπάρχει οδηγία που να ορίζει σαφώς τι είναι μία αναλυτική μέθοδος κατάλληλη για μελέτη σταθερότητας (SIAM) Με αυτή τη μέθοδο πρέπει να επιτυγχάνεται : διαχωρισμός όλων των προϊόντων διάσπασης από το δραστικό συστατικό και μεταξύ τους παρουσία των προσμίξεων των εκδόχων του σκευάσματος και των πιθανών συμπλόκων με μεγαλομόριο (π.χ. κυκλοδεξτρίνη) Η ειδικότητα (specificity) είναι καθοριστικής σημασίας, καθώς με τη συνέκλουση αλλοιώνεται η εκτίμηση των προϊόντων διάσπασης (FDA, 1997 & draft 1998) 2

Μία ΚΑΝΟΝΙΚΗ SIAM πρέπει να αφορά όλα τα είδη έντονων διασπάσεων Πάρα πολλά άρθρα, λίγα όμως έχουν αυτή την ιδιότητα (ΑΙΤΙΑ: έλλειψη σαφούς οδηγίας) Έχουν αναφερθεί ογκομετρήσεις και μετρήσεις σε UV-Vis για μελέτη σταθερότητας. Απλές τεχνικές, αλλά παρακολουθούν (συνήθως) μόνο τη δραστική!! ΕΛΛΕΙΨΗ ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑΣ Το NMR έχει νόημα για την ταυτοποίηση δομών Η TLC έχει νόημα μόνο για κάποια πρώτα στάδια αναλύσεων Η GC αφορά λίγες πτητικές και θερμοανθεκτικές ουσίες Η CE έχει αρχίσει και χρησιμοποιείται LC/MS για ταυτοποίηση δομή (TOF, HRMS), συμβατές κινητές φάσεις 3

Προτιμητέα μέθοδος: RP-HPLC (αντιστρόφου φάσης) Είναι πιο κατάλληλη για μελέτες σταθερότητας γιατί: 1) Είναι συμβατή με οργανικούς διαλύτες και υδατικά διαλύματα 2) Υψηλή πιστότητα 3) Υψηλή ευαισθησία 4) Ικανότητα ανίχνευσης πολικών μορίων 4

Διαχωρισμός με χρωματογραφική μέθοδο HPLC ειδική για τον έλεγχο της σταθερότητας της καρβεδιλόλης 5

Προκατακτικές ενέργειες Βήμα 1: Εκτίμηση της πιθανής πορείας αποικοδόμησης βάσει δομής, γνώσεων για ανάλογα μόρια κτλ.. (χρήση softwares) Κάποια προϊόντα διάσπασης είναι οι προσμίξεις 6

Προκατακτικές ενέργειες Βήμα 2: Προσδιορισμός των φυσικοχημικών ιδιοτήτων όπως pka, logp, λmax κτλ Ειδικά το pka έχει μεγάλη σημασία, καθώς σε ph ± 1,5 συμβαίνουν οι πιο πολλές αλλαγές στους χρόνους συγκράτησης (φορτισμένο-αφόρτιστο μόριο) -Έλεγχος διαλυτότητας δραστικής και προϊόντων διάσπασης σε διαλύτες συμβατούς με την HPLC -Ιδανική η περίπτωση χρήσης ενός λmax για όλους τους αναλύτες, αλλά αν δε γίνεται αλλιώς μπορούν χρησιμοποιηθούν 2, 3, οπότε απαιτείται PDA. 7

Προκατακτικές ενέργειες Βήμα 3: Διενέργεια stress tests -Ένας ελάχιστος αριθμός 4 δειγμάτων πρέπει να χρησιμοποιείται για κάθε δοκιμασία + λευκά δείγματα -Επίσης, απόσυρση δειγμάτων σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα, γιατί κάποια προϊόντα μπορεί να εξαφανίζονται - Εχουν παρουσιαστεί μελέτες με διενέργεια ελέγχων σε εναιωρήματα 8

Προκατακτικές ενέργειες Βήμα 4: Προκαταρκτικά πειράματα διαχωρισμού Ο διαχωρισμός επιτυγχάνεται με: 1) Επιλογή κατάλληλης χρωματογραφικής στήλης 2) Επιλογή θερμοκρασίας στήλης 3) Επιλογή ph κινητής φάσης (σε δεύτερη φάση, αρχικά όχι buffer) 4) Επιλογή οργανικού τροποποιητή (ACN, MeOH) και ποσοστό αυτού 5) Επιλογή βαθμιδωτής (gradient) έκλουσης που μπορεί να δώσει ένα πλήρες προφίλ 9

Βήμα 5: Οριστικοποίηση μεθόδου Γιατί δεν παίρνω έτοιμη τη μέθοδο της φαρμακοποιίας; Βήμα 6: Χαρακτηρισμός προϊόντων διάσπασης -Με MS, NMR, IR Βήμα 7: Ακολουθεί επικύρωση μεθόδου Συνήθως μία διάσπαση 5-20% θεωρείται λογική για επικύρωση της μεθόδου Η κατάσταση δυσκολεύει πολύ αν η μελέτη αφορά σκευάσματα που περιέχουν περισσότερες της μία δραστικές 10

Κρίσιμο σημείο: Ο διαχωρισμός πολύ πολικών μορίων, μεταξύ τους και από το μέτωπο του διαλύτη Λύση: Η εφαρμογή βαθμιδωτής έκλουσης με μεταβαλόμενη αναλογία οργανικού τροποποιητή : ρυθμιστικού διαλύματος Πολικά μόρια: -φορτίο ( ph) -πολικές ομάδες (-ΟΗ, -COOH, SH, κτλ) 11

Η προετοιμασία των δειγμάτων από συνθήκες επιταχυνόμενης διάσπασης (stress sample) πρέπει να μοιάζει, όσο το δυνατό, με την προκατεργασία κατά την ανάπτυξη της αναλυτικής μεθόδου. Αραίωση ή εξουδετέρωση (ουδέτερο ph) είναι πιθανή μετά από όξινη ή αλκαλική υδρόλυση Ως δείγματα χρησιμοποιούνται: 1) ακέραιο αρχικό δείγμα 2) το αρχικό δείγμα που έχει αποικοδομηθεί κατά δύο ημιζωές και 3) δείγματα από ενδιάμεσες καταστάσεις Εμφάνιση και εξαφάνιση κάποιων προϊόντων αποικοδόμησης 12

Τα χρωματογραφικά προφίλ των δειγμάτων επιταχυνόμενης διάσπασης πρέπει να συκρίνονται με αυτά των λευκών (χωρίς δραστική) και των δειγμάτων που δεν έχουν υποστεί διάσπαση (3 είδη δειγμάτων) προέλευση κορυφών Οι κορυφές των λευκών δειγμάτων πρέπει να αποκλείονται από τους υπολογισμούς 13

Διατήρηση της μάζας: Αφορά τo άθροισμα των αποτελεσμάτων του προσδιορισμού (assay) και των επιπέδων των προϊόντων διάσπασης, ώστε να διαπιστωθεί πόσο κοντά στο 100% της αρχικής τιμής φτάνει το συνολικό άθροισμα, λαμβανομένων υπόψιν των αναλυτικών σφαλμάτων. Είναι βασικό να γίνεται στα πρώτα στάδια για να διαπιστωθεί ότι «δουλεύει» η SIAM και ότι δεν «χάνουμε» κάποιο προϊόν (τουλάχιστον βασικό) 14

15

Σε ποιες περιπτώσεις μπορεί να είναι δύσκολο να αποδειχθεί η διατήρηση της μάζας - Πολύπλοκοι μηχανισμοί διάσπασης οδηγούν σε μη αναμενόμενα προϊόντα - Ανεπαρκής ανιχνευσιμότητα στο UV λόγω απώλειας χρωμοφόρου ή μη ομοιόμορφη «συμπεριφορά» - Απώλεια λόγω εξάτμισης (πτητικό προϊόν) - Προσρόφηση σε περιέκτες - Λόγω έλλειψης standards άγνωστη συμπεριφορά π.χ. στην έκλουση (π.χ. συνέκλουση με δραστική) ή στην απορρόφηση - Σημαντικά σφάλματα (όχι τυχαία) στον προσδιορισμό Σε αυτές τις περιπτώσεις είναι απαραίτητη η απόδειξη εκλεκτικότητας της SIAM και η σύνδεση του βαθμού διάσπασης με ένα προϊόν (+ φυσικά στοιχεία επικύρωσης) 16

Η ύπαρξη standards είναι πολύ σημαντική για την SIAM Η ποσότητα των προσμίξεων (γνωστών και αγνώστων) σε κάθε κατάσταση επιταχυνόμενης διάσπασης πρέπει να παρέχεται μαζί με τα χρωματογραφήματα σε κατάλληλη κλίμακα των 3 ειδών δειγμάτων που προαναφέρθηκαν Τα χειρόμορφα μόρια πρέπει να αναλύονται με χειρόμορφες στήλες για να υπολογίζεται η στερεοχημική σταθερότητα και καθαρότητα 17

Η επιλεγόμενη αναλυτική μέθοδος πρέπει να είναι αρκετά ευαίσθητη (..ανιχνευτής) για την ανίχνευση προϊόντων διάσπασης/προσμίξεων σε χαμηλά επίπεδα, π.χ. 0,05% της δραστικής ή ακόμη χαμηλότερα Η ταυτοποίηση και ο χαρακτηρισμός των προϊόντων διάσπασης είναι μία ιδιαίτερα απαιτητική διαδικασία και πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις διαδικασίες της ICH. Οργανολογία όπως NMR ή φασματομετρία μαζών είναι ιδιαίτερα χρήσιμη γενοτοξικότητα (.καθορισμός αυστηρότερων ορίων) 18

Η εύρεση της δομής των προϊόντων διάσπασης είναι απαραίτητη για εκείνα τα προϊόντα που σχηματίζονται στη μελέτη σταθερότητας κατά τη διάρκεια ζωής του και είναι πάνω από το όριο ανίχνευσης Η χρήση ανιχνευτή με ικανότητα απεικόνισης δεδομένων 3D, όπως PDA ή MS επιτρέπει την ανίχνευση ετερογένειας στο φάσμα Μετά την οριστικοποίηση της μεθόδου, η χρήση ανιχνευτών όπως RI/ELSD/CE και η σύγκριση των αποτελεσμάτων μπορεί να οδηγήσει π.χ. στην αποκάλυψη μορίων που δεν απορροφούν στο UV 19

Πρέπει να επιλεγεί μήκος κύματος λ που να επιτρέπει την ανίχνευση και την ποσοτικοποίηση όλων των πιθανών προϊόντων διάσπασης/προσμίξεων Μπορεί να απαιτηθεί χρήση περισσοτέρων του ενός λ, αλλά δεν πρέπει να υπάρχει αλληλεπικάλυψη των φασμάτων!!!! H καταγραφή όλων των φασμάτων, βοηθά στην παρατήρηση διαφορών 20

Ποιες κορυφές αγνοούνται για ποσοτικοποίηση: 1) Αυτές που υπάρχουν και στο λευκό και το δείγμα placebo (δείγμα που δεν έχει υποστεί διάσπαση) 2) Αυτές που αντιστοιχούν σε προσμίξεις ή προϊόντα διάσπασης και είναι < 0,01% της δραστικής 3) Αυτές που αντιστοιχούν σε προϊόντα διάσπασης από το placebo ΑΝ δεν αντιστοιχούν σε τοξικά προϊόντα 21

22

Σκοπός της επικύρωσης (validation) μίας αναλυτικής μεθόδου είναι η απόδειξη της καταλληλότητάς της για το σκοπό που αναπτύχθηκε Χαρακτηριστικά επικύρωσης: -Ειδικότητα (Specificity) -Γραμμικότητα (Linearity) -Εύρος συγκεντρώσεων (Concentration Range) -Όριο ανίχνευσης (Limit of Detection) -Όριο ποσοτικοποίησης (Limit of Quantitation) - Ορθότητα ή Ακρίβεια (Accuracy) - Πιστότητα (Precision), Επαναληψιμότητα, ενδιάμεση πιστότητα, αναπαραγωγιμότητα -Ανθεκτικότητα (Robustness) 23

ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ (SPECIFICITY) ΚΑΙ ΕΚΛΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ (SELECTIVITY) Εκφράζει την παρεμπόδιση στον προσδιορισμό ενός συστατικού σε ένα δείγμα από τα άλλα συστατικά του μείγματος Μια μέθοδος είναι πλήρως ειδική (specific) για ένα αναλύτη, εάν η συγκέντρωσή του μπορεί να προσδιορισθεί με ακρίβεια χωρίς επίδραση από τα άλλα συστατικά του δείγματος 24

ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ (SPECIFICITY) ΚΑΙ ΕΚΛΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ (SELECTIVITY) Μια μέθοδος είναι πλήρως εκλεκτική (selective), εάν παρέχει ορθά αναλυτικά αποτελέσματα για τα διάφορα συστατικά του μείγματος χωρίς αλληλεπίδραση μεταξύ τους. Μια εκλεκτική μέθοδος συνίσταται από μια σειρά ειδικών μετρήσεων. Πολλές φορές δεν γίνεται διάκριση των δύο όρων και χρησιμοποιούνται ισοδύναμα 25

ΣΧΕΣΗ ΟΡΘΟΤΗΤΑΣ ή ΑΚΡΙΒΕΙΑΣ (accuracy) ΜΕ ΠΙΣΤΟΤΗΤΑ (precision) 26

Υποσύνολα της πιστότητας: Επαναληψιμότητα (Repeatability) Αναπαραγωγιμότητα (Reproducibility) Επαναληψιμότητα: Το μέτρο της διασποράς των αποτελεσμάτων διαδοχικών ελέγχων στο ίδιο δείγμα, που εκτελούνται κάτω από τις ίδιες συνθήκες, δηλ. ίδια μέθοδος ελέγχου, ίδιος αναλυτής, ίδια συσκευή, ίδιο εργαστήριο και βραχύ χρονικό διάστημα. 27

Αναπαραγωγιμότητα: Το μέτρο της διασποράς μεταξύ των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται με την ίδια μέθοδο στο ίδιο δείγμα, κάτω από διαφορετικές συνθήκες, δηλ. διαφορετικός αναλυτής, διαφορετικές συσκευές, διαφορετικές παρτίδες αντιδραστηρίων, διαφορετικούς χρόνους. - Ενδοεργαστηριακή αναπαραγωγιμότητα (στο ίδιο εργαστήριο) [στις Φαρμακοποιίες αναφέρεται και ως Intermediate Precision Ενδιάμεση Πιστότητα] - Διεργαστηριακή αναπαραγωγιμότητα (σε διαφορετικά εργαστήρια). 28

LOQ LOD 29

ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ (Ruggedness) (για τη φαρμακοποιία ROBUSTNESS) Εξετάζεται στη φάση της ανάπτυξης της μεθόδου και περιγράφει την ανθεκτικότητά της σε προσχεδιασμένες σκοπούμενες μικρομεταβολές των πειραματικών παραμέτρων. Σχετίζεται με την αντοχή (robustness) της μεθόδου σε τυχαίες μη σκοπούμενες μικρομεταβολές των πειραματικών παραμέτρων που αντιστοιχούν στον έλεγχο της διεργαστηριακής αναπαραγωγιμότητας. 30