Anti-HBs. For the Quantitative Measurement of Antibodies to Hepatitis B Surface Antigen in Human Serum. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 Anti-HBs For the Quantitative Measurement of Antibodies to Hepatitis B Surface Antigen in Human Serum For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 Anti-HBs English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of antibodies against hepatitis B surface antigen (Anti-HBs) in human serum or plasma (heparinized or EDTA), as an aid in the determination of immune status to the hepatitis B virus. Catalog Number: L2KAH2 (200 tests), L2KAH6 (600 tests) Test Code: ahb Color: Dark Pink Summary and Explanation Hepatitis B virus (HBV) is the sole human pathogen in the family of hepatitisassociated DNA viruses, and is found world-wide. Distribution of HBV infection will vary among geographical areas and population groups. Transmission of the virus is due to parenteral contact, through the exchange of blood or blood products, sexual contact, and perinatal spread from mother to newborn. 1,2 Clinical manifestations range from mild asymptomatic infections to severe fulminant hepatitis. 1,2,3 Over 90% of infected adults will have an acute selflimiting infection, 1 with jaundice and abnormal liver function. Recovery occurs without any chronic sequelae. 1,2 Chronic liver disease, a condition in which infection persists for more than six months, a known sequela of a hepatitis B infection, is usually progressive. 1,2 The risk of developing the chronic carrier state is more likely to follow infection acquired in childhood than as an adult. 4,5 In chronic HBV carriers, there is no evidence of continued hepatic damage, 1,2 however, the infection persists and the carrier maintains the ability to transmit the virus. 2 Availability of recombinant HBV vaccines, and the recommendation of universal immunization for infants and other highrisk persons has aided in the prevention of HBV infections. In addition, treatment with alpha-interferon to relieve symptoms is available. Results have shown positive response to treatment in 40 50% of selected individuals with chronic active hepatitis B. 4,5 Classification of a hepatitis B infection requires the identification of several serological markers expressed during three phases (incubation, acute and convalescent) of the infection. The first marker to appear during the incubation phase is HBsAg, and indicates an ongoing infection with HBV. 1,2,4 Antibodies to HBsAg generally appear after HBsAg has been cleared from the blood stream, usually 6 months after infection, and its presence represents recovery and immunity. However, in a few patients known to have antibodies to HBsAg, subclinical infections have developed. 5 The presence of HBsAg antibodies should not be used as the sole marker in determining a prior hepatitis B infection. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Anti-HBs is a solidphase, two-step chemiluminescent enzyme immunoassay. The solid phase, a polystyrene bead, is coated with purified HBsAg subtypes ad and ay. An alkaline phosphatase-labeled HBsAg, supplied in the reagent, is added to the polystyrene bead. Unbound enzyme conjugate is then removed by a centrifugal wash. Finally, chemiluminescent substrate is added and undergoes hydrolysis in the presence of alkaline phosphatase; the photon output, as measured by the luminometer, is related to the presence of antibodies to HBsAg in the sample. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples should not be used in this assay. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving 2 IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )

3 anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Anti-HBs has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 50 µl serum or plasma (heparinized or EDTA). (See Alternate Sample Types section.) Storage: 3 days at 2 8 C. 6 For longer storage: at 20 C. 7 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Certain components contain HBsAg which has been inactivated by proven, documented methods. However, always handle them as if capable of transmitting infectious agents. The concentration of anti-hepatitis B surface antigen in a given specimen determined with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Anti-HBs EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. Anti-HBs Bead Pack (L2AH12) With barcode. 200 beads coated with purified inactivated human HBsAg subtypes ad and ay. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KAH2: 1 Pack. L2KAH6: 3 Packs. Anti-HBs Reagent Wedge (L2AHA2) With barcode ml of a protein-based buffer, with preservative ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to purified inactivated human HBsAg subtypes ad and ay in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KAH2: 1 Wedge. L2KAH6: 3 Wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations without damaging the barcode on the main label. Remove the foil seal from the top of the Reagent Wedge, and snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. Anti-HBs Adjustors (LAHL, LAHH) Two vials (Low and High), 2 ml each, of human serum reactive to HBsAg in a buffer, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KAH2: 1 set. L2KAH6: 2 sets. Anti-HBs Controls (LAHC1, LAHC2, LAHC3) Three vials, 4 ml each, with barcodes. LAHC1 (Negative Control): One vial containing human serum nonreactive to HBsAg, with preservative. LAHC2, LAHC3 (Low Postive Control, Positive Control): Two vials containing human serum reactive to HBsAg, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KAH2: 1 set. L2KAH6: 2 sets. Refer to the control insert for concentration levels. IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, ) 3

4 Aliquot Labels with barcodes are supplied with the kit, for use with Adjustors and Controls. Before use, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) Also Required Distilled or deionized water, test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: The Controls supplied with the kit should be used as quality control material to monitor assay performance. Interpretation of Results The IMMULITE 2000 Anti-HBs calibration employs a stored master curve, generated by the four-parameter logistic mathematical model based on the dose- CPS (counts per second) relationship during the calibration process. Reactive: A result of greater than or equal to 10 miu/ml (WHO 1st IRP ) indicates that antibodies to HBsAg are present and were detected in the patient sample. In vaccinated individuals this usually indicates protection against infection. Nonreactive: A result of less than 10 miu/ml indicates that antibodies to HBsAg were not detected in the patient sample, or are below the protective level for immunity. The results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 Anti-HBs EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Expected Values Individuals acutely infected with the hepatitis B virus will exhibit anti-hbs approximately two weeks after the disappearance of HBsAg. This antibody response will reach peak levels after several months and gradually decline over a period of years. Persons who have been vaccinated against HBV will also have detectable levels of anti-hbs. Limitations The measurement of Anti-HBs may be affected by the presence of elevated levels of human albumin. The results of the test must be taken within the context of the patient's clinical and vaccination history, symptomology and other laboratory findings. Hemolyzed or grossly contaminated samples may give erroneous results. A nonreactive result does not indicate that the patient was not infected with HBV or was not vaccinated against HBV. The patient sample should be tested for the presence of other serological markers. Testing for anti-hbs antibodies alone is not sufficient in determining previous infections. Sodium citrate will affect the measurement of antibodies against hepatitis B surface antigen. Use only serum, EDTA plamsa or heparinized plasma. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test 4 IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )

5 components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in miu/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Calibration Range: 3 2,000 miu/ml (WHO 1st IRP ). Analytical Sensitivity: 3.0 miu/ml Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See Precision table.) Bilirubin: Presence of unconjugated bilirubin in concentrations up to 400 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: May interfere with the assay causing inconsistent or erroneous results. (See Hemolysis table.) Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: Samples (n=46) were collected into plain, heparinized and EDTA vacutainer tubes. (Heparin) = 1.03 (Serum) + 14 miu/ml r = 0.97 (EDTA) = 1.05 (Serum) + 16 miu/ml r = 0.88 Means: 350 miu/ml (Serum) 376 miu/ml (Heparin) 384 miu/ml (EDTA) Method Comparison 1: The IMMULITE 2000 Anti-HBs procedure was compared to IMMULITE Anti-HBs Kit on 59 patient samples. (Concentration Range: approximately 3 2,000 miu/ml. See Method Comparison 1 graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.00 (IML) 3.4 miu/ml r = Means: 343 miu/ml (IMMULITE 2000) 346 miu/ml (IMMULITE) Method Comparison 2: The IMMULITE 2000 Anti-HBs procedure was compared to the Elecsys Anti-HBs immunoassay on 775 samples, consisting of seroconversion panels, potentially crossreactive samples, samples from patients with resolved HBV infection, from vaccinated individuals and hospitalized patients, and routine samples. The table below presents the results of this study. No. of samples anti-hbs reactive IMMULITE 2000 Anti-HBs Elecsys Anti-HBs Reactive Nonreactive Reactive Nonreactive References anti-hbs nonreactive Sensitivity Specificity PPV NPV 99.5% 99.7% 99.7% 99.5% 99.0% 98.7% 98.7% 99.0% 1) Locarnini SA, Gust ID. Hepadnaviridae: hepatitis B virus and the delta virus. In: Balows A, et al, editors. Laboratory diagnosis of infectious diseases: principles and practices. New York: Springer-Verlag, 1988: ) Follett EAC. Diagnosis of hepatitis B infection. In: Young H, McMillan A, editors. Immunological diagnosis of sexually transmitted diseases. New York: Marcel Dekker, 1988: ) Hollinger FB, Dienstag JL. Hepatitis B and D viruses. In: Lennette EH, et al, editors. Manual of clinical microbiology. 6th ed. Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1995: ) Nowicki MJ, Balistreri WF. Hepatitis A to E: building up the alphabet. Contemporary Peds 1992: ) Zuckerman AJ, et al. Hepatitis B virus and hepatitis D virus. In: Principles and practice of clinical virology. 2nd ed. New York: John Wiley & Sons, 1992: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995: ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1995: Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, ) 5

6 The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (miu/ml) Intraassay 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Με την ίδια μέθοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Hemolysis Amount 1 Added 168 mg/dl Amount Added 252 mg/dl Amount Added 504 mg/dl Exp 2 Obs 3 Exp Obs Exp Obs 1 < < < Česky. 1 Přidané, 2 Očekávaná, 3 Naměřená. Ελληνικά. 1 Προστέθηκαν, 2 Αναμενόμενη (E), 3 Παρατηρούμενη (O). Polski. 1 Wartość dodana, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O). Method Comparison 1 IMMULITE 2000 Anti-HBs IMMULITE Anti-HBs, miu/ml (IML 2000) = 1.00 (IML) 3.4 miu/ml r = English. Anti-HBs Česky. Anti-HBs. Ελληνικά. Αντί-HBs. Polski. Anty-HBs. Česky IMMULITE 2000 Anti-HBs Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace protilátek proti povrchovému antigenu viru hepatitidy B (Anti-HBs) v lidském séru nebo plazmě (heparinizované nebo EDTA), jakožto pomůcky při stanovení stavu imunity vůči viru hepatitidy B. Katalogové číslo: L2KAH2 (200 stanovení), L2KAH6 (600 stanovení) Kód metody: ahb Barva: tmavě růžová Shrnutí a vysvětlení Virus hepatitidy B (HBV) je jediný lidský patogen v rodině hepatických DNA virů a je rozšířen celosvětově. Rozšíření HBV infekce se liší v závislosti na zeměpisné oblasti a skupině obyvatelstva. Přenos viru se děje parenterálně, krevními deriváty a krví, pohlavním stykem a perinatálně z matky na novorozence. 1,2 Klinická manifestace se může různit od asymptomatické infekce po závažnou fulminantní hepatitidu. 1,2,3 Přes 90% infikovaných dospělých má akutní infekci 1 se žloutenkou a poruchami jaterní funkce. Uzdravení nastane bez dalších chronických následků. 1,2 6 IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )

7 Chronické onemocnění jater, kdy infekce přetrvává více než šest měsíců jako známý důsledek infekce virem hepatitidy B, bývá obvykle progresivní. 1,2 Riziko vývoje chronického stádia je větší u onemocnění v dětství než v dospělosti. 4,5 U chronických nosičů HBV nepokračuje poškození jater, 1,2 ale infekce přetrvává a je riziko přenosu viru. 2 Prevenci HBV infekcí napomáhá dostupnost rekombinantních HBV očkovacích látek a doporučení plošného očkování dětí a rizikových skupin obyvatelstva. Kromě toho je možná léčba příznaků onemocnění pomocí alfa interferonu. Tato léčba byla úspěšná u 40 50% vybraných jedinců s chronickým aktivním onemocněním hepatitidou B. 4,5 Klasifikace hepatitidy B vyžaduje identifikaci několika serologických markerů ve třech fázích (inkubační, akutní a rekonvalescentní) infekce. Prvním je HbsAg, jehož přítomnost se objevuje během inkubační fáze a indikuje chronické nosičství HBV. 1,2,4 Protilátky proti HBsAg se zpravidla objevují po vymizení HBsAg z krevního řečiště, obyčejně 6 měsíců po infekci, a jejich přítomnost svědčí o uzdravení a imunitě. U malé skupiny pacientů s protilátkami proti HbsAg se ale rozvinula subklinická infekce. 5 Přítomnost protilátek proti HBsAg nelze použít jako jediný marker potvrzující prodělanou infekci virem hepatitidy B. Princip Stanovení Anti-HBs na přístroji IMMULITE 2000 je dvoukroková chemiluminiscenční enzymová reakce v pevné fázi. Pevná fáze, polystyrenová kulička, je potažená purifikovaným HBsAg subtypu ad a ay. Alkalická fosfatáza značená HBsAg, dodaná v reagencii, je přidána k polystyrenové kuličce. Nenavázaný enzymový konjugát je poté odstraněn centrifugačním mytím. Na závěr se přidá chemiluminiscenční substrát, který je hydrolyzován za přítomnosti alkalické fosfatázy a množství uvolněných fotonů je měřeno luminometrem a je úměrné přítomnosti protilátek k HBsAg ve vzorku. Inkubační cykly: 2 30 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. U tohoto stanovení nepoužívejte hemolyzované vzorky. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení Anti- HBs na přístroji IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 50 μl séra nebo plazmy (heparinizované nebo EDTA). (Viz část Alternativní typ vzorku.) Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C. 6 Delší skladování při 20 C. 7 Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, ) 7

8 Některé složky obsahují HBsAg, který byl dezaktivovaný použitím ověřených a doložených postupů. Nakládejte s nimi ale, jako by byly potenciálně infekční. Koncentrace povrchového antigenu proti hepatitidě B v daném vzorku stanovená pomocí testů od různých výrobců se může lišit s ohledem na rozdíly v použité metodě stanovení a specificitu reagencií. Proto by výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, měl obsahovat sdělení: "Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Anti-HBs EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat." Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky na vnitřní krabici. Anti-HBs zásobník s kuličkami (L2AH12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených purifikovaným deaktivovaným lidským HBsAg subtypu ad a ay. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KAH2: 1 balení. L2KAH6: 3 balení. Anti-HBs reagencie (L2AHA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml pufrového roztoku na bázi bílkovin, s konzervačním prostředkem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s purifikovaným deaktivovaným lidským HBsAg subtypu ad a ay v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KAH2: 1 nádobka. L2KAH6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. Anti-HBs kalibrátory (LAHL, LAHH) Dvě ampulky (nízce a vysoce reaktivní kalibrátor), v každé ampulce 2 ml lidského séra reaktivního k HBsAg v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C, nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KAH2: 1 sada. L2KAH6: 2 sady. Anti-HBs kontroly (LAHC1, LAHC2, LAHC3) Tři ampulky po 4 ml, s čárovým kódem. LAHC1 (negativní kontrola): Jedna ampulka obsahující lidské sérum nereaktivní k HBsAg, s konzervačním prostředkem. LAHC2, LAHC3 (mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): Dvě ampulky obsahující lidské sérum reaktivní k HBsAg, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C, nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KAH2: 1 sada. L2KAH6: 2 sady. Hodnoty koncentrace najdete na letáčku přiloženém ke kontrole. Alikvotní štítky s čárovými kódy jsou součásti dodané soupravy a jsou určené na kalibrátory a kontroly. Před použitím nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky tak, aby zabudovaný snímač na analyzátorech IMMULITE 2000 mohl přečíst čárové kódy Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Kontroly dodané se soupravou jsou určeny ke kontrole funkční způsobilosti stanovení. 8 IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )

9 Vyhodnocení výsledků Stanovení Anti-HBs IMMULITE 2000 využívá ke kalibraci vzorovou křivku sestrojenou pomocí čtyřparametrového matematického modelu založeného na množství CPS (count per second) v průběhu kalibračního procesu. Reaktivní: Výsledek větší nebo rovný 10 miu/ml (WHO 1st IRP ) znamená, že protilátky proti HBsAg jsou v pacientově vzorku přítomné a byly zjištěné. U očkovaných jedinců to obyčejně signalizuje ochranu proti infekci. Nereaktivní: Výsledek menší než 10 miu/ml znamená, že protilátky proti HBsAg nebyly v pacientově vzorku zjištěné, nebo jsou pod ochrannou úrovní pro odolnost. Výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, by měl obsahovat sdělení: "Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení Anti-HBs EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat." Očekávané hodnoty Anti-HBs se u jedinců akutně infikovaných virem hepatitidy B objeví přibližně za dva týdny po vymizení HBsAg. Tato odezva protilátek dosáhne vrcholu po několika měsících a v průběhu několika let se bude postupně snižovat. Jedinci očkovaní proti HBV budou rovněž mít zjistitelné množství anti-hbs. Omezení Na stanovení Anti-HBs může mít vliv zvýšená přítomnost lidského albuminu. Výsledky stanovení je třeba posuzovat s ohledem na klinickou anamnézu a dosavadní očkování pacienta, symptomatiku a ostatní laboratorní nálezy. Hemolyzované nebo značně kontaminované vzorky můžou poskytovat chybné výsledky. Nereaktivní výsledek neznamená, že pacient nebyl infikován HBV, nebo že nebyl očkován proti HBV. Je třeba otestovat, zda vzorek pacienta neobsahuje jiné serologické markery. Stanovení samotných protilátek anti-hbs k určení prodělaných onemocnění nepostačuje. Citrát sodný ovlivní měření protilátek proti povrchovému antigenu hepatitidy B. Používejte pouze sérum, EDTA plazmu nebo heparinizovanou plazmu. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v miu/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových separátorů, nebo přísad podporujících srážlivost.) Kalibrační rozsah: miu/ml (WHO 1st IRP ). Analytická citlivost: 3,0 miu/ml Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva cykly za den, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Bilirubin: Přítomnost nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 400 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Hemolýza může rušit stanovení a způsobit nekonzistentní nebo chybné výsledky. (Viz tabulka Hemolýza.) Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, ) 9

10 v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: Vzorky (n=46) byly odebrány do vacutainer zkumavek obyčejných, heparinizovaných a EDTA. (Heparin) = 1,03 (Sérum) + 14 miu/ml r = 0,97 (EDTA) = 1,05 (Sérum) + 16 miu/ml r = 0,88 Střední hodnoty: 350 miu/ml (Sérum) 376 miu/ml (Heparin) 384 miu/ml (EDTA) Srovnání metody 1: Stanovení Anti-HBs na analyzátorech IMMULITE 2000 bylo porovnáno s testem Anti-HBs na analyzátoru IMMULITE na 59 vzorcích pacientů. (Koncentrační rozsah: přibližně miu/ml. Viz graf Srovnání metody 1.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,00 (IML) 3,4 miu/ml r = 0,993 Střední hodnoty: 343 miu/ml (IMMULITE 2000) 346 miu/ml (IMMULITE) Srovnání metody 2: Metoda stanovení Anti-HBs na analyzátorech IMMULITE 2000 byla porovnána s imunologickým stanovením Elecsys Anti- HBs na 775 vzorcích, mezi kterými byly sérokonverzní komplety, vzorky s potenciálem zkřížené reaktivity, vzorky uzdravených pacientů po HBV infekci, vzorky očkovaných jedinců, hospitalizovaných pacientů a běžné vzorky. Výsledky tohoto srovnání jsou uvedené v následující tabulce. Počet vzorků anti-hbs anti-hbs ne reaktivní reaktivní Citlivost Specificita PPV NPV IMMULITE 2000 Anti-HBs Reaktivní Nereaktiv 99,5% 99,7% 99,7% 99,5% ní Elecsys Anti-HBs Reaktivní Nereaktiv ní ,0% 98,7% 98,7% 99,0% Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Anti-HBs Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό των αντισωμάτων κατά του επιφανειακού αντιγόνου της ηπατίτιδας B (αντί-hbs) σε ανθρώπινο ορό ή πλάσμα (ηπαρινισμένο ή EDTA), ως βοήθημα στον εντοπισμό υφιστάμενης ανοσίας στον ιό της ηπατίτιδας Β. Αριθμός καταλόγου: L2KAH2 (200 εξετάσεις), L2KAH6 (600 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: ahb Χρώμα: Σκούρο ροζ Περίληψη και επεξήγηση Ο ιός της ηπατίτιδας Β (HBV) είναι ο μοναδικός ανθρώπινος παθογόνος παράγοντας στην ομάδα των ιών DNA που συνδέονται με την ηπατίτιδα και συναντάται σε όλο τον κόσμο. Η εξάπλωση της μόλυνσης από HBV ποικίλει ανά γεωγραφική περιοχή και πληθυσμιακή ομάδα. Η μετάδοση του ιού γίνεται παρεντερικά, μέσω της ανταλλαγής αίματος ή προϊόντων αίματος, της σεξουαλικής επαφής και της περιγεννητικής μετάδοσης από τη μητέρα στο νεογνό. 1,2 Οι κλινικές εκδηλώσεις ποικίλουν από ήπιες ασυμπτωματικές λοιμώξεις έως σοβαρή κεραυνοβόλος ηπατίτιδα. 1,2,3 Ποσοστό άνω του 90% των προσβεβλημένων ενηλίκων παρουσιάζουν οξεία αυτοπεριοριζόμενη λοίμωξη 1 με ίκτερο και μη φυσιολογική ηπατική λειτουργία. Η ανάρρωση δεν συνοδεύεται από χρόνιες συνέπειες. 1,2 Η χρόνια ηπατική νόσος, μια κατάσταση όπου η λοίμωξη επιμένει για διάστημα μεγαλύτερο των έξι μηνών και αποτελεί γνωστό επακόλουθο της ηπατίτιδας Β, είναι συνήθως προοδευτική. 1,2 Ο κίνδυνος μετατροπής του ατόμου σε χρόνιο φορέα είναι μεγαλύτερος σε περίπτωση 10 IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )

11 μόλυνσης κατά την παιδική ηλικία και μικρότερος στους ενήλικες. 4,5 Μεταξύ των χρόνιων φορέων HBV, δεν υπάρχουν ενδείξεις συνεχιζόμενης ηπατικής βλάβης, 1,2 ωστόσο η μόλυνση παραμένει 2 και ο φορέας μπορεί να μεταδώσει τον ιό. Η διαθεσιμότητα των ανασυνδυασμένων εμβολίων κατά του HBV και η σύσταση για γενική ανοσοποίηση των νεογνών και άλλων ατόμων υψηλού κινδύνου αποσκοπεί στην πρόληψη των μολύνσεων από HBV. Επιπλέον, διαθέσιμη είναι η θεραπεία με άλφα-ιντερφερόνη για την ανακούφιση των συμπτωμάτων. Τα αποτελέσματα έχουν δείξει θετική αντίδραση στη θεραπεία σε ποσοστό 40 50% των επιλεγμένων ατόμων με χρόνια ενεργή ηπατίτιδα B. 4,5 Η κατηγοριοποίηση της μόλυνσης από ηπατίτιδα Β απαιτεί τον προσδιορισμό διαφόρων ορολογικών δεικτών, οι οποίοι εκφράζονται κατά τις τρεις φάσεις (επώαση, οξεία και ανάρρωση) της μόλυνσης. Ο πρώτος δείκτης που εμφανίζεται κατά τη φάση επώασης είναι ο HBsAg, ο οποίος υποδηλώνει συνεχιζόμενη μόλυνση από HBV. 1,2,4 Τα αντισώματα κατά του HBsAg εμφανίζονται κατά κανόνα μετά την κάθαρση του HBsAg από το κυκλοφορικό σύστημα, συνήθως 6 μήνες μετά τη μόλυνση, ενώ η παρουσία του υποδηλώνει ανάρρωση και ανοσία. Ωστόσο, σε ορισμένους ασθενείς με γνωστά αντισώματα κατά του HbsAg έχουν εμφανιστεί υποκλινικές λοιμώξεις. 5 Η παρουσία αντισωμάτων κατά του HΒsAg δεν πρέπει να χρησιμοποιείται ως μοναδικός δείκτης παρελθούσας μόλυνσης από ηπατίτιδα Β. Αρχή της διαδικασίας Το IMMULITE 2000 Anti-HBs είναι μία ξηρής φάσης, χημειοφωταυγής ενζυμική ανοσοεξέταση σε δύο βήματα. Η ξηρή φάση, ένα σφαιρίδιο πολυστυρενίου, επικαλύπτεται από κεκαθαρμένο HΒsAg υπό-τύπων ad και ay. Στο σφαιρίδιο πολυστυρενίου προστίθεται HΒsAg με σήμανση αλκαλικής φωσφατάσης, που περιέχεται στο αντιδραστήριο. Στη συνέχεια, το μη δεσμευμένο υλικό αφαιρείται με φυγόκεντρη πλύση. Τέλος, προστίθεται χημειοφωταυγές υπόστρωμα και υπόκειται σε υδρόλυση παρουσία αλκαλικής φωσφατάσης. Η παραγωγή φωτονίων, όπως μετράται με τον μετρητή φωταύγειας, εξαρτάται από την παρουσία αντισωμάτων κατά του HΒsAg στο δείγμα. Κύκλοι επώασης: 2 30 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Στην ανάλυση αυτή δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται αιμολυμένα δείγματα Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Το IMMULITE 2000 Anti- HBs δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 50 µl ορός ή πλάσμα (ηπαρινισμένο ή EDTA). (Βλ. τμήμα "Εναλλακτικοί τύποι δείγματος"). Φύλαξη: 3 ημέρες στους 2 8 C. 6 Για παρατεταμένη φύλαξη: στους 20 C. 7 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, ) 11

12 βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Ορισμένα συστατικά περιέχουν HBsAg, ο οποίος απενεργοποιήθηκε με δοκιμασμένες, επαληθευμένες μεθόδους. Ωστόσο, μεταχειρίζεστε πάντα τα υλικά αυτά σαν να ήταν φορείς λοιμωδών ασθενειών. Η συγκέντρωση επιφανειακού αντιγόνου κατά της ηπατίτιδας Β σε ένα δεδομένο δείγμα που προσδιορίζεται με μεθόδους διαφόρων κατασκευαστών μπορεί να ποικίλει εξαιτίας των διαφορών των αναλυτικών μεθόδων και της ακρίβειας των αντιδραστηρίων. Για τον λόγο αυτό, τα αποτελέσματα που εκδίδονται στους κλινικούς γιατρούς από το εργαστήριο θα πρέπει να αναφέρουν ότι: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 Anti-HBs EIA. Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων Anti-HBs (L2AH12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια με επικάλυψη κεκαθαρμένου, απενεργοποιημένου, ανθρώπινου HBsAg υπό-τύπων ad και ay. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KAH2: 1 συσκευασία. L2KAH6: 3 συσκευασίες. Δοχείο αντιδραστηρίου Anti-HBs (L2AHA2) Με ραβδοκώδικα. 11,5 ml ρυθμιστικού πρωτεΐνης, με συντηρητικό. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συνδεδεμένης με κεκαθαρμένο, απενεργοποιημένο ανθρώπινο HBsAg υπο-τύπων ad και ay σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KAH2: 1 δοχείο. L2KAH6: 3 δοχεία. Πριν την χρήση, σχίστε το επάνω μέρος της ετικέτας στο σημείο διάτρησης χωρίς να καταστρέψετε τον ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου αντιδραστηρίου και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές Anti-HBs (LAHL, LAHH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) 2 ml το καθένα ανθρώπινου ορού θετικού στο HBsAg, σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KAH2: 1 σετ. L2KAH6: 2 σετ. Έλεγχοι Anti-HBs (LAHC1, LAHC2, LAHC3) Τρία φιαλίδια, έκαστο 4 ml, με ραβδοκώδικες. LAHC1 (Αρνητικός έλεγχος): Ένα φιαλίδιο με ανθρώπινο ορό αρνητικό στο HBsAg, με συντηρητικό. LAHC2, LAHC3 (Χαμηλός θετικός έλεγχος, θετικός έλεγχος): Δύο φιαλίδια με ανθρώπινο ορό θετικό στο HBsAg, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα,ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KAH2: 1 σετ. L2KAH6: 2 σετ. Για πληροφορίες σχετικά με τα επίπεδα συγκέντρωσης, ανατρέξτε στο ένθετο του υλικού ελέγχου. Το kit περιλαμβάνει κατάλληλες ετικέτες με ραβδοκώδικα, για χρήση με τους ρυθμιστές και τους ελέγχους. Πριν την χρήση, κολλήστε τις κατάλληλες ετικέτες διαχωρισμού (παρέχονται με το κιτ) στα δοκιμαστικά σωληνάρια, έτσι ώστε να είναι δυνατή η ανάγνωση των ραβδοκώδικων από τη συσκευή ανάγνωσης του μηχανήματος. 12 IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )

13 Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) Απαιτούνται επίσης: Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό, σωληνάρια. Διαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 4 εβδομάδες. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Οι οροί ελέγχου που παρέχονται με το kit θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως υλικό ποιοτικού ελέγχου για την παρακολούθηση της επίδοσης της ανάλυσης. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Το εύρος καμπύλης του IMMULITE 2000 Anti-HBs χρησιμοποιεί μια αποθηκευμένη κύρια καμπύλη, η οποία παράγεται από το μαθηματικό μοντέλο διαχείρισης τεσσάρων παραμέτρων με βάση τη σχέση δόσης - CPS (χτύποι ανά δευτερόλεπτο) κατά τη διαδικασία ρύθμισης καμπύλης. Θετικό: Ένα αποτέλεσμα μεγαλύτερο ή ίσο με 10 miu/ml (WHO 1st IRP ) υποδηλώνει ότι στο δείγμα του ασθενούς εντοπίστηκαν αντισώματα κατά του HΒsAg. Συνήθως, στα εμβολιασμένα άτομα αυτό υποδηλώνει προστασία από τη μόλυνση. Αρνητικό: Ένα αποτέλεσμα μικρότερο των 10 miu/ml υποδηλώνει ότι στο δείγμα του ασθενούς δεν εντοπίστηκαν αντισώματα στο HBsAg ή ότι αυτά είναι χαμηλότερα από το επίπεδο ανοσίας. Τα αποτελέσματα που λαμβάνει ο κλινικός γιατρός από το εργαστήριο θα πρέπει να περιέχουν την εξής επισήμανση: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 Anti-HBs EIA. Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Αναμενόμενες τιμές Τα άτομα που πάσχουν από οξεία μόλυνση με ηπατίτιδα Β θα εμφανίζουν τον αντι-hbs περίπου δύο εβδομάδες μετά την εξαφάνιση του HΒsAg. Η αντίδραση αυτού του αντισώματος θα φθάσει στο ανώτατο επίπεδο αρκετούς μήνες αργότερα και θα μειωθεί σταδιακά με την πάροδο των ετών. Τα άτομα που έχουν εμβολιαστεί κατά του HBV θα εμφανίζουν επίσης εντοπίσιμα επίπεδα αντί-hbs. Περιορισμοί Η μέτρηση του αντί-hbs μπορεί να επηρεαστεί από την παρουσία αυξημένης ανθρώπινης λευκωματίνης. Τα αποτελέσματα της εξέτασης θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη στα πλαίσια του κλινικού ιστορικού του ασθενούς, του ιστορικού εμβολιασμών, της συμπτωματολογίας και άλλων εργαστηριακών ευρημάτων. Αιμολυμένα ή πολύ μολυσμένα δείγματα μπορεί να δώσουν λανθασμένα αποτελέσματα. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν υποδηλώνει απουσία μόλυνσης από τον HBV ή απουσία εμβολιασμού κατά του HBV. Το δείγμα του ασθενούς θα πρέπει να εξεταστεί για παρουσία άλλων ορολογικών δεικτών. Η εξέταση για αντισώματα αντι-hbs δεν επαρκεί από μόνη της για τον εντοπισμό παλαιότερων μολύνσεων. Το κιτρικό νάτριο επηρεάζει τη μέτρηση αντισωμάτων κατά του επιφανειακού αντιγόνου της ηπατίτιδας Β. Να χρησιμοποιείται μόνον σε ορό, πλάσμα EDTA ή ηπαρινισμένο πλάσμα. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, ) 13

14 all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, μπορεί να εμφανιστούν πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της εκτέλεσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε miu/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος καμπύλης: miu/ml (WHO 1st IRP ). Αναλυτική ευαισθησία: 3,0 miu/ml Ακρίβεια: Για 20 μέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν εις διπλούν, δις ημερησίως, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) Χολερυθρίνη: Η παρουσία έμμεσης χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις έως 400 mg/l δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Μπορεί να επηρεάσει την εξέταση και να προκαλέσει ανακολουθίες και σφάλματα στα αποτελέσματα. (Βλ. πίνακα "Hemolysis".) Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικός τύπος δείγματος: Συλλέχθηκαν δείγματα (n=46) σε απλούς, ηπαρινισμένους και EDTA δοκιμαστικούς σωλήνες. (Ηπαρίνη) = 1,03 (Ορός) + 14 miu/ml r = 0,97 (EDTA) = 1,05 (Ορός) + 16 miu/ml r = 0,88 Μέσοι όροι: 350 miu/ml (Ορός) 376 miu/ml (Ηπαρίνη) 384 miu/ml (EDTA) Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η μέθοδος IMMULITE 2000 Anti-HBs συγκρίθηκε με τη μέθοδο IMMULITE Anti-HBs Kit της σε 59 δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου miu/ml. Βλ. γράφημα "Method Comparison 1"). Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,00 (IML) 3,4 miu/ml r = 0,993 Μέσοι όροι: 343 miu/ml (IMMULITE 2000) 346 miu/ml (IMMULITE) Σύγκριση της Μεθόδου 2: Η μέθοδος IMMULITE 2000 Anti-HBs συγκρίθηκε με την ανοσοανάλυση Elecsys Anti-HBs σε 775 δείγματα, αποτελούμενα από οροθετικές ομάδες, δείγματα ενδεχόμενης διασταυρούμενης αντίδρασης, δείγματα ασθενών με θεραπευμένη μόλυνση από HBV, από εμβολιασμένα άτομα, νοσηλευόμενους ασθενείς και τακτικές εξετάσεις. Ο πίνακας παρακάτω περιέχει τα αποτελέσματα της μελέτης. Αρ. δειγμάτων anti-hbs θετικά IMMULITE 2000 Anti-HBs Θετικά Αρνητικά Elecsys Anti-HBs Θετικά Αρνητικά anti-hbs αρνητικά Ευαισθ. Ειδικότ. PPV NPV 99,5% 99,7% 99,7% 99,5% 99,0% 98,7% 98,7% 99,0% Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485: IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )

15 Polski IMMULITE 2000 Anty-HBs Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro opracowany dla analizatorów systemów IMMULITE 2000, przeznaczony do ilościowego oznaczania w ludzkiej surowicy i osoczu (heparynowym lub EDTA) przeciwciał specyficznych w stosunku do powierzchniowego antygenu wirusa zapalenia wątroby typu B (Anty- HBs). Test służy do określenia poziomu serokonwersji w stosunku do antygenu wirusa zapalenia wątroby typu B. Numery katalogowe: L2KAH2 (200 testów), L2KAH6 (600 testów) Kod Testu: ahb Kolor: Ciemnoróżowy Wprowadzenie Wirus zapalenia wątroby typu B (HBV) jest wyłącznie ludzkim patogenem o zasięgu światowym, należącym do grupy wirusów DNA o tropiźmie do wątroby. Częstość występowania zakażeń HBV różni się w zależności od położenia geograficznego i populacji. Przenoszenie wirusa zachodzi pozajelitowo poprzez krew i produkty krwiopochodne, na drodze kontaktów płciowych i w okresie okołoporodowym od matki do noworodka. 1,2 W obrazie klinicznym spotyka się infekcje bezobjawowe z jednej strony i ciężkie, piorunujące zapalenia wątroby z drugiej. 1,2,3 Ponad 90% zakażonych dorosłych przechodzi ostrą, ustępująca samoistnie infekcję, 1 której towarzyszą żółtaczka i dysfunkcje wątroby. U ozdrowieńców nie obserwuje się chronicznych następstw. 1,2 Chroniczna choroba wątroby, stan, w którym infekcja utrzymuje się ponad 6 miesięcy, znane następstwo infekcji HBV, jest zwykle postępujący. 1,2 Ryzyko wystąpienia stanu chronicznego nosicielstwa jest większe w przypadku zakażeń przebytych w dzieciństwie niż w wieku dorosłym. 4,5 U chronicznych nosicieli HBV nie stwierdza się objawów trwałego uszkodzenia wątroby 1,2 mimo trwania infekcji zdolności nosiciela do przenoszenia wirusa. 2 Dostępność szczepionek rekombinantowych, zalecenia szczepienia całej populacji niemowląt i osób z grupy wysokiego ryzyka są istotne w profilaktyce zakażeń HBV. Po za tym, możliwe jest leczenie alfa-interferonem, łagodzące objawy i dające pozytywne wyniki u 40 50% osób z chroniczną, aktywną formą zapalenia wątroby typu B. 4,5 Klasyfikacja zakażenia HBV opiera się na identyfikacji szeregu markerów w surowicy ulegających ekspresji w przebiegu trzech faz choroby (wylęgania, ostrej i zdrowienia). Pierwszym markerem stwierdzanym w surowicy w zapaleniu wątroby typu B jest antygen powierzchniowy - HBsAg. Jego obecność wskazuje na postępującą infekcję. 1,2,4 Przeciwciała specyficzne w stosunku do HBsAg zwykle pojawiają się po zniknięciu antygenu z krwioobiegu, na ogół 6 miesięcy po infekcji, a ich obecność zwykle jest objawem ozdrowienia i odporności. Jednakże znane są nieliczne przypadki obecności przeciwciał w subklinicznej fazie choroby. 5 Stwierdzenie obecności jedynie przeciwciał anty-hbsag nie stanowi wystarczającego dowodu uprzedniej infekcji wirusem typu B. Zasada Testu IMMULITE 2000 Anty-HBs jest immunoenzymatycznym, chemiluminescencyjnym, sekwencyjnym testem kanapkowym fazy stałej. Faza stała (kulka) opłaszczona jest oczyszczonym HBsAg podtypów ad i ay. Do kulki dodawany jest odczynnik zawierający alkaliczną fosfatazę (izolowaną z jelit cieląt). Niezwiązany koniugat enzymu usuwany jest przez wirowanie i płukanie. W ostatnim etapie do kulki dodawany jest substrat chemiluminescencyjny, który ulega hydrolizie, a wygenerowany sygnał jest proporcjonalny do enzymu związanego z kulką. Czas Inkubacji: 2 30 minut. Preparatyka Próbek Zalecane jest klarowanie próbek lipemicznych przez ultrawirowanie. Nie należy wykonywać oznaczenia w próbkach z hemolizą. IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, ) 15

16 Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. Na wynik oznaczenia może wpływać rodzaj probówek do których pobierana jest krew. Istotne znaczenia mają: producent i tworzywo oraz obecność lub brak bariery żelowej lub innego środka ułatwiającego oddzielenie surowicy, obecność aktywatorów skrzepu oraz brak/obecność antykoagulantów. Wpływ wszystkich wymienionych czynników na wynik Testu IMMULITE 2000 Anty-HBs nie jest znany. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ rodzaju materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 50 μl surowicy lub osocza (heparynowego lub EDTA).(porównaj rozdział Wpływ rodzaju materiału na oznaczenie). Przechowywanie materiału: 3 dni w 2 8 C 6 lub dłużej 20 C. 7 Ostrzeżenia I Warunki Wstępne Test diagnostyczny in vitro. Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. W materiałach izolowanych z krwi ludzkiej wykluczono obecność: reaktywności w kierunku syfilisu, przeciwciał anty-hiv 1 i HIV 2, HBsAg i przeciwciał anty-hcv. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl, użyty jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużej ilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Pewne elementy zestawu zawierają HBsAg inaktywowany sprawdzonymi i udokumentowanymi metodami. Jednakże w trakcie pracy z zestawem należy zawsze zachowywać środki ostrożności obowiązujące w pracy z materiałem zakaźnym. Stężenie przeciwciał anty-hbs wyznaczone w danej próbce zestawami różnych producentów mogą się różnić, w zależności od metody i swoistości reagentów. Wynik badania wysyłany do lekarza kierującego powinien być zaopatrzony w komentarz: Poniższy wynik otrzymano stosując immunoenzymatyczny test (EIA) IMMULITE 2000 Anty-HBsAg. Nie poddawać interpretacji wyników uzyskanych u danej osoby wymiennie stosowanymi testami różnych producentów. Substrat chemiluminescencyjny: Unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Woda destylowana lub dejonizowana. Elementy Zestawu Elementy zestawu stanowią komplet. Zestaw działa w oparciu o kod kreskowy. Anty-HBs Pojemnik z Kulkami (L2AH12) Oznakowany kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych oczyszczonym, inaktywowanym ludzkim HBsAg podtypów ad and ay. Stabilne w 2 8 o C do daty ważności. L2KAH2: 1 opakowanie; L2KAH6: 3 opakowania Anty-Hbs Klin Odczynnikowy (L2AHA2) Oznakowany kodem kreskowym. 11,5 ml buforowanego roztworu białka z konserwantem; 11,5 ml fosfatazy alkalicznej (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z oczyszczonym, inaktywowanym HBsAg podtypu ad i ay w buforze, z konserwantem. Stabilne w 2 8 C do daty ważności. L2KAH2: 1 klin; L2KAH6: 3 kliny Przed użyciem zerwać taśmę zabezpieczającą nie uszkadzając kodu kreskowego. Usunąć foliową uszczelkę komór odczynnikowych. Wsunąć przesuwne zamknięcie komór w prowadnice w pokrywie klina. Anty-HBs Kalibratory Zestawu (LAHL, LAHH) Dwie fiolki (kalibrator niski i wysoki) zawierające po 2 ml surowicy ludzkiej reaktywnej w stosunku do HBsAg w 16 IMMULITE 2000 Anti-HBs (PIEL2KAH-3CE {30CE}, )