ESTRUTURA DE UN AMINOÁIDO 1
PROTEINAS ENLAE PEPTÍDIO Aminoácido 1 Aminoácido 2 UNIÓN PEPTÍDIA PÉPTIDOS dipéptidos tripéptidos tetrapéptidos oligopéptidos 2 aminoácidos 3 aminoácidos 4 aminoácidos 5-10 aminoácidos polipéptidos 10-100 aminoácidos proteínas Más de 100 aminoácidos 2
PROTEÍNAS: FUNIONES BIOLÓGIAS 1- Funciones atalíticas: enzimas 2- Funciones de Transporte: hemoglobina, ferritina 3- Funciones de reserva: proteínas de semillas, ovoalbúmina 4- Funciones contráctiles o mótiles: actina y miosina de los músculos esqueléticos; tubulina y dineína de los flagelos y cilios 5- Funciones de defensa: inmunoglogulinas, fibrinógeno, veneno de serpientes 6- Funciones estructurales: colágeno, queratina, fibroína 7- Funciones reguladoras: insulina, oxitocina PROTEÍNAS: FUNIONES BIOLÓGIAS 1- Enzimas 2- Proteínas de Transporte: se encuentran en el plasma sanguíneo y transportan moléculas o iones específicos de un órgano a otro. Ejemplos: hemoglobina, lipoproteínas, proteínas de membranas etc. 3- Proteínas nutrientes y de reserva: las semillas de muchas plantas almacenan proteínas nutrientes requeridas para el crecimiento de semillas en germinación (ejemplos: semillas de arroz, trigo, maíz). Otros ejemplos: ovalbúmina (clara de huevo), caseína (leche) y ferritina (almacena hierro en ciertas bacterias y en tejidos animales y vegetales). 4- Proteínas contráctiles o motiles: confieren a las células capacidad para contraerse, cambiar de forma o moverse. Ejemplos: actina y miosina (músculo esquelético); tubulina, es la proteína que forma los microtúbulos que actúan de manera concertada con la proteína deneína en los flagelos y cilios para propulsar las células. 3
5- Proteínas de defensa: protegen contra la invasión por otras especies o contra heridas. Ejemplo: inmunoglobulinas o anticuerpos; fibrinógeno, y trombina; ricina (proteína vegetal tóxica); venenos de serpientes, etc. 6- Proteínas estructurales: muchas proteínas actúan como filamentos de soportes, cables u hojas para conferir fuerza o protección a las estructuras biológicas. Ejemplo: colágeno, elastina, queratina, fibroína, etc. 7- Proteínas reguladoras: ayudan a regular la actividad celular o fisiológica. Entre ellas se encuentran las hormonas. omo ejemplo se puede citar la insulina que regula el metabolismo glucídico. Otras proteínas reguladoras se fijan al DNA y controlan la biosíntesis de enzimas y de RNA tanto en procariotas como en eucariotas. PROTEÍNAS: LASIFIAIÓN Según su composición química: SIMPLES Albúminas: ovoalbúmina Globulinas: fibrinógeno Prolaminas: zeína, gliadina Glutelinas: proteínas del trigo Escleroproteínas: queratina Protaminas: proteínas de esperma de peces. ONJUGADAS Nucleoproteínas: cromosomas ( Ácido Desoxiribonucleico) Glucoproteínas: γ globulinas, interferón (glúcidos) Metaloproteínas: hemoglobina (metal) Lipoproteínas: lipoproteína de alta densidad (grasas, colesterol) DERIVADAS Albumosas Peptonas Péptidos 4
PROTEÍNAS: ESTRUTURA ESTRUTURA PRIMARIA Estructura primaria de la insulina humana. PROTEÍNAS: ESTRUTURA ESTRUTURA SEUNDARIA α - Hélice: 5
PROTEÍNAS: ESTRUTURA ESTRUTURA SEUNDARIA onformación β: PROTEÍNAS: ESTRUTURA ESTRUTURA SEUNDARIA Giros β: H H 2 N O H 2 O H 2 H 2 6
PROTEÍNAS: ESTRUTURA ESTRUTURA TERIARIA PROTEÍNAS: ESTRUTURA ESTRUTURA TERIARIA UNIONES QUE ESTABILIZAN ESTA ESTRUTURA : Puente Hidrógeno Enlace iónico Puente disulfuro Interacciones hidrofóbicas 7
PROTEÍNAS: ESTRUTURA ESTRUTURA UATERNARIA PROTEÍNAS: LASIFIAIÓN Según su forma FIBROSAS: queratina colágeno fibroína GLOBULARES: insulina inmunoglobulinas albúminas 8
PROTEÍNAS DE MEMBRANA ELULAR ESTRUTURAS 9
PROPIEDADES Solubilidad Punto Isoeléctrico Desnaturalización Agentes Físicos Agentes Químicos - alor - Radiaciones - ph extremos - cationes de metales pesados - etanol - urea - solventes orgánicos - detergentes PRÁTIO DE LABORATORIO OBJETIVOS: aracterizar, reconocer y cuantificar distintas proteínas mediante prácticas sencillas de laboratorio. MATERIALES: 10
REAIONES DE ARATERIZAIÓN Proteína a caracterizar: Ovoalbúmina (clara de huevo diluida 1/5 y filtrada) 1. Ensayos de oagulación y Precipitación: 2 ml de solución + calor 2 ml de solución + 2 ml EtOH 2 ml de solución + 2 ml Hl Observar 2 ml de solución + 2 ml HNO 3 2 ml de solución + 2 ml NaOH REAIONES DE ARATERIZAIÓN 2. Reacciones de oloración: a) Reacción de Biuret : O H O H N N R R u ++ R R O N H O N H 2 ml sol. Proteína 2 ml NaOH 20 % Observar gotas de uso 4 1% 2 ml sol. Aminoác. 2 ml NaOH 20% Observar gotas de uso 4 1% Grado de Hidrólisis de Proteínas Proteínas + Reactivo de Biuret azul-violeta Proteosas o albumosas + Reactivo de Biuret rosado Peptonas + Reactivo de Biuret rosado Péptidos + Reactivo de Biuret rosado Dipéptidos + Reactivo de Biuret no reacciona Aminoácidos + Reactivo de Biuret no reacciona 11
2. Reacciones de oloración: b) Reacción Xantoproteica : O O O H 2N H OH H 2N H OH H 2N H OH H 2 H 2 H 2 HN Fenilalanina OH Tirosina Triptófano 2 ml sol proteína alentar Observar gotas HNO 3 2 ml sol. Aminoác. aromático alentar Observar gotas HNO 3 2 ml sol. Aminoác. no aromático alentar Observar gotas HNO 3 2. Reacciones de oloración: c) Reacción de Millon : 2 ml sol proteína alentar Observar gotas de Reactivo d) Reacción de la Ninhidrina: 2 ml sol proteína alentar Observar 0,5 ml Ninhidrina 0,1% 2 ml sol aminoác. alentar Observar 0,5 ml Ninhidrina 0,1% 12
EXTRAIÓN Y ARATERIZAIÓN DE PROTEÍNAS DE SEMILLAS Extracción: Albúminas 10 gr harina de trigo Reposo 1 h Filtrar 40 ml H 2 O destilada Prolaminas 10 gr harina de trigo Reposo 1 h Filtrar 50 ml EtOH 70% Glutelinas 10 gr gluten Reposo 1 h Filtrar 50 ml NaOH Globulinas 5 gr harina de arveja Reposo 1 h Filtrar 12 ml Nal 10% EXTRAIÓN Y ARATERIZAIÓN DE PROTEÍNAS DE SEMILLAS - aracterización: Albúmina Prolaminas Glutelinas Globulinas R. de Biuret + + + + alentamie nto oagula No coagula No coagula oagula EtOH 100% H 2 O H 2 SO 4 NaOH 13
DETERMINAIÓN UANTITATIVA DE PROTEÍNAS BLANO PATRÓN MUESTRA H 2 O destilada 0.1 ml -- -- Patrón -- 0.1 ml -- Muestra -- -- 0.1 ml NaOH 10% 5 ml 5 ml 5 ml uso 4 1% O,5 ml O,5 ml O,5 ml 14