ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΤΟΥ ΓΕΝΟΥΣ ΤΩΝ ΜΥΚΟΒΑΚΤΗΡΙΔΙΩΝ Γένος Μycobacterium (G+C 60-70% DNA) Μέγεθος:0.2-0.6 * 1-10 μm Αερόβιο, μη-κινητό,δεν σχηματίζει σπόρια. Ανθίστανται στον αποχρωματισμό από οξέα-αλκοόλη Θεωρούνται Θετικά κατά Gram βάκιλοι Σχηματίζουν αποικίες που είναι χαρακτηριστικές για το κάθε είδος Ορισμένα είδη παράγουν έγχρωμες αποικίες Πολ/σιάζονται με αργό ρυθμό 2-20 ώρες και οι αποικίες σε καλλιέργειες είναι ορατές από 2 ημέρες μέχρι 8 εβδομάδες Τα περισσότερα είδη αναπτύσσονται εύκολα σε απλά θρεπτικά υλικά ( Αμμωνία,γλυκερόλη, ορυκτά άλατα)
ΤΟΥ ΓΕΝΟΥΣ ΤΩΝ ΜΥΚΟΒΑΚΤΗΡΙΔΙΩΝ Μ TUBERCULOSIS COMPLEX NONTUBERCULOUS MYCOBACTERIA MYCOBACTERIUM LEPRAE
ΧΡΟΝΟΛΟΓΙΚΗ ΕΞΕΛΙΞΗ ΤΟΥ Μ TBC Υπάρχει στη γη περισσότερο από 20.000 χρόνια Η μελέτη του SNP αποτελεί το βιολογικό χρονόμετρο του Μυκοβακτηριδίου Εχεί βρεθή σε Μούμιες της προ-κολουμβιανής περιόδου στο ECUADOR Kαι σε μούμιες από τις πυραμίδες της Αιγύπτου Το Μυκοβακτηρίδιο κατά την εξέλιξη του χάνει γεννετικό υλικό (DELETION).
Μ TBC KAI ΞΕΝΙΣΤΕΣ ΑΝΘΡΩΠΟΣ ΟΙΚΕΙΑΚΑ ΖΩΑ ΑΓΡΙΑ ΖΩΑ ΦΩΚΙΕΣ
Μ. PINIPEDII
Μ. PINIPEDII
M. Dassie
Μ. MICROTI
M. CAPRAE
M. BOVIS
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS COMPLEX 4.411.522 bp G+C 65.5% 3924 ΕΙΔΗ ΠΡΩΤΕΙΝΩΝ ΑΥΤΟΔΥΝΑΜΟ ΜΙΚΡΟΒΙΟ
ΛΙΠΙΔΙΑ ΤΟΥ ΕΞΩΤΕΡΙΚΟΥ ΤΟΙΧΩΜΑΤΟΣ ΤΟΥ ΜTBC ( 1LPS)
1LPS: Free Fatty acids Mycolic acid Arabinogalactan Peptidoglycan ΛΙΠΙΔΙΑ ΤΟΥ ΤΟΙΧΩΜΑΤΟΣ ΤΟΥ ΜTBC ( 2LPS) Lipoarabinomannan( 2LPS) Sulfatides Cord Factor (6,6-dimycolyl-α,α-D-trehalose) Mycosides ( Bacteriphage receptors sites)
ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ ΑΝΤΙΓΟΝΑ ΤΟΥ ΜΤΒC
ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ- ΑΝΤΙΓΟΝΑ ΤΟΥ ΜΤΒC ME ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΑΞΙΑ ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ- ΑΝΤΙΓΟΝΑ ΤΟΥ RD1 ΜΤΒC ESAT-6 CFP-10 MPT-64 Μ.TUBERCULOSIS M.KANSASI M.MARINUM M.FLAVESCENS M.SZULGAI ΟΡΟΔΙΓΝΩΣΤΙΚΑ ΑΝΤΙΓΟΝΑ: 38 KDa antigen Lipoarabinomannan Antigen 60 Antigen 80 Elisa, Radioimmunoassay etc
ΛΑΝΘΑΝΟΥΣΑ ΦΥΜΑΤΙΩΣΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ
ΦΥΜΑΤΙΝΟΑΝΤΙΔΡΑΣΗ Μantoux test Heaf test MEIONEKTHMATA 200 αντιγόνα πολλά είναι κοινά με τα άτυπα Αναμνηστική έξέταση Δεν διαχωρίζει την λοίμωξη από το BCG
MANTOUX TEST
ΗΕAF TEST ΑΡΝΗΤΙΚΟ HEAF TEST ΘΕΤΙΚΟ HEAF TEST
IFN-γ Assays Quantiferon-TB Gold Elisspot assay
ΥΛΙΚΑ ΓΙΑ ΕΞΕΤΑΣΗ Πτύελα Προκλητά πτύελα Βρογχοσκοπικό υλικό Γαστρικό υγρό Ούρα Κόπρανα; Aίμα- μυελός Βιολογικά υγρά
ΒΙΟΛΟΓΙΚΑ ΥΓΡΑ ΕΚΤΟΣ ΑΠΟ Εγκεφαλονωτιαίο υγρό Πλευριτικό υγρό Περικαρδιακό υγρό Ασκητικό υγρό ΑΙΜΑ Tο Βιολογικό υλικό.β Υ ενίετε στο Θρεπτικό υλικό Θ Υ σε αναλογία :1ml :4-5 ml Θρεπτικά υλικά είναι τα εξης: 7Η9 Broth 7H12 σε 12Β ΒACTEC vial (1ml :4ml 7H12 ) 7H13-13A BACTEC (5ml :20 ml 7H13)
MIKΡΟΒΙΟΛΟΓΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ Απλή χρώση: Carbol fuschin( ΖΙΕΗL-ΝΕΕLSEN) Kinyoun Aπαιτούνται 10.000 βάκιλοι/ml Συνολικός χρόνος εξέτασης 15-30 min 100 οπτικά πεδία αναλογούν στο 1% του δείγματος 5000 βακ/ml πρέπει να ελεγχθούν 200 οπ για να εντοπισθή ένας βάκιλος Φθοριοχρωστικές Auramine-rhodamine Μεγαλύτερη ευαισθησία, μικρότερος χρόνος εξέτασης 3 min Eπιβεβαίωση με ΖΙΕΗL-ΝΕΕLSEN
ΧΡΩΣΗ ZIEL-NEELSEN
XΡΩΣΗ Αuramine-rhodamine
ΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ ΤΟΥ ΜΤΒC Σε θρεπτικά υλικά από αυγό Σε θρεπτικά υλικά από άγαρ Σε υγρά θρεπτικά υλικά
ΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ ΤΟΥ ΜΤΒC* ΣΥΜΒΑΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ (Σ.Θ.Υ) L-J (4-6 εβδομ) Agar Middlebrook 7H10,7H11(2-4 εβδομ) ΜΗ ΣΥΜΒΑΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ( Υ.Θ.Υ) Βactec 460 Ραδιομετρική μεθ (12-21 ημ) Μη ραδιμετρικές μέθοδοι(12-21 ημ) MGIT,ESP II,Bactec 9000 MB System, MB-BacT Mycobacteria Detection System * (10-100 βάκιλοι/ml υλικού)
KAΛΙΕΡΓΕΙΑ LOWENSTEIN-JENSEN
KAΛΙΕΡΓΕΙΑ ΣΕ ΑΓΑΡ
ΡΑΔΙΟΜΕΤΡΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ BD BACTEC bottles containing Middlebrook 7H12 media prior to inoculation. Figure 2. BD BACTEC machine.
Mycobacteria Growth Indicator Tube
ΑΛΛΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ Η ΜΗ ΙΣΟΤΟΠΙΚΗ ΔΙΦΑΣΙΚΗ ΜΕΘΟΔΟΣ ΑΙΜΟΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ ΓΙΑ ΜΥΚΟΒΑΚΤΗΡΙΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ EΠΙΔΗΜΙΟΛΟΓΙΑ (RFLP,MIRUS,SPOLIGOTYPING) ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ ΑΜPLICOR( DNA,Roche Diagnosis System) Eυαισθ 74-92%sm(+),40-73% sm(-) E-MDT(Rrna, Gen-probe, Inc) Eυαισθ :83-98% sm(+),70-81% sm(-) Εξειδ 98-99% 1-10 Βάκιλοι για την εξέταση m RNA (ζωντανοί Βάκιλοι)
CDC ΣΥΣΤΑΣΕΙΣ ΓΙΑ ΤΙΣ ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ(ΜΤ) MMWR 2000;49 (26):593-4 1)To πρώτο δείγμα θετικό στη χρώση και στη μτ(e-mtd) και η κλινική πιθανότητα είναι μετρίου η υψηλού βαθμού Τότε θεωρείται ότι ο ασθενής πάσχει από φυματίωση. 2) To πρώτο δείγμα θετικό στη μτ(e-mtd)και αρνητικό στη χρώση και και η κλινική πιθανότητα είναι μετρίου η υψηλού βαθμού ο ασθενής θεωρείται οτι πάσχει από φυματίωση 3) Εάν το πρώτο δείγμα είναι αρνητικό στη χρώση και θετικό στη (Ε-MTD) και η κλινική πιθανότητα είναι χαμήλου βαθμού η εξέταση επαναλαμβάνεται 4) Όταν η χρώση είναι επανειλημμένα θετική και η μτ αρνητική και έχει αποκλεισθεί η πιθανότητα αναστολέων της μτ στα πτύελα. Τότε Η νόσος οφείλεται σε άτυπα μυκοβακτήρια 5) Εάν το πρώτο δείγμα είναι αρνητικό και στις δύο τεχνικές και η κλινική πιθανότητα είναι μετρίου η υψηλού βαθμού η έξέταση επαναλαμβάνεται Εάν η δευτερή E-MDT είναι θετική ο ασθενής θεωρείται οτι πάσχει από φυματίωση Εάν είναι αρνητική και η κλινική πιθανότητα είναι μικρού βαθμού τότε θεωρείται ότι δεν πάσχει από φυματίωση 6) Εάν η κλινική πιθανότητα είναι μετρίου η υψηλού βαθμού και τα δύο δείγματα είναι αρνητικά κρίνεται σκόπιμη και Τρίτη εξέταση
ΟΙ ΜΤ ΣΤΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΤΗΣ ΜΗ ΠΝΕΥΜΟΝΙΚΗΣ ΦΥΜΑΤΙΩΣΗΣ E-MTD, AMPLICOR Συνολική ευαισθ: 67-100% Εξειδίκευση: 100% Στο ΕΝΥ η ευαισθησία είναι πιο μεγάλη από το πλευριτικό υγρό
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΕΛΕΓΧΟ ΤΗΣ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ α)pcr:1)(inno-lipa MYCOBACTERIA v2) 2)(INNO-LiPA MYCOBACTERIARif TB) β)μοριακοί Φάροι
ΜHXANIΣΜΟΙ ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΤΟΥ MTBC
MOΡΙΑΚΟΙ ΦΑΡΟΙ
MOΡΙΑΚΟΙ ΦΑΡΟΙ
ΤΑΧΕΙΕΣ ΜΗ- ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΔΙΑΓΝΩΣΗ ΤΗΣ ΦΥΜΑΤΙΩΣΗΣ Bακτηριοφάγοι απλοί η με Luciferase: FASTIPlaqueTB FASTIPlaqueTB-ΜDR FASTIPlaqueTB-RIF
ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ
ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ
ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ-LUCIFARASE
Η ΚΑΤΑΣΤΑΣΗ ΣΤΟ ΝΝΘΑ ΣΤΑΘΕΡΟΙ ΣΤΗΝ ΠΑΡΑΔΟΣΗ ΜΕΘΟΔΟΙ ΤΟΥ 1960 ΜΕΣΟΣ ΧΡΟΝΟΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ 3 ΜΗΝΕΣ Η 90 ΗΜΕΡΕΣ ΜΕΣΟΣ ΧΡΟΝΟΣ ΓΙΑ ΚΑΛΙΕΡΓΕΙΑ 2 ΜΗΝΕΣ
ΤΕΛΟΣ Ν.Χ. ΠΟΥΛΑΚΗΣ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΦΑΡΜΑΚΑ
ΑΝΘΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΑΝΤΙΦΥΜΑΤΙΚΑ ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΥΓΡΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ (MODS) BAKΤΗΡΙΟΦΑΓΟΙ