HBsAg. For the Qualitative Detection of Hepatitis B Surface Antigen in Human Serum. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 HBsAg For the Qualitative Detection of Hepatitis B Surface Antigen in Human Serum For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 HBsAg English Intended Use For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the qualitative detection of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in human serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA), as an aid in the determination of acute and chronic hepatitis B virus infections. Catalog Number: L2KHB2 (200 tests), L2KHB6 (600 tests) Test Code: HBS Color: Orange Summary and Explanation Hepatitis B virus (HBV) is the sole human pathogen in the family of hepatitisassociated DNA viruses, and is found world-wide. Distribution of HBV infection will vary among geographical areas and population groups. Transmission of the virus is due to parenteral contact, through the exchange of blood or blood products, sexual contact, and perinatal spread from mother to newborn. 1,2 Clinical manifestations range from mild asymptomatic infections to severe fulminant hepatitis. 1,2,3 Over 90% of infected adults will have an acute selflimiting infection, 1 with jaundice and abnormal liver function. Recovery occurs without any chronic sequelae. 1,2 Chronic liver disease, a condition in which infection persists for more than six months, a known sequela of a hepatitis B infection, is usually progressive. 1,2 The risk of developing the chronic carrier state is more likely to follow infection acquired in childhood than as an adult. 4,5 In chronic HBV carriers, there is no evidence of continued hepatic damage, 1,2 however, the infection persists and the carrier maintains the ability to transmit the virus. 2 Availability of recombinant HBV vaccines, and the recommendation of universal immunization for infants and other highrisk persons has aided in the prevention of HBV infections. In addition, treatment with alpha-interferon to relieve symptoms is available. Results have shown positive response to treatment in 40 50% of selected individuals with chronic active hepatitis B. 4,5 Classification of a hepatitis B infection requires the identification of several serological markers expressed during three phases (incubation, acute and convalescent) of the infection. The first marker to appear in serum is hepatitis B surface antigen (HBsAg). Presence of this antigen indicates an ongoing infection with HBV, and is detectable in the acutely ill and in chronic carriers. 1,2,4 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 HBsAg is a solid-phase, two-step chemiluminescent enzyme immunoassay. The solid phase, a polystyrene bead enclosed within a Reaction Tube, is coated with an antibody directed against the hepatitis B surface antigen (anti-hbs). The patient specimen is added to the Reaction Tube containing a coated bead. An alkaline phosphatase-labeled anti-hbs antibody is also added to the Reaction Tube. After the wash and incubation steps, chemiluminescent substrate undergoes hydrolysis in the presence of alkaline phosphatase. The photon output, as measured by the luminometer, is related to the presence of HBsAg in the sample. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Time to First Result: 65 minutes. Specimen Collection Lipemia may interfere with the assay. An ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving 2 IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

3 anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 HBsAg has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 100 µl serum or plasma (heparinized, sodium citrate or EDTA). Storage: 2 days at room temperature (15 28 C). 8 3 days at 2 8 C. 6,8 For longer storage: at 20 C. 7 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. The HBsAg Adjustor, HBsAg Low Positive and HBsAg Positive Controls contain HBsAg which has been inactivated by proven, documented methods. However, always handle all controls as if capable of transmitting infectious agents. The HBsAg results determined for a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 HBsAG EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. The barcode labels are needed for the assay. HBsAg Bead Pack (L2HB12) With barcode. 200 beads coated with murine monoclonal anti-hbs. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KHB2: 1 pack. L2KHB6: 3 packs. HBsAg Reagent Wedge (L2HBA2) With barcodes ml of a protein-based buffer, with preservative ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal goat anti-hbs in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KHB2: 1 wedges. L2KHB6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations without damaging the barcode on the main label. Remove the foil seal from the top of the Reagent Wedge, and snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. HBsAg Adjustor (LHBR) 4 ml containing human serum with inactivated HBsAg, with preservative. The Adjustor serves as the assay's Cutoff. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KHB2: 1 vial. L2KHB6: 2 vials. HBsAg Controls (LHBC1, LHBC2, LHBC3) Three vials (Negative, Low Positive and Positive) containing 8 ml each. LHBC1 (Negative Control): human serum without HBsAg, with preservative. LHBC2, LHBC3 (Low Positive Control, Positive Control): human serum with inactivated HBsAg, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KHB2: 1 set. L2KHB6: 2 sets. For the current control ratio ranges, please refer to the Control insert. Aliquot Labels with barcodes are supplied with the kit, for use with the Adjustor and Controls. Before use, place the appropriate Aliquot Labels on standard IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 3

4 test tubes, so the barcodes can be read by the barcode reader on the IMMULITE Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) Also Required Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: The control(s) supplied with the kit should be used as quality control material to monitor the performance of the assay. For the current control ratio ranges, please refer to the Control insert. Calculation of Cutoff and S/CO Ratio: The Master Cutoff of the assay was determined from representative samples to achieve optimal sensitivity and specificity for the assay. The cutoff is set equal to the average counts per second (mean cps) of the Adjustor (from the most recent adjustment) multiplied by Curve Parameter 1. (See the "Low Adjustor CPS" and "Curve Parameter 1" fields in the IMMULITE 2000 Kit Information screen, which can be accessed from the menu via Data Entry: Kit Entry.) Calculation of a signal/cutoff (s/co) ratio is done by using the following formula: S/CO Ratio = Sample or Control cps Mean Adjustor cps P1 Calculation and reporting of qualitative (reactive/nonreactive) and s/co ratio results are handled automatically by the IMMULITE The result is "Reactive" if the sample's counts are above the cutoff, and "Nonreactive" if below the cutoff. Interpretation of Results A result of "Reactive" (ratio of 1.0) indicates that HBsAg is present and was detected in the patient sample. Specimens found to be initially reactive for HBsAg should be reassayed in duplicate to verify that the initially reactive result is repeatable. If at least two of three result ratios are 100 for an individual sample, the patient sample may be reported as reactive and does not require testing with the IMMULITE HBsAg Confirmatory Assay (LKCH). If at least two of three result ratios are reactive, with ratios < 100, the patient sample must be tested using the IMMULITE HBsAg Confirmatory Assay (LKCH), a procedure to confirm the presence of HBsAg based on the neutralization of HBsAg-reactive samples with anti- HBs. Those samples with initial and repeated ratios 1.0 and < 100, in which the HBsAg is neutralized by the confirmatory test procedure, are considered confirmed reactive for HBsAg. It is essential that results be confirmed before patients are informed of the test results. If neither of the duplicates of the reassayed sample is reactive, the patient sample should be considered nonreactive for HBsAg. A result of "Nonreactive" (ratio of <1.0) indicates that HBsAg is not present and was not detected in the patient sample. When HBsAg is used as a standalone assay for screening pregnant women to identify neonates who are at risk for acquiring HBV during the perinatal period, supplemental testing such as the IMMULITE HBsAg Confirmatory Kit must be used to confirm the result regardless of whether the reactive ratio results are above or below IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

5 Since all highly sensitive immunoassays may produce false reactive results in rare cases, it is essential that results be confirmed before patients are informed of the test results. The results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 HBsAg EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Expected Values Individuals acutely infected with the hepatitis B virus will exhibit a rapid rise and decline of detectable levels of HBsAg between one and four months after exposure; usually through the course of the clinical illness. Of acutely infected adults, 5 10% will become chronic carriers of the virus. 1,4 In chronic carriers, no significant decrease in HBsAg level is observed. Limitations The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical history, symptomology and other laboratory findings. Lipemic, hemolyzed or grossly contaminated samples may give erroneous results. A nonreactive result does not indicate that the patient was not infected with HBV. The patient sample should be tested for the presence of other serological markers. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed as a signal-tocutoff ratio. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 400 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Hemolysis may cause a shift in values. (See Hemolysis table.) Lipemia: Lipemia may cause a shift in values. (See Lipemia table.) Alternate Sample Type: Samples (n=60) were collected into plain, heparinized, sodium citrate and EDTA vacutainer tubes. 41 samples were spiked with HBsAg and all samples were then assayed by the IMMULITE 2000 HBsAg procedure. Results are expressed as a signal-to-cutoff ratio. (Heparin) = 0.99 (Serum) r = 1.00 (NaCitrate) = 0.96 (Serum) r = 1.00 (EDTA) = 0.98 (Serum) r = 1.00 Means: 219 (Serum) 218 (Heparin) 211 (NaCitrate) 216 (EDTA) Method Comparison 1: The IMMULITE 2000 HBsAg procedure was compared to the Abbott AUSZYME MONOCLONAL, a commercially available enzyme immunoassay for HBsAg, on 231 patient samples. IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 5

6 IML 2000 Nonreact. Abbott React. Reactive 16 0 Nonreactive Agreement: 99% Relative Sensitivity Relative Specificity 100% 99% Method Comparison 2: The IMMULITE 2000 HBsAg procedure was compared to the Elecsys HBsAg immunoassay on 2,438 samples, consisting of seroconversion panels, potentially crossreactive samples, samples from patients with acute and chronic HBV infection, from blood donors, hospitalized patients, and routine samples. The table below presents the results of this study. No. of samples HBsAg reactive IMMULITE 2000 HBsAg Elecsys HBsAg HBsAg nonreactive Sensitivity Specificity PPV NPV 93.7% 100% 100% 99.3% 100% 100% 100% 100% Method Comparison 3: The IMMULITE 2000 HBsAg procedure was compared to the AxSYM HBsAg immunoassay on 438 samples, consisting of seroconversion panels and samples from patients with chronic HBV infection. The table below presents the results of this study. IMMULITE 2000 AxSYM Seroconversion (n = 340) Reactive Nonreactive 16 2,184 Reactive Nonreactive 0 2,184 Nonreacreac. Non- Reac. Reac. Nonreac. Reac. reac. Non- Reac. Agreement % Chronic HBV infection (n = 98) % Total (n = 438) % infectious diseases: principles and practices. New York: Springer-Verlag, 1988: ) Follett EAC. Diagnosis of hepatitis B infection. In: Young H, McMillan A, editors. Immunological diagnosis of sexually transmitted diseases. New York: Marcel Dekker, 1988: ) Hollinger FB, Dienstag JL. Hepatitis B and D viruses. In: Lennette EH, et al, editors. Manual of clinical microbiology. 6th ed. Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1995: ) Nowicki MJ, Balistreri WF. Hepatitis A to E: building up the alphabet. Contemporary Peds 1992: ) Zuckerman AJ, et al. Hepatitis B virus and hepatitis D virus. In: Principles and practice of clinical virology. 2nd ed. New York: John Wiley & Sons, 1992: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1995: Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (ratio) Intraassay 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Με την ίδια μέθοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. References 1) Locarnini SA, Gust ID. Hepadnaviridae: hepatitis B virus and the delta virus. In: Balows A, et al, editors. Laboratory diagnosis of 6 IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

7 Hemolysis (ratio) Hemoglobin 168 mg/dl 252 mg/dl 504 mg/dl Exp 1 Obs 2 Exp Obs Exp Obs Česky. 1 Očekávaná, 2 Naměřená. Ελληνικά. 1 Αναμενόμενη (E), 2 Παρατηρούμενη Polski. 1 Oczekiwane (O), 2 Zmierzone (Z). Lipemia (ratio) Triglycerides Added 1 mg/dl Observed 2 Expected 3 %O/E % 1, % 2, % 3, % % 1, % 2, % 3, % % 1, % 2, % 3, % % 1, % 2, % 3, % % 1, % 2, % 3, % % 1, % 2, % 3, % Česky. 1 Přidané triglyceridy, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Προστιθέμενα τριγλυκερίδια, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Dodane trójglicerydy, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 %Z/O. IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 7

8 Česky IMMULITE 2000 HBsAg Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení přítomnosti povrchového antigenu hepatitidy B (HBsAg) v lidském séru nebo plazmě (heparinizované, citrát sodný nebo EDTA), jakožto pomůcky při stanovení akutní nebo chronické infekce virem hepatitidy B. Katalogové číslo: L2KHB2 (200 stanovení), L2KHB6 (600 stanovení) Kód metody: HBS Barva: Oranžová Shrnutí a vysvětlení Virus hepatitidy B (HBV) je jediný lidský patogen v rodině hepatických DNA virů a je rozšířen celosvětově. Rozšíření HBV infekce se liší v závislosti na zeměpisné oblasti a skupině obyvatelstva. Přenos viru se děje parenterálně, krevními deriváty a krví, pohlavním stykem a perinatálně z matky na novorozence. 1,2 Klinické projevy se mohou různit od asymptomatické infekce po závažnou fulminativní hepatitidu. 1,2,3 Přes 90% infikovaných dospělých má akutní infekci 1 se žloutenkou a poruchami jaterní funkce. Uzdravení nastane bez dalších chronických následků. 1,2 Chronické onemocnění jater, kdy infekce přetrvává více než šest měsíců jako známý důsledek infekce virem hepatitidy B, bývá obvykle progresivní. 1,2 Riziko vývoje chronického stádia je větší u onemocnění v dětství než v dospělosti. 4,5 U chronických nosičů HBV nepokračuje poškození jater, 1,2 ale infekce přetrvává a je riziko přenosu viru. 2 Prevenci HBV infekcí napomáhá dostupnost rekombinantních HBV očkovacích látek a doporučení plošného očkování dětí a rizikových skupin obyvatelstva. Kromě toho je možná léčba příznaků onemocnění pomocí alfa interferonu. Táto léčba byla úspěšná u 40 50% vybraných jedinců s chronickým aktivním onemocněním hepatitidou B. 4,5 Klasifikace hepatitidy B vyžaduje identifikaci několika serologických markerů ve třech fázích (inkubační, akutní a rekonvalescentní) infekce. První marker, který se objeví v séru je povrchový antigen hepatitidy B (HBsAg). Přítomnost tohoto antigenu indikuje přetrvávající infekci HBV a je prokazatelný při akutním onemocnění a u chronických nosičů viru. 1,2,4 Princip IMMULITE 2000 HBsAg je dvou kroková chemiluminiscenční enzymová imunoanalýza probíhající na pevné fázi. Pevná fáze, polystyrénová kulička, je potažena protilátkou namířenou proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B (anti-hbs). Vzorek pacienta je napipetován do reakční zkumavky obsahující potaženou kuličku. Dále je do reakční zkumavky přidána anti-hbs protilátka značená alkalickou fosfatázou. Po promytí a proběhnutí všech inkubačních kroků, dochází za přítomnosti alkalické fosfatázy k hydrolýze chemiluminiscenčního substrátu. Množství fotonů na výstupu, změřených v luminometru, souvisí s přítomností HBsAg ve vzorku. Inkubační cykly: 2 30 minut. Čas do prvního výsledku: 65 minut. Odebírání vzorků Lipémie může stanovení rušit. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugací vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení HBsAg na přístroji IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami 8 IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

9 jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části Alternativní typ vzorku. Potřebný objem vzorku: 100 μl séra nebo plazmy (heparinizované, s citrátem sodným nebo EDTA). Skladování: 2 dny při pokojové teplotě (15 28 C). 8 3 dny při teplotě 2 8 C. 6,8 Delší skladování při 20 C. 7 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. HBsAg kalibrátor, HBsAg mírně pozitivní kontrola a HBsAg pozitivní kontrola obsahují HBsAg inaktivované použitím ověřených a doložených postupů. Se všemi kontrolami nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Výsledky HBsAg stanovené v daném vzorku pomocí testů od různých výrobců se mohou lišit s ohledem na rozdíly v použité metodě stanovení a specificitu reagencií. Proto by výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři měl obsahovat sdělení: "Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení HBsAg EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat." Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovými kódy. HBsAg zásobník s kuličkami (L2HB12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených myší monoklonální protilátkou anti-hbs. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KHB2: 1 balení. L2KHB6: 3 balení. HBsAg reagencie (L2HBA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml pufrového roztoku na bázi bílkovin, s konzervačním prostředkem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální kozí protilátkou anti-hbs v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KHB2: 1 nádobka. L2KHB6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. HBsAg kalibrátor (LHBR) Ampulka, 4 ml, obsahující lidské sérum s deaktivovaným HBsAg, s konzervačním prostředkem. Kalibrátor slouží jako cut-off stanovení. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KHB2: 1 ampulka. L2KHB6: 2 ampulky. HBsAg kontroly (LHBC1, LHBC2, LHBC3) Tři ampulky, každá obsahující 8 ml jedné kontroly (negativní, mírně pozitivní, pozitivní). LHBC1 (negativní kontrola): lidské sérum bez HBsAg, s konzervačním prostředkem. LHBC2, LHBC3 (mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): lidské sérum s inaktivovaným HBsAg, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C, nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KHB2: 1 sada. L2KHB6: 2 sady. IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 9

10 Aktuální rozmezí kontrolního ukazatele najdete na informačním letáčku přiloženém ke kontrole. Alikvotní štítky s čárovými kódy jsou součásti dodané soupravy a jsou určené na kalibrátory a kontroly. Před použitím nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky tak, aby zabudovaný snímač na analyzátorech IMMULITE 2000 mohl přečíst čárové kódy. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminescenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Kontrola(y) dodané se soupravou jsou určeny ke kontrole funkční způsobilosti stanovení. Aktuální rozmezí kontrolního ukazatele najdete na informačním letáčku přiloženém ke kontrole. Výpočet cut-off hodnoty a poměru S/CO: Hlavní cut-off hodnota tohoto testu byla určena z reprezentativních vzorků tak, aby bylo dosaženo optimální citlivosti a specificity metody stanovení. Cut-off hodnota je rovná průměrnému cps (střední hodnota cps) kalibrátoru (od poslední adjustace) vynásobenému parametrem kalibrační křivky 1 (Curve Parameter 1). (Viz políčka Low Adjustor CPS (cps nízkého kalibrátoru) a Curve Parameter 1 (parametr kalibrační křivky 1) na obrazovce přístroje IMMULITE Přístup je možný z nabídky přes Data Entry: Kit Entry.) K výpočtu poměru signál / hodnota cut-off (s/co) se používá následující vztah: Cps vzorku nebo kontroly S/CO = Střední hodnota cps kalibrátoru P1 Výpočet poměru s/co a hlášení kvalitativních výsledků (udávaných ve tvaru reaktivní/nereaktivní) provádí analyzátor IMMULITE 2000 automaticky. Výsledek je "Reaktivní", když je cps vzorku nad hodnotou cut-off a "Nereaktivní", když je cps pod hodnotou cut-off. Vyhodnocení výsledků Výsledek "Reaktivní" (poměr 1,0) značí, že HBsAg se ve vzorku nachází a byl zjištěný. Vzorky, které jsou reaktivní k HBsAg je třeba opětovně otestovat dvojmo, aby se prokázalo, že původně reaktivní výsledek je opakovatelný. Jestliže nejméně dva ze tří výsledných poměrů jsou 100 pro daný vzorek pacienta, výsledek vzorku může být vydán jako reaktivní a nevyžaduje se testování konfirmačním stanovením IMMULITE HBsAg Confirmatory Assay (LKCH). Pokud nejméně dva ze tří výsledných poměrů jsou reaktivní s poměrem < 100, vzorek pacienta musí být testován konfirmačním stanovením IMMULITE HBsAg Confirmatory Assay (LKCH), které potvrzuje přítomnost HBsAg na základě neutralizace HBsAg- reaktivních vzorků s anti-hbs. Tyto vzorky s výchozími a opakovanými poměry 1,0 a < 100, ve kterých je HBsAg neutralizováno konfirmačním testem, jsou považovány za potvrzené reaktivní na HBsAg. Je nezbytné, aby byly výsledky potvrzeny dříve, než je o výsledcích testu informován pacient. Pokud žádný z duplikátů opětovně testovaného vzorku není reaktivní, vzorek pacienta je třeba brát jako nereaktivní k HBsAg. Výsledek "Nereaktivní" (poměr <1,0) značí, že HBsAg se ve vzorku pacienta nenachází a nebyl zjištěn. 10 IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

11 Když je použito samostatného stanovení HBsAg ke screeningu těhotných žen k identifikaci novorozenců, u kterých je riziko přenosu HBV během porodu, musí být využito doplňkového stanovení, jako například IMMULITE HBsAg Confirmatory Kit, k potvrzení výsledku bez ohledu na to, je-li u reaktivního výsledku poměr větší nebo menší než 100. Protože ve vzácných případech mohou být výsledkem všech vysoce citlivých imunologických stanovení falešně reaktivní výsledky, je nezbytné tyto výsledky ověřit, než je o nich pacient informován. Výsledky stanovení, který laboratoř posílá lékaři měl obsahovat sdělení: "Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení HBsAg EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat." Očekávané hodnoty U jedinců akutně infikovaných virem hepatitidy B se jeden až čtyři týdny po kontaktu s nákazou objeví rychlý nárůst a pokles zjistitelného množství HBsAg, obvykle formou klinické nemoci. Z těchto akutně infikovaných dospělých jedinců se 5 10% stane chronickými nosiči viru. 1,4 U chronických nosičů viru nebyl pozorován žádný významný pokles množství HBsAg. Omezení Výsledky stanovení je třeba posuzovat s ohledem na klinickou anamnézu, symptomatiku a ostatní laboratorní nálezy. Lipemické, hemolyzované nebo značně kontaminované vzorky můžou poskytovat chybné výsledky. Nereaktivní výsledek neznamená, že pacient nebyl infikován HBV. Je třeba otestovat, zda vzorek pacienta neobsahuje jiné serologické markery. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají jako poměr signál / cut-off. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových separátorů, nebo přísad podporujících srážlivost.) Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva cykly za den, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Bilirubin: Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 400 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Hemolýza může způsobit posun hodnot. (Viz tabulka Hemolýza.) Lipémie: Lipémie může způsobit posun hodnot. (Viz tabulka Lipémie.) Alternativní typ vzorku: Vzorky (n=60) byly odebrány do vacutainer zkumavek obyčejných, heparinizovaných, s citrátem sodným a EDTA. Do 41 vzorků byl přidán HBsAg a všechny vorky byly následně testovány metodou HBsAg na analyzátorech IMMULITE Výsledky se udávají jako poměr signál / cut-off. (Heparin) = 0,99 (Sérum) + 1,93 r = 1,00 (Citrát sodný) = 0,96 (Sérum) + 0,83 r = 1,00 (EDTA) = 0,98 (Sérum) + 1,52 r = 1,00 Střední hodnoty: 219 (Sérum) 218 (Heparin) 211 (Citrát sodný) 216 (EDTA) IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 11

12 Srovnání metody 1: Stanovení HBsAg na analyzátorech IMMULITE 2000 bylo porovnáno na 231 vzorcích pacientů s testem Abbott AUSZYME MONOCLONAL, což je komerčně dostupný enzymový imunologický test HBsAg. IML 2000 Reakti Nerea Abbott vní ktivní Reaktivní 16 0 Nereaktivní Shoda: 99% Relativní citlivost Relativní specificita 100% 99% Srovnání metody 2: Metoda stanovení HBsAg na analyzátorech IMMULITE 2000 byla porovnána s imunologickým stanovením HbsAg od Elecsys na vzorcích, mezi kterými byly sérokonverzní komplety, vzorky s potenciálem zkřížené reaktivity, vzorky od pacientů s akutní a chronickou infekcí HBV, od dárců krve a hospitalizovaných pacientů a běžné vzorky. Výsledky tohoto srovnání jsou uvedené v následující tabulce. Počet vzorků HBsAg HBsAg nereaktivn reaktivní í Citlivost Specificita PPV NPV IMMULITE 2000 HBsAg Reaktivní ,7% 100% 100% 99,3% Nereaktivní Elecsys HBsAg Reaktivní Nereaktivní % 100% 100% 100% Srovnání metody 3: Metoda stanovení HBsAg na analyzátorech IMMULITE 2000 byla porovnána s imunologickým stanovením HBsAg od AxSYM na 438 vzorcích, mezi kterými byly sérokonverzní vzorky a vzorky od pacientů s chronickou infekcí HBV. Výsledky tohoto srovnání jsou uvedené v následující tabulce. IMMULITE 2000 AxSYM Sérokonverze (n = 340) Nerea Nerea Reak. Reak. ktiv. ktiv. Nerea Nerea Reak. ktiv. Reak. ktiv. Shoda ,1% Chronická infekce % HBV (n = 98) Celkem (n = 438) ,7% Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 HBsAg Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποιοτικό προσδιορισμό του επιφανειακού αντιγόνου της ηπατίτιδας B (HBsAg) σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα (ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA), ως βοήθημα στον εντοπισμό οξείας ή χρόνια μόλυνσης από τον ιό της ηπατίτιδας Β. Αριθμός καταλόγου: L2KHB2 (200 αναλύσεις), L2KHB6 (600 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: HBS Χρώμα: Πορτοκαλί Περίληψη και επεξήγηση Ο ιός της ηπατίτιδας Β (HBV) είναι ο μοναδικός ανθρώπινος παθογόνος παράγοντας στην ομάδα των ιών DNA που συνδέονται με την ηπατίτιδα και συναντάνται σε όλο τον κόσμο. Η κατανομή της μόλυνσης από HBV ποικίλει ανά γεωγραφική περιοχή και πληθυσμιακή ομάδα. Η μετάδοση του ιού γίνεται παρεντερικά, μέσω της ανταλλαγής αίματος ή προϊόντων αίματος, τη σεξουαλική επαφή και την περιγεννητική μετάδοση από τη μητέρα στο νεογνό. 1,2 Οι 12 IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

13 κλινικές εκδηλώσεις ποικίλουν από ήπιες ασυμπτωματικές λοιμώξεις έως σοβαρή κεραυνοβόλο ηπατίδιδα. 1,2,3 Ποσοστό άνω του 90% των προσβεβλημένων ενηλίκων παρουσιάζουν οξεία αυτοπεριοριζόμενη μόλυνση 1 με ίκτερο και παθολογική ηπατική λειτουργία. Η ανάρρωση δεν συνοδεύεται από χρόνιες συνέπειες. 1,2 Η χρόνια ηπατική νόσος, μια κατάσταση όπου η μόλυνση επιμένει για διάστημα μεγαλύτερο των έξι μηνών και αποτελεί ένα γνωστό επακόλουθο της ηπατίτιδας Β, είναι συνήθως προοδευτική. 1,2 Ο κίνδυνος μετατροπής του ατόμου σε χρόνιο φορέα είναι μεγαλύτερος σε περίπτωση μόλυνσης κατά την παιδική ηλικία και μικρότερος στους ενήλικες. 4,5 Μεταξύ των χρόνιων φορέων HBV, δεν υπάρχουν ενδείξεις συνεχιζόμενης ηπατικής βλάβης, 1,2 ωστόσο η μόλυνση παραμένει και ο φορέας μπορεί να μεταδόσει τον ιό. 2 Η διαθεσιμότητα των ανασυνδυασμένων εμβολίων κατά του HBV και η σύσταση για γενική ανοσοποίηση των νεογνών και άλλων ατόμων υψηλού κινδύνου αποσκοπεί στην πρόληψη των μολύνσεων από HBV. Επιπλέον, διαθέσιμη είναι η θεραπεία με άλφα-ιντερφερόνη για την ανακούφιση των συμπτωμάτων. Τα αποτελέσματα έχουν δείξει θετική αντίδραση στη θεραπεία σε ποσοστό 40 50% των επιλεγμένων ατόμων με χρόνια ενεργή ηπατίτιδα B. 4,5 Η κατηγοριοποίηση της μόλυνσης από ηπατίτιδα Β απαιτεί τον προσδιορισμό διαφόρων ορολογικών δεικτών, οι οποίοι εκφράζονται κατά τις τρεις φάσεις (επώαση, οξεία και ανάρρωση) της μόλυνσης. Ο πρώτος δείκτης που εμφανίζεται στον ορό είναι το επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBsAg). Η παρουσία αυτού του αντιγόνου υποδηλώνει μια συνεχιζόμενη μόλυνση με τον ΗΒV και είναι ανιχνεύσιμο στους ασθενείς με οξεία νόσο, καθώς και στους χρόνιους φορείς. 1,2,4 Αρχή της διαδικασίας Ο προσδιορισμός IMMULITE 2000 HBsAg είναι ένας ανοσοενζυματικός προσδιορισμός χημειοφωταύγειας στερεάς φάσης, δύο σταδίων. Η στερεά φάση, που αποτελείται από ένα σφαιρίδιο πολυστυρενίου, είναι καλυμμένη με ένα αντίσωμα κατά του επιφανειακού αντιγόνου της ηπατίτιδας Β (anti-hbs). Το δείγμα του ασθενούς προστίθεται στην κυβέττα που περιέχει το καλυμμένο σφαιρίδιο. Ένα anti-hbs αντίσωμα σημασμένο με αλκαλική φωσφατάση προστίθεται επίσης στην κυβέττα. Μετά τα στάδια της έκπλυσης και επώασης, το υπόστρωμα της χημειοφωταύγειας υφίσταται υδρόλυση υπό την παρουσία της αλκαλικής φωσφατάσης. Τα προκύπτοντα φωτόνια, όπως μετρώνται από το φωτόμετρο, συσχετίζονται με την ύπαρξη HBsAg στο δείγμα. Κύκλοι επώασης: 2 x 30 λεπτά. Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Η λιπιδαιμία μπορεί να επηρεάσει την εξέταση. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντρηση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συλλογής αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Το IMMULITE 2000 HBsAg δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 100 µl ορός ή πλασμα (ηπαρινισμένο, κιτρικό νάτριο ή EDTA). IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 13

14 Φύλαξη: 2 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου (15 28 C). 8 3 ημέρες στους 2 8 C. 6,8 Για παρατεταμένη φύλαξη: στους 20 C. 7 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Ο ρυθμιστής HBsAg, ο χαμηλός θετικός έλεγχος HBsAg και ο θετικός έλεγχος HBsAg περιέχουν HbsAg, που έχει απενεργοποιηθεί με ελεγμένες, τεκμηριωμένες μεθόδους. Ωστόσο, μεταχειρίζεστε πάντα όλους τους ελέγχους σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Τα αποτελέσματα του HBsAg που υπολογίζονται για ένα συγκεκριμένο δείγμα με εξετάσεις διαφορετικών κατασκευαστών μπορεί να μην δίνουν το ίδιο αποτέλεσμα εξαιτίας διαφορών στις μεθόδους της εξέτασης και στην ειδικότητα των αντιδραστηρίων. Για τον λόγο αυτό, τα αποτελέσματα που εκδίδονται στους κλινικούς γιατρούς από το εργαστήριο θα πρέπει να αναφέρουν ότι: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 HBsAG EIA. Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρήση απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες με ραβδοκώδικα στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων HBsAg (L2HB12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με μονοκλωνικό αντί-hbs ποντικού. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KHB2: 1 συσκευασία. L2KHB6: 3 συσκευασίες. Δοχείο αντιδραστηρίων HBsAg (L2HBA2) Με ραβδοκώδικες. 11,5 ml ρυθμιστικού πρωτεΐνης, με συντηρητικό. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συνδεδεμένης με πολυκλωνικό αντί-hbs κατσίκας σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C μέχρι την ημερομηνία λήξεως. L2KHB2: 1 δοχείο. L2KHB6: 3 δοχεία. Πριν την χρήση, σχίστε το επάνω μέρος της ετικέτας στο σημείο διάτρησης χωρίς να καταστρέψετε τον ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου αντιδραστηρίου και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστής HBsAg (LHBR) 4 ml ανθρώπινου ορού με απενεργοποιημένο HBsAg, με συντηρητικό. Ο ρυθμιστής χρησιμεύει ως cut off της εξέτασης. Σταθερά στους 2 8 C για 14 ημέρες μετά το άνοιγμα ή 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KHB2: 1 φιαλίδιο. L2KHB6: 2 φιαλίδια. Δείγματα ελέγχου HBsAg (LHBC1, LHBC2, LHBC3) Τρία φιαλίδια, (αρνητικό, χαμηλό θετικό και θετικό), 8 ml έκαστο. LHBC1 (Αρνητικός έλεγχος): ανθρώπινος ορός χωρίς HBsAg, με συντηρητικό. LHBC2, LHBC3 (Χαμηλός θετικός έλεγχος, θετικός έλεγχος): ανθρώπινος ορός με απενεργοποιημένο HBsAg, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 ημέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KHB2: 1 σετ. L2KHB6: 2 σετ. 14 IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

15 Για τις πρόσφατες τιμές των ορών ελέγχου βλ. το αντίστοιχο ένθετο. Το kit περιλαμβάνει κατάλληλες ετικέτες με ραβδοκώδικα, για χρήση με τους ρυθμιστές και τους ελέγχους. Πριν τη χρήση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες στους συνήθεις δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το IMMULITE Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) Χρειάζονται επίσης: Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό, σωληνάρια. Διαδικασία της Ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Οι οροί ελέγχου που παρέχονται με το kit θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της εξέτασης. Για τις πρόσφατες τιμές των ορών ελέγχου βλ. το αντίστοιχο ένθετο. Υπολογισμός του Cut Off και της αναλογίας S/CO: Το Κύριο Cutoff της εξέτασης υπολογίστηκε από αντιπροσωπευτικά δείγματα προκειμένου να επιτευχθεί η μέγιστη δυνατή ευαισθησία και ακρίβεια για την εξέταση. Το cutoff ορίστηκε ως ίσο με το μέσο όρο των χτύπων ανά δευτερόλεπτο (mean cps) του ρυθμιστή (από την πιο πρόσφατη ρύθμιση) πολλαπλασιασμένο με τη παράμετρο 1 της καμπύλης (Curve Parameter 1). (Βλ. τα πεδία "Low Adjustor CPS" και "Curve Parameter 1" στην οθόνη πληροφοριών του IMMULITE 2000 Kit, η οποία είναι προσπελάσιμη από το Data Entry: Kit Entry.) Ο υπολογισμός της αναλογίας σήματος/cutoff (s/co) γίνεται με τον παρακάτω τύπο: S/CO αναλ. = Δείγμα ή Έλεγχος cps Μ.Ο. Ρυθμιστή cps P1 Ο υπολογισμός και η αναφορά των ποιοτικών αποτελεσμάτων, (θετικά/αρνητικά) και η αναλογία s/co γίνονται αυτόματα από το IMMULITE Το αποτέλεσμα αναφέρεται ως θετικό (reactive), αν οι χτύποι ανά δευτερόλεπτο για το συγκεκριμένο δείγμα βρίσκονται πάνω από το cutoff, και αρνητικό (nonreactive), εάν βρίσκονται κάτω από το cutoff. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Ένα θετικό αποτέλεσμα (θετικά - αναλογία 1,0) φανερώνει ότι ανιχνεύτηκε HBsAg στο δείγμα του ασθενούς. Τα δείγματα που αρχικά βρέθηκαν θετικά στο HBsAg θα πρέπει να επανεξετάζονται εις διπλούν, ώστε να επιβεβαιωθεί το αρχικό θετικό αποτέλεσμα. Αν τουλάχιστον δύο από τα τρία αποτελέσματα είναι 100 για ένα συγκεκριμένο δείγμα, το δείγμα αυτό μπορεί να θεωρηθεί ως αντιδραστικό χωρίς να απαιτείται έλεγχος με τον προσδιορισμό IMMULITE HBsAg Confirmatory Assay (LKCH). Αν τουλάχιστον δύο από τα τρία αποτελέσματα είναι αντιδραστικά με τιμή < 100, το δείγμα του ασθενούς θα πρέπει να ελεγχθεί με τον προσδιορισμό IMMULITE HBsAg Confirmatory Assay (LKCH), μια διαδικασία για την επιβεβαίωση της παρουσίας HBsAg που βασίζεται στην εξουδετέρωση HBsAgαντιδραστικών δειγμάτων με anti- HBs. Δείγματα με αρχική τιμή και τιμή επανάληψης 1,0 και < 100, στα οποία το HBsAg εξουδετερώθηκε με την διαδικασία του επιβεβαιωτικού ελέγχου, θεωρούνται επιβεβαιωμένα αντιδραστικά για HBsAg. Είναι αναγκαίο να γίνει επιβεβαίωση IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 15

16 αποτελεσμάτων πριν ενημερωθούν οι ασθενείς για αυτά. Εάν κανένα από τα δύο αντίγραφα του επανεξεταζόμενου δείγματος δεν βρεθεί θετικό, το δείγμα του ασθενούς θα πρέπει να θεωρηθεί αρνητικό στο HBsAg. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα (αρνητικά - αναλογία <1,0) υποδηλώνει ότι δεν ανιχνεύτηκε HBsAg στο δείγμα του ασθενούς. Όταν ο προσδιορισμός HBsAg χρησιμοποιείται ως μεμονωμένο τεστ για τον έλεγχο εγκύων ώστε να αναγνωριστούν έμβρυα που είναι σε κίνδυνο για περιγεννητική HBV λοίμωξη, πρέπει να χρησιμοποιείται συμπληρωματικός έλεγχος όπως το IMMULITE HBsAg Confirmatory Kit για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων, ανεξάρτητα αν οι τιμές των αντιδραστικών δειγμάτων είναι πάνω ή κάτω από 100. Επειδή όλες οι υψηλής ευαισθησίας ανοσοεξετάσεις είναι δυνατό να δώσουν λανθασμένα θετικά αποτελέσματα σε σπάνιες περιπτώσεις, είναι απαραίτητη η επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων πριν την ενημέρωση των ασθενών για τα αποτελέσματα. Τα αποτελέσματα που λαμβάνει ο κλινικός γιατρός από το εργαστήριο θα πρέπει να περιέχουν την εξής επισήμανση: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 HBsAg EIA. Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Αναμενόμενες τιμές Τα άτομα που παρουσιάζουν οξεία μόλυνση από τον ιό της ηπατίτιδας Β εμφανίζουν ταχεία αύξηση και μείωση των ανιχνεύσιμων επιπέδων HbsAg σε διάστημα ενός έως τεσσάρων μηνών από την έκθεση, συνήθως δε κατά την εξέλιξη της κλινικής νόσου. Από τους ενήλικες με οξεία μόλυνση, ποσοστό 5 10% θα εξελιχθεί σε χρόνιους φορείς του ιού. 1,4 Μεταξύ των χρόνιων φορέων δεν παρατηρείται σημαντική μείωση των τιμών HBsAg. Περιορισμοί Τα αποτελέσματα της εξέτασης θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη στα πλαίσια του κλινικού ιστορικού του ασθενούς, της συμπτωματολογίας και άλλων εργαστηριακών ευρημάτων. Λιπιδαιμικα, αιμολυμένα ή πολύ μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν λανθασμένα αποτελέσματα. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν υποδηλώνει απουσία μόλυνσης από τον HBV. Το δείγμα του ασθενούς θα πρέπει να εξεταστεί για παρουσία άλλων ορολογικών δεικτών. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης. Παρόλ αυτά, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως αναλογία σήματος/cut off. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορών που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) 16 IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, )

17 Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις μέχρι 400 mg/l δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η αιμόλυση μπορεί να προκαλέσει απόκλιση των τιμών. (Βλ. πίνακα "Hemolysis".) Λιπιδαιμία: Η λιπιδαιμία μπορεί να προκαλέσει απόκλιση των τιμών. (Βλ. πίνακα Lipemia ). Εναλλακτικοί τύποι δείγματος: Συλλέχθηκαν δείγματα (n=60) σε απλούς, ηπαρινισμένους, κιτρικού νατρίου και EDTA δοκιμαστικούς σωλήνες. 41 δείγματα εμπλουτίστηκαν με HBsAg και όλα τα δείγματα εξετάστηκαν με τη διαδικασία IMMULITE 2000 HBsAg. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως αναλογία σήματος/cut off. (Ηπαρίνη) = 0,99 (ορός) + 1,93 r = 1,00 (Κιτρικό νάτριο) = 0,96 (ορός) + 0,83 r = 1,00 (EDTA) = 0,98 (ορός) + 1,52 r = 1,00 Μέσοι όροι: 219 (ορός) 218 (ηπαρίνη) 211 (κιτρικό νάτριο) 216 (EDTA) Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η διαδικασία IMMULITE 2000 HBsAg συγκρίθηκε με την Abbott AUSZYME MONOCLONAL, μια διαθέσιμη στο εμπόριο ενζυμική ανοσοεξέταση για HBsAg, σε 231 δείγματα ασθενών. IML 2000 Σχετική Σχετική Abbott Θετ. Αρνητ. ευαισθησία Ειδικότητα Θετικά % 99% Αρνητικά Συμφωνία: 99% Σύγκριση της Μεθόδου 2: Η μέθοδος IMMULITE 2000 HBsAg συγκρίθηκε με την ανοσοεξέταση Elecsys HBsAg σε δείγματα, αποτελούμενα από οροθετικές ομάδες, δείγματα ενδεχόμενης διασταυρούμενης αντίδρασης, δείγματα ασθενών με όξεία και χρόνια μόλυνση από HBV από αιμοδότες, νοσηλευόμενους ασθενείς και τακτικές εξετάσεις. Ο πίνακας παρακάτω περιέχει τα αποτελέσματα της μελέτης. Αρ.δειγμάτων Θετικά HBsAg IMMULITE 2000 HBsAg Θετικά Αρνητικά Elecsys HBsAg Θετικά Αρνητικά Αρνητικά HBsAg Ευαισθ. Ειδικότ. PPV NPV 93,7% 100% 100% 99,3% 100% 100% 100% 100% Σύγκριση της Μεθόδου 3: Η μέθοδος IMMULITE HBsAg συγκρίθηκε με την ανοσοεξέταση AxSYM HBsAg σε 438 δείγματα, αποτελούμενα από οροθετικές ομάδες και δείγματα ασθενών με χρόνια μόλυνση από HBV. Ο πίνακας παρακάτω περιέχει τα αποτελέσματα της μελέτης. IMMULITE 2000 Θετ. Θετ. Αρν. Αρν. AxSYM Θετ. Αρν. Θετ. Αρν. Συμφωνία: Οροθ. ομάδες (αρ. = 340) Χρόνια μόλυνση HBV (αρ. = 98) Σύνολο (αρ. = 438) ,1% % ,7% Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 HBsAg Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do jakościowego oznaczania antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby typu B HBsAg w ludzkiej surowicy i osoczu (heparynowym, cytrynianowym oraz EDTA), przydatny w rozpoznawaniu ostrej i chronicznej infekcji wirusem zapalenia wątroby typu B. IMMULITE 2000 HBsAg (PIEL2KHB-5 {35CE}, ) 17