EBV-VCA IgM. For the Qualitative Detection of IgM Antibodies to Viral Capsid Antigen of Epstein-Barr Virus. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 EBV-VCA IgM For the Qualitative Detection of IgM Antibodies to Viral Capsid Antigen of Epstein-Barr Virus For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the qualitative detection of IgM antibodies to viral capsid antigen of Epstein-Barr virus in human serum or plasma (EDTA and heparinized). This assay may also be used as an aid in the diagnosis of EBV-associated diseases when used in conjunction with the IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG and IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG immunoassays. Catalog Number: L2KEM2 (200 tests) Test Code: ECM Color: Brown Summary and Explanation Epstein-Barr virus (EBV) is a member of the herpesvirus family and a worldwide infectious agent that is the classic cause of infectious mononucleosis (IM). 1 IM is often diagnosed based on the presentation of characteristic symptoms of sore throat, lymphadenopathy and fever, along with a positive heterophile antibody test and a characteristic hematological picture of lymphocytosis (>50%) with 10% or more of the lymphocytes identified as atypical. 2 EBV is generally acquired by oral transmission of infected saliva. Following multiplication in epithelial cells of the oropharynx, the virus selectively infects B lymphocytes in the peripheral blood and other reticuloendothelial tissues. EBV has been intimately associated with several human tumors, including African Burkitt lymphoma, nasopharyngeal carcinoma, Hodgkin's disease, and B-cell lymphomas and leiomyosarcomas in organ transplant recipients and patients with immunodeficiency disorders. 3 Serological methods have been an important aid in the diagnosis of EBV infections. Several distinct EBVassociated antigen systems and their corresponding antibodies have been characterized and developed into important diagnostic tools. One of the best indicators of active EBV infection is an antibody to viral capsid antigens, as well as structural proteins necessary for replication of the virus. 4 The acute phase of infectious mononucleosis is characterized by rapid IgM and IgG antibody responses to VCA. The IgM response to VCA is transient, lasting for about 1 to 3 months. The IgG response to this antigen usually peaks during the acute illness, declines slightly over the next few weeks to months, and then persists at a relatively stable level for life. 5 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM is a solid-phase IgM capture chemiluminescent immunoassay. The solid phase (bead) is coated with monoclonal murine anti-human IgM antibody. The liquid phase consists of three reagents: 1) protein-based buffer, 2) biotinylated VCA peptide in buffer and 3) alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to streptavidine in buffer. In the first cycle, the pre-diluted patient sample (1-in-20) and the protein buffer are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, IgM antibodies to EBV-VCA in the patient sample bind to the monoclonal murine anti-human IgM antibody on the bead. Unbound sample is then removed by a centrifugal wash. In the second cycle, reagents containing biotinylated VCA peptide and the enzyme-conjugated streptavidine are added to the original reaction tube for an additional 30-minute incubation. During this time, the immobilized anti-human IgM binds to the VCA peptide or/and VCA peptide and enzyme-conjugate complex. The unbound conjugate is removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube, and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes Time to first result: 65 minutes 2 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

3 Specimen Collection Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Samples which are cloudy or have particulate material should be clarified by low-speed centrifugation. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum or plasma (EDTA or heparinized). After automatic predilution, 50 µl of diluted sample is used for the immunoassay. Storage: 3 days at 2 8 C or 6 months at 20 C. 6 Automatic Predilution Factor: 20 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. CAUTION! POTENTIAL BIOHAZARD Contains human source material. Each donation of human blood or blood component was tested by FDA-approved methods for the presence of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and type 2 (HIV-2) as well as for Hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibody to Hepatitis C virus (HCV). The test results were negative (not repeatedly reactive). No test offers complete assurance that these or other infectious agents are absent; this material should be handled using good laboratory practices and universal precautions CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H318, H315, H400, H411, H311, H302, H412 P280, P273, P305 + P351 + P310, P301 + P312, P302 + P312, P501 Danger! Causes serious eye damage. Causes skin irritation. Very toxic to aquatic life. Toxic to aquatic life with long lasting effects. Toxic in contact with skin. Harmful if swallowed. Harmful to aquatic life with long lasting effects. Wear protective gloves/ protective clothing/eye protection/face protection. Avoid release to the environment. IF IN EYES: Rinse cautiously with water for several minutes. Immediately call a POISON CENTER or doctor/physician. IF SWALLOWED: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. IF ON SKIN: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: zinc chloride; EBV-VCA IgM Reagent Wedge Contains: sodium azide; EBV-VCA IgM Adjustor, EBV-VCA IgM Controls Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 3

4 Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. The anti-ebv-vca IgM results determined for a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: The following results were obtained with the IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. EBV-VCA IgM Bead Pack (L2EM12) With barcode. 200 beads coated with a murine monoclonal anti-human IgM antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KEM2: 1 pack EBV-VCA IgM Reagent Wedge (L2EMA2) With barcode. Three reagents: 11.5 ml of a protein-based buffer; 11.5 ml biotinylated VCA peptide, in a protein-based buffer; and 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to streptavidine, in a protein-based buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KEM2: 1 wedge Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. EBV-VCA IgM Adjustor (LEMR) One vial of lyophilized human serum with IgM reactive to EBV-VCA, in a protein-based buffer, with preservative. Reconstitute with 4.0 ml distilled water or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. (No predilution is required.) Stable at 2 8 C for 14 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KEM2: 1 vial EBV-VCA IgM Controls (LEMC1, LEMC2) Negative Control (LEMC1): One vial of lyophilized human serum nonreactive to EBV-VCA IgM, with preservative. Positive Control (LEMC2): One vial of lyophilized human serum with IgM reactive to EBV-VCA, with preservative. Reconstitute with 2.0 ml distilled water or deionized water. Mix by gently swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 14 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KEM2: 1 set The IMMULITE 2000 software performs automatic on-board dilution of control samples, and the results will be tracked in the QC database. Enter controls as controls. For the current control ratio ranges, refer to the Control insert. Before running adjustors or controls, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes, so that the barcodes can be read by the on-board reader. IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KEM2: 1 vial. 4 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

5 Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2KEM2: 3 labels Kit Components Supplied Separately IgG/IgM Sample Diluent (L2IGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2IGZ2: 1 vial. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2IGZ2: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps Also Required Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks Quality Control Samples: The EBV-VCA IgM control(s) supplied with the kit should be used as quality control material to monitor the performance of the assay. The Controls should be processed at (or near) the beginning of every run containing patient samples to be tested for EBV-VCA IgM, and also when readjusting. In addition to the controls provided, users may wish to run additional controls for their own purposes. Additional controls may be tested in accordance with guidelines or requirements of local, state, and/or federal regulations or accrediting organizations. It is also recommended that known reactive and nonreactive specimens be run periodically to assure pipetting accuracy for the dilution step. Users of the IMMULITE 2000 system are advised to consult the NCCLS document C24-A, Internal Quality Control Testing: Principles and Definitions, for additional guidance on quality control for the basic principles and definitions in dealing with internal quality control testing. Calculation of Cutoff and S/CO Ratio: The Master Cutoff of the assay was determined from representative samples to achieve optimal sensitivity and specificity for the assay. The cutoff is set equal to the average counts per second (mean cps) of the Adjustor (from the most recent adjustment) multiplied by Curve Parameter 1. (See the Low Adjustor CPS and Curve Parameter 1 fields in the IMMULITE 2000 Kit Information screen, which can be accessed from the menu via Data Entry: Kit Entry.) Calculation of a signal/cutoff (s/co) ratio is done by using the following formula: S/CO Ratio = Sample or Control cps Mean Adjustor cps P1 Calculation and reporting of qualitative (reactive/nonreactive/indeterminate) and s/co ratio results are handled automatically by the IMMULITE The result for a sample is reported as Indeterminate if the counts per second for that sample fall within 10% of the cutoff. The result is reported as Reactive if the sample's counts are above the indeterminate range, and Nonreactive if below this range. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 5

6 Interpretation of Results The cutoff of the IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM assay was determined with reactive and nonreactive patient samples by a ROC analysis, with a balanced consideration of sensitivity and specificity. A result of Reactive (ratio of 1.1) indicates that EBV-VCA IgM antibodies were detected in the patient sample. A result of Nonreactive (ratio of 0.9) indicates that EBV-VCA IgM antibodies were not detected in the patient sample. Any result of Indeterminate (ratio between 0.9 and 1.1) should be retested. Samples which still test as Indeterminate should be tested by an alternate method, or a second sample should be taken if possible within a reasonable period of time (e.g., one week). The magnitude of the measured results (cps) above the Cutoff is not indicative of the total amount of antibodies detected. Reports by the laboratory to the physician should include The following results were obtained with the IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Values obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably. An interpretation of the results is not recommended if the positive or negative control falls outside the range specified in the EBV-VCA IgM Control Insert. Clinical interpretation requires knowledge of the patient s medical history and clinical condition (signs and symptoms), as well as other diagnostic results including presence or absence of antibodies against VCA IgG and EBNA IgG utilizing the IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG and IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG immunoassays. Although EBV serodiagnosis requires measurement of more than one analyte, universal agreement of a serological profile does not exist. Nonreactive results do not rule out the diagnosis of infectious mononucleosis (IM). The specimen may have been drawn before appearance of detectable antibodies. Nonreactive results in suspected early IM infection should be retested in 4-5 weeks. A serological profile used for diagnostic interpretation is shown below. 13,14 Interpretation Criteria: Interpretation VCA IgG EBNA IgG VCA IgM Past Infection + + Current / Acute +/ + No Infection Expected Values Antibodies to EBV have been detected in all population groups studied. However, the prevalence may vary with the population group under review (e.g. age, race, geographic location, socioeconomic status, etc.). 7 Approximately 50% of the early childhood (<5 years) population in the United States and Great Britain demonstrate EBV seroconversion. Further seroconversion occurs in adolescence and young adulthood, reaching greater than 90% seroconversion by the 4 th decade of life. 8, 9,10 The incidence of infectious mononucleosis is 30 times higher for whites than for blacks. 10 Persons in tropical and developing nations, as well as lower socioeconomic persons in industrialized nations, acquire EBV in childhood, while the acquisition of EBV by economically advantaged persons in industrialized nations does not occur until adolescence or early adulthood. 11 After EBV infection, VCA IgG antibodies persist indefinitely. 12 Limitations The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical history, symptomology and other laboratory findings. The presence of IgM antibodies in a single specimen is not sufficient to distinguish between active or past infection. Diagnosis should not be made on the basis of anti-vca-igm results alone. Test results should be interpreted in conjunction with the results of IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG and IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG. Caution should be used if interpreting a profile using more than one manufacturer s kits or different assay methods. Samples containing antinuclear antibodies or other anticell antibodies may give false positive results. 6 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

7 The performance characteristics of this assay have not been established for use with specimens from neonates, cord blood, or pre-transplant patients. The results in HIV patients, in patients undergoing immunosuppressive therapy, or in patients with other disorders leading to immunosuppression, should be interpreted with caution. The performance of IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM has not been established for sample matrices other than human serum and plasma. The IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA assay is not intended to replace virus isolation and/or identification. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM ELISA assays are not intended to replace virus isolation and/or identification. Heterophilic antibodies in human serum and plasma can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed as a signal-to-cutoff ratio. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Precision: Samples were processed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Crossreactivity: A study was conducted on 76 samples to evaluate whether the measurement of EBV-VCA IgM antibody is affected by closely related microorganisms. Sera containing antibodies to the microorganisms listed in the table below were tested by IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM and by a commercially available ImmunoWell EBV-VCA IgM. Disease state Total n IMMULITE 2000 reactive/tested ImmunoWell reactive/tested ANA 10 0/10 1/10 Anti-HIV 10 2/10 0/10 Rheumatoid Factor 10 0/10 0/10 Anti-VZV 10 0/10 2/10 Anti-HAV 4 1/4 0/4 HBsAg 2 0/2 0/2 HSV IgM 8 1/8 1/8 Toxoplasma IgM 9 3/9 0/9 Rubella IgM 3 0/3 0/3 CMV IgM 10 0/10 1/10 Sixty-nine out of 76 samples yielded nonreactive results. The seven reactive samples were further tested by a commercially available EBV-VCA blot assay and confirmed 6 positive results (2 HIV, 1 HSV IgM, 1 Hep A and 2 Toxoplasma) and yielded one negative result (1 Toxoplasma). Alternate Sample Types: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 52 volunteers into plain, sodium heparin, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer plastic tubes and assayed by the IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM procedure. Results are expressed as a signal-to-cutoff ratio. By linear regression: (NaHeparin) = 1.08 (Serum) 0.01 r = 0.98 (EDTA) = 1.09 (Serum) 0.01 r = 0.98 (SST) = 1.02 (Serum) r = 0.97 Means: 0.31 (Serum) 0.33 (NaHeparin) 0.33 (EDTA) 0.32 (SST) IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 7

8 Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 269 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Method Comparison: The assay was compared to a commercially available ImmunoWell EBV-VCA IgM kit on 135 samples. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM ImmunoWell React Non- Relative Relative EBV-VCA IgM Ind react Sensitivity Specificity Positive Equivocal % 96.4% Negative Total Agreement: 91.1% Based on the serological profiles listed under the Interpretation of Results section, 13,14 the IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM results were compared to those obtained with the ImmunoWell reference assays (VCA IgG, EBNA-IgG and VCA IgM). IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM 95% Confidence Condition Percent Agreement Interval Past Infection N/A N/A Acute Infection 100% (19/19) 82.4% 100% No Infection N/A N/A References 1) Jenson HB, Baltimore RS. Infectious mononucleosis. Pediatric infectious diseases: principles and practice. Norwalk, Conn. Appleton & Lange, 1995: ) Henle W, Henle G. Epstein-Barr virus and infectious mononucleosis. In: Human herpesvirus infections: clinical aspects. New York: Marcel Dekker, ) Gaffey MJ, Weiss LM. Association of Epstein-Barr virus with human neoplasia. Pathol Ann 1992: 27: ) Sumaya CV, Ench Y. Heterophile antibody and viral-specific responses. Pediatrics 1985: 75: ) Davidsohn I, Lee CL The clinical serology of infectious mononucleosis. In: Carter RL, Penman HG, editors. Infectious mononucleosis. Oxford: Blackwell Scientific. 1969: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995: ) Schooley RT, Dolin R. Epstein-Barr virus (infectious mononucleosis). In: Mandell G, editor. Principles and practice of infectious diseases. 3rd ed. New York: Churchill Livingstone, 1990: ) Pereira MS, et al. EB virus antibody at different ages. Br. Med J 1969; 4:526. 9) Porter DD, et al. Prevalence of antibodies to EB virus and other herpesviruses. JAMA 1969; 208: ) Tamir D. Infectioius mononucleosis and EB virus in childhood. Pediatrics 1974; 53: ) De-The G. Epidemiology of Epstein-Barr virus and associated diseases in man. In: Roizman B. editor. The herpes viruses. Vol.1. New York: Plenum Press, 1982: ) Pochedly C. Laboratory testing for infectious mononucleosis. Postgrad Med 1987; 81: ) Lennette ET. Epstein-Barr Virus (EBV). In: Lennette EH, Lennette DA, Lennette ET. Diagnostic Procedures for Viral. Rickettsial, and Chlamydial Infections, 7 th Ed. American Public Health Association, Washington D.C., ) Lennette ET. Epstein-Barr Virus. In: Murray PR, et al. Manual of Clinical Microbiology, 6 th Ed. ASM Press, Washington D.C., ) Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human immunodeficiency virus, Hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR, 1988;37:377-82, ) Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS Document M29-A3. 17) Federal Occupational Safety and Health Administration, Bloodborne Pathogens Standard, 29 CFR Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485: IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

9 Tables and Graphs Precision (ratio) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Česky IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 pro kvalitativní stanovení IgM protilátek proti virovému kapsulárnímu antigenu (VCA - viral capsid antigen) viru Epstein-Barrové v lidském séru nebo plazmě (EDTA a heparinizované). Tento test se může použít také jako pomůcka při diagnostice chorob způsobených virem Epstein-Barrové (EBV) spolu se stanovením IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG a IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG. Katalogové číslo: L2KEM2 (200 testů) Kód metody: ECM Barva: Hnědá Shrnutí a vysvětlení Virus Epstein-Barrové (EBV) je člen rodiny herpetických virů a nositel infekce způsobující infekční mononukleózu (IM) rozšířený po celém světě. 1 Diagnóza IM se obvykle stanovuje na základě typických symptomů, jako je škrábání v krku, lymfadenopatie a horečka, doprovázených pozitivním testem na heterofilní protilátky a typickým hematologickým nálezem lymfocytózy (>50%), kdy již 10% a více detekovaných lymfocytů je považováno za atypický nález. 2 Nákaza EBV probíhá nejčastěji orálně přenosem infikovaných slin. Poté nastává rozmnožení viru v epiteliálních buňkách části hltanu (orofarynxu) a virus napadá selektivně B lymfocyty v periferní krvi a ostatní retikuloendoteliální tkáně. EBV bývá úzce spojován s některými typy lidských nádorů včetně afrického Burkittova lymfomu, nasofaryngeálního karcinomu, Hodgkinsovy choroby, B buněčného lymfomu a leiomyosarkomů u příjemců transplantovaných tkání a u pacientů s poruchami imunity. 3 Při diagnostice infekcí EBV se úspěšně používají sérologické metody. Byly definovány různé systémy antigenů spojené s EBV a jejich odpovídající protilátky, které se staly významným diagnostickým prostředkem. Jedním z nejlepších indikátorů aktivní infekce je protilátka proti virovým kapsulárním antigenům a strukturální bílkoviny potřebné pro replikaci viru. 4 Akutní fáze infekční mononukleózy je charakterizována rychlou tvorbou IgM a IgG protilátek proti VCA. Odezva IgM na VCA je přechodná a trvá přibližně 1 až 3 měsíce. Odezva IgG na tento antigen má obvykle vrchol během akutního onemocnění, klesá pomalu po dobu několika týdnů až měsíců a pak setrvává v poměrně stabilní hladině v organismu po celý život. 5 Princip stanovení IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM je chemiluminiscenční imunochemické stanovení IgM protilátek v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potažena monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgM. Kapalná fáze sestává ze tří reagencií: 1) pufr na bázi bílkoviny, 2) biotinylovaný peptid VCA v pufru a 3) alkalická fosfatáza (z telecího střeva) konjugovaná se streptavidinem v pufru. V prvním cyklu se inkubuje vzorek pacienta ředěný analyzátorem (1 : 20) a pufr na bázi bílkoviny s potaženou kuličkou po dobu 30 minut. V tomto kroku se IgM protilátky proti EBV-VCA ve vzorku navážou na monoklonální myší protilátku proti lidskému IgM na kuličce. Nenavázaný vzorek se poté odstraní centrifugačním mytím. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 9

10 V druhém cyklu se do reakční zkumavky přidá reagencie obsahující biotinylovaný VCA peptid a s enzymem konjugovaný streptavidin a probíhá další inkubace po dobu 30 minut. V tomto kroku se imobilizované protilátky proti lidskému IgM navážou na VCA peptid a/nebo VCA peptid a s enzymem konjugovaný komplex. Nenavázaný enzymový konjugát se odstraní centrifugačním mytím. Nakonec se do reakční zkumavky s kuličkou přidá chemiluminiscenční substrát a generovaný signál je úměrný navázanému enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut Čas do prvního výsledku: 65 minut Odebírání vzorků Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Zakalené vzorky nebo vzorky s částicemi je třeba upravit nízkootáčkovou centrifugací. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení EBV-VCA IgM na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 10 µl séra nebo plazmy (heparinizované nebo EDTA). Po automatickém předředění se pro imunochemické stanovení použije 50 µl naředěného vzorku. Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců při teplotě 20 C. 6 Faktor automatického předředění: 20 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. POZOR! POTENCIÁLNÍ BIOHAZARD Obsahuje materiál lidského původu. Každé darování krve nebo jejích složek bylo testováno metodami schválenými FDA na přítomnost protilátek proti viru lidské imunodeficience typu 1 (HIV-1) a typu 2 (HIV-2) a také na povrchový antigen viru hepatitidy B (HBsAg) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV). Výsledky testu byly negativní (opakovaně nereaktivní). Žádný test však není absolutní zárukou nepřítomnosti uvedených nebo jiných infekčních zárodků; s materiálem proto zacházejte podle zásad správné laboratorní praxe a dbejte obecných bezpečnostních opatření UPOZORNĚNÍ: Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. 10 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

11 H318, H315, H400, H411, H311, H302, H412 P280, P273, P305 + P351 + P310, P301 + P312, P302 + P312, P501 Nebezepečí! Způsobuje vážné poškození očí. Dráždí kůži. Vysoce toxický pro vodní organismy. Toxický pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Toxický při styku s kůží. Zdraví škodlivý při požití. Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ ochranné brýle/obličejový štít. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. PŘI ZASAŽENÍ OČÍ: Několik minut opatrně oplachujte vodou. Okamžitě volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI POŽITÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. PŘI STYKU S KŮŽÍ: Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje: chlorid zinečnatý; EBV-VCA IgM Reagencie Obsahuje: azid sodný; EBV-VCA IgM Kalibrátor, EBV-VCA IgM Kontroly Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Výsledky stanovení IgM protilátek proti EBV-VCA se mohou pro daný vzorek lišit při použití metod od jiných výrobců, vzhledem k odlišnoti metody a specificitě reagencií. Hlášení lékaři by mělo obsahovat následující poznámku Tyto výsledky byly získány metodou IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Hodnoty naměřené na systémech od jiných výrobců se nesmí zaměňovat. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky uvnitř krabice. EBV-VCA IgM zásobník s kuličkami (L2EM12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených myší monoklonální protilátkou proti lidskému IgM. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KEM2: 1 balení EBV-VCA IgM Reagencie (L2EMA2) Opatřeno čárovým kódem. Tři reagencie: 11,5 ml pufru na bázi bílkoviny; 11,5 ml biotinylovaného VCA peptidu v pufru na bázi bílkoviny a 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované se streptavidinem v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KEM2: 1 nádobka Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. EBV-VCA IgM Kalibrátor (LEMR) Jedna ampule lyofilizovaného lidského séra s IgM reaktivním vůči EBV-VCA v pufru na bázi bílkoviny, s konzervačním prostředkem. Rekonstituujte 4,0 ml destilované nebo deionizované vody. Míchejte jemným kroužením nebo překlápěním až do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. (Není nutné předředění.) Stabilní při 2 8 C 14 dní po rozpuštění nebo 6 měsíců při 20 C rozdělené na alikvotní části. L2KEM2: 1 ampule IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 11

12 EBV-VCA IgM Kontroly (LEMC1, LEMC2) Negativní kontrola (LEMC1): Jedna ampule obsahující lyofilizované lidské sérum nereaktivní vůči EBV-VCA IgM, s konzervačním prostředkem. Pozitivní kontrola (LEMC2): Jedna ampule lyofilizovaného lidského séra s IgM reaktivním vůči EBV-VCA, s konzervačním prostředkem. Rekonstituujte 2,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchávejte jemným kroužením nebo překlápěním do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní při 2 8 C 14 dní po rozpuštění nebo 6 měsíců při 20 C rozdělené na alikvotní části. L2KEM2: 1 sada Software analyzátoru IMMULITE 2000 provede automatické ředění kontrolních vzorků a výsledky uloží do databáze QC. Zadejte kontroly jako kontroly. Aktuální rozsahy poměrů kontrolních vzorků najdete v příbalovém letáku kontroly. Před měřením kalibrátorů nebo kontrol nalepte vždy na zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodávané se soupravou) tak, aby čtečka analyzátoru mohla přečíst čárový kód. IgG/IgM Diluent vzorků (L2IGZ2) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků a kontrol analyzátorem. 55 ml koncentrované (připravené k použití) nehumánní bílkovinné/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KEM2: 1 ampule Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2KEM2: 3 štítky Materiál dodávaný zvlášť IgG/IgM Diluent vzorků (L2IGZ2) Pro automatické ředění koncentrovaných vzorků a kontrol analyzátorem. 55 ml koncentrované (připravené k použití) nehumánní bílkovinné/pufrové matrice, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2IGZ2: 1 ampule Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2IGZ2: 5 štítky L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 Testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 Uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly EBV-VCA IgM dodávané se soupravou jsou určeny k monitorování stanovení. Kontrolní vzorky se mají měřit na začátku (nebo blízko začátku) měření, které obsahuje vzorky určené ke stanovení EBV-VCA IgM, a po adjustaci. Kromě dodávaných kontrol může laboratoř používat také své vlastní kontrolní vzorky. Je možné používat také jiné kontroly v souladu se směrnicemi nebo požadavky místních, státních a/nebo federálních předpisů nebo akreditačních organizací. Doporučuje se také v pravidelných intervalech měřit známé reaktivní a nereaktivní vzorky, aby se ověřila přesnost pipetování v kroku ředění. 12 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

13 Uživatelům analyzátorů IMMULITE 2000 se doporučuje dodržovat pokyny uvedené v NCCLS dokument C24-A, Interní kontrola kvality: principy a definice, postup při kontrole kvality, zásady a definice (Internal Quality Control Testing: Principles and Definitions, for additional guidance on quality control for the basic principles and definitions in dealing with internal quality control testing). Výpočet hodnoty cut-off a poměru S/CO: Kalibrační hodnota cutoff stanovení byla určena z reprezentativních vzorků tak, aby bylo dosaženo optimální senzitivity a specificity stanovení. Hodnota cutoff je rovna průměru CPS (střední CPS) kalibrátoru (z poslední adjustace) vynásobenému Parametrem křivky 1 (Curve Parameter 1). (viz políčka Low Adjustor CPS a Curve Parameter 1 v obrazovce KITS analyzátoru IMMULITE 2000.) Výpočet poměru signál/cutoff (s/co) se provádí podle následujícího vzorce: Poměr S/CO= CPS vzorku nebo kontroly Střední CPS kalibrátoru P1 Výpočet a vydání kvalitativního výsledku (reaktivní/nereaktivní/neurčitý) a poměru s/co provádí analyzátor IMMULITE 2000 automaticky. Výsledek vzorku je označen jako Neurčitý (Indeterminate), jestliže CPS vzorku jsou v intervalu 10% hodnoty cutoff. Výsledek vzorku je označen jako Reaktivní (Reactive), jsou-li CPS vzorku nad horním limitem rozsahu pro neurčitý výsledek a Nereaktivní (Nonreactive) pokud jsou pod dolním limitem tohoto rozsahu. Vyhodnocení výsledků Cutoff stanovení IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM byl určen na základě měření reaktivních a nereaktivnívh vzorků pacientů a s použitím analýzy ROC tak, aby senzitivita a specificita byly maximálně vyvážené. Výsledek "Reaktivní" (poměr 1,1) znamená, že protilátky EBV-VCA IgM byly ve vzorku detekovány. Výsledek "Nereaktivní" (poměr 0,9) znamená, že protilátky EBV-VCA IgM nebyly ve vzorku detekovány. Kterýkoli výsledek označený jako Neurčitý (poměr mezi 0,9 a 1,1) se musí znovu změřit. Vzorky, které opakovaně vyjdou jako Neurčitý, se musí testovat alternativní metodou nebo se doporučuje, pokud je to možné, za přiměřenou dobu (např. jeden týden) odebrat další vzorek. Hodnota naměřených CPS nad hodnotou cutoff nepředstavuje celkové množství detekovaných protilátek. Hlášení lékaři by mělo obsahovat následující poznámku Tyto výsledky byly získány metodou IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Hodnoty naměřené na systémech od jiných výrobců se nesmí zaměňovat. Nedoporučuje se vydávat výsledky, pokud pozitivní nebo negativní kontrola vyjde mimo rozsah uvedený v příbalovém letáku kontroly EBV-VCA IgM. Klinická interpretace vyžaduje znalost zdravotní historie a klinického stavu pacienta (znaky a symptomy) i ostatních diagnostických výsledků včetně přítomnosti nebo nepřítomnosti protilátek proti VCA IgG a EBNA IgG stanovených metodami IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG a IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG. Ačkoli sérologická diagnostika EBV vyžaduje měření víc než jednoho analytu, neexistuje univerzální shoda ohledně sérologickho profilu. Nereaktivní výsledky nevylučují diagnózu infekční mononukleózy (IM). Vzorek mohl být odebrán předtím, než se detekovatelné protilátky vytvořily. Nereaktivní výsledky by v případě podezření na infekci IM měly vést k opakování odběru a měření za 4-5 týdnů. Sérologický profil používaný k diagnostické interpretaci je uveden v tabulce. 13,14 Kritéria interpretace: Interpretace VCA IgG EBNA IgG VCA IgM Pozdní infekce + + Současná / akutní +/ + Bez infekce IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 13

14 Očekávané hodnoty Protilátky proti EBV byly detekovány u všech zkoumaných skupin populace. Výskyt se ovšem u různých skupin populace může lišit (např. podle věku, rasy, zeměpisné polohy, socioekonomických podmínek, atd.). 7 U přibližně 50% malých dětí (<5 let) ve Spojených státech a Velké Británii byla zjištěna EBV sérokonverze. K další sérokonverzi dochází v období adolescence a rané dospělosti, přičemž více než 90% sérokonverze bylo zjištěno ve 4. dekádě života. 8, 9,10 K výskytu infekční mononukleózy dochází 30krát častěji u bělochů než u černochů. 9 Příslušníci národů v rozvojových zemích a tropických oblastech, stejně jako nižší socioekonomické vrstvy ve vyspělých zemích vykazují EBV v dětství, zatímco k výskytu EBV u ekonomicky silnějších osob ve vyspělých zemích dochází až v období adolescence a rané dospělosti. 11 Po infekci EBV přetrvávají protilátky VCA IgG po celý život. 12 Omezení Výsledky testu musí být posuzovány spolu s klinickou historií pacienta, symptomy a ostatními laboratorními nálezy. Přítomnost IgM protilátek v jednotlivém vzorku neumožňuje rozlišení mezi aktivní nebo pozdní infekcí. Diagnóza by se neměla stanovovat pouze na základě výsledku IgM protilátek proti VCA. Výsledky testu by měly být vyhodnoceny spolu s výsledky IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG a IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG. Je třeba být opatrný při vyhodnocování profilu s použitím souprav od různých výrobců nebo s použitím jiných metod. Vzorky obsahující antinukleární protilátky nebo jiné protilátky proti buňkám mohou vykazovat falešně pozitivní výsledky. Tato metoda není určena pro stanovení vzorků od novorozenců, pupečníkové krve nebo od pacientů před transplantací. Výsledky vzorků od pacientů s HIV, pacientů podstupujících imunosupresivní léčbu nebo pacientů s jinými poruchami vedoucími k imunosupresi je nutné interpretovat s obezřetností. Stanovení IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM nebylo vyvinuto pro jiné matrice než je lidské sérum nebo plazma. Stanovení IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA není určeno k použití místo izolace a/nebo identifikace viru. Stanovení IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM ELISA nejsou určena k použití místo izolace a/nebo identifikace viru. Heterofilní protilátky v lidském séru/ plazmy můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Parametry metody najdete v odstavci Tabulky a grafy (Tables and Graphs). Výsledky se uvádějí poměrem signál/cutoff. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Přesnost: Vzorky byly měřeny v duplikátu po 20 dní, dvě měření denně, celkem 40 měření a 80 replikátů (viz tabulka Precision.) Zkřížená reaktivita: Byla provedena studie na 76 vzorcích, zjišťující, zda na měření IgM protilátek proti EBV-VCA nemají vliv blízce příbuzné mikroorganismy. Metodou IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM a komerčně dostupným stanovením ImmunoWell EBV-VCA IgM byla měřena séra obsahující protilátky proti mikroorganismům uvedeným v tabulce. 14 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

15 Protilátka Celkem n IMMULITE 2000 reaktivní/ testováno ImmunoWell reaktivní/ testováno ANA 10 0/10 1/10 Anti-HIV 10 2/10 0/10 Revmatoidní faktor 10 0/10 0/10 Anti-VZV 10 0/10 2/10 Anti-HAV 4 1/4 0/4 HBsAg 2 0/2 0/2 HSV IgM 8 1/8 1/8 Toxoplazma 3/9 0/9 9 IgM Rubela IgM 3 0/3 0/3 CMV IgM 10 0/10 1/10 Šedesát devět ze 76 vzorků vykázalo nereaktivní výsledky. Sedm reaktivních vzorků bylo dále testováno komerčně dostupným stanovením EBV-VCA blot, které potvrdilo šest pozitivních výsledků (2 HIV, 1 HSV IgM, 1 Hep A a 2 Toxoplazma) a vydalo 1 negativní výsledek (1 Toxoplazma). Alternativní typ vzorku: Pro vyhodnocení vlivu alternativních typů vzorků byla odebrána krev od 52 dobrovolníků do obyčejných, heparinových sodný, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer plastových zkumavek a analyzována stanovením IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM. Výsledky jsou vyjádřeny poměrem signál/cutoff. Podle lineární regrese: (NaHeparin) = 1,08 (Sérum) 0,01 r = 0,98 (EDTA) = 1,09 (Sérum) 0,01 r = 0,98 (SST) = 1,02 (Sérum) + 0,00 r = 0,97 Střední hodnoty: 0,31 (Sérum) 0,33 (NaHeparin) 0,33 (EDTA) 0,32 (SST) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 269 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s komerčně dostupným stanovením ImmunoWell EBV-VCA IgM kit na 135 vzorcích. ImmunoWell EBV-VCA IgM IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Reakt Neurč. Nereakt Pozitivní Relativní senzitivita Relativní specificita Neurčitý ,4% 96,4% Negativní Celková shoda: 91,1% Na základě sérologických profilů uvedených v odstavci Vyhodnocení výsledků 13,14 byly výsledky stanovení IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM porovnány s referenčními metodami ImmunoWell (VCA IgG, EBNA-IgG a VCA IgM). IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM 95% Interval Stav Procent shody spolehlivosti Pozdní infekce N/A N/A Akutní infekce 100% (19/19) 82,4% 100% Bez infekce N/A N/A Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 15

16 Ελληνικά IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποιοτική ανίχνευση αντισωμάτων IgM στο ιικό καψιδικό αντιγόνο του ιού Epstein- Barr σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα (EDTA και ηπαρινισμένο). Η ανάλυση αυτή μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ως βοήθημα στη διάγνωση νόσων που συσχετίζονται με τον EBV όταν χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με τις ανοσοαναλύσεις IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG και IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG. Αριθμός Καταλόγου: L2KEM2 (200 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: ECM Χρώμα: Καφέ Περίληψη και επεξήγηση Ο ιός Epstein-Barr (EBV) είναι μέλος της οικογένειας των ερπητοϊών και ένας παγκόσμιος μολυσματικός παράγοντας ο οποίος αποτελεί τη βασική αιτία της λοιμώδους μονοπυρήνωσης (IM). 1 Η διάγνωση της λοιμώδους μονοπυρήνωσης (IM) βασίζεται συχνά στην παρουσία χαρακτηριστικών συμπτωμάτων όπως πονόλαιμος, λεμ αδενοπάθεια και πυρετός, σε συνδυασμό με μια θετική εξέταση για ετερόφιλα αντισώματα και μια χαρακτηριστική αιματολογική εικόνα λεμφοκυττάρωσης (>50%) με το 10% ή περισσότερο των λεμφοκυττάρων να αναγνωρίζονται ως άτυπα. 2 Ο EBV γενικά μεταδίδεται μέσω στοματικής μεταβίβασης του μολυσμένου σάλιου. Μετά από πολλαπλασιασμό σε επιθηλιακά κύτταρα του στοματοφάρυγγα, ο ιός μολύνει επιλεκτικά τα B λεμφοκύτταρα στο αίμα της περιφερειακής κυκλοφορίας και άλλους δικτυοενδοθηλιακούς ιστούς. Ο EBV έχει συσχετιστεί σαφώς με διάφορους ανθρώπινους όγκους, μεταξύ των οποίων περιλαμβάνονται και το αφρικανικό λέμφωμα Burkitt, το ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα, η νόσος Hodgkin και λεμφώματα β-κυττάρων και μυοσαρκώματα σε λήπτες μεταμοσχευμένων οργάνων και ασθενείς με διαταραχές ανοσοανεπάρκειας. 3 Οι ορολογικές μέθοδοι υπήρξαν ένα σημαντικό βοήθημα στη διάγνωση των μολύνσεων από τον EBV. Αρκετά διαφορετικά συστήματα αντιγόνων που συσχετίζονται με τον EBV και τα αντίστοιχα αντισώματα έχουν χαρακτηριστεί και αναπτυχθεί σε σημαντικά διαγνωστικά εργαλεία. Ένας από τους καλύτερους δείκτες ενεργού λοίμωξης από τον EBV είναι ένα αντίσωμα έναντι των ιικών καψιδικών αντιγόνων, καθώς και τις δομικές πρωτεΐνες που είναι απαραίτητες για την αναπαραγωγή του ιού. 4 Η οξεία φάση της λοιμώδους μονοπυρήνωσης χαρακτηρίζεται από τις γρήγορες αποκρίσεις των αντισωμάτων IgM και IgG στο ιικό καψιδικό αντιγόνο (VCA). Η απόκριση της IgM στο VCA είναι μεταβατική και διαρκεί από 1 έως 3 μήνες περίπου. Η απόκριση της IgG σε αυτό το αντιγόνο συνήθως κορυφώνεται κατά τη διάρκεια της οξείας φάσης της νόσου, μειώνεται ελαφρά στις επόμενες εβδομάδες έως μήνες και κατόπιν διατηρείται σε σχετικά σταθερά επίπεδα ισόβια. 5 Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM είναι μία ξηρής φάσης χημειοφωταυγής ανοσοανάλυση σύλληψης IgM. Η στερεή φάση (σφαιρίδιο) είναι επικαλυμμένη με μονοκλωνικό αντι-ανθρώπινο αντίσωμα IgM ποντικού. Η υγρή φάση συνίσταται από τρία αντιδραστήρια: 1) πρωτεϊνικό ρυθμιστικό διάλυμα, 2) βιοτινυλιωμένο πεπτίδιο VCA σε ρυθμιστικό διάλυμα και 3) αλκαλική φωσφατάση (βόειο έντερο) συζευγμένη με στρεπταβιδίνη σε ρυθμιστικό διάλυμα. Στον πρώτο κύκλο, το προαραιωμένο δείγμα ασθενούς (1 προς 20) και το πρωτεϊνικό ρυθμιστικό διάλυμα επωάζονται μαζί με το επικαλυμμένο σφαιρίδιο για 30 λεπτά. Κατά την διάρκεια αυτού του χρόνου, τα αντισώματα IgM στο EBV-VCA στο δείγμα ασθενούς συνδέονται με το μονοκλωνικό αντιανθρώπινο αντίσωμα IgM ποντικού στο σφαιρίδιο. Το μη συνδεδεμένο δείγμα στη συνέχεια απομακρύνεται με φυγοκεντρική έκπλυση. 16 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

17 Στον δεύτερο κύκλο, αντιδραστήρια που περιέχουν βιοτινυλιωμένο πεπτίδιο VCA και η συζευγμένη με ένζυμο στρεπταβιδίνη προστίθενται στο αρχικό σωληνάριο αντίδρασης για επιπλέον επώαση 30 λεπτών. Στη διάρκεια αυτού του χρόνου, το ακινητοποιημένο αντι-ανθρώπινο IgM συνδέεται με το πεπτίδιο VCA ή/και με το σύμπλοκο πεπτιδίου VCA και ενζυμικού συζεύγματος. Το μη συνδεδεμένο σύμπλεγμα απομακρύνεται με φυγοκεντρική έκπλυση. Τελικά, το χημειοφωταυγές υπόστρωμα προστίθεται στο σωληνάριο της αντίδρασης και το σήμα παράγεται σε αναλογία με το δεσμευμένο ένζυμο. Κύκλοι επώασης: 2 30 λεπτά Χρόνος για το πρώτο αποτέλεσμα: 65 λεπτά Συλλογή δειγμάτων Τα αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Απαιτείται η φυγοκέντρηση σε χαμηλές ταχύτητες των θολών δειγμάτων ή δειγμάτων που περιέχουν σωματίδια. Η φυγοκέντρηση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη παρουσία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε πριν την φυγοκέντρηση των δειγμάτων ότι το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται εκτεταμένο χρόνο πήξης. Τα σωληνάρια συλλογής αίματος από διαφορετικούς κατασκευαστές μπορεί να δώσουν διαφορετικές τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, μεταξύ των οποίων περιλαμβάνεται η γέλη ή οι φυσικοί φραγμοί, οι ενεργοποιητές πήξης και/ή τα αντιπηκτικά. Η IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευτείτε την ενότητα για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορού ή πλάσματος (EDTA ή ηπαρινισμένο). Μετά την αυτόματη προαραίωση, 50 µl αραιωμένου δείγματος χρησιμοποιούνται για την ανοσοανάλυση. Αποθήκευση: 3 ημέρες στους 2 8 C ή 6 μήνες στους 20 C. 6 Αυτόματος συντελεστής προαραίωσης: 20 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ! ΥΝΗΤΙΚΟΣ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟΣ ΚΙΝ ΥΝΟΣ Περιέχει υλικό ανθρώπινης προέλευσης. Κάθε δωρεά ανθρώπινου αίματος ή συστατικού αίματος ελέγχθηκε με μεθόδους εγκεκριμένες από τον FDA για την ύπαρξη αντισωμάτων ενάντια στους ιούς της ανοσοανεπάρκειας του ανθρώπου τύπου 1 (HIV-1) και τύπου 2 (HIV-2), καθώς και για επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β (HBsAg) και για αντισώματα ενάντια στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Τα αποτελέσματα των εξετάσεων ήταν αρνητικά (όχι επανειλημμένα αντιδραστικά). Επειδή καμία εξέταση δεν παρέχει πλήρη διασφάλιση για την απουσία αυτών ή άλλων μολυσματικών παραγόντων, ο χειρισμός αυτού του υλικού θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις ορθές εργαστηριακές πρακτικές και γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 17

18 H318, H315, H400, H411, H311, H302, H412 P280, P273, P305 + P351 + P310, P301 + P312, P302 + P312, P501 Κίνδυνος! Προκαλεί σοβαρή οφθαλμική βλάβη. Προκαλεί ερεθισμό του δέρματος. Πολύ τοξικό για τους υδρόβιους οργανισμούς. Τοξικό για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Τοξικό σε επαφή με το δέρμα. Επιβλαβές σε περίπτωση κατάποσης. Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/πρόσωπο. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΑ ΜΑΤΙΑ: Ξεπλύνετε προσεκτικά με νερό για αρκετά λεπτά. Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΕΡΜΑ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: χλωριούχος ψευδάργυρος, οχείο αντιδραστηρίου EBV-VCA IgM Περιέχει: αζίδιο νατρίου, Ρυθμιστής EBV-VCA IgM, Οροί ελέγχου EBV-VCA IgM Αντιδραστήρια: ιατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου, σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl, έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Υπόστρωμα χημειοφωταύγειας: Αποφύγετε την μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (Βλέπε ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιείτε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Τα αποτελέσματα της anti-ebv-vca IgM εξέτασης που υπολογίζονται για ένα συγκεκριμένο δείγμα με αναλύσεις από διαφορετικούς κατασκευαστές μπορεί να μη δίνουν το ίδιο αποτέλεσμα εξαιτίας διαφορών στις μεθόδους της ανάλυσης και στην ειδικότητα των αντιδραστηρίων. Για τον λόγο αυτό, τα αποτελέσματα που εκδίδονται στους κλινικούς γιατρούς από το εργαστήριο θα πρέπει να αναφέρουν ότι: Τα παρακάτω αποτελέσματα ελήφθηκαν με την εξέταση IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Aποτελέσματα που προέκυψαν από διαφορετικές μεθόδους άλλων κατασκευαστών δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται εναλλακτικά μεταξύ τους. Υλικά που διατίθενται Τα υλικά είναι μια ολοκληρωμένη ενότητα. Οι ετικέτες στο εσωτερικό κουτί είναι απαραίτητες για την ανάλυση. EBV-VCA IgM Συσκευασία σφαιριδίων (L2EM12) Με γραμμωτό κώδικα. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με μονοκλωνικό αντι-ανθρώπινο αντίσωμα IgM ποντικού. Σταθερή στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KEM2: 1 συσκευασία οχείο αντιδραστηρίου EBV-VCA IgM (L2EMA2) Με γραμμωτό κώδικα. Τρία αντιδραστήρια: 11,5 ml πρωτεϊνικού ρυθμιστικού διαλύματος, 11,5 ml βιοτινυλιωμένου πεπτιδίου VCA σε πρωτεϊνικό ρυμιστικό διάλυμα και 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συζευγμένης με στρεπταβιδίνη, σε πρωτεϊνικό ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξης. L2KEM2: 1 δοχείο 18 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

19 Πριν από τη χρήση, σχίστε το επάνω μέρος της ετικέτας στη γραμμή διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε τον γραμμωτό κώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου και πιέστε το συρόμενο κάλυμμα προς τα κάτω, προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστής EBV-VCA IgM (LEMR) Ένα φιαλίδιο λυοφιλοποιημένου ανθρώπινου ορού με IgM αντιδραστικό έναντι του EBV-VCA, σε πρωτεϊνικό ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Κάνετε ανασύσταση με 4,0 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ανάδευσης ή με αναστροφή έως ότου το λυοφιλοποιημένο υλικό διαλυθεί πλήρως. ( εν απαιτείται προ-αραίωση). Σταθερός στους 2 8 C για 14 μέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένος) στους 20 C. L2KEM2: 1 φιαλίδιο Οροί ελέγχου EBV-VCA IgM (LEMC1, LEMC2) Αρνητικός ορός ελέγχου (LEMC1): Ένα φιαλίδιο που περιέχει λυοφιλοποιημένο ανθρώπινο ορό μη αντιδραστικό έναντι του EBV-VCA IgM, με συντηρητικό. Θετικός ορός ελέγχου (LEMC2): Ένα φιαλίδιο που περιέχει λυοφιλοποιημένο ανθρώπινο ορό με IgM αντιδραστικό έναντι του EBV-VCA, με συντηρητικό. Κάνετε ανασύσταση με 2,0 ml απεσταγμένου ή απιονισμένου νερού. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ανάδευσης ή με αναστροφή έως ότου το λυοφιλοποιημένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Σταθερός στους 2 8 C για 14 μέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένος) στους 20 C. L2KEM2: 1 σετ Το λογισμικό IMMULITE 2000 εκτελεί αυτόματη αραίωση των δειγμάτων ελέγχου στον αναλυτή και τα αποτελέσματα καταγράφονται στη βάση δεδομένων ποιοτικού ελέγχου. Εισαγάγετε τους ελέγχους ως controls. Για το τρέχον εύρος τιμών των ελέγχων, βλ. το αντίστοιχο ένθετο. Πριν κάνετε τη ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες (παρέχονται με το κιτ) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, ώστε οι γραμμωτοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του αναλυτή. Αραιωτικό δειγμάτων IgG/IgM (L2IGZ2) Για την επί του αναλυτή αραίωση των δειγμάτων των ασθενών και των δειγμάτων ελέγχου. 55 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μήτρας μη ανθρώπινης πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένο) στους 20 C. L2KEΜ2: 1 φιαλίδιο Ετικέτες με γραμμωτό κώδικα παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετήστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα mm, έτσι ώστε οι γραμμωτοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του αναλυτή. L2KEM2: 3 ετικέτες Συστατικά του κιτ που παρέχονται ξεχωριστά Αραιωτικό δειγμάτων IgG/IgM (L2IGZ2) Για την επί του αναλυτή αραίωση των δειγμάτων των ασθενών και των δειγμάτων ελέγχου. 55 ml συμπυκνωμένης (έτοιμης για χρήση) μήτρας μη ανθρώπινης πρωτεΐνης/ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένο) στους 20 C. L2IGZ2: 1 φιαλίδιο Ετικέτες με γραμμωτό κώδικα παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετήστε μια κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα mm, έτσι ώστε οι γραμμωτοί κώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του αναλυτή. L2IGZ2: 5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ρύγχους L2KPM: Κιτ καθαρισμού του ρύγχους LRXT: Σωληνάρια αντίδρασης (αναλώσιμα) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 πώματα σωληναρίων αραίωσης του δείγματος IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 19

20 Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες. ιαδικασία ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες είγματα ποιοτικού ελέγχου: Οι οροί ελέγχου EBV-VCA IgM που παρέχονται με το κιτ θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της ανάλυσης. Οι οροί ελέγχου θα πρέπει να χρησιμοποιούνται στο ξεκίνημα (ή κοντά σε αυτό) κάθε ανάλυσης που περιέχει δείγματα ασθενών, τα οποία θα εξεταστούν για EBV-VCA IgM, καθώς επίσης όταν ξαναρυθμίζουμε την εξέταση. Εκτός από τους ορούς ελέγχου που παρέχονται, είναι δυνατό οι χρήστες να εκτελούν πρόσθετους ελέγχους για τους δικούς τους σκοπούς. Επιπλέον οροί ελέγχου μπορούν να δοκιμαστούν σε συμφωνία με οδηγίες ή απαιτήσεις τοπικών κρατικών και/ή ομοσπονδιακών κανονισμών ή οργανισμών διαπίστευσης. Συνιστάται επίσης γνωστά αντιδραστικά και μη αντιδραστικά δείγματα να εξετάζονται περιοδικά για την εξασφάλιση διανομής του σωστού όγκου στο στάδιο της αραίωσης. Συνιστάται στους χρήστες του συστήματος IMMULITE 2000 να συμβουλεύονται το έγγραφο NCCLS C24-A, Εσωτερικός Ποιοτικός Έλεγχος: Αρχές και ορισμοί, για πρόσθετες οδηγίες ποιοτικού ελέγχου σχετικά με τις βασικές αρχές και έννοιες όσον αφορά τους εσωτερικούς ποιοτικούς ελέγχους. Υπολογισμός του ορίου αποκοπής (Cut Off) και της αναλογίας S/CO: Το κύριο όριο αποκοπής (Cutoff) της ανάλυσης υπολογίστηκε από αντιπροσωπευτικά δείγματα προκειμένου να επιτευχθεί η μέγιστη δυνατή ευαισθησία και η μέγιστη δυνατή ακρίβεια για την ανάλυση. Το όριο αποκοπής (cutoff) ορίστηκε ως ίσο με τον μέσο όρο των μετρήσεων ανά δευτερόλεπτο (mean cps) του ρυθμιστή (από την πιο πρόσφατη ρύθμιση) πολλαπλασιασμένο με τη παράμετρο 1 της καμπύλης (Curve Parameter 1). (Βλ. τα πεδία Low Adjustor CPS και Curve Parameter 1 στην οθόνη πληροφοριών του IMMULITE 2000 Kit, τα οποία μπορούν να είναι προσβάσιμα από το Data Entry: Kit Entry). Ο υπολογισμός της αναλογίας σήματος/όριο αποκοπής (cutoff) (s/co) γίνεται σύμφωνα με τον παρακάτω τύπο: Αναλογία S/CO= cps δείγματος ή ορού ελέγχου Μ.Ο. cps Ρυθμιστή P1 Ο υπολογισμός και η αναφορά των ποιοτικών αποτελεσμάτων (αντιδραστικά/μη αντιδραστικά/απροσδιόριστα) και της αναλογίας s/co γίνονται αυτόματα από το IMMULITE Το αποτέλεσμα ενός δείγματος αναφέρεται ως Indeterminate (απροσδιόριστο), αν οι μετρήσεις ανά δευτερόλεπτο για το συγκεκριμένο δείγμα βρίσκονται εντός του 10% του ορίου αποκοπής (cutoff). Το αποτέλεσμα αναφέρεται ως Reactive (Αντιδραστικό), αν οι μετρήσεις για το συγκεκριμένο δείγμα βρίσκονται πάνω από το απροσδιόριστο εύρος, και ως Nonreactive (Μη αντιδραστικό), αν βρίσκονται κάτω από αυτό. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Το όριο αποκοπής (cutoff) για την ανάλυση EBV-VCA IgM του συστήματος IMMULITE 2000 προσδιορίστηκε με βάση αντιδραστικά και μη αντιδραστικά δείγματα ασθενών από μια ανάλυση ROC, με ισορροπημένο συνυπολογισμό της ευαισθησίας και της ειδικότητας. 20 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

21 Το αποτέλεσμα Reactive (Αντιδραστικό) (αναλογία 1,1) σημαίνει ότι ανιχνεύτηκαν αντισώματα EBV-VCA IgM στο δείγμα του ασθενούς. Το αποτέλεσμα Nonreactive (Μη αντιδραστικό) (αναλογία 0,9) σημαίνει ότι δεν ανιχνεύτηκαν αντισώματα EBV-VCA IgM στο δείγμα του ασθενούς. Οποιοδήποτε απροσδιόριστο αποτέλεσμα ( Indeterminate αναλογία μεταξύ 0,9 και 1,1) θα πρέπει να επανεξεταστεί. είγματα τα οποία εξακολουθούν να είναι Απροσδιόριστα θα πρέπει να εξετάζονται από μία εναλλακτική μέθοδο, ή αν είναι δυνατό ένα δεύτερο δείγμα να λαμβάνεται μέσα σε ένα λογικό χρονικό πλαίσιο (π.χ. μία εβδομάδα). Το μέγεθος των μετρούμενων αποτελεσμάτων (cps) πάνω από το όριο αποκοπής (Cutoff) δεν είναι ενδεικτικό της συνολικής ποσότητας των αντισωμάτων που ανιχνεύτηκαν. Οι αναφορές που λαμβάνει ο ιατρός από το εργαστήριο θα πρέπει να περιέχουν την εξής επισήμανση: Τα παρακάτω αποτελέσματα ελήφθησαν με IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Aποτελέσματα που προέκυψαν από διαφορετικές μεθόδους άλλων κατασκευαστών δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν εναλλακτικά μεταξύ τους. εν συνιστάται ερμηνεία των αποτελεσμάτων, εάν οι θετικοί ή αρνητικοί οροί ελέγχου βρίσκονται εκτός του εύρους που καθορίζεται στο ένθετο για τους ορούς ελέγχου EBV-VCA IgM. Η κλινική ερμηνεία απαιτεί γνώση του ιατρικού ιστορικού και της κλινικής κατάστασης του ασθενούς (ενδείξεις και συμπτώματα), καθώς και άλλα ιατρικά αποτελέσματα, συμπεριλαμβανομένης της παρουσίας ή απουσίας αντισωμάτων VCA IgG και EBNA IgG, με χρήση των ανοσοαναλύσεων IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG και IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG. Παρόλο που η οροδιάγνωση EBV απαιτεί μέτρηση από περισσότερους του ενός αναλυτές, δεν υπάρχει γενική συμφωνία για ένα ορολογικό προφίλ. Τα μη αντιδραστικά αποτελέσματα δεν αποκλείουν τη διάγνωση λοιμώδους μονοπυρήνωσης (IM). Το δείγμα μπορεί να έχει ληφθεί πριν από την εμφάνιση ανιχνεύσιμων αντισωμάτων. Τα μη αντιδραστικά αποτελέσματα, σε περιπτώσεις για τις οποίες υπάρχει υποψία πρώιμης IM, πρέπει να επανεξετάζονται μετά από 4-5 εβδομάδες. Ακολουθεί ένα ορολογικό προφίλ το οποίο χρησιμοποιείται για διαγνωστική ερμηνεία. 13,14 Κριτήρια ερμηνείας: Ερμηνεία Παρελθοντική λοίμωξη Τρέχουσα / Οξεία εν υπάρχει λοίμωξη VCA IgG EBNA IgG VCA IgM + + +/ + Αναμενόμενες τιμές Έχουν ανιχνευτεί αντισώματα στον EBV σε όλες τις πληθυσμιακές ομάδες που μελετήθηκαν. Πάντως, ο επιπολασμός μπορεί να ποικίλλει ανάλογα με την εξεταζόμενη πληθυσμιακή ομάδα (π.χ. ηλικία, φυλή, γεωγραφική τοποθεσία, κοινωνικοοικονομική κατάσταση, κλπ.). 7 Περίπου 50% του παιδικού πληθυσμού (<5 ετών) στις Ηνωμένες Πολιτείες και τη Μεγ. Βρετανία εμφανίζουν ορομετατροπή EBV. Περαιτέρω ορομετατροπή εμφανίζεται στους εφήβους και τους νέους ενήλικες, με την ορομετατροπή να προσεγγίζει ποσοστό υψηλότερο του 90% έως την 4 η δεκαετία της ανθρώπινης ζωής. 8, 9,10 Η εμφάνιση λοιμώδους μονοπυρήνωσης είναι 30 φορές υψηλότερη στους λευκούς σε σύγκριση με τους μαύρους. 10 Άνθρωποι που ζουν σε τροπικές περιοχές και αναπτυσσόμενα κράτη, καθώς και άτομα χαμηλότερης κοινωνικοοικονομικής κατάστασης σε βιομηχανοποιημένα κράτη, μολύνονται από τον EBV κατά την παιδική ηλικία, ενώ η μόλυνση με τον EBV των ευκατάστατων ατόμων στα βιομηχανοποιημένα κράτη συμβαίνει κατά την εφηβεία ή κατά τα πρώτα χρόνια της ενηλικίωσης. 11 Μετά τη μόλυνση από τον EBV, τα αντισώματα VCA IgG παραμένουν μόνιμα. 12 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 21

22 Περιορισμοί Τα αποτελέσματα της εξέτασης θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη στα πλαίσια του κλινικού ιστορικού του ασθενούς, της συμπτωματολογίας και άλλων εργαστηριακών ευρημάτων. Η παρουσία αντισωμάτων έναντι της IgΜ σε ένα μόνο δείγμα δεν επαρκεί για να γίνει διάκριση μεταξύ ενεργής και παρελθούσης μόλυνσης. εν πρέπει να πραγματοποιείται διάγνωση με βάση μόνο τα αποτελέσματα αντι-vca-igm. Τα αποτελέσματα της εξέτασης πρέπει να ερμηνεύονται σε συνδυασμό με τα αποτελέσματα των IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG και IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG. Απαιτείται προσοχή όταν ερμηνεύεται ένα προφίλ με χρήση κιτ από περισσότερους του ενός κατασκευαστές ή με διαφορετικές μεθόδους ανάλυσης. είγματα που περιέχουν αντιπυρηνικά αντισώματα ή άλλα αντικυτταρικά αντισώματα ενδέχεται να δώσουν ψευδή θετικά αποτελέσματα. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης αυτής της ανάλυσης δεν έχουν καθοριστεί για χρήση σε δείγματα νεογνών, αίματος ομφάλιου λώρου ή ασθενών πριν τη μεταμόσχευση. Τα αποτελέσματα των ασθενών με HIV, των ασθενών που υποβάλλονται σε ανοσοκατασταλτικές θεραπείες ή των ασθενών με άλλες νόσους που συνεπάγονται ανοσοκαταστολή, θα πρέπει να αξιολογούνται με προσοχή. Η απόδοση της ανάλυσης EBV-VCA IgM του συστήματος IMMULITE 2000 δεν έχει καθοριστεί για κατηγορίες δειγμάτων εκτός από ανθρώπινο ορό και πλάσμα. Οι αναλύσεις IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA δεν προορίζονται να αντικαταστήσουν την απομόνωση ή/και αναγνώριση του ιού. Οι αναλύσεις IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM ELISA δεν προορίζονται να αντικαταστήσουν την απομόνωση ή/και αναγνώριση του ιού. Τα ετερόφιλα αντισώματα στον ανθρώπινο ορό και πλάσμα μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της ανάλυσης προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. [Βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34: ] είγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορεί να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλοεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλοεπίδρασης. Πάντως, πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της εξέτασης μπορεί να εμφανιστούν. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή την ανάλυση θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλ. Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της ανάλυσης. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως αναλογία σήματος -προς- όριο αποκοπής. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού που συλλέχθηκαν σε σωληνάρια χωρίς φραγμούς γέλης ή πρόσθετα που προκαλούν θρόμβους). Ακρίβεια: Τα δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν σε διάστημα 20 ημερών, δύο αναλύσεις την ημέρα, για ένα σύνολο 40 αναλύσεων και 80 επαναλήψεων. (Βλ. Πίνακα Ακρίβεια ). ιασταυρούμενη αντίδραση: ιεξήχθη μελέτη σε 76 δείγματα με σκοπό να αξιολογηθεί εάν η μέτρηση του αντισώματος EBV-VCA IgM επηρεάζεται από συγγενικούς μικροοργανισμούς. Οροί που περιείχαν αντισώματα στους μικροοργανισμούς που αναφέρονται στον παρακάτω πίνακα εξετάστηκαν με την μέθοδο IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM και με την εμπορικά διαθέσιμη μέθοδο ImmunoWell EBV-VCA IgM. 22 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

23 Κατάσταση νόσου Σύνολο n IMMULITE 2000 αντιδραστικά/ εξετασθέντα ImmunoWell αντιδραστικά/ εξετασθέντα ANA 10 0/10 1/10 Anti-HIV 10 2/10 0/10 Ρευματοειδής παράγοντας 10 0/10 0/10 Anti-VZV 10 0/10 2/10 Anti-HAV 4 1/4 0/4 HBsAg 2 0/2 0/2 HSV IgM 8 1/8 1/8 Τοξόπλασμα IgM 9 3/9 0/9 Ερυθρά IgM 3 0/3 0/3 CMV IgM 10 0/10 1/10 Εξήντα εννέα από τα 76 δείγματα έδωσαν μη αντιδραστικά αποτελέσματα. Τα επτά αντιδραστικά δείγματα εξετάστηκαν περαιτέρω με την εμπορικά διαθέσιμη μέθοδο EBV-VCA και επιβεβαιώθηκαν 6 θετικά αποτελέσματα (2 HIV, 1 HSV IgM, 1 Hep A και 2 Τοξόπλασμα) ενώ προέκυψε και ένα αρνητικό αποτέλεσμα (1 Τοξόπλασμα). Εναλλακτικοί τύποι δείγματος: Για να αξιολογηθεί η επίδραση των εναλλακτικών τύπων δειγμάτων, συλλέχθηκε αίμα από 52 εθελοντές σε απλά, με ηπαρίνη με νάτριο, EDTA και Becton Dickinson SST Vacutainer πλαστικά σωληνάρια και αναλύθηκαν με τη διαδικασία IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως αναλογία σήματος-προς-όριο αποκοπής. Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (NaΗπαρίνη) = 1,08 (Ορός) 0,01 r = 0,98 (EDTA) = 1,09 (Ορός) 0,01 r = 0,98 (SST) = 1,02 (Ορός) + 0,00 r = 0,97 Μ.Ο.: 0,31 (Ορός) 0,33 (NaΗπαρίνη) 0,33 (EDTA) 0,32 (SST) Χολερυθρίνη: Η παρουσία συζευγμένης και μη συζευγμένης χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 269 mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως mg/dl δεν επιδρά στα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Σύγκριση της Μεθόδου: Η ανάλυση συγκρίθηκε με το εμπορικά διαθέσιμο κιτ ImmunoWell EBV-VCA IgM σε 135 δείγματα. ImmunoWell Αντιδρροσδ. Απ- EBV-VCA IgM Θετικά Αμφισβητούμε να IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Μη αντιδρ. Αρνητικά Συνολική συμφωνία: 91,1% Σχετική ευαισθησία Σχετική ειδικότητα ,4% 96,4% Σύμφωνα με τα ορολογικά προφίλ που αναφέρονται στην ενότητα Ερμηνεία αποτελεσμάτων, 13,14 τα αποτελέσματα των εξετάσεων IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM συγκρίθηκαν με τα αποτελέσματα των εξετάσεων αναφοράς ImmunoWell (VCA IgG, EBNA-IgG και VCA IgM). Κατάσταση Παρελθοντική λοίμωξη IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Εκατοστιαία συμφωνία /Υ 95% ιάστημα αξιοπιστίας /Υ Οξεία λοίμωξη 100% (19/19) 82,4% 100% εν υπάρχει λοίμωξη /Υ /Υ Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 23

24 Polski IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do jakościowego oznaczenia przeciwciał IgM specyficznych dla antygenu kapsydu wirusa Epsteina- Barr w surowicy ludzkiej lub osoczu (EDTA i heparynowym). Test może również stanowić pomoc w diagnostyce chorób wiązanych z EBV, o ile stosowany jest łącznie z immunotestami IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG i IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG. Numery katalogowe: L2KEM2 (200 testów) Kod testu: ECM Kolor: Brązowy Wprowadzenie Należący do grupy herpeswirusów wirus Epsteina-Barr (EBV) jest drobnoustrojem o zasięgu światowym stanowiącym klasyczny czynnik etiologiczny mononukleozy zakaźnej (IM). 1 Mononukleoza zakaźna rozpoznawana jest często po typowych objawach: bólu gardła, uogólnionym powiększeniu węzłów chłonnych i gorączce w połączeniu z dodatnim testem w kierunku przeciwciał heterofilnych i charakterystycznym obrazem limfocytozy (>50%) przy 10% lub ponad 10% limfocytów określanych jako atypowe. 2 Na ogół do zakażenia EBV dochodzi przez ustne przeniesienie w zainfekowanej ślinie. Po namnożeniu w nabłonkowych komórkach ustnej części gardła wirus wybiorczo atakuje limfocyty B krwi obwodowej i inne tkanki układu siateczkowo-śródbłonkowego. EBV jest blisko związany ze znaczną liczbą nowotworów ludzkich, w tym z występującym w Afryce chłoniakiem Burkitta, rakiem nosogardzieli, chorobą Hodgkina, chłoniakami typu B i mięśniakomięsakami u biorców organów z upośledzoną odpornością 3 Metody serologiczne stanowią istotną pomoc w diagnostyce zakażenia EBV. Scharakteryzowano kilka różnych grup antygenów związanych z EBV, które wraz ze specyficznymi dla nich przeciwciałami wykorzystywane są jako istotne narzędzie diagnostyczne. Jednym z najlepszych wskaźników aktywnie przebiegającej infekcji EBV jest przeciwciało specyficzne w stosunku do antygenów kapsydu wirusa oraz białek strukturalnych niezbędnych w procesie replikacji wirusa. 4 W ostrej fazie mononukleozy zakaźnej występuje gwałtowny wzrost produkcji przeciwciał klasy IgM i IgG specyficznych dla VCA (antygen kapsydu wirusa). Odpowiedź w klasie IgM jest ograniczona w czasie, trwając od około 1 do 3 miesięcy. Odpowiedź w klasie IgG w stosunku do tego antygenu osiąga zwykle maksimum w ostrym okresie choroby, następnie spada lekko w ciągu następnych kilku tygodni lub miesięcy, po czym utrzymuje się już na stosunkowo stałym poziomie do końca życia. 5 Zasada testu IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM jest immunoenzymatycznym, chemiluminescencyjnym testem fazy stałej typu IgM -capture (wyłapywanie via fragment przeciwciała IgM). Fazą stałą jest polistyrenowa kulka opłaszczona mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-igm ludzka. Faza ciekła składa się z trzech odczynników: 1) buforowanego roztworu białka, 2) biotynylowanego peptydu VCA w buforze i 3) sprzężonej ze sptreptoawidiną fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) w buforze. W pierwszym etapie rozcieńczona wstępnie (20 krotnie) próbka badana i buforowany roztwór białka inkubowane są przez 30 minut z opłaszczoną kulką. W trakcie inkubacji przeciwciała IgM dla EBV-VCA z próbki badanej wiążą mysie przeciwciało monoklonalne anty- IgM ludzka związane z kulką. Niezwiązana próbka usuwana jest następnie przez wirowanie połączone z płukaniem. 24 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

25 W drugim etapie do oryginalnej kuwety reakcyjnej dodawany jest odczynnik zawierający biotynylowany peptyd VCA i streptoawidinę sprzężoną z enzymem, inkubacja trwa 30 minut. W jej trakcie, unieruchomiona anty- IgM ludzka wiąże się równolegle z peptydem VCA oraz z peptydem VCA z koniugatu z enzymem. Niezwiązany koniugat usuwany jest przez wirowanie połączone z płukaniem. Ostatecznie do kuwety reakcyjnej dodawany jest substrat chemiluminescencyjny, a generowany sygnał jest proporcjonalny do ilości związanego enzymu. Czas inkubacji: 2 30 minut Czas do pierwszego wyniku: 65 minut Preparatyka próbek Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Próbki mętne lub z osadem należy wyklarować przez odwirowanie w wolno obrotowej wirówce. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 10 µl surowicy lub osocza (EDTA lub heparynowego). Po automatycznym rozcieńczeniu wstępnym, do oznaczenia wykorzystywane jest 50 µl rozcieńczonej próbki. Przechowywanie materiału: 3 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C. 6 Współczynnik automatycznego rozcieńczenia: 20 Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA! POTENCJALNE ZAGROŻENIE BIOLOGICZNE Zawiera materiał pochodzenia ludzkiego. Każdą porcję ludzkiej krwi lub składnika krwi pochodzącą od dawców przetestowano metodami zaaprobowanymi przez FDA na obecność przeciwciał przeciwko ludzkiemu wirusowi nabytego niedoboru odporności typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), antygenu powierzchniowego zapalenia wątroby typu B (HBsAg) i przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu C (HCV). Wyniki tych badań były ujemne (nie wykazały powtarzalnej reaktywności). Jednak żadne badanie nie gwarantuje całkowitej pewności, że te lub inne czynniki chorobotwórcze nie są obecne w materiale; z tym materiałem należy postępować zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej i stosować uniwersalne środki ostrożności PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 25

26 H318, H315, H400, H411, H311, H302, H412 P280, P273, P305 + P351 + P310, P301 + P312, P302 + P312, P501 Niebezpieczeństwo! Powoduje poważne uszkodzenie oczu. Działa drażniąco na skórę. Działa bardzo toksycznie na organizmy wodne. Działa toksycznie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Działa toksycznie w kontakcie ze skórą. Działa szkodliwie po połknięciu. Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne/ odzież ochronną/ochronę oczu/ochronę twarzy. Unikać uwolnienia do środowiska. W PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO OCZU: Ostrożnie płukać wodą przez kilka minut. Natychmiast skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub lekarzem. W PRZYPADKU POŁKNIĘCIA: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: chlorek cynku; EBV-VCA IgM Klin odczynnikowy Zawiera: azydek sodu; EBV-VCA IgM Kalibrator, EBV-VCA IgM Kontrole Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. Azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl dodawany jest jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (Patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Stężenie IgM anty-ebv-vca oznaczone w danej próbce testami od różnych producentów może być różne w zależności od metody i swoistości odczynników. Dlatego wynik badania wysyłany do lekarza kierującego powinien być zaopatrzony w komentarz: Poniższe wyniki otrzymano stosując test IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Wyniki uzyskiwane oznaczeniami różnych producentów nie powinny być stosowane wymiennie. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. EBV-VCA IgM Pojemnik z kulkami (L2EM12) Z kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-igm ludzka. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KEM2: 1 opakowanie EBV-VCA IgM Klin odczynnikowy (L2EMA2) Z kodem kreskowym. Trzy odczynniki: 11,5 ml buforowanego roztworu białka; 11,5 ml biotynylowanego peptydu VCA w buforze białkowym i 11,5 ml sprzężonej ze sptreptoawidiną fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) w buforze białkowym. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KEM2: 1 klin Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelką komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. EBV-VCA IgM Kalibrator (LEMR) Jedna fiolka liofilizowanej surowicy z IgM reaktywną w stosunku do EBV-VCA, w buforze białkowym, z konserwantem. Rekonstytuować 4,0 ml destylowanej lub dejonizowanej wody. Mieszać przez delikatne obracanie i odwracanie do 26 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

27 momentu pełnego rozpuszczenia materiału. (Wstępne rozcieńczenie zbędne). Po rekonstutucji stabilny w 2 8 C przez 14 dni lub przez 6 miesięcy (rozpipetowany) w 20 C. L2KEM2: 1 fiolka EBV-VCA IgM Kontrole (LEMC1, LEMC2) Kontrola ujemna (LEMC1): Fiolka liofilizowanej surowicy ludzkiej niereaktywnej dla EBV-VCA IgM, z konserwantem. Kontrola dodatnia (LEMC2): Fiolka liofilizowanej surowicy ludzkiej z IgM reaktywną w stosunku do EBV-VCA, z konserwantem. Rekonstytuować 2,0 ml destylowanej lub dejonizowanej wody. Mieszać przez delikatne obracanie i odwracanie do momentu pełnego rozpuszczenia materiału. Po rekonstutucji stabilne w 2 8 C przez 14 dni lub przez 6 miesięcy (rozpipetowane) w 20 C. L2KEM2: 1 zestaw Oprogramowanie IMMULITE 2000 dokonuje automatycznego rozcieńczenia próbek kontrolnych w aparacie, wyniki przesyła do bazy systemu kontroli jakości (QC). Kontrole wprowadzać jako kontrole. Aktualne współczynniki dla kontroli zawarte są Ulotkach kontroli. Z zestawem dostarczane są nalepki z kodem kreskowym dla kalibratora i kontroli. Przed użyciem umocować odpowiednie nalepki na probówkach testowych by umożliwić ich rozpoznanie przez czytnik kodów kreskowych aparatu. IgG/IgM rozcieńczalnik próbek (L2IGZ2) Do automatycznego rozcieńczania wysokich próbek i kontroli. 55 ml koncentrowanej (gotowej do użytku) matrycy buforowanego białka zwierzęcego z konserwantem. Po otwarciu stabilny 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2KEM2: 1 fiolka Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę umieścić na probówce ( mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2KEM2: 3 nalepki Materiały dostarczane oddzielnie IgG/IgM rozcieńczalnik próbek (L2IGZ2) Do automatycznego rozcieńczania wysokich próbek i kontroli. 55 ml koncentrowanej (gotowej do użytku) matrycy buforowanego białka zwierzęcego z konserwantem. Po otwarciu stabilny 30 dni w 2 8 C lub 6 miesięcy w 20 C (rozpipetować). L2IGZ2: 1 fiolka Wraz z rozcieńczalnikiem dostarczane są nalepki z kodami kreskowymi. Nalepkę umieścić na probówce ( mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2IGZ2: 5 nalepki L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący igłę pipetora LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki. Procedura oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie Próbki kontrolne: Kontrola(e) EBV-VCA IgM dostarczone w zestawie powinny być stosowane jako materiał kontroli jakości do oceny poprawności wykonania oznaczenia. Kontrole powinny być oznaczane na początku (lub w pobliżu początku) każdej serii próbek badanych w kierunku EBV-VCA IgM, a także po rekalibracji. IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 27

28 Poza kontrolami dostarczonymi użytkownik może stosować inny materiał kontrolny zgodnie z ustalonymi przez siebie wymogami. Kontrole dodatkowe mogą być oznaczane zgodnie z zaleceniami lub wymogami miejscowymi lub instytucji akredytujących. Zaleca się również okresowe oznaczanie próbek określonych jako reaktywne lub niereaktywne dla sprawdzenia dokładności pipetowania w procesie rozcieńczania. Użytkownikom systemu IMMULITE 2000 doradza się zapoznanie z opracowaniem sygnowanym jako C24-A autorstwa NCCLS - Wewnętrzne Badania Kontroli Jakości: Zasady i definicje, dla uzyskania orientacji o podstawowych zasadach i pojęciach postępowania w ramach wewnętrznego systemu badań kontrolnych. Obliczenia wartości granicznej i stosunku S/CO: Wzorcowa wartość graniczna dla testu została opracowana na podstawie zbioru próbek o liczebności pozwalającej na uzyskanie optymalnej czułości i specyficzności testu. Wartość graniczna testu została ustalona jako iloczyn średniej ilości zliczeń na sekundę (cps) dla kalibratora (w ostatniej kalibracji) i Parametru P1. Obie wartości można znaleźć w polu IMMULITE 2000 Okno informacyjne o zestawach, dostępnym via Zestawy: jako CPS niskiego kalibratora i Parametr 1. Obliczanie stosunku S/CO [tj. stosunku natężenia sygnału do wartości granicznej testu (CO)] dokonywane jest wg wzoru: Stosunek S/CO = cps próbki lub kontroli średnia cps kalibratora P1 Obliczenia i raportowanie wyników jakościowych (reaktywna / niereaktywna / nieokreślona i stosunku s/co wykonywane są automatycznie przez IMMULITE Wynik oznaczenia zostaje uznany za Nieokreślony, gdy zliczenia próbki plasują się w zakresie 10% wartości granicznej. Wynik Reaktywna oznacza, że ilość zliczeń (cps) w próbce jest wyższa niż wartość graniczna, wynik Niereaktywna, że jest niższa niż wartość graniczna. Interpretacja wyników Wartość graniczna testu IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM została określona w zbiorze próbek reaktywnych i niereaktywnych za pomocą analizy ROC z uwzględnieniem równowagi pomiędzy czułością i specyficznością. Wynik Reaktywna (stosunek 1,1) wskazuje, że przeciwciała EBV-VCA IgM zostały stwierdzone w próbce badanej. Wynik Niereaktywna (stosunek 0,9) wskazuje, że przeciwciała EBV-VCA IgM nie zostały stwierdzone w próbce badanej. Każdy wynik Nieokreślony (stosunek pomiędzy 0,9 i < 1,1) pociąga konieczność ponownego oznaczenia próbki. Powtórny wynik Nieokreślony kwalifikuje próbkę do oznaczenia alternatywną metodą lub stanowi wskazanie do pobrania kolejnej próbki, po możliwie najdłuższym, racjonalnym, odstępie czasu (na przykład po tygodniu). Wartość (ilość cps) o jaką uzyskany wynik przekracza wartość graniczną testu nie jest miarą całkowitej ilości wykrytych przeciwciał. Wynik badania wysyłany do lekarza kierującego powinien być zaopatrzony w komentarz: Poniższe wyniki otrzymano stosując test IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA. Wyniki uzyskiwane oznaczeniami różnych producentów nie powinny być stosowane wymiennie. Nie należy interpretować wyniku oznaczenia próbki badanej w przypadku, gdy wartości kontroli dodatniej i ujemnej plasują się poza zakresami podanymi w Ulotce dla kontroli EBV-VCA IgM. Kliniczna interpretacja wyników wymaga znajomości historii choroby, stanu klinicznego (objawów przedmiotowych i podmiotowych) oraz wyników innych badań diagnostycznych dotyczących obecności lub braku przeciwciał VCA IgG i EBNA IgG, uzyskanych przy zastosowaniu testów IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG i IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG. Mimo, że serodiagnostyka EBV wymaga oznaczania więcej niż jednego analitu, to nie ustalono powszechnie akceptowanego profilu serologicznego dla EBV. Wyniki niereaktywne nie wykluczają rozpoznania zakaźnej mononukleozy (IM) gdyż próbka mogła być pobrana przed wytworzeniem 28 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

29 wykrywalnych ilości przeciwciał. Badani z wynikami niereaktywnymi przy podejrzeniu wczesnego zakażenia IM powinni być poddani powtórnemu badaniu po 4-5 tygodniach. Profil serologiczny pomocny w interpretacji rozpoznania zamieszczono poniżej. 13,14 Kryteria interpretacji: Interpretacja Infekcja w przeszłości VCA IgG EBNA IgG VCA IgM + + Świeża / Ostra +/ + Brak infekcji Oczekiwane wartości Przeciwciała dla EBV stwierdzono we wszystkich badanych populacjach, jednakże prewalencja w porównywanych grupa była różna (w zależności od wieku, rasy, położenie geograficznego, pozycji społecznej itd.). 7 W USA i w Wielkiej Brytanii serokonwersję dla EBV stwierdzono u około 50% dzieci młodszych (<5 lat). Wzrost serokonwersji następuje w okresie dorastania i wczesnej dorosłości, przekraczając 90% przypadków około czwartej dekady życia. 8, 9,10 Częstość mononukleozy zakaźnej u białych jest 30 krotnie większa niż u czarnych. 10 W tropikach i w krajach rozwijających się, a także w przypadkach osób o niskiej pozycji społecznej w krajach rozwiniętych, do zakażenia EBV dochodzi w dzieciństwie, natomiast osoby z warstw ekonomicznie uprzywilejowanych w krajach rozwiniętych ulegają infekcji EBV dopiero w okresie dojrzewania lub wczesnej dojrzałości. 11 Po zakażeniu EBV, przeciwciała IgG dla VCA utrzymują się do końca życia. 12 Ograniczenia Wyniki testu muszą być rozpatrywane w kontekście historii choroby i symptomologii łącznie z wynikami innych badań laboratoryjnych. Stwierdzenie obecności przeciwciał IgM w pojedynczej próbce nie pozwala na rozróżnienie zakażenia czynnego od przebytego w przeszłości. Rozpoznania nie dależy opierać wyłącznie na wyniku oznaczenia IgM anty-vca. Wyniki powinny być interpretowane łącznie z wynikami testów IMMULITE 2000 EBV-EBNA IgG i IMMULITE 2000 EBV-VCA IgG. Należy zachować ostrożność przy interpretacji wyników profilu serologicznego uzyskanego testami tego samego rodzaju, lecz pochodzących od różnych producentów lub wyników uzyskanych różnymi metodami. W próbkach zawierających przeciwciała przeciwjądrowe lub inne przeciwciała przeciwkomórkowe wyniki mogą być fałszywie dodatnie. Charakterystyka zestawu nie predestynuje go do stosowania w próbkach od noworodków, w krwi pępowinowej i próbkach od osób przygotowywanych do transplantacji. Z ostrożnością należy interpretować wyniki uzyskane u chorych zakażonych HIV, osób poddanych immunosupresji i z zaburzeniami prowadzącymi do obniżenia odporności. Rozwiązania zastosowane w teście IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM nie pozwalają na jego stosowanie w materiale innym niż ludzkie surowica i osocze. Test IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM EIA nie jest uważany za alternatywę dla izolacji lub identyfikacji wirusa. Test IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM ELISA nie jest uważany za alternatywę dla izolacji lub identyfikacji wirusa. Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy/osocza ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988: 34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 29

30 taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i na wykresach. Wyniki wyrażono w postaci stosunku natężenia sygnału do wartości granicznej testu. (O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą próbek surowicy pobranych bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie.) Precyzja: Próbki oznaczano przez okres 20 dni w duplikatach, dwa razy dziennie, co dało w sumie 40 serii i 80 powtórzeń. (patrz: tabela Precyzja). Reaktywność krzyżowa: W 76 próbkach przeprowadzono badania mające na celu wykazanie wpływu blisko spokrewnionych mikroorganizmów na oznaczenia przeciwciał IgM EBV-VCA. Testem IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM i dostępnym na rynku testem ImmunoWell EBV-VCA IgM badano surowice zawierające przeciwciała specyficzne dla mikroorganizmów i elementów wyszczególnionych w tabeli poniżej. Czynnik Ilość n IMMULITE 2000 Reakt./ badane ImmunoWell Reakt./badane ANA 10 0/10 1/10 Anty-HIV 10 2/10 0/10 Czynnik reumatoidalny 10 0/10 0/10 Anty-VZV 10 0/10 2/10 Anty-HAV 4 1/4 0/4 HBsAg 2 0/2 0/2 HSV IgM 8 1/8 1/8 Toxoplasma IgM 9 3/9 0/9 Różyczka IgM 3 0/3 0/3 CMV IgM 10 0/10 1/10 W sześćdziesięciu dziewięciu z 76 próbek uzyskano wyniki niereaktywne. Siedem próbek reaktywnych weryfikowano dostępnym na rynku testem EBV-VCA blot potwierdzając 6 wyników dodatnich (2 HIV, 1 HSV IgM, 1 Hep A i 2 Toxoplasma) i uzyskując jeden wynik ujemny (1 Toxoplasma). Wpływ materiału na oznaczenie: W celu oznaczenia rodzaju próbki na oznaczenie krew od 52 ochotników pobierano do plastikowych probówek próżniowych BD: zwykłych, z heparyną sodową, EDTA i SST i oznaczano testem IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM. Wyniki wyrażano jako stosunek sygnału do wartości granicznej. Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (HeparynaNa) = 1,08 (Surowica) 0,01 r = 0,98 (EDTA) = 1,09 (Surowica) 0,01 r = 0,98 (SST) = 1,02 (Surowica) + 0,00 r = 0,97 Średnie: 0,31 (Surowica) 0,33 (HeparynaNa) 0,33 (EDTA) 0,32 (SST) Bilirubina: Obecność bilirubiny wolnej i związanej w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Obecność hemoglobiny w ilości do 269 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do mg/dl nie ma znaczącego wpływu na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Porównanie metod: Test porównywano z dostępnym na rynku zestawem ImmunoWell EBV-VCA IgM w grupie 135 próbek. ImmunoWell EBV-VCA IgM IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Reakt Nieokr. Niereakt Dodatni Względna czułość Względna specyficzn. Dwuznaczny ,4% 96,4% Ujemny Zgodność całkowita: 91,1% 30 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )

31 Stosując profil serologiczny opisany na końcu rozdziału Interpretacja wyników 13,14 wyniki IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM porównano z wynikami uzyskanymi w referencyjnych testach ImmunoWell (VCA IgG, EBNA-IgG i VCA IgM). Okoliczności Infekcja w przeszłości IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM Procent zgodności 95% zakres ufności N/A N/A Ostra infekcja 100% (19/19) 82.4% 100% Brak infekcji N/A N/A Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2KEM 4 {7} Changes in this Edition: cc#eu22516: 1) Under Warnings and Precautions, added biohazard symbol and potential biohazard statement, caution statement, required GHS pictograms/signal words/hazard and precautionary codes and statements, offending chemicals and sources. 2) Under References, added citations from the potential biohazard statement. 3) Changed Origin: UK to Made in: UK. 4) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 5) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, ) 31

32 Symbol Definition En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! υνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie Symbol Definition En: Contains sufficient for (n) tests Cz: Dostatečné množství pro (n) testů El: Περιεχόμενο επαρκές για (n) εξετάσεις Pl: Zawartość wystarczająca na (n) testów En: Date format (year-month) Cz: Formát data (rok-měsíc) El: Μορφή ημερομηνίας (έτος-μήνας) Pl: Zapis daty (rok-miesiąc) En: Use by Cz: Spotřebujte do El: Ημερομηνία λήξης Pl: Wykorzystać do En: Health Hazard Cz: Zdravotní riziko El: Κίνδυνος για την υγεία Pl: Zagrożenie dla zdrowia En: Exclamation Mark Cz: Vykřičník El: Θαυμαστικό Pl: Wykrzyknik En: Corrosion Cz: Koroze El: ιάβρωση Pl: Działanie żrące En: Skull and Crossbones Cz: Lebka se zkříženými hnáty El: Νεκροκεφαλή με διασταυρούμενα οστά Pl: Czaszka i skrzyżowane piszczele En: Environment Cz: Prostředí El: Περιβάλλον Pl: Środowisko En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: ιατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym BEAD PACK En: Bead Pack Cz: Zásobník s kuličkami El: Συσκευασία σφαιριδίων Pl: Pojemnik z kulkami LOT En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii TEST UNIT En: Test Unit Cz: Testovací Jednotky El: Μονάδες ανάλυσης Pl: Jednostki testowe 32 IMMULITE 2000 EBV-VCA IgM (PIEL2KEM-4 {7}, )