ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΤΩΝ ΔΙΑΛΥΤΩΝ ΑΝΤΙΓΟΝΩΝ ΤΟΥ CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS

Transcript

1 PASTOREX CRYPTO PLUS 64 6 ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΤΩΝ ΔΙΑΛΥΤΩΝ ΑΝΤΙΓΟΝΩΝ ΤΟΥ CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS ΣΕ ΒΙΟΛΟΓΙΚΑ ΥΓΡΑ (ΟΡΟ, ΕΓΚΕΦΑΛΟΝΩΤΙΑΙΟ ΥΓΡΟ (ΕΝΥ), ΒΡΟΓΧΟΚΥΨΕΛΙΔΙΚΟ ΕΚΠΛΥΜΑ (B.A.L.), ΟΥΡΑ) 883-4/ - ΚΛΙΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Η κρυπτοκόκκωση είναι μία ευκαιριακή λοίμωξη η οποία παρατηρείται σε ασθενείς με ανοσολογική ανεπάρκεια, και συγκεκριμένα σε ασθενείς που πάσχουν από AIDS. Η κρυπτοκόκκωση αποτελεί σήμερα την κύρια αιτία θανατηφόρων λοιμώξεων σε ασθενείς που πάσχουν από AIDS. Η συχνότητα εμφάνισης της κρυπτοκόκκωσης κυμαίνεται από % έως % στη Δυτική Ευρώπη και στις Ηνωμένες Πολιτείες Αμερικής, ενώ υπερβαίνει το 5% σε ορισμένες περιοχές της Αφρικής (3). Σε αυτούς τους ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς, μετά από το αρχικό στάδιο της πνευμονικής λοίμωξης (), παρατηρείται ταχεία εξάπλωση της λοίμωξης στο κεντρικό νευρικό σύστημα (στους μήνιγγες) καθώς και σε άλλα όργανα. Ο εντοπισμός των διαλυτών αντιγόνων στον ορό, στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό (ΕΝΥ), στο βρογχοκυψελιδικό έκπλυμα (B.A.L.) και στα ούρα καθίσταται εφικτός μέσα σε σύντομο χρονικό διάστημα. Η διάγνωση της κρυπτοκόκκωσης βασίζεται στη μικροσκοπική ανίχνευση του μύκητα με κάψα, στην ανάπτυξη του Cryptococcus neoformans σε καλλιέργεια και στην ανίχνευση των καψιδικών αντιγόνων σε βιολογικά υγρά (). - ΒΑΣΙΚΗ ΑΡΧΗ Το Pastorex Crypto Plus είναι μια ποιοτική και ημιποσοτική δοκιμή που βασίζεται σε μία απλή τεχνική συγκόλλησης, με σκοπό την ανίχνευση σε βιολογικά υγρά (ορό, ΕΝΥ, BAL, ούρα) του καψιδικού πολυσακχαρίτη του Cryptococcus neoformans, της γλυκουρονοξυλομαννάνης (GXM). Στη δοκιμή αυτή χρησιμοποιούνται σωματίδια επικαλυμμένα με μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-γλυκουρονοξυλομαννάνης που αποτελεί το βασικό συστατικό της κάψας του Cryptococcus neoformans (4). Η συγκόλληση που προκαλείται από την αντίδραση των σωματιδίων και της GXM είναι ορατή δια γυμνού οφθαλμού. Το όριο ευαισθησίας για τον ορό είναι 5 ng/ml. Η δοκιμή μπορεί να διεξαχθεί σε αδρανοποιημένα, μετά από θέρμανση, δείγματα (3 λεπτά στους 56 C), ούτως ώστε να αποτρέπεται ο κίνδυνος μόλυνσης από τον HIV. Για την εξάλειψη των παρεμβολών και την ενίσχυση της ευαισθησίας της ανίχνευσης, απαιτείται καταρχήν η ενζυμική επεξεργασία όλων των δειγμάτων, με εξαίρεση τα δείγματα ούρων (5, 6, ). Ακολουθεί η τιτλοδότηση των θετικών δειγμάτων μέσω διαδοχικής αραίωσης σε ρυθμιστικό διάλυμα. Ο τίτλος αντιγόνων υποδηλώνει το στάδιο εξάπλωσης της λοίμωξης Ο προσδιορισμός της κινητικής του αντιγόνου κατά τη διάρκεια της ασθένειας μπορεί να βοηθήσει στην εκτίμηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας (). 3- ΠΑΡΟΥΣΙΑΣΗ Κιτ των 6 δοκιμών - κωδικός 64 - που περιλαμβάνει: Cryptococcus λάτεξ: σταγονομετρική φιάλη του ml με Cryptococcus λάτεξ: σωματίδια λάτεξ, ευαισθητοποιημένα με αντίσωμα αντι-γλυκουρονοξυλομαννάνης (ποντικού), σε ρυθμιστικό διάλυμα γλυκίνης. Αντιγόνο θετικού μάρτυρα: σταγονομετρική φιάλη των,5 ml με θετικό μάρτυρα: καθαρός καψικός πολυσακχαρίτης του Cryptococcus neoformans. Ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης: σταγονόμετρο των ml με ρυθμιστικό διάλυμα γλυκίνης με αλβουμίνη Προνάση: φιαλίδια λυοφιλιωμένων ενζύμων (προνάση) για ανασύσταση σε ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Διάλυμα διακοπής της αντίδρασης: σταγονομετρική φιάλη με ml διαλύματος διακοπής της αντίδρασης (ενζυμικός αναστολέας) 5 πλακίδια συγκόλλησης μίας χρήσης μπατονέτες μίας χρήσης Όλα τα αντιδραστήρια περιέχουν, % merthiolate και λιγότερο από,% αζίδιο νατρίου. 4- ΦΥΛΑΞΗ Όλα τα αντιδραστήρια που φυλάσσονται στους έως 8 C και δεν υφίστανται μικροβιακή μόλυνση παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξεως που αναγράφεται στην ετικέτα της συσκευασίας (ακόμα και μετά το άνοιγμα). Η ανασυσταθείσα προνάση μπορεί να διατηρηθεί για τέσσερις εβδομάδες στους έως 8 C ή για μερικούς μήνες στους - C. Οι φιάλες με αντιδραστήριο λάτεξ πρέπει να φυλάσσονται σε όρθια θέση. ΤΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΛΑΤΕΞ ΔΕΝ ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΚΑΤΑΨΥΧΟΝΤΑΙ.

2 5- ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΟ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΟ ΥΛΙΚΟ Πιπέτες ακριβείας Μικροσωλήνες σφραγισμένοι με πώμα Οριζόντιος περιστροφικός αναδευτήρας (6 στροφές ανά λεπτό) Αναμείκτης περιδίνησης. Uδατόλουτρο 56 C Uδατόλουτρο C Δοχείο απολύμανσης 6- ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Η ποιότητα των αποτελεσμάτων εξαρτάται από την αυστηρή τήρηση των Ορθών Εργαστηριακών Πρακτικών. Όλα τα αντιδραστήρια καθώς και το δείγμα πρέπει να χρησιμοποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου (8 έως 3 C). Μην αγγίζετε την επιφάνεια αντίδρασης των πλακιδίων συγκόλλησης. Μετά από κάθε εξέταση δείγματος, αλλάζετε την πιπέτα ή το ακροστόμιο μιας χρήσης. Πριν από τη χρήση, ανακινήστε τις φιάλες του λάτεξ. Σκουπίζετε το ακροστόμιο της σταγονομετρικής φιάλης του αντιδραστηρίου ούτως ώστε να χορηγείται ο σωστός αριθμός σταγόνων. Κατά τη χορήγηση των σταγόνων, κρατάτε τη φιάλη του αντιδραστηρίου σε κατακόρυφη θέση. Αλλάζετε τη ράβδο για κάθε αντίδραση. Η απόρριψη όλων των χρησιμοποιηθέντων υλικών μιας χρήσης πρέπει να γίνεται σε αυτόκαυστο αποβλήτων ή σε υδατόλουτρο με απολυμαντικό. ΟΔΗΓΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΓΙΕΙΝΗ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑ Συνιστάται σε κάθε περίπτωση η εφαρμογή των σύγχρονων τεχνικών και των μέτρων προφύλαξης από μικροβιολογικούς κινδύνους. Για συστάσεις αναφορικά με τους κινδύνους και τις προφυλάξεις που σχετίζονται με κάποια χημικά συστατικά αυτού του κιτ εξέτασης, ανατρέξτε στα εικονογραφήματα που αναφέρονται στις ετικέτες και στις πληροφορίες που παρέχονται στο τέλος των οδηγιών χρήσης. Το Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας διατίθεται στη διεύθυνση - ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ) ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΟΥ ΕΝΖΥΜΟΥ ΠΡΟΝΑΣΗ Προβείτε σε ανασύσταση ενός δοχείου προνάσης με ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Αποφύγετε τον σχηματισμό αφρού και βεβαιωθείτε ότι τα λυοφιλιωμένα ένζυμα έχουν διαλυθεί τελείως. Εάν διενεργούνται από 3 έως 4 δοκιμές ανά μήνα, η προνάση πρέπει να φυλάσσεται στους έως 8 C (οπότε παραμένει σταθερή για 4 εβδομάδες). Για μικρότερο αριθμό δοκιμών, προετοιμάστε κλάσματα των µl σε ξεχωριστούς σωλήνες και φυλάξτε τους στους - C. ) ΔΕΙΓΜΑΤΑ Φύλαξη Μετά τη συλλογή τους, τα δείγματα πρέπει να υφίστανται επεξεργασία το ταχύτερο δυνατόν. Εάν αυτό δεν είναι εφικτό, μπορούν να φυλάσσονται για λίγες ώρες στους έως +8 C. ΠΡΟΣΟΧΗ : χρησιμοποιείτε τα δείγματα ορού μόνο σε στεγνούς σωλήνες. Δεν έχει παρατηρηθεί παρεμβολή λόγω υπερβολικής ποσότητας αλβουμίνης, λιπιδίων, αιμοσφαιρίνης και χολερυθρίνης. Επεξεργασία α) Ορός, βρογχοκυψελιδικό έκπλυμα (B.A.L.) Εισάγετε µl του προς ανάλυση δείγματος σε σωλήνα καλά κλεισμένο με πώμα και προσθέστε µl προνάσης. Αναμίξτε ανακινώντας έντονα, και θερμάνετε επί 3 λεπτά στους 56 C. Απομακρύνετε το σωλήνα από το υδατόλουτρο και προσθέστε σταγόνα διαλύματος διακοπής της αντίδρασης (ενζυμικό αναστολέα). Αναμίξτε καλά. ΠΡΟΣΟΧΗ : όταν χρησιμοποιείτε το υδατόλουτρο, βεβαιωθείτε ότι το νερό δεν εισέρχεται στους σωλήνες διότι διαφορετικά το αποτέλεσμα ενδέχεται να είναι πλασματικό. β) Ε.Ν.Υ. Εάν το δείγμα ΕΝΥ χαρακτηρίζεται από έντονη θολερότητα ή περιέχει ερυθροκύτταρα, φυγοκεντρήστε επί 5 λεπτά στα 35 g ( στροφές ανά λεπτό) και συλλέξτε το υπερκείμενο. Εισάγετε µl του προς ανάλυση δείγματος σε σωλήνα καλά κλεισμένο με πώμα και προσθέστε µl προνάσης.

3 Αναμίξτε ανακινώντας έντονα, και θερμάνετε επί 3 λεπτά στους 56 C. Απομακρύνετε το σωλήνα από το υδατόλουτρο των 56 C. Τερματίστε την ενζυμική δράση της προνάσης θερμαίνοντας επί 5 λεπτά σε υδατόλουτρο C. Αναμίξτε καλά. Πριν από τη συγκόλληση, αφήστε το μείγμα για 3 έως 4 λεπτά ώστε να κρυώσει. ΠΡΟΣΟΧΗ : όταν χρησιμοποιείτε το υδατόλουτρο, βεβαιωθείτε ότι το νερό δεν εισέρχεται στους σωλήνες διότι διαφορετικά το αποτέλεσμα ενδέχεται να είναι πλασματικό. γ) Ούρα Αραιώστε σε αναλογία : σε ρυθμιστικό διάλυμα γλυκίνης. 3) ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗΣ Τοποθετήστε 4 µl επεξεργασμένου δείγματος σε ένα κύκλο του πλακιδίου συγκόλλησης. Προσθέστε δίπλα σε αυτό μία σταγόνα Cryptococcus λάτεξ. Αναμίξτε καλά χρησιμοποιώντας μία μπατονέτα. Διενεργήστε δοκιμή με αρνητικό μάρτυρα αναμιγνύοντας 4 µl ρυθμιστικού διαλύματος με μία σταγόνα λάτεξ. Τοποθετήστε το πλακίδιο συγκόλλησης στον αναδευτήρα για 5 λεπτά (6 στροφές ανά λεπτό) σε θερμοκρασία δωματίου (8 έως 3 C). 8- ΕΡΝΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Ανάγνωση : Η συγκόλληση των σωματιδίων λάτεξ με το δείγμα της δοκιμής και η απουσία συγκόλλησης με τον αρνητικό μάρτυρα (λάτεξ και ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης) υποδηλώνει θετική αντίδραση. Τιτλοδότηση Οι αραιώσεις σε ρυθμιστικό διάλυμα γλυκίνης πραγματοποιούνται ως εξής: Αραίωση : : : : Επεξεργασμένο δείγμα 5 μl 5 μl 5 μl 5 μl Ρυθμιστικό διάλυμα 45 μl 45 μl 45 μl 45 μl Ακολουθεί ακριβής τιτλοδότηση με υποδιπλάσιες διαδοχικές αραιώσεις, ξεκινώντας από τον τελευταίο σωλήνα του θετικού δείγματος: 5 µl και 5 µl ρυθμιστικού διαλύματος. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Σε μεγάλες αραιώσεις η ερμηνεία της συγκόλλησης ποικίλει ανάλογα με το χειριστή. Πριν από την τιτλοδότηση ενός νέου δείγματος από τον ίδιο ασθενή, συνιστάται η επιβεβαίωση του τίτλου του προηγούμενου δείγματος. 9- ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΤΗΣ ΔΟΚΙΜΗΣ Η ευαισθησία του λάτεξ μπορεί να ελέγχεται ανά διαστήματα μέσω του θετικού μάρτυρα που περιέχεται στο κιτ. Τα επίπεδα συγκέντρωσης της GXM στον θετικό μάρτυρα είναι ng/ml. - ΕΛΕΓΧΟΣ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ ΕΚ ΜΕΡΟΥΣ ΤΟΥ ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΤΗ Όλα τα προϊόντα που κατασκευάζονται και διατίθενται στο εμπόριο από την εταιρία Bio-Rad υποβάλλονται σε όλες τις διεργασίες του συστήματος διασφάλισης ποιότητας, από την παραλαβή των πρώτων υλών έως την εμπορευματοποίηση των τελικών προϊόντων. Κάθε παρτίδα τελικού προϊόντος υποβάλλεται σε έλεγχο ποιότητας και διατίθεται στο εμπόριο μόνον όταν συμμορφώνεται προς τα κριτήρια αποδοχής. Η τεκμηρίωση σχετικά με την παραγωγή και τον έλεγχο κάθε παρτίδας τηρείται εντός της εταιρίας. - ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΠΙΔΟΣΕΩΝ Ο χαρακτηρισμός του μονοκλωνικού αντισώματος E που χρησιμοποιείται σε αυτή τη δοκιμή συγκόλλησης πραγματοποιήθηκε από τους Dromer και συνεργάτες. (4). Η επιβεβαίωση των υψηλών επιδόσεων του αντισώματος αυτού έγινε από προηγούμενες μελέτες με βάση τη δοκιμή συγκόλλησης με τη χρήση λευκών σωματιδίων. Σε μία από αυτές τις μελέτες (8) χρησιμοποιήθηκαν 84 οροί από ασθενείς που έπασχαν από κρυπτοκόκκωση καθώς και 4 οροί μάρτυρες. Αποδείχθηκε ότι η χορήγηση προνάσης προκαλούσε αύξηση της ευαισθησίας και της ειδικότητας κατά την ανίχνευση της GXM. Μία άλλη αξιολόγηση (9) έδειξε ότι οι τίτλοι των αντιγόνων που προέκυπταν με τη χρήση διαφορετικών αντιδραστηρίων δεν ταυτίζονταν μεταξύ τους, ενώ η απουσία ανίχνευσης των διαλυτών αντιγόνων με το κιτ Pastorex Crypto Plus μπορεί να αποτελεί ένδειξη της αποτελεσματικότητας της θεραπείας. Η απεικόνιση των συσσωματωμάτων βελτιώνεται με τη χρήση ερυθρών σωματιδίων λάτεξ αντί των λευκών σωματιδίων. Κατά τη διάρκεια κλινικής αξιολόγησης η οποία διενεργήθηκε σε εργαστήριο νοσοκομείου προέκυψαν τα παρακάτω αποτελέσματα. 3

4 ΕΥΑΙΣΘΗΣΙΑ Δείγματα που ελήφθησαν από 38 ασθενείς με κρυπτοκόκκωση. Δείγμα Αριθμός ασθενών Pastorex Crypto Plus Τύπος Συνολικός αριθμός + - ΟΡΟΣ ΕΝΥ B.A.L. ΟΥΡΑ ΣΥΝΟΛΟ * Με βάση τα 5 αυτά δείγματα, υπολογίστηκε ότι η συνολική ευαισθησία του Pastorex Crypto Plus ήταν 9%. * Τα τέσσερα δείγματα στα οποία δεν επιτεύχθηκε η ανίχνευση μέσω του Pastorex Crypto Plus ήταν επίσης αρνητικά σύμφωνα με άλλη δοκιμή συγκόλλησης κατά την οποία χρησιμοποιήθηκε πολυκλωνικό αντιγόνο. ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ Δείγματα 9 ασθενών που δεν έπασχαν από κρυπτοκόκκωση. Δείγμα Αριθμός ασθενών Pastorex Crypto Plus Τύπος Συνολικός αριθμός + - ΟΡΟΣ ΕΝΥ B.A.L. ΟΥΡΑ ΣΥΝΟΛΟ Με βάση τα 96 αυτά δείγματα, υπολογίστηκε ότι η ειδικότητα του Pastorex Crypto Plus ήταν 98%. Η ειδικότητα που προέκυψε από τη διενέργεια συμπληρωματικών εσωτερικών αξιολογήσεων σε 59 ορούς, οι 8 εκ των οποίων ελήφθησαν από ασθενείς με αποδεδειγμένη ή πιθανολογούμενη ασπεργίλλωση ή καντιντίαση, ήταν %. Υπολογίστηκε ότι το όριο ανίχνευσης της GXM σε ορό είναι 5 ng/ml. - ΟΡΙΑ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Η παρουσία πολύ μεγάλης ποσότητας GXM μπορεί να προκαλέσει αναστολή της συγκόλλησης (hook effect). Σε περίπτωση αμφιβολίας στην ερμηνεία μιας αντίδρασης, επαναλάβετε τη δοκιμή με αραίωση του δείγματος σε αναλογία /. Συνεπώς, η ερμηνεία των αποτελεσμάτων πρέπει να γίνει λαμβάνοντας υπόψη το κλινικό ιστορικό του ασθενούς. Εάν η συγκέντρωση του αντιγόνου στο δείγμα είναι μικρότερη από το κατώτατο όριο ανίχνευσης του Pastorex Crypto Plus, το αποτέλεσμα που θα ληφθεί μπορεί να είναι πλασματικό. Στην περίπτωση αυτή συνιστάται η επανεξέταση του δείγματος μετά από την παρέλευση κάποιου χρονικού διαστήματος. Η μέθοδος ανίχνευσης διαλυτών αντιγόνων μέσω της συγκόλλησης σωματιδίων λάτεξ επιτρέπει την ταχύτερη διάγνωση σε σύγκριση με τις συμβατικές μεθόδους καλλιέργειας. Προς το παρόν υπάρχουν περιορισμένα κλινικά και βιβλιογραφικά δεδομένα σχετικά με την ανίχνευση του αντιγόνου της GXM σε βρογχοκυψελιδικό έκπλυμα (B.A.L.) και στα ούρα με τη χρήση αντιδραστηρίων λάτεξ. Σε ασθενείς που πάσχουν από τριχοσπορίαση (4), οι αντιγονικές ομοιότητες μεταξύ της κάψας του Cryptococcus και του τοιχώματος του Trichosporon beigelii μπορεί να προκαλέσουν πλασματικά θετικές αντιδράσεις. Όπως ακριβώς συμβαίνει με κάθε ανοσολογική τεχνική, δεν πρέπει να αποκλείεται η πιθανότητα διασταυρούμενων αντιδράσεων. Η διάγνωση της κρυπτοκόκκωσης βασίζεται στη μικροσκοπική ανίχνευση του μύκητα με κάψα (χρώση σινικής μελάνης), στην ανάπτυξη του Cryptococcus neoformans σε καλλιέργεια και στην ανίχνευση των καψιδικών αντιγόνων σε βιολογικά υγρά (). Η μέθοδος ανίχνευσης διαλυτών αντιγόνων μέσω της συγκόλλησης σωματιδίων λάτεξ επιτρέπει τη διάγνωση. Η διάγνωση της κρυπτοκόκκωσης μπορεί να γίνει μόνον εφόσον έχουν ληφθεί υπόψη όλα τα κλινικά, ραδιολογικά και βιολογικά (μικροβιολογικά, ιστολογικά, ορολογικά) δεδομένα και έχει προηγηθεί η προσεκτική ερμηνεία του κάθε στοιχείου ξεχωριστά. 3- ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ. CAMERON M.L, BARTLETT J.A., GALLIS H.A., WASKIN H.A, Manifestations of Pulmonary Cryptococcocis in Patients with Acquired Immunodeficiency Syndrome, R.I.D., 99, 3, p STAIB F., Cryptococcocis in Aids - Mycological-diagnostic and epidemiological observations, Aids-Forshung (AIFO), 98, p DROMER F., MATHOULIN S., DUPONT B, LAPORTE A., and the French Cryptococcosis Study Group. Epidemiology of Cryptococcosis in France : A 9-Year Survey ( ). Clin. Inf. Dis.996, 3, p DROMER F., SALAMERO J., CONTREPOIS A., CARBON C., YENI P. Production, Characterization and Antibody Specificity of a Mouse Monoclonal Antibody Reactive with Cryptococcus neoformans Capsular Polysaccharide. Infect. and Immun., 98, 55, p GRAY L.D., ROBERTS G.D. Experience with the Use of Pronase to eliminate Interference Factors in the Latex Agglutination Test for Cryptococcal Antigen. J. Clin. Microbiol., 988, 6, p

5 6. HEELAN J.S., CORPUS L, KESSIMIAN N. False-positive reaction in the Latex Agglutination Test for Cryptococcus neoformans Antigen. J.Clin.MIcrobiol. 99, 9, p HAMILTON J.R., NOBLE A., DENNING D.W., STEVENS D.A. Performance of Cryptococcus Antigen Latex Agglutination Kits on Serum and Cerebrospinal Fluid Specimens of Aids patients before and after Pronase treatment. J. Clin. Microbiol. 99, 9, p TEMSTET A., ROUX P., POIROT J.L., RONIN O., DROMER F. Evaluation of monoclonal antibody based latex test for the diagnosis of Cryptococcosis : Comparison with two tests Using Polyclonal Antibodies J. Clin. Microbiol. 99, 3, p SWINNE D., MEULEMANS L., DE VROEY Ch. Detection of Cryptococcus antigen with a mononucleal antibody based latex test (abstract) Trends in the management of systemic fungal infections, Nijmegen, The Netherlands, 5- Sept. 99 5

6 6

7 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré 943 Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 () / Fax : +33 ()