«Αξιολόγηση της Αντιβακτηριακής Δράσης του μελιού Όλυμπος (Θεσσαλία, Κεντρική Ελλάδα) σε Σύγκριση με το μέλι ΜANUKA 10+»

Transcript

1 «Αξιολόγηση της Αντιβακτηριακής Δράσης του μελιού Όλυμπος (Θεσσαλία, Κεντρική Ελλάδα) σε Σύγκριση με το μέλι ΜANUKA 10+» Ι. Βουλγαρίδη 1, Χ. Μαίου 2, Β. Λαχανάς 2, Ε. Πετεινάκη 1, Χ. Σκουλάκης 2 1 Μικροβιολογικό Εργαστήριο, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, Λάρισα 2 ΩΡΛ Κλινική, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Λάρισα

2 Ορισμός «μέλι είναι το γλυκό προϊόν το οποίο παράγουν οι μέλισσες του γένους Apis καθώς αυτές συλλέγουν, μετατρέπουν και αποθηκεύουν στις κηρήθρες τους το νέκταρ και άλλους φυτικούς χυμούς από διάφορα ζωντανά μέρη του φυτού» Διεθνής Οργανισμός Γεωργίας και Τροφίμων (F.A.O)

3 Ιστορική Αναδρομή - Αρχαίοι Έλληνες : μυθικές διαστάσεις στο μέλι σύνδεση με θεούς - όλοι οι αρχαίοι πολιτισμοί (Έλληνες, Ρωμαίοι, Κινέζοι και Αιγύπτιοι) χρησιμοποιούσαν το μέλι για επούλωση πληγών και θεραπεία νόσων ΓΕΣ (Zumla and Lulat, 1989) - Iπποκράτης : μελίκτριτον & οξυμέλι - Παιδαγωγοί Σπάρτης : «μήνας του μέλιτος»

4 Αντιβακτηριακές Ιδιότητες Jeddar A, Kharsany A, RamsaroopUG, Bhamjee A, Haffejee IE, Moosa A. The antibacterial action of honey. An in vitro study. SAMJ 1985;67:257-8 Ibrahim AS. Antibacterial action of honey. Proceedings of the First International Conference on Islamic Medicine, Kuwait, January, Bull Islamic Med 2 nd edn, vol. 1. Kuwait: Ministry of Health, 1981:363-5 Obaseiki-Ebor EE, Ofonya TCA. In vitro evaluation of the anti-candidiasis activity of honey distillate (HY-I) compared with that of some

5 Αντιβακτηριακές Ιδιότητες H 2 O 2 και γλυκονικό οξύ Οσμωτικότητα Οξύτητα Aρωματικά οξέα, φαινολικές ενώσεις, πρωτεϊνες και μεθυλγλυοξάλη

6 MANUKA HONEY Μονοποικιλιακό μέλι από το γένος Avis Nellifera Liqustica από το φυτό Leptospermum scoparium - γηγενές της Ν. Ζηλανδίας και νοτιοανατολικής Αυστραλίας Μονάδες UMF (Unique Manuka Factor) = μέθοδος μέτρησης αντισηπτικής ισχύος Πιστοποιημένη αντιβακτηριακή δράση (2008, μεθυλγλυοξάλη MGO) Έγκριση για ιατρικούς σκοπούς

7 Μέλι «Όλυμπος» : παραγωγή από σταθερή μελισσοκομεία σε δασικές και λιβαδικές περιοχές του Ολύμπου με πληθώρα αυτοφυών φυτών - πολυανθικό (υ: 1000μ). Ελληνικό Μέλι Το ελληνικό μέλι θεωρείται ένα από τα καλύτερα παγκοσμίως γιατί δέχεται ελάχιστη επεξεργασία και έχει τυποποιηθεί πλήρως Υπάρχουν 2 κατηγορίες μελιού. Το ανθόμελο, που παράγεται από το νέκταρ των λουλουδιών, και το μέλι των μελιτωμάτων που παράγεται από το χυμό του πεύκου, της ελάτης και άλλων δασικών φυτών.

8 Σκοπός Aξιολογήση της αντιμικροβιακής δράσης του ελληνικού μελιού Όλυμπος έναντι κλινικά σημαντικών παθογόνων μικροοργανισμών σε σύγκριση με το πρότυπο μέλι Manuka 10+.

9 Επιβεβαίωση απουσίας αντιμικροβιακών παραγόντων με χρωματογραφία Έλεγχος 23 μικροοργανισμών από κλινικά δείγματα και 3 πρότυπων στελεχών ATCC (S. aureus, P. aeruginosa, E. faecalis) 13 στελέχη Gram(+) κόκκοι 10 στελέχη Gram(-) βακτηρίδια Staphylococcus aureus Enterococcus faecium Streptococcus mitis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Acinetobacter baumannii Enterobacter aerogenes Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Citrobacter koseri

10 H αξιολόγηση της ευαισθησίας έναντι του μελιού Όλυμπος έγινε με τη μέθοδο αραιώσεων σε θρεπτικό ζωμό ενώ σαν μέλι ελέγχου χρησιμοποιήθηκε το πρότυπο Manuka 10+. Προσδιορίστηκε η ελάχιστη ανασταλτική συγκέντρωση (ΜΙC) και η ελάχιστη βακτηριοκτόνος συγκέντρωση (ΜΒC).

11 Έλεγχος αντιμικροβιακής δράσης Μέθοδος Μακροαραιώσεων σε θρεπτικό ζωμό (Macrodilution) H μέθοδος στηρίζεται στην ορατή αναστολή της ανάπτυξης των βακτηρίων και είναι ποιοτική Διαφορετικές συγκεντρώσεις μελιού γίνονται με μέτρηση όγκου μελιού (ml) κατ όγκο αραιωτικού ( vol/vol) ώστε να προκύψουν αραιώσεις 50% (1/2), 25% (1/4), 12,5% (1/8), 6,25% (1/16), 3,125% (1/32), 1,562% 1ml (1/64)

12 Έλεγχος αντιμικροβιακής δράσης Μέθοδος Μακροαραιώσεων σε θρεπτικό ωμό (Macrodilution) Κάθε αραίωση αναδεύεται προσεκτικά ώστε να ομογενοποιηθεί το περιεχόμενο του φιαλιδίου Προστίθεται σε κάθε μια από τις αραιώσεις 10 μl μικροβιακού εναιωρήματος 0,5 ΜcF Τα δείγματα επωάζονται σε κλίβανο 37 ο C για 48 ώρες και στην συνέχεια ελέγχονται για την παρουσία ορατής θολερότητας Η ελάχιστη ανασταλτική συγκέντρωση (MIC) του μελιού ισούται με την πρώτη διαυγή αραίωση. Τα δείγματα συγκρίνονται με το growth control και το negative control κάθε δείγματος.

13 MANUKA10+ OΛΥΜΠΟΣ ΔΕΙΓΜΑ 67 : S. aureus

14 MANUKA10+ ΘΟΛΕΡΟΤΗΤΑ (+) ΣΤΟ 1/8 OΛΥΜΠΟΣ ΘΟΛΕΡΟΤΗΤΑ (+) ΣΤΟ 1/16 MIC 1/4 (25%) MBC 1/4 MIC 1/8 (12,5%) MBC 1/8 ΔΕΙΓΜΑ 67 : S. aureus

15 Minimum Bactericidal Concentration (MBC) Οι αραιώσεις χωρίς ορατή θόλωση επιστρώνονται σε Muller Hinton για την ανεύρεση της MBC (10 μl/τρυβλίο). H MBC είναι ίση με την αραίωση στην οποία η ανάπτυξη στο Muller Hinton είναι <0,1% της συγκέντρωσης του μικροοργανισμού στο θετικό δείγμα ελέγχου (growth control).

16 GRAM (+) GRAM (-) MEΛΙ «ΟΛΥΜΠΟΣ» 8.41% 12,18% ΜΑΝUΚΑ ,10% 17,47%

17 GRAM (+) GRAM (-) MEΛΙ «ΟΛΥΜΠΟΣ» 8.89% 12,81% ΜΑΝUΚΑ % 17,5%

18 ΜΕΛΙ «ΟΛΥΜΠΟΣ» ΜΑΝUKA 10+ MIC % (V/V) MBC % (V/V) MIC % (V/V) MBC % (V/V) MRSA (4/11) 9,375 9,375 20,31 20,31 MSSA (7/11) ,92 12,94 14,73 IMI R (3/10) 11,45 11,45 14,58 14,58 IMI S(7/10) 12,5 13,39 18,75 18,75

19 Πρότυπα Στελέχη ATCC ΑΡΑΙΩΣΗ 1\2 1\4 1\8 1\16 1\32 1\64 MIC ΜΙC 50% 25% 12,50% 6,25% 3,125% 1,563% S. aureus ΟΛΥΜΠΟΣ S. aureus ΜΑΝUKA10+ P. aeruginosa ΟΛΥΜΠΟΣ P. aeruginosa ΜΑΝUKA10+ E. faecalis ΟΛΥΜΠΟΣ E. faecalis ΜΑΝUKA10+ GROWTH CONTROL MBC ,125% + 3,125% ,250% + 6,250% ,250% + 6,250% ,500 % 12,500 % 25,000 % + 12,500% + 12,500% + 25,000%

20 Όλυμπος vs Manuka 10+ Iσχυρότερη αντιμικροβιακή δράση του μελιού Όλυμπος στους εξεταζόμενους μικροοργανισμούς σε σχέση με το μέλι Manuka 10+ Πιθανολογείται η ύπαρξη παραγόντων με ισχυρότερη θεραπευτική δράση έναντι ανθρώπινων μικροοργανισμών. παθογόνων

21 Ευχαριστώ για την προσοχή σας!